專利名稱：治療代謝紊亂的糖皮質(zhì)激素受體配基的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用作肝臟選擇性糖皮質(zhì)激素受體拮抗劑的新型化合物、制備這種化合物的方法和使用這種化合物調(diào)節(jié)代謝，尤其是降低血清葡萄糖水平和/或減輕體重的方法。
背景技術(shù)：
2型和1型糖尿病的主要問題在于存在由肝臟產(chǎn)生的過量或非適量的葡萄糖。這種異常是禁食性高血糖癥的主要誘因并且伴隨發(fā)生胰島素釋放的調(diào)節(jié)缺陷和對胰島素的外周敏感性缺陷。因此，降低肝臟葡萄糖生成的試劑將有助于治療2型和1型糖尿病。
1型糖尿病的高血糖癥的深入治療表明能夠降低眼睛、腎臟和神經(jīng)綜合征的發(fā)展，有證據(jù)表明這種治療還有助于2型糖尿病?，F(xiàn)有數(shù)據(jù)還表明多數(shù)2型或1型糖尿病患者都沒有獲得適當(dāng)治療。盡管已有多種不同類型的胰島素制劑和許多其他治療，但仍存在有這種不足，所述其他治療包括刺激胰島素釋放的試劑(例如磺酰脲)；影響肝臟葡萄糖生成的試劑(例如二甲雙胍)；影響對胰島素敏感性的試劑(例如trglitazone)和葡萄糖吸收劑(α-葡萄糖苷酶抑制劑)。盡管已有降低血液中葡萄糖水平的多種不同的口服活性試劑，但許多2型糖尿病患者還是需要胰島素來控制其血糖水平?？傮w上，胰島素在2型糖尿病中的使用超過了在1型糖尿病中的使用，對治療2型糖尿病和其他肥胖相關(guān)疾病的其他口服活性試劑的需求已經(jīng)達(dá)成共識。
腎上腺的糖皮質(zhì)激素分泌(人類中主要為氫化可的松)如此命名，是由于它們具有調(diào)節(jié)葡萄糖代謝的能力。這些類固醇在肝臟中通過促進(jìn)糖質(zhì)異生而刺激葡萄糖的生成，所述糖質(zhì)異生是指新生葡萄糖的生物合成(即非來自糖原的葡萄糖)。因此，糖皮質(zhì)激素不足時，由于肝臟葡萄糖生成降低會有發(fā)生低血糖的趨勢。糖尿病中Addison’s病的進(jìn)一步發(fā)生通常會導(dǎo)致葡萄糖水平降低。相反，糖皮質(zhì)激素過量會激發(fā)具有潛伏性糖尿病癥的個體發(fā)生癥狀明顯的糖尿病，并通常會惡化已有糖尿病的血糖控制。已經(jīng)在各種動物模型中觀察到了類似的影響。
糖皮質(zhì)激素作用下葡萄糖生成的增加源于對多種蛋白質(zhì)的影響。其中重要的是對將氨基酸轉(zhuǎn)化為葡萄糖前體的各種轉(zhuǎn)氨酶的影響，以及對關(guān)鍵的葡糖異生酶如葡萄糖-6-磷酸酶和磷酸烯醇丙酮酸酯羧激酶(PEPCK)的誘導(dǎo)。如在轉(zhuǎn)基因小鼠中所觀察到的，甚至PEPCK的中度增加也會導(dǎo)致血糖升高。2型糖尿病的遺傳學(xué)小鼠模型已經(jīng)增加了皮質(zhì)酮(該物種的內(nèi)源性糖皮質(zhì)激素)水平，并伴隨PEPCK表達(dá)的增加。這種PEPCK的超表達(dá)可以用GR拮抗劑RU-38486處理抑制，導(dǎo)致高血糖下降。其他肝臟蛋白質(zhì)也受到糖皮質(zhì)激素的類似調(diào)節(jié)。例如，通過GR激動劑強(qiáng)的松龍或地塞米松處理來誘導(dǎo)肝酶酪氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(TAT)；通過用RU-38486處理使該酶升高的水平正?；?br> 上述事項(xiàng)表明如果內(nèi)源性糖皮質(zhì)激素對肝臟葡萄糖生成的作用可以以一種特異的方式阻斷，則可以改善血糖控制，從而對糖尿病患者有利。但是，迄今為止，所有阻斷糖皮質(zhì)激素作用的手段都是系統(tǒng)性的。這些方法由于抑制系統(tǒng)性糖皮質(zhì)激素信號傳導(dǎo)而產(chǎn)生不希望的副作用。因此，腎上腺切除術(shù)使患者患有癥狀明顯的腎上腺機(jī)能不全和Addison’s病的問題。例如通過甲吡酮阻斷腎上腺類固醇的生成，或例如用RU-38486阻斷糖皮質(zhì)激素的作用，通常只有有限的有效持續(xù)時間；當(dāng)其有效時，還導(dǎo)致全身性的腎上腺機(jī)能不全。長期下來，補(bǔ)償性ACTH分泌過多和增加的氫化可的松釋放最終會使阻斷無效，并克制這些治療。升高的外周氫化可的松水平可以引發(fā)非必要的副作用如低血鉀。相比之下，肝臟特異性GR拮抗劑將不會具有這些問題，可以對抗糖尿病中增加的肝臟葡萄糖生成，并可用于治療2型糖尿病。
以前將阻斷糖皮質(zhì)激素作用作為治療糖尿病和肥胖癥的方法的努力遇到了阻礙，即所用的化合物通常會在所有組織中阻斷糖皮質(zhì)激素的作用，并導(dǎo)致潛在的糖皮質(zhì)激素缺乏的問題，如低血壓、休克以及如果生物有機(jī)體完全暴露于強(qiáng)壓力條件下時會導(dǎo)致的最終死亡。相比之下，在肝臟外具有最小作用的肝臟選擇性GR拮抗劑可以用作2型糖尿病的前沿治療，或可以和其他現(xiàn)有的治療聯(lián)用。
肝臟選擇性GR拮抗劑提供了許多優(yōu)點(diǎn)。首先，它減少肝臟葡萄糖的生成。這種作用將對血糖控制具有明顯的效果。事實(shí)上，過量的肝臟葡萄糖生成可能是2型糖尿病中的主要缺陷。其次，這種藥會增加胰島素敏感性，這是由于代謝微環(huán)境的全面改善和高血糖誘導(dǎo)的胰島素功能和分泌缺陷的改善。作為降低血糖的結(jié)果，對β-細(xì)胞分泌的需求下降會妨礙2型糖尿病的進(jìn)行性β-細(xì)胞功能紊亂性質(zhì)。與磺酰脲或胰島素治療相比，肝臟GR拮抗劑的另一個優(yōu)點(diǎn)是患者將具有更小的低血糖危險性。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及化學(xué)式(I)的化合物，其可用于治療II型糖尿病、肥胖癥、X綜合征、高血糖、高血壓、葡萄糖清除(clearance)不充分、高胰島素血癥、高脂血癥和肝臟糖皮質(zhì)激素水平升高。
或其藥學(xué)上合適的鹽或前藥，其中A是選自-O-或-NRA的單元，其中RA是選自氫和烷基的單元；R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7各自獨(dú)立地是選自氫、(C1-C6)-烷基、烯基、炔基、烷氧基、羥基、烷氧烷基、羥基烷基和鹵素的單元；且R8、R9和R10各自獨(dú)立地是選自氫、烷基、烯基、炔基、烷氧基、羥基、氰基、鹵素和-NRBRC的單元，其中RB和RC各自獨(dú)立地是選自氫和烷基的單元。
在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及選擇性拮抗哺乳動物中糖皮質(zhì)激素受體的效應(yīng)的方法，該方法包括施用治療有效量的化學(xué)式(I)的化合物。
在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及選擇性拮抗哺乳動物中肝臟糖皮質(zhì)激素受體的效應(yīng)的方法，該方法包括施用治療有效量的化學(xué)式(I)的一種或多種化合物。
在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及治療糖尿病、高血糖、高胰島素血癥、不充分的葡萄糖清除、肥胖癥、X綜合征、高脂血癥、糖尿病性高血壓和肝臟糖皮質(zhì)激素水平升高的方法，該方法包括施用化學(xué)式(I)的一種或多種化合物。
在另一個實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含化學(xué)式(I)的化合物的藥用組合物。
本發(fā)明的另一個實(shí)施方案涉及化學(xué)式(I)的化合物的藥學(xué)上合適的前藥。
具體實(shí)施例方式
術(shù)語“烯基”指從具有至少一個碳-碳雙鍵的烴衍生的2-12個碳原子的單價直鏈或支鏈基團(tuán)。本發(fā)明的烯基基團(tuán)可以任選地用1-5個取代基取代，所述取代基選自烷氧基、烷?；趸?、烷氧基羰基、氨基、疊氮基、酰胺基、羧基、氰基、鹵基、羥基、硝基、全氟烷基、全氟烷氧基、氧基、硫代烷氧基、未取代或取代的芳基、未取代或取代的雜芳基和未取代或取代的雜環(huán)。取代本發(fā)明的烷基的取代芳基、取代雜芳基和取代雜環(huán)基團(tuán)用選自烷基、烷氧基、羧基、疊氮基、甲醛基、鹵基、羥基、全氟烷基和全氟烷氧基的至少一種取代基取代。
術(shù)語“烷氧基”指通過氧原子和母體分子基團(tuán)結(jié)合的烷基基團(tuán)。
術(shù)語“烷氧烷基”指通過亞烷基和母體分子基團(tuán)結(jié)合的烷氧基。
術(shù)語“烷基”指從具有1-12個碳原子的飽和烴衍生的單價直鏈或支鏈基團(tuán)。本發(fā)明的烷基集團(tuán)可以任選地用1-5個取代基取代，所述取代基選自烷氧基、烷?；趸?、烷氧基羰基、氨基、疊氮基、酰胺基、羧基、氰基、鹵基、羥基、硝基、全氟烷基、全氟烷氧基、氧基、硫代烷氧基、未取代或取代的芳基、未取代或取代的雜芳基和未取代或取代的雜環(huán)。取代本發(fā)明的烷基的取代芳基、取代雜芳基和取代雜環(huán)基團(tuán)用選自烷基、烷氧基、羧基、疊氮基、甲醛基(carboxaldehyde)、鹵基、羥基、全氟烷基和全氟烷氧基的至少一種取代基取代。
術(shù)語“炔基”指具有至少一個碳-碳三鍵的、2-12個碳原子的單價直鏈或支鏈烴。本發(fā)明的炔基基團(tuán)可任選地用1-5個取代基取代，所述取代基選自烷氧基、烷?；趸⑼檠趸驶?、氨基、疊氮基、酰胺基、羧基、氰基、鹵基、羥基、硝基、全氟烷基、全氟烷氧基、氧基、硫代烷氧基、未取代或取代的芳基、未取代或取代的雜芳基和未取代或取代的雜環(huán)。取代本發(fā)明的烷基的取代芳基、取代雜芳基和取代雜環(huán)基團(tuán)用選自烷基、烷氧基、羧基、疊氮基、甲醛基、鹵基、羥基、全氟烷基和全氟烷氧基的至少一種取代基取代。
術(shù)語“芳基”指具有一個或兩個芳香環(huán)的單-或雙環(huán)的碳環(huán)型環(huán)系統(tǒng)。芳基還可以和環(huán)己烷、環(huán)己烯、環(huán)戊烷和環(huán)戊烯環(huán)稠合。本發(fā)明的芳基可以任選地用1-5個取代基取代，所述取代基各自選自烷基、烷氧基、烷氧烷基、烷氧烯基、烷酰基、烷?；趸?、烷酰基氧基烷基、烷酰基氧基烯基、烷氧基羰基、烷氧基羰基烷基、烷氧基羰基烯基、烷基磺酰基、烷基磺酰基烷基、烷基磺?；┗?、氨基、氨基烷基、氨基烯基、氨基磺?；被酋；榛?、氨基磺?；┗?、疊氮基、甲醛基、(甲醛基)烷基、(甲醛基)烯基、酰胺基、酰胺基烷基、酰胺基烯基、羧基、羧基烷基、羧基烯基、氰基、氰基烷基、氰基烯基、鹵基、鹵烷基、鹵烯基、羥基、羥基烷基、羥基烯基、硝基、氧基、全氟烷基、全氟烷氧基、全氟烷氧基烷基、全氟烷氧基烯基、硫代烷氧基、硫代烷氧基烷基、硫代烷氧基烯基、未取代或取代的芳基、未取代或取代的雜芳基、未取代或取代的雜環(huán)。取代本發(fā)明的芳基的取代芳基、雜芳基和雜環(huán)基團(tuán)用選自烷基、烷氧基、羧基、疊氮基、甲醛基、鹵基、羥基、全氟烷基和全氟烷氧基的至少一種取代基取代。
術(shù)語“氰基”指-CN。
術(shù)語“鹵基”或“鹵素”指F、Cl、Br或I。
此處所用的術(shù)語“雜環(huán)”指包含選自氧、氮和硫的至少一個原子的環(huán)狀的、非芳族的四-、五-、六-或七-元環(huán)。四元環(huán)具有零個雙鍵，五元環(huán)具有零個或一個雙鍵，六元環(huán)和七元環(huán)具有零個、一個或兩個雙鍵。本發(fā)明的雜環(huán)基團(tuán)例如二氫吡啶基、嗎啉基、哌嗪基、吡咯烷基、四氫吡啶基、哌啶基、硫代嗎啉基、1，3-二氧戊環(huán)基、1，4-二噁烷基、1，3-二噁烷基等。本發(fā)明的雜環(huán)基團(tuán)可以和芳基或雜芳基稠合。本發(fā)明的雜環(huán)基團(tuán)可以通過環(huán)中可取代的碳或氮原子與母體分子基團(tuán)相連。
雜環(huán)還包括跨接的雙環(huán)基團(tuán)，其中單環(huán)的雜環(huán)基團(tuán)通過亞烷基跨接，如 等。
本發(fā)明的雜環(huán)基團(tuán)可以任選地用1-5個取代基取代，所述取代基各自選自烷基、烷氧基、烷氧烷基、烷氧烯基、烷酰基、烷酰基氧基、烷酰基氧基烷基、烷?；趸┗⑼檠趸驶?、烷氧基羰基烷基、烷氧基羰基烯基、烷基磺?；⑼榛酋；榛⑼榛酋；┗?、氨基、氨基烷基、氨基烯基、氨基磺?；?、氨基磺?；榛被酋；┗B氮基、甲醛基、(甲醛基)烷基、(甲醛基)烯基、酰胺基、酰胺基烷基、酰胺基烯基、羧基、羧基烷基、羧基烯基、氰基、氰基烷基、氰基烯基、鹵基、鹵烷基、鹵烯基、羥基、羥基烷基、羥基烯基、硝基、氧基、全氟烷基、全氟烷氧基、全氟烷氧基烷基、全氟烷氧基烯基、硫代烷氧基、硫代烷氧基烷基、硫代烷氧基烯基、未取代或取代的芳基、未取代或取代的雜芳基、未取代或取代的雜環(huán)。取代本發(fā)明的雜環(huán)基團(tuán)的取代芳基、雜芳基和雜環(huán)基團(tuán)用選自烷基、烷氧基、羧基、疊氮基、甲醛基、鹵基、羥基、全氟烷基和全氟烷氧基的至少一種取代基取代。
此處所用的“雜芳基”指環(huán)狀的、芳香族的五元和六元基團(tuán)，其中至少一個原子選自N、O和S，其他原子為碳原子。五元環(huán)具有兩個雙鍵，六元環(huán)具有三個雙鍵。本發(fā)明的雜芳基通過環(huán)中的可取代碳或氮與母體分子基團(tuán)相連。雜芳基的例子有呋喃基、噻吩基、吡咯基、唑基、噻唑基、咪唑基、異唑基、異噻唑基、二唑基、二唑基、三唑基、噻二唑基、吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基、吡唑基、三嗪基等。本發(fā)明的雜芳基可以和芳基、雜環(huán)或其他雜芳基稠合。本發(fā)明的雜芳基可以任選地用1-5個取代基取代，所述取代基各自選自烷基、烷氧基、烷氧烷基、烷氧烯基、烷?；⑼轷；趸?、烷?；趸榛⑼轷；趸┗⑼檠趸驶?、烷氧基羰基烷基、烷氧基羰基烯基、烷基磺?；?、烷基磺?；榛?、烷基磺?；┗?、氨基、氨基烷基、氨基烯基、氨基磺酰基、氨基磺?；榛?、氨基磺酰基烯基、疊氮基、甲醛基、(甲醛基)烷基、(甲醛基)烯基、酰胺基、酰胺基烷基、酰胺基烯基、羧基、羧基烷基、羧基烯基、氰基、氰基烷基、氰基烯基、鹵基、鹵烷基、鹵烯基、羥基、羥基烷基、羥基烯基、硝基、氧基、全氟烷基、全氟烷氧基、全氟烷氧基烷基、全氟烷氧基烯基、硫代烷氧基、硫代烷氧基烷基、硫代烷氧基烯基、未取代或取代的芳基、未取代或取代的雜芳基、未取代或取代的雜環(huán)。取代本發(fā)明的雜芳基的取代芳基、雜芳基和雜環(huán)基團(tuán)用選自烷基、烷氧基、羧基、疊氮基、甲醛基、鹵基、羥基、全氟烷基和全氟烷氧基的至少一種取代基取代。
術(shù)語“羥基”指-OH。
術(shù)語“羥基烷基”指通過烷基和母體分子相連的羥基基團(tuán)。
本發(fā)明涉及化學(xué)式(I)的化合物， 或其藥學(xué)上合適的鹽或前藥，其中A是選自-O-或-NRA的單元，其中RA是選自氫和烷基的單元；R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7是獨(dú)立選自氫、(C1-C6)-烷基、烯基、炔基、烷氧基、羥基、烷氧烷基、羥基烷基和鹵素的單元；且R8、R9和R10是獨(dú)立選自氫、烷基、烯基、炔基、烷氧基、羥基、氰基、鹵素和-NRBRC的單元，其中RB和RC是選自氫和烷基的單元。
根據(jù)本發(fā)明的一個實(shí)施方案，提供了化學(xué)式(I)的化合物，其中R1、R2、R3和R4是氫；R5是選自氫和烷基的單元；A、R6、R7、R8、R9、R10、RA、RB和RC在化學(xué)式1中限定。
在本發(fā)明的另一個實(shí)施方案中，提供了化學(xué)式(I)的化合物，其中R1、R2、R3、R4、R8、R9和R10是氫；R5是選自氫和烷基的單元；R6是OH；R7是炔基，A、R8、R9、R10、RA、RB和RC在化學(xué)式(I)中限定。
在本發(fā)明的另一個實(shí)施方案中，提供了化學(xué)式(I)的化合物，其中R1、R2、R3、R4、R8、R9和R10是氫；R5是選自氫和烷基的單元；R6是OH；R7是-C≡C-CH3，A、R8、R9、R10、RA、RB和RC在化學(xué)式(I)中限定。
在本發(fā)明的另一個實(shí)施方案中，提供了化學(xué)式(I)的化合物，其中R1、R2、R3、R4、R8、R9和R10是氫；R5是選自氫和烷基的單元；R6是OH；R7是-C≡C-CH3，A是-NCH3，R8、R9、R10、RA、RB和RC在化學(xué)式1中限定。
在本發(fā)明的另一個實(shí)施方案中，提供了化學(xué)式(I)的化合物，其中R6是OH；R7是-C≡C-CH3；A是-O-，R1、R2、R3、R4、R5、R8、R9、R10、RA、RB和RC在化學(xué)式1中限定。
本發(fā)明的另一個方案涉及化學(xué)式(I)的化合物的藥學(xué)上合適的前藥。
在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及在消化道中分解釋放化學(xué)式(I)的化合物的前藥。
在本發(fā)明的另一個實(shí)施方案中，提供了化學(xué)式(II)的化合物， 或其藥學(xué)上合適的鹽，其中A是選自-O-或-NRA的單元；R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7是獨(dú)立選自氫、(C1-C6)-烷基、烯基、炔基、烷氧基、羥基、烷氧烷基、羥基烷基和鹵素的單元；且R8、R9和R10是獨(dú)立選自氫、烷基、烯基、炔基、烷氧基、羥基、氰基、鹵素和-NRBRC的單元；RA是選自氫和烷基的單元；RB和RC是選自氫和烷基的單元；PD1和PD2中的一個或多個在體內(nèi)被切割。在本發(fā)明的另一個實(shí)施方案中提供了化學(xué)式(II)的化合物，
或其藥學(xué)上合適的鹽，其中A是選自-O-或-NRA的單元；R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7是獨(dú)立地選自氫、(C1-C6)-烷基、烯基、炔基、烷氧基、羥基、烷氧烷基、羥基烷基和鹵素的單元；R8、R9和R10是選自氫、烷基、烯基、炔基、烷氧基、氰基、羥基、鹵素和-NRBRC的單元；RA是選自氫和烷基的單元；RB和RC是獨(dú)立地選自氫和烷基的單元；PD1和PD2中的一個或多個是在消化道中被體內(nèi)切割的部分。
在本發(fā)明的另一個實(shí)施方案中，提供了化學(xué)式(II)的化合物，其中R1、R2、R3、R4、R8、R9和R10是氫；R5是選自氫和烷基的單元；R6是OH；R7是-C≡C-CH3。在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，提供了選擇性拮抗哺乳動物中糖皮質(zhì)激素受體的效應(yīng)的方法，該方法包括施用治療有效量的化學(xué)式(I)的化合物。
在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，提供了選擇性拮抗哺乳動物中糖皮質(zhì)激素受體的效應(yīng)的方法，該方法包括施用治療有效量的化學(xué)式(II)的化合物。
在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，提供了選擇性拮抗哺乳動物中肝臟糖皮質(zhì)激素受體的效應(yīng)的方法，該方法包括施用治療有效量的化學(xué)式(I)的化合物。
在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，提供了選擇性拮抗哺乳動物中肝臟糖皮質(zhì)激素受體的效應(yīng)的方法，該方法包括施用治療有效量的化學(xué)式(II)的化合物。
在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，提供了治療哺乳動物中糖尿病、肥胖癥或X綜合征的方法，該方法包括施用治療有效量的化學(xué)式(I)的化合物。
在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，提供了治療哺乳動物中糖尿病、肥胖癥或X綜合征的方法，該方法包括施用治療有效量的化學(xué)式(II)的化合物。
在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，提供了治療哺乳動物中高血糖、葡萄糖清除不充分、高胰島素血癥、高脂血癥、糖尿病性高血壓和肝臟糖皮質(zhì)激素水平升高的方法，該方法包括施用治療有效量的化學(xué)式(I)的化合物。
在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，提供了治療哺乳動物中高血糖、葡萄糖清除不充分、高胰島素血癥、高脂血癥、糖尿病性高血壓和肝臟糖皮質(zhì)激素水平升高的方法，該方法包括施用治療有效量的化學(xué)式(II)的化合物。
在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，提供了一種藥用組合物，包含治療有效量的化學(xué)式(I)的化合物和藥學(xué)上合適的載體。
在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，提供了一種藥用組合物，包含治療有效量的化學(xué)式(II)的化合物和藥學(xué)上合適的載體。
在本發(fā)明中，術(shù)語“前藥”指例如通過血液或食道中的水解在體內(nèi)轉(zhuǎn)化成化學(xué)式(I)的化合物的化合物。在T.Higuchi and V.Stella，Pro-drugs as Novel DeliverySystems，Vol.14 of the A.C.S.Symposium Series和Edwar B.Roche，ed.，Bioreversiblecarriers in Drug Design，American Pharmaceutical Association and Pergamon Press，1987中進(jìn)行了全面討論，二者通過引用并入本文。
術(shù)語“藥學(xué)上合適的前藥”指本發(fā)明化合物的前藥，其在合理的醫(yī)療判斷范圍內(nèi)適用于與人類和低等動物的組織接觸，而不具有過度的毒性、刺激性、過敏反應(yīng)等，具有合理的效益/風(fēng)險比，對預(yù)期應(yīng)用有效，以及本發(fā)明化合物的各種離子形式。例如，可以根據(jù)J.Pharm.Sci.1981，70，181-186中所述的Anderson和Taphouse的方法制備酯前藥?？梢愿鶕?jù)Kitagawa、Mohri和Kitagawa在Arneim.-Forschung 1972，22，402-410中描述的方法，或通過Thaisrivongs等在J.Med.Chem.1993，36，2575-2577所述的步驟制備磷酸鹽(酯)前藥。根據(jù)Safadi、Oliyai和Stella在Pharm.Res.1993，10(9)，1350-1355中所概述的方法制備磷酰氧基-甲基碳酸酯和氨基甲酸酯。還可以根據(jù)Hewawasam等在Bioorg.Med.Chem.Letts.2003，13，1695-1698中概述的策略制備這些前藥和包括酰氧基甲基和磷酰氧基甲基醚的其他前藥。Y.Hattori、S.Kawakami、F.Yamashita和M.Hashida在J.Controlled Release 69(2000)，369-377中、R.Saner、J.Maurinsh、U.Reith、F.Fulle、K-N.Klotz和C.Muller在J.Med.Chem.2000，43，440-448中還描述了水溶性前藥的其他例子。二者通過舉例并入本文。
術(shù)語“藥學(xué)上合適的鹽”指在合理的醫(yī)療判斷范圍內(nèi)適用于與人類和低等動物的組織接觸，不具有過分的毒性、刺激性、過敏反應(yīng)等、具有合理的效益/風(fēng)險比的鹽。藥學(xué)上合適的鹽是本領(lǐng)域所熟知的。例如，S.M.Berge等在J.PharmaceuticalSciences，661-19(1997)中描述了藥學(xué)上合適的鹽。所述的鹽可以在本發(fā)明的化合物最終分離和純化的過程中原位制備，或通過使游離的堿官能團(tuán)和適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)酸反應(yīng)而單獨(dú)制備。代表性的酸加成鹽包括醋酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、抗壞血酸鹽、天冬氨酸鹽、苯磺酸鹽、苯甲酸鹽、硫酸氫鹽、硼酸鹽、丁酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽(camphersulfonate)、檸檬酸鹽、環(huán)戊丙酸鹽、二葡萄糖酸鹽(digluconate)、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、延胡索酸鹽、葡庚糖酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、氫溴酸鹽、鹽酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、乳糖酸鹽、乳酸鹽、月桂酸鹽、月桂基硫酸鹽、蘋果酸鹽、馬來酸鹽、丙二酸鹽、甲基磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、煙酸鹽、硝酸鹽、油酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、雙羥基萘酸鹽(pamoate)、pectinate、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、磷酸鹽、苦味酸鹽、特戊酸鹽、丙酸鹽、硬脂酸鹽、琥珀酸鹽、硫酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽、十一烷酸鹽、戊酸鹽等。代表性堿或堿土金屬鹽包括鈉、鋰、鉀、鈣、鎂等，以及無毒的銨、季銨和胺陽離子，包括但不局限于銨、四甲基銨、四乙基銨、甲胺、二甲胺、三甲胺、三乙胺、乙胺等。
本發(fā)明的化合物可以作為立體異構(gòu)體存在，其中存在有不對稱或手性中心。這些化合物用符號“R”或“S”表示，取決于手性碳原子周圍取代基的構(gòu)型。本發(fā)明考慮了各種立體異構(gòu)體及其混合物。立體異構(gòu)體包括對映異構(gòu)體和非對映異構(gòu)體，對映異構(gòu)體的等量混合物表示為(±)。本發(fā)明化合物的各立體異構(gòu)體可以從商業(yè)來源的起始材料合成制得，所述的起始材料包含不對稱或手性中心，或通過制備外消旋的混合物、然后進(jìn)行本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所熟知的拆分。這些拆分方法例如(1)將對映異構(gòu)體混合物和手性助劑結(jié)合，通過再結(jié)晶或色譜法分離所得的非對映異構(gòu)體，并從助劑釋放光學(xué)純產(chǎn)物；或(2)在手性色譜柱上直接分離對映異構(gòu)體混合物。
本發(fā)明的化合物中還可以存在幾何異構(gòu)體。本發(fā)明考慮了由碳-碳雙鍵周圍的取代基排列或環(huán)周圍的取代基排列所產(chǎn)生的各種幾何異構(gòu)體和其混合物。碳-碳雙鍵周圍的取代基命名為Z或E構(gòu)型，其中術(shù)語“Z”表示碳-碳雙鍵同側(cè)的取代基，術(shù)語“E”表示碳-碳雙鍵對側(cè)的取代基。環(huán)周圍取代基的排列命名為順式或反式，其中術(shù)語“順式”表示環(huán)平面同側(cè)的取代基，術(shù)語“反式”表示環(huán)平面對側(cè)的取代基。取代基位于環(huán)平面同側(cè)和對側(cè)的化合物的混合物命名為順/反式。
本發(fā)明還提供了藥用組合物，其包含與一種或多種無毒的藥學(xué)上合適的載體配制在一起的本發(fā)明化合物。配制藥用組合物可以具體配制用于固體或液體形式的口服、用于腸道外施用或直腸施用。
本發(fā)明的藥用組合物可以經(jīng)口、經(jīng)直腸、腸道外、腦池內(nèi)、陰道內(nèi)、腹腔內(nèi)、局部(如粉末、軟膏或滴劑)、經(jīng)頰(bucally)、或作為口或鼻噴霧施用于人類或其他動物。術(shù)語“腸道外”施用指包括靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)、腹腔內(nèi)、胸骨內(nèi)、皮下和關(guān)節(jié)內(nèi)注射和輸注的施用模式。
本發(fā)明用于腸道外注射的藥用組合物包含藥學(xué)上合適的無菌水溶液或非水溶液、分散體、懸浮液或乳液，以及使用前復(fù)原為無菌可注射溶液或分散體的無菌粉末。合適的水或非水載體、稀釋劑、溶劑或溶媒的例子包括水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)及其合適的混合物；植物油(如橄欖油)，和可注射的有機(jī)酯如油酸乙酯。例如，通過使用包衣材料如卵磷脂；通過維持分散體中所需顆粒尺寸；以及通過使用表面活性劑，可以保持適當(dāng)?shù)牧鲃有浴Ｏ喾?，減小顆粒尺寸可以保持生物活性。
這些組合物還可以包含助劑，如防腐劑、潤濕劑、乳化劑和分散劑。可以通過引入各種抗細(xì)菌和抗真菌劑例如對羥基苯甲酸酯、氯丁醇、苯酚山梨酸等來保證對微生物作用的抑制。也可能希望引入等滲透壓劑如糖、氯化鈉等?？梢酝ㄟ^引入延遲吸收的試劑如單硬脂酸鋁和明膠，實(shí)現(xiàn)可注射藥用形式的長時間吸收。
在某些情況下，為了延長藥物的效應(yīng)，需要減緩皮下或肌肉注射后的藥物吸收?？梢酝ㄟ^使用具有低水溶性的晶體或無定形材料的懸浮液來實(shí)現(xiàn)這一點(diǎn)。因此，藥物的吸收速度依賴于其溶解速度，而溶解速度依賴于晶體大小和晶體形式。作為可替換方案，通過將藥物溶解或懸浮在油溶媒中實(shí)現(xiàn)腸道外施用的藥物形式的延遲吸收。
通過在生物可降解的聚合物如聚丙交酯-聚乙交酯中形成藥物的微囊基質(zhì)來制備可注射貯存型。依賴于藥物與聚合物的比例和所用具體聚合物的性質(zhì)，藥物釋放速度可以得以控制。其他生物可降解聚合物的例子包括聚(原酸酯)和聚(酐)。還可以通過將藥物圈閉在和身體組織相容的脂質(zhì)體或微乳劑中來制備貯存可注射配方制劑。
可注射配方制劑可以加以消毒，例如使用前通過截留細(xì)菌的過濾器進(jìn)行過濾，或引入能夠溶解或分散于無菌水或其他可注射介質(zhì)的無菌固體組合物形式的消毒劑。
用于口服的固體劑型包括膠囊、片、丸、粉末和顆粒。在這樣的固體劑型中，活性化合物和至少一種惰性的藥學(xué)上合適的賦形劑或載體混合，所述的賦形劑或載體如檸檬酸鈉或磷酸二鈣，和/或a)填充劑或增容劑，如淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；b)粘合劑，例如羧甲基纖維素、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯膠；c)保濕劑，如甘油；d)崩解劑，如瓊脂、碳酸鈣、土豆或木薯淀粉、藻酸、特定的硅酸鹽、和碳酸鈉；e)溶液阻滯劑，如石蠟；f)吸收加速劑，如季銨化合物；g)潤濕劑，如十六烷醇和單硬脂酸甘油酯；h)吸附劑，如高嶺土和膨潤土；和i)潤滑劑，如滑石、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、月桂基硫酸鈉，及其混合物。在膠囊、片和丸的情況下，劑型還可以包含緩沖劑。
利用諸如乳糖(lactose或milk sugar)以及高分子量聚乙二醇等的賦形劑，將類似類型的固體組合物用作軟-和硬-填充的明膠膠囊中的填充劑。
可以制備帶有包衣和鞘如腸溶衣和藥學(xué)配制領(lǐng)域中熟知的其他包衣來制備片、糖錠、膠囊、丸和顆粒形式的固體劑型。它們可以任選地包含遮光劑，還可以具有僅在腸道的某部分或者優(yōu)先在腸道的某部分任選地以延遲方式釋放活性成分的組合物?？梢允褂玫陌窠M合物的例子包括多聚物質(zhì)和蠟。
活性化合物還可以是微膠囊形式的，如果合適的話，具有一種或多種上述賦形劑。
用于口服的液體劑型包括藥學(xué)上合適的乳液、溶液、懸浮液、糖漿和酏劑。除了活性化合物，液體劑型還包含本領(lǐng)域中通用的惰性稀釋劑，例如水或其他溶劑、增溶劑和乳化劑，如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、苯甲醇、苯甲酸芐酯、丙二醇、1，3-丁二醇、二甲基甲酰胺、油(尤其是棉籽油、花生油、玉米油、胚芽油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、四氫糠醇、聚乙二醇和山梨聚糖的脂肪酸酯，及其混合物。
除了惰性稀釋劑，口服組合物還可以包括助劑，如潤濕劑、乳化和懸浮劑、甜味劑、調(diào)味品和香味劑。
除了活性化合物之外，懸浮液還包括懸浮劑，例如乙氧基化的異硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇和山梨聚糖酯、微晶纖維素、aluminum metahydroxide、膨潤土、瓊脂和黃芪膠，及其混合物。
用于直腸或陰道施用的組合物優(yōu)選為栓劑，可以通過將本發(fā)明的化合物和合適的無刺激性的賦形劑或載體混合而制備，所述的賦形劑或載體如可可油、聚乙二醇或栓劑蠟，其在室溫下為固體，體溫下為液體，從而能夠在直腸或陰道中融化并釋放活性化合物。
本發(fā)明的化合物還可以以脂質(zhì)體的形式施用。如本領(lǐng)域中所公知的，脂質(zhì)體通常來源于磷脂或其他脂物質(zhì)。脂質(zhì)體由分散在水介質(zhì)中的單或多薄層狀的水合液態(tài)晶體(liquid crystals)形成。可以使用能夠形成脂質(zhì)體的任何無毒的、生理學(xué)上合適的、可代謝的脂質(zhì)。除了本發(fā)明的化合物之外，脂質(zhì)體形式的該組合物還可以包含穩(wěn)定劑、防腐劑、賦形劑等。優(yōu)選的脂質(zhì)是天然的和合成的磷脂與磷脂酰膽堿(卵磷脂)。
形成脂質(zhì)體的方法是本領(lǐng)域所公知的。例如參見Prescott，Ed.，Methods in CellBiology，Volume XIV， Academic Press，New York，N.Y.(1976)，p.33及以下。
本發(fā)明化合物用于局部施用的劑型包括粉末、噴霧、軟膏和吸入劑。在無菌條件下活性化合物和可能需要的藥學(xué)上合適的載體和任何所需的防腐劑、緩沖劑或推進(jìn)劑混合。眼用配方制劑、眼膏、粉末和溶液也在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
可以改變本發(fā)明的藥用組合物中活性成分的實(shí)際劑量水平，以獲得能夠有效實(shí)現(xiàn)對特定患者、組合物和施用模式所需治療應(yīng)答的活性化合物的量。所選的劑量水平取決于特定化合物的活性、施用途徑、待治療病情的嚴(yán)重程度和待治療患者的病情和病史。但是，從低于達(dá)到所需治療效果所需要水平的化合物劑量出發(fā)，逐漸增大劑量直至達(dá)到所需效果，屬于本領(lǐng)域的技術(shù)范圍。
哺乳動物患者口服的通常劑量水平為每天每kg體重約0.1至約50mg活性化合物，較優(yōu)選約1至約10mg活性化合物。如果需要，有效日劑量可以分成多劑進(jìn)行服用，如每天2-4次獨(dú)立劑量。
可以采用下面方案中所示的反應(yīng)來制備本發(fā)明的化合物。通過替換這些合成法中的適當(dāng)反應(yīng)物可以合成所述的化合物，步驟自身可以以不同的順序進(jìn)行，這對于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說將是顯而易見的。例如，在下面的方案中，R1、R2、R3、R4、R5、R8、R9和R10在方便的情況下都是氫，這僅僅是為了易于說明。當(dāng)這些基團(tuán)是氫以外的其他基團(tuán)時，也可以進(jìn)行所述方案中所采用的化學(xué)方法。同樣顯而易見的是，可以進(jìn)行保護(hù)和去保護(hù)步驟，以成功地完成化合物的合成。Protective Groupsin Oganic Synthesis，3rdedition，John Wiley & Sons，New York(1999)中提供了保護(hù)基團(tuán)的全面討論。
在下面的方案和實(shí)施例的描述中所用的縮略詞有DMF是N，N-二甲基甲酰胺；DMSO是二甲基亞砜；HFA是三水合六氟丙酮；PPh3是三苯基膦；OsO4是四氧化鋨；NaBH4是硼氫化鈉；(iPr)EtN是二異丙基乙胺；NaIO4是高碘酸鈉；LiOH是氫氧化鋰；TBTU是2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，2，2-四甲基脲陽離子四氟硼酸鹽；NBS是N-溴代丁二酰亞胺；THF是四氫呋喃。
方案1.活化膽汁酸中間體的制備
方案2.糖皮質(zhì)激素拮抗劑中間體的制備 方案3.片段的組合 本發(fā)明的化合物可以根據(jù)方案1-3中所述的方法制備。在膽酸中間體上引入潛在的連接基團(tuán)的一種方法如方案1所述。膽酸甲酯例如通過用磺酰鹵化物等處理而選擇性地在3-位活化。活化的3-醇用乙二醇置換，所得的醇例如通過向氯化物、磺酸酯等的轉(zhuǎn)化而活化為離去基團(tuán)，即得中間體Z。
在方案2中，中間體A和B在以下的幾個步驟中從公知的酮-縮酮制備。有機(jī)金屬反應(yīng)試劑例如丙炔基-溴化鎂等向C-17酮的加成產(chǎn)生相應(yīng)的β醇作為主要的立體異構(gòu)體。Δ(5，10)雙鍵的選擇性環(huán)氧化作用，例如使用由六氟丙酮催化的過氧化氫，產(chǎn)生未飽和的環(huán)氧化物，其以SN2’方式和有機(jī)金屬試劑例如4-(N-Boc-N-甲基)-苯基溴化鎂反應(yīng)，即得相應(yīng)C-11取代的烯丙醇A。例如使用對甲苯磺酸水合物或鹽酸等進(jìn)行酸催化的去保護(hù)，并同時去除C-5醇，即得烯酮樣的B。
在方案3中，C-11處的連接取代基的任選的去保護(hù)之后，例如使用類堿的三乙胺等清除反應(yīng)過程中產(chǎn)生的酸，該片段和方案1中所述的修飾的膽汁酸Z偶聯(lián)。所得的連接產(chǎn)物C中酯基團(tuán)的水解產(chǎn)生目標(biāo)化合物。
方案4.片段的替換方式的組合 方案4描述了方案3中所述的偶聯(lián)策略的替換方式。在C-11處的連接基團(tuán)的任選的去保護(hù)之后，來自方案2的中間體A可以直接與方案1中修飾的膽汁酸Z偶聯(lián)。偶聯(lián)產(chǎn)物用酸處理，以除去C-3乙縮醛，去除C-3醇，所得的烯酮酯C如前所述水解，即得目標(biāo)化合物。
方案5.糖皮質(zhì)激素拮抗劑中間體的替換方式的組合方案5A
方案5B 為了有利于結(jié)構(gòu)-活性研究，可以根據(jù)方案5中所述的幾個替換方式的策略制備關(guān)鍵中間體B。因此，例如，如方案5A中所述，Δ5，10石蠟的環(huán)氧化可以發(fā)生在C-17取代基的加成之前。所得環(huán)氧-醇的進(jìn)一步轉(zhuǎn)化如前面的方案2所述。作為可替換方案，C-17取代基的加成可以一直推遲到合成后期。在這種情況下，如方案5B所示，C-11和C-17加成步驟的順序是顛倒的。所有的其他轉(zhuǎn)化如方案2所述。
方案6 本發(fā)明化合物的前藥形式可以根據(jù)方案6-10中概述的方法制備。在方案6中，膽酸的C-3羥基例如以酯、三烷基甲硅烷基醚等形式加以保護(hù)，使得C-7和/或C-12羥基可以用潛在形式的體內(nèi)分解部分處理。這種反應(yīng)基團(tuán)(LPD-X)的例子可以包括二烷基磷酰氯(dialkylphosphochloridate)、活化的酸、氯甲酸酯等。如前面的方案1所述，選擇性地去除C-3保護(hù)基，所得的C-3醇轉(zhuǎn)化為潛在的連接基團(tuán)，即得中間體D。
方案7 作為可替換方案，如方案7所示，根據(jù)方案1制備的化合物Z的C-7和/或C-12羥基用潛在形式的體內(nèi)分解物質(zhì)處理，直接提供中間體。
方案8 如方案8所示，根據(jù)方案6或方案7制備的化合物Y可以如方案3所述用二烯酮B(任選的去保護(hù)之后)處理，提供完全保護(hù)的偶聯(lián)產(chǎn)物D。水解D中的酯，然后去除保護(hù)基，即得最終的前藥酸。作為可替換方案，偶聯(lián)產(chǎn)物D可以通過中間體A(任選的去保護(hù)之后)和化合物Y反應(yīng)、然后在酸性條件下進(jìn)行處理來制備。
方案9 方案9表明化合物D可以從倒數(shù)第二個中間體C通過和潛在形式的體內(nèi)分解部分反應(yīng)直接制備。這種反應(yīng)性基團(tuán)的例子可以包括二烷基磷酰氯、活化的酸、氯甲酸酯等。水解D中的酯，然后去除保護(hù)基，即得最終的前藥酸。
方案10 方案10表明本發(fā)明的化合物可以直接用于制備前藥形式。所述化合物用潛在形式的體內(nèi)分解部分處理，然后去除保護(hù)基。這種反應(yīng)性基團(tuán)的例子可以包括二烷基磷酰氯、活化的酸、氯甲酸酯等。
現(xiàn)在將結(jié)合所述方案的優(yōu)選實(shí)施方案來描述本發(fā)明，所述方案并不限制本發(fā)明的范圍。相反，本發(fā)明涵蓋了包括在權(quán)利要求書范圍內(nèi)的所有替換方式、改變和等同物。因此，下面的實(shí)施例說明本發(fā)明的特別優(yōu)選的實(shí)踐，應(yīng)該理解，實(shí)施例的目的是說明某些優(yōu)選的實(shí)施方案，并提供最有用的且易于理解的步驟和概念方面的描述。
合成方法在以下的方案和實(shí)施例的描述中用到的縮略詞為EtOAc是乙酸乙酯；CH2Cl2是二氯甲烷；CHCl3是氯仿；CH3CN是乙腈；THF是四氫呋喃；MTBE是甲基叔丁基醚。
實(shí)驗(yàn)技術(shù) 實(shí)施例1(3β，5β，7α，12α)-7，12-二羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-1-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}-24-膽烷酸 實(shí)施例1A(3α，5β，7α，12α)-7，12-二羥基-3-(甲磺酰基氧基)-24-膽烷酸甲酯在0℃攪拌下，在30分鐘期間，向吡啶(75mL)中的膽酸甲酯(25g，59.2mmol)溶液中滴加甲基磺酰氯(5.04mL，65.1mmol)。反應(yīng)物升溫至室溫，攪拌6小時。將反應(yīng)混合物倒入EtOAc(200mL)、1N HCl(200mL)和冰的混合物中。分層，有機(jī)層用1N HCl(2×50mL)洗滌，干燥(Na2SO4)并濃縮，即得淺黃色的油。將該粗制材料通過用50％EtOAc/己烷洗脫的二氧化硅塞(plug)，即得24.5g(83％)淺黃色油狀的標(biāo)題化合物，其置于高真空泵下時形成白色粘稠的泡沫。
實(shí)施例1B(3β，5β，7α，12α)-7，12-二羥基-3-(2-羥基乙氧基)-24-膽烷酸甲酯在環(huán)境溫度下，含有實(shí)施例1A化合物(10.0g，20mmol)的壓力容器(250mL燒瓶)中裝入乙二醇(20mL)和吡啶(4mL)，密封，然后于120℃加熱4小時。將反應(yīng)物冷卻至室溫，用EtOAc(50mL)稀釋，并用1N HCl(30mL)終止反應(yīng)。分層，有機(jī)層用1N HCl(2×50mL)洗滌、干燥(Na2SO4)并濃縮。通過硅膠色譜(10％->40％丙酮/己烷)進(jìn)行純化，即得標(biāo)題化合物(3.5g，37％)。MS(ESI)m/e484(M+NH4)+ 實(shí)施例1C(3β，5β，7α，12α)-7，12-二羥基-3-[2-(對甲苯磺酰基氧基)乙氧基]-24-膽烷酸甲酯將實(shí)施例1B的化合物(1.50g，3.2mmol)溶解于15mL氯仿和15mL吡啶中；加入對甲苯磺酰氯(920mg，4.83mmol)，并將混合物攪拌過夜。加入氯仿(250mL)，所得溶液用5％HCl溶液和飽和Na2SO4洗滌。在真空中除去溶劑之后，該粗制產(chǎn)物通過硅膠柱色譜(40％->60％丙酮/己烷)進(jìn)行純化。標(biāo)題化合物的產(chǎn)率為1.40g(71％)。
實(shí)施例1DN-叔丁氧羰基-N-甲基-4-溴苯胺將50mmol 4-溴苯胺(0.86g)溶解于10mL的THF中；加入1.09g(5.0mmol)二碳酸二叔丁基酯，并將所得溶液升溫至50℃ 5小時。反應(yīng)物在水和乙酸乙酯之間分配；有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，并濃縮產(chǎn)生白色固體。該粗制材料溶解于20mL的干燥THF中，并在冰浴中冷卻；按份加入250mg(1.25當(dāng)量)的NaH(60％油分散體)。氣體放出，15min后留下泡沫狀的半固體。加入額外的THF(10mL)以驅(qū)散泡沫，然后加入0.50mL(1.6當(dāng)量)的碘代甲烷。所得產(chǎn)物攪拌過夜，緩慢升溫至室溫。將反應(yīng)混合物小心加入到1N H3PO4水溶液中(有氣體放出！)，所得混合物用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層用鹽水洗滌，并用Na2SO4干燥。粗制產(chǎn)物通過硅膠色譜、用0->10％乙酸乙酯/己烷梯度洗脫進(jìn)行純化，得到1.08g(共76％)標(biāo)題化合物，其為稍帶黃色的油。
實(shí)施例1E(5’R，10’R，13’S)-13’-甲基-1’，2’，6’，7’，8’，12’，13’，14’，15’，16’-十氫-17’H-螺[1，3-二氧戊環(huán)-2，3’-[5，10]環(huán)氧環(huán)戊[α]菲]-17’-酮0℃下，向CH2Cl2(160mL)中的二烯(5.0g，15.9mmol)、三水合六氟丙酮(349mg，1.59mmol)和吡啶(75mg，0.95mmol)溶液中滴加30％H2O2溶液(2.7g，23.8mmol)。反應(yīng)物于0℃攪拌2小時，并于常溫下攪拌2天(通過TLC監(jiān)測)。用10％Na2S2O3溶液終止反應(yīng)，用CH2Cl2(250mL×3)萃取，并經(jīng)Na2SO4干燥。在真空中除去溶劑，所得的黃色固體用35mL二乙醚在封閉的燒瓶中磁力攪拌過夜，粉碎?；旌衔锿ㄟ^粗-多孔燒結(jié)的玻璃漏斗進(jìn)行吸濾，用5mL二乙醚洗滌三次，并吸干1小時。所得的濾餅?zāi)氤杉?xì)粉，真空干燥，即得標(biāo)題化合物(2.0g，38％產(chǎn)率)。殘留物質(zhì)(～2.6g)可以再次經(jīng)歷上述步驟，回收另外的0.5gα-環(huán)氧化物。
實(shí)施例1F(5’R，10’R，13’S，17’S)-13’-甲基-17’-丙-1-炔基-1’，2’，7’，8’，12’，13’，14’，15’，16’，17’-十氫-6’H-螺[1，3-二氧戊環(huán)-2，3’-[5，10]環(huán)氧環(huán)戊[α]菲]-17’-醇0℃下，向THF(1.2mL，蒸餾)中的100mg(0.30mmol)實(shí)施例1E化合物的溶液中滴加丙-1-炔基溴化鎂溶液(1.2mL，0.60mmol，0.5M，在THF中)。反應(yīng)混合物攪拌2hr。在真空中除去溶劑；殘余物用飽和的NH4Cl水溶液終止，用EtOAc(20mL×3)萃取。合并的有機(jī)萃取物用Na2SO4干燥。在真空中除去溶劑，即得110mg標(biāo)題化合物(產(chǎn)率～100％)。
實(shí)施例1G叔丁基4-((5R，11R，13S，17S)-5，17-二羥基-13-甲基-17-丙-1-炔基-1，2，4，5，6，7，8，11，12，13，14，15，16，17-十四氫螺[環(huán)戊[α]菲-3，2’-[1，3]二氧戊環(huán)]-11-基)苯基(甲基)氨基甲酸酯將裝有Mg粉(44mg，1.8mmol)的50mL燒瓶在N2下用加熱槍(heat-gun)干燥。在裝置冷卻至室溫后，加入THF(2mL)和小的碘晶體。往有效攪拌的混合物中加入0.6mL實(shí)施例1D化合物(500mg，1.75mmol)的THF(2mL)溶液?；旌衔锛訜峄亓骷s5分鐘后，碘的顏色迅速褪為無色，然后將混合物冷卻至室溫。在20分鐘期間滴加其余的溴化物溶液。混合物在冰水浴中冷卻30分鐘，然后一次性加入CuI(132mg，0.69mmol，粉末)?；旌衔飻嚢?分鐘后，加入THF(2mL)中的實(shí)施例1F化合物(256mg，0.69mmol)溶液，導(dǎo)致形成大量的淺黃色沉淀。30分鐘后，緩慢加入NH4Cl溶液(5mL，飽和)，然后緩慢加入EtOAc(10mL)。將混合物攪拌10分鐘，然后分離水層，用EtOAc萃取。合并的有機(jī)層用鹽水(3×)洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥并濃縮。該粗制產(chǎn)物通過HPLC(標(biāo)準(zhǔn)相)純化，即得標(biāo)題化合物(352mg，90％產(chǎn)率)。
實(shí)施例1H(11β，17α)-17-羥基-11-(4-(甲基氨基)苯基)-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-3-酮將實(shí)施例1G化合物(36mg)溶解于0.3mL TsOH.H2O/CH2Cl2/THF(1.9g/3mL/3.8mL)溶液中；所得混合物于室溫下攪拌3小時。將反應(yīng)混合物滴加到NaHCO3溶液(2mL，飽和)中，然后用EtOAc(3×)萃取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥并濃縮。粗制產(chǎn)物通過制備的(preparative)TLC純化，即得標(biāo)題化合物(20mg，74％產(chǎn)率)。

實(shí)施例1I(3β，5β，7α，12α)-7，12-二羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}-24-膽烷酸甲酯在1升的壓力瓶中，將實(shí)施例1C化合物(15g，24.2mmol)和實(shí)施例1H化合物(11g，26.5mmol)與NaI(2.7g)、溶于400mL乙腈中的二異丙基乙胺(3.12g)混合。溶液加熱至100℃。采用TLC(EtOAc∶己烷，60∶40)或HPLC驗(yàn)證反應(yīng)的完成；16小時后未觀察到起始物質(zhì)。將反應(yīng)混合物冷卻至環(huán)境溫度，并通過Celite硅藻土過濾；在真空中除去溶劑。該粗制材料用EtOAc(500mL)稀釋，并用飽和的氯化銨溶液(2×100mL)洗滌。在真空中除去溶劑，將該粗制材料加到硅膠柱上，并用己烷/EtOAc(3∶2-1∶1-2∶3)洗脫。收集純的級分，濃縮，即得14.5g(63.3％)的標(biāo)題化合物。
實(shí)施例1J(3β，5β，7α，12α)-7，12-二羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}-24-膽烷酸將實(shí)施例1I化合物(1.40g，1.62mmol)溶解于15mL的THF中；加入15mL的1N的LiOH水溶液，所得混合物于環(huán)境溫度下攪拌5小時。在真空中除去溶劑，并加入足夠的水以形成一相。用醋酸將溶液酸化，以沉淀出淺黃色的固體，該固體可以通過過濾收集，并用水洗滌數(shù)次。產(chǎn)物在凍干機(jī)上干燥過夜。生成1.35g(98％)的標(biāo)題化合物。1H NMR(500MHz，MeOH)δ7.07-7.71(m，4H)，5.76(s，1H)，4.57(d，1H)，3.95(s，1H)，3.78(d，1H)，3.74(t，1H)，3.44(m，1H)，3.23(m，3H)，2.86(m，1H)，2.66(m，1H)，2.50(m，2H)，2.16-2.41(m，7H)，2.15(m，2H)，2.08(m，1H)，1.95(m，3H)，1.85(m，5H)，1.75(m，5H)，1.57(m，7H)，1.40(m，8H)，1.31(m，6H)，1.01(d，3H)，0.92(m，5H)，0.71(s，3H)，0.48(s，3H)，MS(ESI)m/e 850(M+H)+，848(M-H)-；對于C54H75NO7的準(zhǔn)確分子量計算值850.5616；實(shí)測值850.5620.
(3β，5β，7α，12α)-7，12-二羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}-24-膽烷酸的替換方式的合成。
實(shí)施例1K，實(shí)施例1A的可替換方案(3α，5β，7α，12α)-7，12-二羥基-3-(p-甲苯磺?；趸?-24-膽烷酸甲酯在2.5小時期間，-10℃下、向溶于吡啶(2250mL)中的膽酸甲酯(1000.0g，2.366mol)溶液中滴加溶于吡啶(650mL)中的對甲苯磺酰氯(654.2g，2.431mol)，并同時將反應(yīng)溫度維持在-10至-6℃。將該溶液于-10℃再混合12.5小時，用水(61.8g)稀釋，并繼續(xù)冷卻。在43分鐘期間將-7.5℃的混合物加入到MTBE(5L)和6NHCl(6.2L)的混合物中。分層，將有機(jī)相用7％NaHCO3(2L)、然后用2％NaCl(2L)、最終用pH7的磷酸鹽緩沖液(2L)洗滌。將有機(jī)相過濾，用MTBE(3×200mL)減壓濃縮，即得1608.93g非常粘稠的淡黃色油(95.3％效能調(diào)整產(chǎn)率)，直接用于下一步驟。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ7.79(d，J＝8.5Hz，2H)，7.32(d，J＝8.6Hz，2H)，4.40-4.31(m，1H)，3.97(br s，1H)，3.83(br s，1H)，3.68(s，3H)，2.60-2.50(m，1H)，2.45(s，3H)，2.43-1.34(m，25H)，0.99(d，J＝6.3Hz，3H)，0.88(s，3H)，0.69(s，3H)，MS(ESI)預(yù)期值＝576；基準(zhǔn)值(base)＝594.2(576+NH4+).
實(shí)施例1L，實(shí)施例1B的替換方式(3β，5β，7α，12α)-7，12-二羥基-3-(2-羥基乙氧基)-24-膽烷酸甲酯往含有殘留MTBE(311.5g)的實(shí)施例1K的粗制次級(secondary)甲苯磺酰酯(1297.3g，2.25mol)中裝入乙二醇(2516g，40.5mol)和吡啶(445g，5.63mol)，將該混合物于60℃加熱15小時，然后于80℃加熱4小時。將混合物冷卻至30℃以下，加入乙酸異丙酯(5.3L)，然后加入1.15M HCl(3387mL)。分層，水層用乙酸異丙酯(3L)萃取。合并的有機(jī)相用10％鹽水(5L)洗滌，然后濃縮成殘余物。將殘余物溶解于甲醇(15L)和水(7.5L)中，將混合物用庚烷(30L)萃取。加入額外的水(7.5L)，將甲醇/水溶液加熱至45℃，然后用庚烷(2×30L)萃取。將甲醇/水相冷卻至室溫，然后加入二氯甲烷溶液(15L)和20％鹽水(15L)，并分層。減壓除去二氯甲烷溶液，往殘余物中加入甲苯，將產(chǎn)物過濾并加以干燥，即得白色固體狀的實(shí)施例1B化合物(462.2g，44％)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ3.97(m，1H)，3.85(m，1H)，3.70(m，2H)，3.65(s，3H)，3.58(m，1H)，3.47(m，2H)，1.10-2.40(m，27H)，0.98(d，J＝6.3Hz，3H)，0.91(s，3H)，0.69(s，3H).MS(M+NH4)+＝484.3.
實(shí)施例1M，實(shí)施例1C的替換方式(3β，5β，7α，12α)-7，12-二羥基-3-[2-(碘)乙氧基]-24-膽烷酸甲酯35分鐘期間，往-11℃的溶于吡啶(67.5mL)中的得自實(shí)施例1B的伯醇(30.0g，64.2mmol)溶液中滴加吡啶(22.5mL)中的對甲苯磺酰氯(15.57g，81.5mmol)，同時將反應(yīng)溫度維持在-11至-8℃。反應(yīng)物于-12℃再混合6小時，然后通過加入水(1.5g)終止反應(yīng)。在5分鐘期間，將-12.5℃的、終止了的反應(yīng)混合物加入到叔丁基甲醚(180mL)和3N HCl(369mL)的混合物中，分層。有機(jī)層用7％NaHCO3(90mL)洗滌，然后用2％NaCl(90mL)洗滌，最后用pH7的緩沖溶液(90mL)洗滌。將有機(jī)層減壓濃縮，并用MTBE(90mL)、然后用丙酮(90mL)收集，即得51.26g粘稠的油。加入丙酮(386mL)，然后加入碘化鈉(14.45g，96.4mmol)，反應(yīng)混合物在氮?dú)庀录訜峄亓?，直到甲苯磺酸鹽消耗完。往冷卻的反應(yīng)混合物中加入MTBE(200mL)和H2O(200mL)，分層。有機(jī)層用H2O(150mL)洗滌，濃縮并用CH3CN收集。通過過濾將產(chǎn)物和CH3CN分離，并干燥，即得29.51g(76.9％)的標(biāo)題化合物。
實(shí)施例1N，實(shí)施例1H的替換方式(11β，17α)-17-羥基-11-(4-(甲基氨基)苯基)-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-3-酮將實(shí)施例1G化合物(36mg)溶解于0.3mL TsOH.H2O/CH2Cl2/THF(1.9g/3mL/3.8mL)溶液中；所得混合物于室溫下攪拌3小時。反應(yīng)混合物滴加到NaHCO3溶液(2mL，飽和)中，并用EtOAc(3次)萃取。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥并加以濃縮。粗制產(chǎn)物通過制備性TLC純化，即得標(biāo)題化合物(20mg，74％產(chǎn)率)。
實(shí)施例1O，實(shí)施例1H的另一替換方式(11β，17α)-17-羥基-11-(4-(甲基氨基)苯基)-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-3-酮往CH2Cl2(500mL)中的(11β，17α)-17-羥基-11-(4-(二甲基氨基)苯基)-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-3-酮(200g，0.446mol)中，加入已經(jīng)用Na2SO4干燥的、溶于CH2Cl2(1250mL)中的NMO(260g，2.22mol)濾液，所得溶液在N2下冷卻至-10℃。在25分鐘內(nèi)滴加溶于CH2Cl2(150mL)中的TPAP(16.1g，0.046mol)溶液，所得溶液于-10℃混合。在20min內(nèi)通過加料漏斗加入10％亞硫酸氫鈉(2100mL)終止反應(yīng)。然后將溶液升溫至室溫，再攪拌10min。加入EtOAc(3.5L)和H2O(2L)并分層。水層用EtOAc(2L)反萃取，合并的有機(jī)相用pH7的磷酸鹽緩沖液(2×4L)洗滌。有機(jī)層通過Celite硅藻土過濾，并用碳(Darco G-60，46.1g)脫色。濃縮產(chǎn)物溶液，使產(chǎn)物沉淀。產(chǎn)物過濾、干燥，即得130.17g的甲酰胺(63.0％)。1HNMR(CDCl3，400MHz)δ8.47(s，1H)，7.22(d，J＝8.1Hz，2H)，7.09(d，J＝8.7Hz，2H)，5.80(s，1H)，4.44(d，J＝7.2Hz，1H)，3.31(s，3H)，2.85-2.2(m，11H)，1.92(s，1H)，2.1-1.3(m，6H)，0.53(s，3H).樣品還含有約20mole％EtOAc。MS(ESI)，M+1＝444，M-1＝442.
往15-20℃的溶于甲醇(2.6L)中的甲酰胺(130.17g，0.265mol)溶液中加入5℃的HCl水溶液(696mL濃HCl和1440mL H2O)。反應(yīng)物升溫至室溫，混合40小時。反應(yīng)混合物冷卻至15℃，加入10％Na2CO3溶液調(diào)pH。產(chǎn)物于pH3(12℃下最終pH＝7.05)時開始沉淀。過濾分離產(chǎn)物，然后將濕濾餅溶解于CH2Cl2(700mL)中，分層，有機(jī)層在真空下濃縮成稠的殘余物。將溶劑換為CH3CN，然后將產(chǎn)物過濾并干燥，即得實(shí)施例1H化合物(104.2g，85.4％)。1H NMR(CDCl3，400MHz)δ6.98(d，J＝8.1Hz，2H)，6.56(d，J＝8.7Hz，2H)，5.77(s，1H)，4.35(d，J＝6.9Hz，1H)，2.83(s，3H)，2.85-2.1(m，10H)，1.91(s，3H)，2.1-1.3(m，6H)，0.53(s，3H).樣品還含有約80mole％CH3CN。MS(ESI)，M+1＝416，M-1＝414.
實(shí)施例1P，實(shí)施例1I的替換方式(3β，5β，7α，12α)-7，12-二羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}24-膽烷酸甲酯將N，N-二甲基乙酰胺(20mL)中的實(shí)施例1H化合物(4.0g，9.63mmol)、實(shí)施例1M的一價碘化物(7.44g，12.9mmol)、二異丙基乙胺(1.66g，12.9mmol)在氮?dú)庀录訜嶂?0℃18h。冷卻的反應(yīng)混合物用乙酸異丙酯(50mL)稀釋，并用10％NH4Cl(50mL)洗滌，然后用pH7的磷酸鹽緩沖液(50mL)洗滌。將有機(jī)相真空濃縮，粗制產(chǎn)物在二氧化硅上層析(50％EtOAc/庚烷至100％EtOAc)，即得標(biāo)題化合物(5.95g，76.8％)。
實(shí)施例1Q，實(shí)施例1I的另一替換方式(3β，5β，7α，12α)-7，12-二羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}24-膽烷酸甲酯N，N-二甲基乙酰胺(20.7mL)中的(11β，17α)-17-羥基-11-(4-(二甲基氨基)苯基)-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-3-酮(4.14g，9.63mmol)、實(shí)施例1L的一價碘化物(7.44g，12.9mmol)、二異丙基乙胺(1.66g，12.9mmol)在氮?dú)庀录訜嶂?0℃ 19h。冷卻的反應(yīng)混合物用乙酸異丙酯(50mL)稀釋，并用10％NH4Cl(50mL)洗滌，然后用pH7的磷酸鹽緩沖液(50mL)洗滌。將有機(jī)相真空濃縮，該粗制產(chǎn)物經(jīng)二氧化硅色譜(50％EtOAc/庚烷至100％EtOAc)純化，即得標(biāo)題化合物(4.96g，60.6％)。
實(shí)施例1R，實(shí)施例1I的另一替換方式(3β，5β，7α，12α)-7，12-二羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}24-膽烷酸甲酯得自實(shí)施例1B的伯醇(8.69g，18.62mmol)溶解于CH2Cl2(87mL)，并加入N，N-二異丙基乙胺(6.14g，47.52mmol)，將溶液冷卻至-45至-55℃。在2.5h期間、在-52℃至-47℃加入三氟甲磺酸酐(5.31g，18.82mmol)。溶液于約-48℃混合47min。然后加入(11β，17α)-17-羥基-11-(4-(二甲基氨基)苯基)-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-3-酮(5.00g，11.6mmol)，混合物升溫至-6℃，混合88h。溶液用10％NH4Cl溶液洗滌，在真空中除去溶劑。將殘余物溶解于乙腈(50mL)，在真空中除去溶劑；加入乙腈，即得約10mL乙腈終體積/g苯胺。往溶液中加入N，N-二異丙基乙胺(2.27g，17.56mmol)和NaI(5.24g，34.96mmol)，混合物加熱回流并混合45h。冷卻微混濁的溶液，并加入CH2Cl2(20mL)和EtOAc(50mL)，溶液用5％NH4Cl溶液洗滌，然后用20％NaCl溶液洗滌。通過硅膠色譜(EtOAc/庚烷梯度)純化，即得標(biāo)題化合物(82.7％)。
實(shí)施例1S，實(shí)施例1J的替換方式(3β，5β，7α，12α)-7，12-二羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}-24-膽烷酸5℃的EtOH(173mL)中的實(shí)施例1I化合物(17.28g，20.0mmol，91％化學(xué)效能，因此是15.72g，18.2mmol)溶液以一定的速率添加3N KOH(33.3mL，100mmol)，以將內(nèi)部溫度維持在＜7℃。反應(yīng)物于5℃攪拌17小時。反應(yīng)混合物用3N HCl(33.3mL，100mmol)中和，并同時將內(nèi)部溫度維持在＜10℃(最終pH用0.2mL的3N KOH從4.63調(diào)整至4.87)。加入3N HCl后數(shù)分鐘反應(yīng)混合物結(jié)晶。將反應(yīng)混合物升溫至環(huán)境溫度，加入種子(20mg的籽晶)，升溫至40℃ 3小時，緩慢冷卻至環(huán)境溫度，再攪拌16小時。將漿料過濾，洗滌并干燥，即得14.30g(92.4％)的標(biāo)題化合物。
實(shí)施例2(3β，7α，12α)-7，12-二羥基-3-(2-(4-((11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基)-2-甲基苯氧基)乙氧基)-24-膽烷酸實(shí)施例2A1-烯丙氧基-4-溴-2-甲基-苯往4-溴-2-甲基苯酚(2.0g，10.7mmol)的THF(100mL)溶液中加入固體Cs2CO3(3.8g，11.7mmol)和烯丙基溴化物(1.9mL，21.4mmol)。反應(yīng)混合物于室溫下攪拌20小時。攪拌結(jié)束時，溶液用NH4Cl水溶液稀釋，并用乙酸乙酯萃取兩次。合并的有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，真空濃縮，并通過柱色譜(己烷中0至100％乙酸乙酯)純化，即得1.1g(45％)的白色固體。
實(shí)施例2B(3β，7α，12α)-7，12-二羥基-3-(2-((甲基磺酰基)氧基)乙氧基)-24-膽烷酸甲酯實(shí)施例1B化合物(1.0g，2.1mmol)溶解于THF(21mL)中并冷卻至0℃。往冷卻的溶液中加入甲基磺酰氯(0.25mL，3.21mmol)，然后滴加三乙胺(0.45mL，3.21mmol)。反應(yīng)溶液升溫至室溫，并攪拌過夜。加入NH4Cl飽和水溶液，并用乙酸乙酯萃取兩次。有機(jī)相用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，濃縮，并通過柱色譜(1∶1己烷∶乙酸乙酯)純化。生成產(chǎn)物429mg(37％)。
實(shí)施例2C(11β，17α)-11-(4-(烯丙氧基)-3-甲苯基)-17-羥基-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-3-酮往圓底燒瓶中加入鎂粉(916mg，38mmol)，火焰干燥。冷卻至室溫時，加入碘晶體。往合并的固體中加入30mL THF，并將懸浮液浸入水浴。然后滴加實(shí)施例2A中制備的化合物(8.6g，38mmol，為10-30mL THF中的溶液)。在加入溴化物15分鐘內(nèi)發(fā)生起始反應(yīng)，由碘顏色消失來指示。反應(yīng)溶液冷卻至0℃，并一次性加入CuI(3.6g，19mmol)。2分鐘后，迅速加入溶解于10mL THF的實(shí)施例1F的環(huán)氧化物溶液(2.8g，7.5mmol)。于0℃攪拌1小時后，用NH4Cl水溶液終止反應(yīng)，并用乙酸乙酯萃取。有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并濃縮。粗制殘余物溶解于THF(150mL)，并加入2M HCl(75mL)。反應(yīng)混合物于室溫下攪拌1小時，加入NaHCO3水溶液中和反應(yīng)物，所得溶液用乙酸乙酯萃取。有機(jī)相用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，濃縮，并通過柱色譜(1∶1己烷∶乙酸乙酯)純化。產(chǎn)物產(chǎn)率為429mg(37％)。并通過柱色譜(4∶1己烷∶乙酸乙酯)純化。反應(yīng)產(chǎn)率為737mg(21％)。
實(shí)施例2D(11β，17α)-17-羥基-11-(4-羥基-3-甲苯基)--17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-3-酮實(shí)施例2C中所述的化合物(737mg，1.6mmol)溶解于二氯甲烷(8mL)中。往溶液中加入苯基硅烷(0.4mL，3.2mmol)和Pd(Ph3)4(186mg，0.2mmol)，此時反應(yīng)混合物變黑。室溫下攪拌1小時后，將溶液用鹽水稀釋，并用乙酸乙酯萃取。合并的有機(jī)級分在MgSO4上干燥，濃縮，并通過柱色譜(70∶30己烷∶乙酸乙酯)純化，即得369mg(55％)白色固體產(chǎn)物。

實(shí)施例2E(3β，7α，12α)-7，12-二羥基-3-(2-(4-((11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基)-2-甲基苯氧基)乙氧基)-24-膽烷酸甲酯合并實(shí)施例2D的苯酚(252mg，0.6mmol)和實(shí)施例2B的甲磺酸酯(390mg，0.7mmol)，溶解于THF(6mL)中。往溶液中加入Cs2CO3(600mg，1.8mmol)和nBu4NI(450mg，1.2mmol)，所得的混合物升溫至55℃24小時。冷卻至室溫時，混合物用鹽水稀釋，并用乙酸乙酯萃取。有機(jī)級分經(jīng)MgSO4干燥，真空濃縮，并通過柱色譜(70∶30己烷∶乙酸乙酯)純化。偶聯(lián)的產(chǎn)率是480mg(93％)。
實(shí)施例2F(3β，7α，12α)-7，12-二羥基-3-(2-(4-((11β，17β)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基)-2-甲基苯氧基)乙氧基)-24-膽烷酸實(shí)施例2E中所述的酯溶解于THF(2mL)和甲醇(2mL)的混合物中。往混合物中加入LiOH(1.4mL的1M水溶液)。所得混合物于室溫下攪拌2小時。反應(yīng)混合物用水稀釋，并用二乙醚洗滌。水相級分用1M H3PO4酸化，并用乙酸乙酯萃取。合并的有機(jī)級分經(jīng)MgSO4干燥，真空濃縮。粗制的白色物體不進(jìn)行進(jìn)一步純化。1H NMR(300mHz，CDCl3)δ6.95(d，J＝2.03Hz，1H)，6.84(m，1H)，6.71(d，J＝8.48Hz，1H)，5.76(s，1H)，4.34(d，J＝6.10Hz，1H)，4.06(m，2H)，3.99(s，1H)，3.85(d，J＝2.37，1H)，3.72(dd，J＝4.58，6.27Hz，2H)，3.65(d，J＝2.71Hz，1H)，2.75(m，2H)，2.59(m，4H)，2.36(m，12H)，2.19(s，3H)，1.97(m，4H)，1.90(m，3H)，1.54(m，19H)，1.01(m，3H)，0.90(s，3H)，0.71(s，3H)，0.53(s，3H)，MS(ESI)m/e 851.6(M+H)+，849.6(M-H).

實(shí)施例3(3β，5β，7α，12α)-7，12-二羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]-2-氟苯基}(甲基)氨基]乙氧基}-24-膽烷酸 實(shí)施例3AN-叔丁氧羰基-N-甲基-2-氟-4-溴苯胺用4-溴-2-氟苯胺代替4-溴苯胺，根據(jù)實(shí)施例1D的方法制備該化合物。
實(shí)施例3B2-氟-4-((11R，13S，17S)-7-羥基-13-甲基-17-丙-1-炔基-1，2，6，7，8，11，12，13，14，15，16，17-十二氫螺[環(huán)戊[α]菲-3，2’-[1，3]二氧戊環(huán)]-11-基)苯基(甲基)氨基甲酸叔丁酯用實(shí)施例3A的化合物代替實(shí)施例1D的化合物，使用實(shí)施例1G的方法制備該化合物(95％產(chǎn)率)。1H NMR(300mHz，DMSO)δ7.23(t，J＝8.4Hz，1H)，7.06(m，1H)，7.02(m，1H)，5.07(s，1H)，4.26(d，J＝6.3Hz，1H)，4.17(m，1H)，3.91-3.70(m，4H)，3.08(s，3H)，2.33-0.98(m，16H)，1.83(s，3H)，1.29(s，9H)，0.32(s，3H)；MS(ESI)m/e 578(M+H)+.
實(shí)施例3C(11β，17α)-(3-氟-4-(甲基氨基)苯基)-17-羥基-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-3-酮往0℃ CH2Cl2(2mL)中的實(shí)施例3B化合物(490mg，0.85mmol)溶液中滴加CH2Cl2中的TFA溶液(6mL 50％溶液)。所得混合物于0℃攪拌35分鐘。通過滴加NaHCO3溶液(飽和)中和反應(yīng)混合物，然后用EtOAc萃取(3次)。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，經(jīng)Na2SO4干燥，并濃縮。粗制產(chǎn)物通過硅膠色譜(33％乙酸乙酯/己烷)純化，即得標(biāo)題化合物(244mg，66％產(chǎn)率)。1H NMR(300mHz，CDCl3)δ6.84-6.76(m，2H)，6.64(t，J＝8.3Hz，1H)，5.77(s，1H)，4.33(d，J＝6.9Hz，1H)，2.87(s，3H)，2.81-1.30(m，18H)，1.89(s，3H)，0.55(s，3H)，MS(ESI)m/e 434(M+H)+，432(M-H)-.
實(shí)施例3D(3β，5β，7α，12α)-7，12-二羥基-3-{ 2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]-2-氟苯基}(甲基)氨基]乙氧基}-24-膽烷酸甲酯在密封管中，將實(shí)施例1C化合物(79mg，0.13mmol)、實(shí)施例3C化合物(55mg，0.13mmol)、二異丙基乙胺(25mg，0.193mmol)和CH3CN(1.9mL)中的NaI(15mg，0.16mmol)的混合物于115℃加熱40小時。反應(yīng)混合物吸進(jìn)EtOAc中，用NH4Cl溶液和鹽水洗滌。有機(jī)層經(jīng)Na2SO4干燥，濃縮。粗制產(chǎn)物通過硅膠色譜(40％乙酸乙酯/己烷)純化，即得標(biāo)題化合物(68mg，61％產(chǎn)率)。1H NMR(300mHz，CDCl3)δ6.84-6.74(m，3H)，5.77(s，1H)，4.34(d，J＝6.9Hz，1H)，3.98(m，1H)，3.83(m，1H)，3.67(s，3H)，3.53-3.32(m，5H)，2.91(s，3H)，2.80-1.10(m，44H)，1.89(s，3H)，0.98(d，J＝6.3Hz，3H)，0.89(s，3H)，0.69(s，3H)，0.55(s，3H)；MS(ESI)m/e 882(M+H)+，880(M-H)-.
實(shí)施例3E(3β，5β，7α，12α)-7，12-二羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]-2-氟苯基}(甲基)氨基]乙氧基}-24-膽烷酸實(shí)施例3D的化合物(360mg，0.408mmol)溶解于6mL THF和CH3OH(1∶1)中。然后于0℃加入2.5mL LiOH溶液(1M，水溶液)。所得混合物于環(huán)境溫度下攪拌5小時。在真空中除去有機(jī)溶劑，加入足夠的水形成一相。溶液用醋酸進(jìn)行酸化，以沉淀淺黃色的固體，所述固體用EtOAc萃取(3次)。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌并經(jīng)Na2SO4干燥。真空濃縮，即得標(biāo)題化合物(350mg，98％產(chǎn)率)。1H NMR(300mHz，CDCl3)δ 6.83-6.74(m，3H)，5.78(s，1H)，4.34(d，J＝7.2Hz，1H)，3.98(m，1H)，3.84(m，1H)，3.52-3.33(m，5H)，2.92(s，3H)，2.80-1.10(m，44H)，1.89(s，3H)，0.99(d，J＝6.0Hz，3H)，0.89(s，3H)，0.69(s，3H)，0.55(s，3H)；MS(ESI)m/e 868(M+H)+，866(M-H)-.
實(shí)施例4 (3β，5β，7α，12α)-7，12-二羥基-3-{2-[{4-[(11β，16α，17α)-17-羥基-16-甲基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}-24-膽烷酸實(shí)施例4A (5’R，10’R，13’S，16’R)-13’，16’-二甲基-1’，2’，6’，7’，8’，12’，13’，14’，15’-九氫-17’H-螺[1，3-二氧戊環(huán)-2，3’-[5，10]環(huán)氧環(huán)戊[α]菲]-17’-酮實(shí)施例1E的化合物(3.0g，9.1mmol)溶解于30mL THF，冷卻至-78℃。往冷卻的溶液中加入LiHMDS(1.0M THF溶液，9.5mL)，所得混合物于-78℃攪拌1小時。通過注射器迅速加入MeI(6.0mL，91mmol)，20分鐘內(nèi)將溶液升溫至室溫。加入NH4Cl水溶液終止反應(yīng)，并用乙酸乙酯萃取兩次。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并真空濃縮，即得3.03g(97％)標(biāo)題化合物，不經(jīng)進(jìn)一步純化即使用。
實(shí)施例4B (5’R，10’R，13’S，16’R，17’S)-13’，16’-二甲基-17’-丙-1-炔基-1’，2’，6’，7’，8’，12’，13’，14’，15’，17’-九氫-17’H-螺[1，3-二氧戊環(huán)-2，3’-[5，10]環(huán)氧環(huán)戊[α]菲]-17’-醇實(shí)施例4A的化合物(3.03g，8.80mmol)溶解于THF(35mL)，冷卻至0℃。一次性加入丙炔基溴化鎂(0.5M in THF，35mL)。反應(yīng)混合物于0℃攪拌2.5小時。攪拌結(jié)束時，用NH4Cl水溶液終止反應(yīng)，并用乙酸乙酯萃取。有機(jī)級分用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，并真空濃縮。粗制殘余物通過柱色譜(70∶30己烷∶乙酸乙酯)純化，即得1.0g(29％)標(biāo)題化合物。
實(shí)施例4C
(11β，16α，17α)-17-羥基-16-甲基-11-(4-(甲基氨基)苯基)-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-3-酮往火焰干燥的三頸圓底燒瓶(裝有回流冷凝器、玻璃塞和橡膠隔板)中加入RiekeMg(1.0M in THF，13mL)和20mL THF。然后滴加實(shí)施例1D所述的化合物(1.86g，6.50mmol)。加入少部分的溴化物，然后用加熱槍加熱燒瓶直至反應(yīng)開始。按比例加入其余的溴化物，使反應(yīng)混合物回流，然后冷卻。完成加入時，將反應(yīng)溶液冷卻至室溫，并在冰浴中冷卻。一次性加入CuI(1.23，6.50mmol)。2分鐘后，迅速加入6mL THF中的實(shí)施例4β所述的化合物溶液(1.0g，2.6mmol)。0℃攪拌1小時，然后用NH4Cl水溶液終止反應(yīng)，并用乙酸乙酯萃取。有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)，濃縮。粗制殘余物溶解于7.6mL THF和6mL CH2Cl2中。往溶液中加入TsOH(3.8g，19.9mmol)，所得溶液于室溫攪拌3h。加入飽和NaHCO3水溶液中和反應(yīng)，所得溶液用乙酸乙酯萃取。有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)濃縮并通過柱色譜(70∶30己烷∶乙酸乙酯)純化。以34％的產(chǎn)率(250mg)分離得到標(biāo)題化合物。
實(shí)施例4D (3β，5β，7α，12α)-7，12-二羥基-3-{2-[{4-[(11β，16α，17α)-17-羥基-16-甲基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}-24-膽烷酸甲酯在壓力管中，將實(shí)施例4C所述的苯胺(250mg，0.581mmol)和實(shí)施例1C的甲苯磺酸酯(361mg，0.581mmol)合并，并溶解于8mL乙腈中。往溶液中加入NaI(104mg，0.696mmol)和Hünig’s堿(0.2mL，0.873mmol)。反應(yīng)混合物于60℃攪拌2天。冷卻至室溫，溶液用鹽水稀釋，并用乙酸乙酯萃取。有機(jī)級分用鹽水洗滌，干燥(MgSO4)并真空濃縮。粗制殘余物通過柱色譜(3∶2己烷∶乙酸乙酯)純化，即得215mg(42％)的標(biāo)題化合物。
實(shí)施例4E (3β，5β，7α，12α)-7，12-二羥基-3-{2-[{4-[(11β，16α，17α)-17-羥基-16-甲基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}-24-膽烷酸實(shí)施例4D所述的化合物(215mg，0.244mmol)溶解于3mL THF和3mL MeOH。然后加入LiOH水溶液(1.0M，1.0mL)，所得溶液于室溫攪拌3小時。堿溶液用Et2O萃取1次，用1N H3PO4酸化，并用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯級分用Na2SO4干燥并真空濃縮。白色固體不需要進(jìn)一步純化。1H NMR(500mHz，MeOH)δ7.07-7.71(m，4H)，5.76(s，1H)，4.4(d，1H)，3.95(s，1H)，3.78(bs，1H)，3.74(t，1H)，3.44(m，4H)，2.86(m，1H)，2.66(m，1H)，2.50(m，2H)，2.16-2.41(m，9H)，2.15(m，2H)，2.08(m，1H)，1.9(m，3H)，1.85(m，5H)，1.75(m，5H)，1.57(m，7H)，1.40(m，8H)，1.31(m，6H)，1.05(d，3H)，1.01(d，3H)，0.81(s，3H)，0.71(s，3H)，0.6(s，3H)；MS(ESI)m/e 864(M+H)+，863(M-H)-；對于C55H78NO7的準(zhǔn)確分子量計算值864.5769；實(shí)測值864.5773.

實(shí)施例5(3β，5β，7α，12α)-7-[(2-氨根(ammonio)乙氧基)羰基氧基]-12-羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}-24-膽烷酸 實(shí)施例5A(3β，5β，7α，12α)-7-(4-硝基苯氧基羰基氧基)-12-羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}-24-膽烷酸甲酯往充分?jǐn)嚢璧?℃吡啶(4.1mL)中的實(shí)施例1I化合物(1.20g，1.39mmol)溶液中加入4-硝基苯基氯甲酸酯(698mg，3.47mmol)，并升溫至室溫過夜。反應(yīng)混合物在H3PO4(1N)和EtOAc之間分離。有機(jī)層在Na2SO4上干燥并濃縮。粗制產(chǎn)物通過硅膠色譜(50％乙酸乙酯/己烷)純化，即得標(biāo)題化合物(0.70g，49％產(chǎn)率)。
實(shí)施例5B(3β，5β，7α，12α)-7-[2-(叔丁氧基羰基氨基)乙氧基羰基氧基]-12-羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}-24-膽烷酸甲酯實(shí)施例5A化合物(83mg，0.081mmol)、2-(叔丁氧基-羰基氨基)乙醇(26mg，0.161mmol)、DMAP(10mg)和乙腈(1mL)中的Hunig’s堿(0.1mL)的混合物于90℃攪拌過夜。反應(yīng)混合物在H2O和EtOAc之間分離。有機(jī)相經(jīng)Na2SO4干燥并真空濃縮。殘余物通過硅膠層析(45％乙酸乙酯/己烷)純化，即得標(biāo)題化合物(73mg，86％產(chǎn)率)。
實(shí)施例5C(3β，5β，7α，12α)-7-(2-氨基乙氧基)羧基-12-羥基-3-{2-[{4-[(11β，17β)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}-24-膽烷酸往實(shí)施例5B的化合物(20mg，0.019mmol)中加入HCl的1，4-二氧六環(huán)(4M，0.3mL)溶液。所得溶液于室溫攪拌6小時。反應(yīng)混合物通過HPLC(反相)純化，即得標(biāo)題化合物(5mg，28％產(chǎn)率)。1H NMR(300mHz，CD3OD)δ7.33-7.21(m，2H)，7.18-7.07(m，2H)，5.75(s，1H)，4.75(m，1H)，4.51(d，J＝7.2Hz，1H)，4.42-4.31(m，1H)，4.30-4.23(m，1H)，3.98(m，1H)，3.71-1.07(m，52H)，3.14(s，3H)，1.86(s，3H)，1.02(d，J＝6.6Hz，3H)，0.93(s，3H)，0.72(s，3H)，0.51(s，3H)；MS(ESI)m/e 937(M+H)+，935(M-H)-.
實(shí)施例6(3β，5β，7α，12α)-7-[(3-氨根丙氧基)羰基氧基]-12-羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}-24-膽烷酸
實(shí)施例6A(3β，5β，7α，12α)-7-[3-(叔丁氧基羰基)氨基丙氧基羰基氧基]-12-羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}-24-膽烷酸甲酯用3-(叔丁氧基羰基氨基)丙醇代替2-(叔丁基羰基氨基)乙醇，按照實(shí)施例5B的方法制備標(biāo)題化合物(65％)。
實(shí)施例6B(3β，5β，7α，12α)-7-[3-(叔丁氧基羰基)氨基丙氧基羰基氧基]-12-羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}-24-膽烷酸化合物5(46mg，0.043mmol)溶解于2.5mLTHF和CH3OH(1∶1.5)中。然后加入0℃的0.8mL LiOH溶液(1M，水溶液)。所得混合物于環(huán)境溫度攪拌過夜。在真空中除去有機(jī)溶劑，加入足夠的水形成一相。溶液用H3PO4(1M)酸化，以沉淀淺黃色的固體。所述固體用EtOAc萃取(2次)。合并的有機(jī)層用鹽水洗滌，并經(jīng)Na2SO4干燥。真空濃縮，即得標(biāo)題化合物(46mg，100％產(chǎn)率)。
實(shí)施例6C(3β，5β，7α，12α)-7-[(3-氨根丙氧基)羰基氧基]-12-羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}-24-膽烷酸0℃下，往實(shí)施例6B的化合物(24mg，0.023mmol)中加入HCl的1，4-二氧六環(huán)溶液。所得混合物于0℃攪拌0.5小時，然后于室溫攪拌0.5小時。反應(yīng)混合物通過HPLC(反相)純化，即得標(biāo)題化合物(5mg，23％產(chǎn)率)。1H NMR(300mHz，CD3OD)δ7.46-7.36(m，4H)，5.77(s，1H)，4.73(m，1H)，4.57(d，J＝6.8Hz，1H)，4.31-4.21(m，1H)，4.21-4.10(m，1H)，3.98(m，1H)，3.82-1.06(m，54H)，3.24(s，3H)，1.86(s，3H)，1.02(d，J＝6.4Hz，3H)，0.95(s，3H)，0.73(s，3H)，0.49(s，3H)；MS(ESI)m/e 951(M+H)+，949(M-H)-.
實(shí)施例7(3β，5β，7α，12α)-7-磷酰氧基-12-羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}-24-膽烷酸
實(shí)施例7A(3β，5β，7α，12α)-7-二烯丙基磷酰氧基-12-羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}-24-膽烷酸甲酯實(shí)施例1I的化合物溶解于THF并冷卻至0℃。滴加正丁基鋰(2.5M己烷溶液；1.5當(dāng)量)；白色固體形成并分散，溶液變成淺黃色。加入二烯丙基磷酰氯(2當(dāng)量)，使顏色迅速褪去；溶液緩慢升溫至環(huán)境溫度，攪拌過夜。反應(yīng)物用碳酸氫鹽水溶液稀釋，并用乙酸乙酯萃取。有機(jī)層干燥(Na2SO4)，過濾并真空濃縮。粗制材料通過柱色譜純化。
實(shí)施例7B(3β，5β，7α，12α)-7-二烯丙基磷酰氧基-12-羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}-24-膽烷酸實(shí)施例7A的化合物溶解于THF中；加入LiOH水溶液，所得混合物于環(huán)境溫度下攪拌3小時。加入磷酸水溶液(1N)終止反應(yīng)，并用乙酸乙酯萃取。合并的有機(jī)層干燥(Na2SO4)，過濾并減壓濃縮。粗制材料不加進(jìn)一步純化而直接使用。
實(shí)施例7C(3β，5β，7α，12α)-7-磷酰氧基-12-羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}-24-膽烷酸實(shí)施例7B的化合物溶解于THF；加入三苯基膦(0.5當(dāng)量)、甲酸(2當(dāng)量)、正丁基胺(2當(dāng)量)和四(三苯基膦)鈀(0)(0.3當(dāng)量)，所得混合物于環(huán)境溫度下攪拌3小時。真空下除去溶劑；殘余物移入1N NaOH水溶液中，并用二氯甲烷萃取。水相用磷酸水溶液(1N)酸化；產(chǎn)物通過反相HPLC純化。
實(shí)施例8(3β，5β，7α，12α)-7-磷酰氧基甲氧基-12-羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}-24-膽烷酸
實(shí)施例8A(3β，5β，7α，12α)-7-甲基硫甲氧基-12-羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}-24-膽烷酸甲酯實(shí)施例1I的化合物溶解于吡啶，并在冰浴中冷卻；加入甲基硫氯甲基(1.2當(dāng)量)，混合物升溫至環(huán)境溫度，然后加熱至90℃過夜。真空中除去溶劑；殘余物在磷酸水溶液(1N)和乙酸乙酯之間分離。有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾并真空濃縮。粗制材料通過柱色譜純化。
實(shí)施例8B(3β，5β，7α，12α)-7-氯甲氧基-12-羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}-24-膽烷酸甲酯實(shí)施例8A的化合物溶解于二氯甲烷；加入磺酰氯(1.1當(dāng)量)，混合物于室溫下攪拌直至起始物質(zhì)消耗完。加入碳酸氫鈉水溶液終止反應(yīng)；移除有機(jī)層，水相用二氯甲烷重新萃取。合并的有機(jī)相干燥(Na2SO4)，過濾并真空濃縮。該粗制材料不需要進(jìn)一步純化而使用。

實(shí)施例8C(3β，5β，7α，12α)-7-二烯丙基磷酰氧基甲氧基-12-羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}-24-膽烷酸甲酯實(shí)施例8B的化合物溶解于THF。加入二烯丙基磷酸銀，混合物加熱回流過夜。冷卻至環(huán)境溫度之后，使粗制反應(yīng)混合物通過硅膠塞(plug)除去鹽。
實(shí)施例8D(3β，5β，7α，12α)-7-二烯丙基磷酰氧基甲氧基-12-羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}-24-膽烷酸實(shí)施例8C的化合物溶解于THF；加入LiOH的水溶液，所得混合物于室溫攪拌3小時。加入磷酸水溶液(1N)終止反應(yīng)，并用乙酸乙酯萃取。粗制材料不需進(jìn)一步純化而使用。
實(shí)施例8E(3β，5β，7α，12α)-7-磷酰氧基甲氧基-12-羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}-24-膽烷酸實(shí)施例8D的化合物溶解于THF；加入三苯基膦(0.5當(dāng)量)、甲酸(2當(dāng)量)、正丁基胺(2當(dāng)量)和四(三苯基膦)鈀(0)(0.3當(dāng)量)，所得混合物于環(huán)境溫度下攪拌3小時。真空下除去溶劑；殘余物移入1N NaOH水溶液，并用二氯甲烷萃取。水相用磷酸水溶液(1N)酸化；產(chǎn)物通過反相HPLC純化。
實(shí)施例9(3β，5β，7α，12α)-7-(4-氨根丁酰氧基)-12-羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}-24-膽烷酸 實(shí)施例9A(3β，5β，7α，12α)-7-(4-叔丁氧基羰基氨基丁酰氧基)-12-羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}-24-膽烷酸甲酯實(shí)施例8B的化合物溶解于DMF；加入4-叔丁氧基羰基氨基丁酸(1.3當(dāng)量)和1.2當(dāng)量的Cs2CO3。所得混合物于環(huán)境溫度下攪拌過夜。反應(yīng)混合物在磷酸水溶液(1N)和乙酸乙酯之間分離。有機(jī)相干燥(Na2SO4)，過濾并真空濃縮。在硅膠上使用己烷中的梯度乙酸乙酯純化該粗制材料，即得標(biāo)題化合物。
實(shí)施例9B(3β，5β，7α，12α)-7-(4-叔丁氧基羰基氨基丁酰氧基)-12-羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}-24-膽烷酸實(shí)施例9A的化合物溶解于THF；加入LiOH水溶液，所得混合物于環(huán)境溫度攪拌3小時。加入磷酸水溶液(1N)終止反應(yīng)，并用乙酸乙酯萃取。粗制材料不需進(jìn)一步純化而使用。
實(shí)施例9C(3β，5β，7α，12α)-7-(4-氨根丁酰氧基)-12-羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}-24-膽烷酸實(shí)施例9B的化合物用HCl的二氧六環(huán)溶液(4N)處理。所得混合物于室溫攪拌1小時。反應(yīng)混合物通過HPLC(反相)純化，即得標(biāo)題化合物。
實(shí)施例10(3β，5β，7α，12α)-7-(5-氨根戊酰氧基)-12-羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}-24-膽烷酸
實(shí)施例10A(3β，5β，7α，12α)-7-(5-叔丁氧基羰基氨基戊酰氧基)-12-羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}-24-膽烷酸甲酯實(shí)施例8B的化合物溶解于DMF；加入4-叔丁氧基羰基氨基丁酸(1.3當(dāng)量)和1.2當(dāng)量的Cs2CO3。所得混合物于環(huán)境溫度下攪拌過夜。反應(yīng)混合物在磷酸水溶液(1N)和乙酸乙酯之間分離。有機(jī)相干燥(Na2SO4)，過濾并真空濃縮。在硅膠上使用己烷中的梯度乙酸乙酯純化該粗制材料，即得標(biāo)題化合物。
實(shí)施例10B(3β，5β，7α，12α)-7-(5-叔丁氧基羰基氨基戊酰氧基)-12-羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}-24-膽烷酸實(shí)施例9A的化合物溶解于THF；加入LiOH水溶液，所得混合物于環(huán)境溫度攪拌3小時。加入磷酸水溶液(1N)終止反應(yīng)，并用乙酸乙酯萃取。粗制材料不需進(jìn)一步純化而使用。
實(shí)施例10C(3β，5β，7α，12α)-7-(5-氨根戊酰氧基)-12-羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}-24-膽烷酸實(shí)施例9B的化合物用HCl的二氧六環(huán)溶液(4N)處理。所得混合物于室溫攪拌1小時。反應(yīng)混合物通過HPLC(反相)純化，即得標(biāo)題化合物。
實(shí)施例11(3β，5β，7α，12α)-7-(4-氨根丁酰氧基甲氧基)-12-羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}-24-膽烷酸 實(shí)施例11A4-叔丁氧基羰基氨基丁酸氯甲酯4-N-叔丁氧基羰基氨基丁酸(5mmol)溶解于20mL DMF；加入10mmol三乙基胺和20mmol氯碘甲烷，所得混合物于環(huán)境溫度下攪拌24hr。反應(yīng)混合物在乙酸乙酯和水之間分離；有機(jī)層用水和鹽水洗滌。所得溶液干燥(Na2SO4)，過濾并真空濃縮。在硅膠上使用己烷中的梯度乙酸乙酯純化該粗制材料，即得標(biāo)題化合物。
實(shí)施例11B(3β，5β，7α，12α)-7-(4-叔丁氧基羰基氨基丁酰氧基甲氧基)-12-羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}-24-膽烷酸甲酯實(shí)施例1I的化合物(1mmol)和等摩爾量的1mL乙腈中的實(shí)施例11A的化合物合并。加入二異丙基乙胺(2當(dāng)量)和NaI(20mg)，所得混合物于90℃加熱20hr。反應(yīng)混合物在乙酸乙酯和水之間分離；有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，干燥(Na2SO4)，過濾并真空濃縮。在硅膠上使用己烷中的梯度乙酸乙酯純化該粗制材料，即得標(biāo)題化合物。
實(shí)施例11C(3β，5β，7α，12α)-7-(4-叔丁氧基羰基氨基丁酰氧基甲氧基)-12-羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}-24-膽烷酸實(shí)施例11B的化合物溶解于THF；加入LiOH水溶液，所得混合物于環(huán)境溫度攪拌3小時。加入磷酸水溶液(1N)終止反應(yīng)，并用乙酸乙酯萃取。粗制材料不需進(jìn)一步純化而使用。
實(shí)施例11D(3β，5β，7α，12α)-7-(4-氨根丁酰氧基甲氧基)-12-羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}-24-膽烷酸實(shí)施例11C的化合物用二噁烷中的HCl溶液(4N)處理。所得混合物于室溫攪拌20min。反應(yīng)混合物通過HPLC(反相)純化，即得標(biāo)題化合物。
生物學(xué)數(shù)據(jù)獲得肝臟選擇性化合物的一種策略是將它們和膽汁酸如膽酸偶聯(lián)。Kramer和Wess(Kramer，W.Wess，G.；“Bile acid transport systems as pharmaceutical targets”；Eur.J.Clin.Invest.1996，26，715-732)對這種策略作了評論。例如，已經(jīng)制備了帶有甲狀腺激素T3和HMG-CoA還原酶抑制劑的膽汁酸偶聯(lián)物。兩種類型的偶聯(lián)物都能夠降低血清膽固醇水平，同時將非必要的外周效應(yīng)降至最小。這些結(jié)果表明膽汁酸偶聯(lián)物有時可以是肝臟選擇性的，能夠?qū)⒅委熡行舛鹊乃幬镞f送到肝臟中。膽汁酸偶聯(lián)物一個有誘惑力的方面是它們從腸道吸收，排出到膽汁中，并且可以多次重吸收。因此，膽汁酸可以極為有效地維持釋放遞送機(jī)制。但是，膽汁酸偶聯(lián)物必須小心設(shè)計。母藥和膽汁酸上連接位點(diǎn)的選擇必須使每一部分都賦予連接物質(zhì)所需的特征。必須選擇連接體，并和母藥分子相結(jié)合，以便保留適當(dāng)水平的所需生化活性(例如酶活性或受體結(jié)合親和性)和選擇性。同樣，必須選擇膽汁酸組分，保證連接體的結(jié)合能夠使膽汁酸將偶聯(lián)物選擇性地導(dǎo)向肝臟。另外，為了生產(chǎn)可經(jīng)口遞送的試劑，所得偶聯(lián)物的總體特征必須優(yōu)化，以通過單獨(dú)或聯(lián)合的主動(轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白介導(dǎo)的)和被動(擴(kuò)散)機(jī)制來跨腸腔吸收。
EP0417725介紹了用于治療各種疾病的膽汁酸衍生物。所提到的衍生物具有“修飾的膽汁酸基團(tuán)”，該基團(tuán)通過連接體和“活性化合物部分W”相連，所述“活性化合物部分W”是肽、抗生素、抗病毒物質(zhì)、抗癌試劑、保肝試劑、抗血脂劑、利尿劑、降血壓藥、腎素抑制劑或脯氨酸羥基化酶抑制劑。US5780444描述了一系列作為轉(zhuǎn)化細(xì)胞試劑的膽汁酸偶聯(lián)的核酸，一般地要求保護(hù)“一種偶聯(lián)物，包含膽汁酸或其類似物……與一種或多種第二化合物直接或間接共價連接”。WO9944616描述了作為抗生素試劑的修飾的膽汁酸。一個允許的改變是“與第二類固醇連接的連接基團(tuán)”。這些例子和Kramer和Wess的綜述中概述的研究都表明膽汁酸偶聯(lián)物策略可以產(chǎn)生在肝臟中具有選擇活性的試劑。但是，仍沒有這種策略如何在活性藥物試劑是糖皮質(zhì)激素受體拮抗劑的具體情況下實(shí)施的教導(dǎo)。事實(shí)上，如表I中報道的例子中所概述的，有助于開發(fā)經(jīng)口遞送的和肝臟選擇性的糖皮質(zhì)受體拮抗劑的因素并不是顯而易見的。
實(shí)施例1的化合物 WO0058337的實(shí)施例1 化合物A 化合物B化合物C化合物D

圖1.代表性的GR拮抗劑-膽汁酸偶聯(lián)物，包括實(shí)施例1的化合物表I.膽汁酸-偶聯(lián)物類固醇對肝臟和系統(tǒng)性糖皮質(zhì)激素應(yīng)答的影響

所有化合物在大鼠中的口服劑量為100mpk，只有*化合物D為皮下劑量23mpk。
使用涉及對大鼠施用強(qiáng)的松龍激發(fā)的單一藥理學(xué)研究可以實(shí)現(xiàn)體內(nèi)活性和肝臟選擇性的分析。強(qiáng)的松龍是一種普遍存在的糖皮質(zhì)受體激動劑，其在肝臟和肝臟外區(qū)域都表現(xiàn)出GR-激動效應(yīng)。給正常大鼠施用10mg/kg(10mpk)劑量的強(qiáng)的松龍，在7個小時的實(shí)驗(yàn)過程中3倍誘導(dǎo)受糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)的酶酪氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(TAT)。此時，激動劑導(dǎo)致肝臟糖原的積累增加～60％。人們認(rèn)為這兩種效應(yīng)都是由肝臟GR的直接活化所介導(dǎo)的；這些實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1所示。
系統(tǒng)性糖皮質(zhì)激素活性導(dǎo)致抗炎反應(yīng)，這是GR相關(guān)的、抑制淋巴細(xì)胞活性的結(jié)果。實(shí)踐中，上述強(qiáng)的松龍激發(fā)方案能夠降低正常大鼠中的循環(huán)淋巴細(xì)胞水平(結(jié)果概括在圖2中)。因此，強(qiáng)的松龍激發(fā)研究能夠進(jìn)行體內(nèi)肝臟和系統(tǒng)GR活化的內(nèi)部對照評價；它提供了一種分析方法，以測定任何GR拮抗劑化合物阻斷肝臟應(yīng)答(需要的特征)、而不影響系統(tǒng)糖皮質(zhì)激素受體(不需要的副作用)的選擇能力。
RU38486是一種原型GR拮抗劑，口服時其廣泛分布在全身，并在各種組織類型中表現(xiàn)出功效。在大鼠強(qiáng)的松龍激發(fā)實(shí)驗(yàn)中，口服劑量為30mpk時RU-38486完全阻斷對TAT誘導(dǎo)的激動效應(yīng)。在同一實(shí)驗(yàn)中，強(qiáng)的松龍誘導(dǎo)的肝糖原積累也完全得以抑制。因此，RU-38486具有口服活性試劑阻斷肝臟糖皮質(zhì)激素受體的所需效果。但是，該試劑在肝臟外區(qū)域也具有效果，在同樣的實(shí)驗(yàn)中，它能夠阻斷強(qiáng)的松龍誘導(dǎo)的淋巴細(xì)胞應(yīng)答。這些肝臟外效果使RU-38486不可能是長期治療的候選物。
酪氨酸轉(zhuǎn)氨酶活性 肝糖原血漿淋巴細(xì)胞 圖2.10-mpk劑量的強(qiáng)的松龍對大鼠中肝臟-(TAT、糖原)和系統(tǒng)性-(淋巴細(xì)胞水平)糖皮質(zhì)激素調(diào)節(jié)的應(yīng)答的影響。
通過將GR拮抗劑和膽汁酸連接已經(jīng)制備了各種偶聯(lián)分子(參見說明代表性結(jié)構(gòu)的圖1)。使用上述的分析方法可以評價這些化合物的體內(nèi)活性和肝臟選擇性。在此所要求保護(hù)的化合物能夠阻斷大鼠激發(fā)模型中強(qiáng)的松龍的肝臟效應(yīng)，而對系統(tǒng)活性沒有顯著影響。例如，口服劑量僅為100mpk時，實(shí)施例1的化合物對強(qiáng)的松龍誘導(dǎo)的TAT活性和糖原水平產(chǎn)生近乎完全的阻斷(分別為85％和111％)，而循環(huán)淋巴細(xì)胞的數(shù)目只有很小變化(對強(qiáng)的松龍誘導(dǎo)的抑制作用只有35％的阻斷)。肝臟選擇性拮抗劑的這種效果有望用于長期治療，例如將需要用來治療如糖尿病的代謝紊亂。
獲得用來拮抗糖皮質(zhì)激素受體的、可經(jīng)口遞送的、肝臟選擇性的試劑所需的化學(xué)結(jié)構(gòu)的具體細(xì)節(jié)不是顯而易見的。實(shí)施例1的化合物具有三個主要部分賦予所需生化特征的糖皮質(zhì)激素拮抗劑樣的片段；有助于將偶聯(lián)物靶向肝臟區(qū)域的膽汁樣片段；和連接片段，其必須將兩個部分連接起來以保留各自的活性，并提供偶聯(lián)物的整體物理化學(xué)特征。任意這三個部分中的小的改變都將不可預(yù)知地導(dǎo)致所需藥理效果的喪失。例如，實(shí)施例1化合物的膽汁酸部分可以將膽酸換為?；悄懰?，產(chǎn)生化合物A(圖1)。如所期望的，化合物A保留有與化合物1類似的GR親和性(化合物1對人GR的IC50為3.6nM，化合物A為3.0nM)。但是，兩個化合物的藥理活性(表I)相當(dāng)不同。和化合物1不同，該類似物只顯示出抑制TAT活化的中等效應(yīng)(同樣口服劑量時有39％的抑制作用)，對糖原積累或淋巴細(xì)胞應(yīng)答基本上沒有作用。它對于肝臟GR和系統(tǒng)效應(yīng)沒有選擇性；事實(shí)上，其具有最小的體內(nèi)活性。連接片段中簡單的變化，如化合物B和C所示的變化也可以產(chǎn)生不能阻斷肝臟糖皮質(zhì)激素應(yīng)答的類似物。即使在連接體改變不導(dǎo)致GR拮抗劑片段或膽汁酸片段上結(jié)合位點(diǎn)變化的最保守情況(如化合物C)下，這一點(diǎn)也是真實(shí)的。這些不大的變化對于偶聯(lián)物的GR親和性幾乎沒有影響(化合物B對人GR的IC50為3.1nM，化合物C為4.3nM)。最后，使用該策略選擇具體的靶向GR拮抗劑對偶聯(lián)分子的特征有顯著的影響。RU-43044是一種甾族的的GR拮抗劑，其具有和RU-38486(對人GR的IC50＝1.1nM)非常類似的效力(對人GR的IC50＝2.2nM)。RU-43044可以以類似于上述的方式和膽酸連接，產(chǎn)生化合物D。化合物D以與化合物1類似的方式和GR結(jié)合(IC50＝5.2nM，化合物1為3.6nM)；但是它在體內(nèi)失活，在大鼠強(qiáng)的松龍激發(fā)模型中不具有選擇性。如上面的實(shí)例所述，具有所需肝臟選擇性藥理學(xué)特征的化合物結(jié)構(gòu)細(xì)節(jié)是不容易辨別或預(yù)測的。
例如，由RU-38486所致的、對GR的系統(tǒng)性阻斷誘導(dǎo)了由下丘腦-垂體-腎上腺(HPA)軸所介導(dǎo)的補(bǔ)償性應(yīng)答。由受抑制的系統(tǒng)性糖皮質(zhì)激素引發(fā)的下丘腦刺激使垂體腺體分泌促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)。ACTH作用于腎上腺腺體，刺激內(nèi)源性糖皮質(zhì)激素如氫化可的松(人類)或皮質(zhì)酮(嚙齒類)的生成。實(shí)踐中，口服劑量的RU-38486使正常小鼠中ACTH和皮質(zhì)酮的循環(huán)水平增加(參見圖3)。類似劑量的實(shí)施例1化合物不能刺激HPA軸，證據(jù)是缺少這些參數(shù)的變化。該結(jié)果驗(yàn)證了大鼠強(qiáng)的松龍激發(fā)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，證實(shí)化合物1表現(xiàn)出肝臟選擇性藥理學(xué)特征。其還提供了進(jìn)一步證據(jù)，說明化合物1能夠通過阻斷肝臟GR減少葡萄糖，且不產(chǎn)生HPA活化所致的副作用。如化合物1的類似物可能對于治療代謝疾病如糖尿病和肥胖癥具有改進(jìn)的功效和安全效果。
對糖皮質(zhì)激素拮抗劑的ATCH應(yīng)答 對糖皮質(zhì)激素拮抗劑的皮質(zhì)酮應(yīng)答 圖3.糖皮質(zhì)激素拮抗劑對下丘腦-垂體-腎上腺(HPA)軸的影響。RU-38486和化合物1以100mpk的劑量給于正常小鼠；1hr后測定應(yīng)答。
利用人糖皮質(zhì)激素受體和強(qiáng)的松龍受體胞液進(jìn)行放射配體結(jié)合研究的方法3(H)-地塞米松(TRK 645)在下文中稱作3(H)-dex，購自Pharmacia Amersham，Uppsala，Sweden。地塞米松在下文中稱作dex，購自SIGMA。Costar 96-孔板(3794或3365)購自Life Technologies AB，Tby，Sweden。GF/B濾器(1450-521)、過濾盒(1450-104)、MeltiLex閃爍蠟(1450-441)、樣品袋(1450-42)、MicrobetaTM1450-PLUS和Microsealer 1495-021均購自Wallac Oy，Turkku，F(xiàn)inland。從感染有包含克隆hGR基因的重組桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體的Sf9細(xì)胞提取人糖皮質(zhì)激素受體。利用BAC-TO-BAC表達(dá)系統(tǒng)(Life Technologies)、根據(jù)供應(yīng)商的指示產(chǎn)生重組桿狀病毒。通過常規(guī)技術(shù)將hGR編碼序列克隆到桿狀病毒轉(zhuǎn)移載體中。擴(kuò)增表達(dá)hGR的重組桿狀病毒，用于感染Sf9細(xì)胞。感染后48hr收獲感染的細(xì)胞。用磷酸鹽緩沖液(1mMEDTA，20mM K3PO4(pH8)，8.6％甘油，12mM MTG，20mM Na2MoO4)從細(xì)胞沉淀中提取受體。使用J.Steroid Biochem.Molec.Biol.50，No.5/6，313-318，1994中所述的G25分析方法，提取物中的hGR濃度測定為特異性3(H)-dex結(jié)合，估算約25nM。將提取物分裝成小份，保存于-70℃。
過濾結(jié)合分析所提到的受試化合物和地塞米松的稀釋系列從DMSO中的10mM(1mM dex)貯液配制。10μl稀釋液加入孔中，設(shè)兩個復(fù)孔。細(xì)胞提取物在EPMo+MTG緩沖液(1mM EDTA，HPO420mM(pH8)，6mM MTG)中稀釋10倍。稀釋的提取物加入孔中(110μl)。將3(H)-dex貯液在EPMo+MTG緩沖液中稀釋至10-10.8nM。往孔中加入110μl稀釋的3(H)-dex。實(shí)驗(yàn)中hGR的終濃度估算為1nM。所有制劑都在環(huán)境溫度(20-25℃)下于冰上、用+4℃溫度的緩沖液制備。板于4℃孵育過夜(15-20hr)。
在Tomtec Cellharvester上用GF/B濾器進(jìn)行過濾終止孵育。在TomtecCellharvester上的過濾程序如下1)過濾之前制備EP緩沖液(1mM EDTA 20mMH3PO4(pH8))2×(Wash/Asp 0.6sec.，Asp 0.5sec.)；2)用EP+PEI緩沖液(EP緩沖液，0.3％聚乙烯亞胺)(Asp 0.8sec)預(yù)先將GF/B濾器濕潤。3)過濾/收獲96孔孵育板3×(Wash/Asp 0.6sec.，Asp 0.5sec.)。GF/B濾器于65℃干燥至少1hr。用Microsealer將MeltiLex閃爍蠟融化在濾器上。將濾器置于樣品袋中，用剪刀剪成和過濾盒相匹配。將過濾盒置于Microbeta中，測定1min/位置，返回ccpm(每分鐘的校正計數(shù))。
對于能夠從受體置換3(H)-地塞米松的化合物來說，通過非線性四參數(shù)對數(shù)模型計算IC50值(抑制50％的3(H)-dex結(jié)合所需的濃度)；b＝((bmax-bmin)/(1+(I/IC50)S))+bminIb是結(jié)合抑制劑的加入濃度，IC50是半數(shù)最大結(jié)合處的抑制劑濃度，S是斜率因數(shù)1。對于溶液中3(H)-dex濃度的測定來說，使用scintillation cocktail SupermixTM(Wallac)在Wallac Rackbeta中進(jìn)行常規(guī)閃爍計數(shù)。
Microbeta設(shè)備產(chǎn)生平均cpm(每分鐘計數(shù))值/分鐘，并校正探測器之間的個體變異性，從而產(chǎn)生校正的cpm值。結(jié)果發(fā)現(xiàn)檢測器之間的計數(shù)效率差異小于5％。
采用類似的方案測定本發(fā)明化合物對于皮質(zhì)酮受體(PR)的親和性。
如下所述，本發(fā)明的化合物對糖皮質(zhì)激素受體表現(xiàn)出結(jié)合親和性，表現(xiàn)出相對于PR的GR選擇性

Haggblad，J.，Carlsson，B.，Kivel，P.，Siitari H.，(1995)Biotechniques 18，146-151
可以使用下述方法評價本發(fā)明化合物的體內(nèi)活性。這些相同的體內(nèi)模型還可用于說明某些化合物在肝臟中選擇性阻斷糖皮質(zhì)激素作用的能力。
評價肝臟靶向的糖皮質(zhì)激素受體拮抗劑的大鼠強(qiáng)的松龍激發(fā)模型禁食過夜的150g雄性Sprague Dawley大鼠口服溶媒、RU-486(30-100mg/kg)或選定的糖皮質(zhì)激素受體拮抗劑(30-100mg/kg)，60分鐘后用10mg/kg強(qiáng)的松龍口服激發(fā)。強(qiáng)的松龍激發(fā)6小時后，用CO2將大鼠處死，通過心臟穿刺取血，評價血液淋巴細(xì)胞和血漿藥物水平。收獲7mm肝臟活檢打孔物(punches)用來評價酪氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(TAT)、肝臟糖原和GR拮抗劑水平。還摘除其他的肝臟組織、腹膜后脂肪、骨骼肌、腎臟和來自耳活檢的皮膚，分離并評價mRNA。在6小時的激發(fā)期間，強(qiáng)的松龍增加肝臟TAT和糖原水平，并誘發(fā)嚴(yán)重的淋巴細(xì)胞減少。100mpk劑量時，RU-486完全拮抗這些肝臟和外周應(yīng)答。
如表I所示，本發(fā)明的化合物在上述的模型中表現(xiàn)出體內(nèi)功效和肝臟選擇性。
小鼠下丘腦-垂體-腎上腺(HPA)活化模型在糖皮質(zhì)激素水平低的0800hr時，給未禁食的CD-1雄性小鼠，體重約25g，服用溶媒、RU-486(30-100mg/kg)或GR拮抗劑(30-100mg/kg)。兩小時后，用CO2將小鼠處死，通過心臟穿刺取血，通過質(zhì)譜分析血漿中的皮質(zhì)酮，通過ELISA分析血漿中的促腎上腺皮質(zhì)激素(ACTH)水平。取出大腦和血漿，分析GR拮抗劑水平。100mpk劑量下，和溶媒對照相比，RU-486顯著增加ACTH和皮質(zhì)酮水平。本發(fā)明表明刺激HPA軸的能力下降，如圖3所示。
本發(fā)明的化合物可用于治療與過量肝臟糖皮質(zhì)激素應(yīng)答相關(guān)的疾病。這些疾病包括但不局限于下述疾病糖尿病、肥胖癥、X綜合征、高血糖癥、葡萄糖清除不充分、高血壓、高胰島素血癥、高脂血癥和肝臟糖皮質(zhì)激素水平升高。
對于治療糖尿病、X綜合征或高血糖癥來說，本發(fā)明的化合物可以單獨(dú)使用，或者和現(xiàn)有的任意抗糖尿病或抗高血糖癥試劑聯(lián)用。用作這種聯(lián)合治療的一部分的試劑包括但不限于胰島素；胰島素類似物，如美卡舍明等；胰島素促分泌素，如那格列奈(nateglinide)、exendin等；胰島素增敏劑，如吡咯列酮、羅格列酮等；磺酰脲類，如格列吡嗪、格列本脲等；雙胍類，如二甲雙胍、苯乙雙胍等；metiglinide，如repaglinide等；和α-葡萄糖苷抑制劑，如阿拉伯糖、米格列醇等。其他類似的試劑是本領(lǐng)域的技術(shù)人員所公知的。本發(fā)明的化合物單獨(dú)使用或與其他試劑聯(lián)用治療糖尿病、X綜合征或高血糖癥的能力可以使用本文描述的模型和方法驗(yàn)證，或者根據(jù)Friedman等在J.Biol.Chem.1997，272(50)，31475-31481中所述的方法進(jìn)行驗(yàn)證。測試本發(fā)明化合物功效的其他這類方法是本領(lǐng)域的技術(shù)人員所公知的。
對于治療肥胖癥來說，本發(fā)明的化合物可以單獨(dú)使用，或者和現(xiàn)有的任意抗肥胖試劑聯(lián)用。可用作這種聯(lián)合治療一部分的試劑包括但不限于厭食劑，如溴隱定、右芬氟拉明等；單胺重吸收抑制劑，如西布曲明(sibutramine)等；類交感神經(jīng)藥，如酚妥拉明、苯甲曲秦等；脂肪酸吸收抑制劑，如奧利司他(orlistat)等；和擬甲狀腺素藥，如三碘甲腺原氨酸等。其他抗肥胖癥試劑是本領(lǐng)域的技術(shù)人員所公知的。本發(fā)明的化合物單獨(dú)使用或與其他試劑聯(lián)用治療肥胖癥的能力可以根據(jù)Langley和York在Am.J.Physiol.1990，259(Reg.Int.Comp.Phys.28)R539-544中所述的模型和方法進(jìn)行驗(yàn)證，或者根據(jù)Walker和Romsos在Am.J.Physiol.192，262(Endo.Metab.25)E-110-117中所述的模型和方法進(jìn)行驗(yàn)證。測試本發(fā)明化合物功效的其他這類方法是本領(lǐng)域的技術(shù)人員所公知的。
對于治療葡萄糖清除不充分或肝臟糖皮質(zhì)激素水平升高來說，本發(fā)明的化合物可以單獨(dú)使用，或者和影響葡萄糖吸收或肝臟葡萄糖生成的任意現(xiàn)有試劑聯(lián)用?？梢杂米髀?lián)合治療的一部分的試劑包括但不限于胰島素；胰島素類似物，如美卡舍明等；胰島素促分泌素，如那格列奈(nateglinide)、exendin等；胰島素增敏劑，如吡咯列酮、羅格列酮等；磺酰脲類，如格列吡嗪、格列本脲等；雙胍類，如二甲雙胍、苯乙雙胍等；和metiglinide，如repaglinide等。其他這種試劑是本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的。本發(fā)明的化合物單獨(dú)使用或與其他試劑聯(lián)用治療葡萄糖清除不充分或肝臟糖皮質(zhì)激素水平升高的能力可以使用本文描述的模型和方法驗(yàn)證，或者根據(jù)Terrettaz、Assimacopoulos-Jeannet和Jeanrenaud在Endocrinology.1986，118674-678中所述的方法進(jìn)行驗(yàn)證。測試本發(fā)明化合物功效的其他這類方法是本領(lǐng)域的技術(shù)人員所公知的。
對于治療糖尿病性高血壓來說，本發(fā)明的化合物可以單獨(dú)使用，或者和現(xiàn)有的任意抗高血壓試劑聯(lián)用。可以用作這種聯(lián)合治療一部分的試劑包括但不局限于ACE抑制劑，如卡托普利、enanlipril等；利尿藥，如利尿磺胺、雙氫氯噻嗪等；β-阻斷劑，如阿替洛爾、卡維地洛等；鈣阻斷劑，如氨氯地平、硝苯地平等。其他這種試劑是本領(lǐng)域的技術(shù)人員所公知的。本發(fā)明的化合物單獨(dú)使用或與其他試劑聯(lián)用治療糖尿病性高血壓的能力可以根據(jù)Velasquez等在Hypertension 1997(5)，1232-1237中所述的模型和方法進(jìn)行驗(yàn)證。測試本發(fā)明化合物功效的其他這類方法是本領(lǐng)域的技術(shù)人員所公知的。
對于治療高胰島素血癥來說，本發(fā)明的化合物可以單獨(dú)使用，或者和影響胰島素水平或胰島素敏感性的任意現(xiàn)有試劑聯(lián)用。可以用作這種聯(lián)合治療的一部分的試劑包括但不局限于胰島素；胰島素類似物，如美卡舍明等；胰島素促分泌素，如那格列奈(nateglinide)、exendin等；和胰島素增敏劑，如吡咯列酮、羅格列酮等。其他這種試劑是本領(lǐng)域的技術(shù)人員所公知的。本發(fā)明的化合物單獨(dú)使用或與其他試劑聯(lián)用治療高胰島素血癥的能力可以使用本文描述的模型和方法驗(yàn)證，或者根據(jù)Shulman等在Metabolism 1991，40(10)1025-1030中所述的方法進(jìn)行驗(yàn)證，或者根據(jù)Hevener、Reichart和Olefsky在Diabetes 2000，49(12)2154-2159中所述的方法進(jìn)行驗(yàn)證。測試本發(fā)明化合物功效的其他這類方法是本領(lǐng)域的技術(shù)人員所公知的。
對于治療高脂血癥來說，本發(fā)明的化合物可以單獨(dú)使用，或者和現(xiàn)有的任意抗高脂血癥試劑聯(lián)用?？梢杂米鬟@種聯(lián)合治療的一部分的試劑包括但不局限于煙酸；他汀類(statins)，如洛伐他汀、辛伐他汀等；貝特類，如非諾貝特、吉非貝齊等；和膽汁酸螯合劑，如消膽胺、考來替泊等。其他這種試劑是本領(lǐng)域的技術(shù)人員所公知的。本發(fā)明的化合物單獨(dú)使用或與其他試劑聯(lián)用治療高脂血癥的能力可以根據(jù)Olivier等在Atherosclerosis 1988，74(1-2)，15-21中所述的模型方法進(jìn)行驗(yàn)證。測試本發(fā)明化合物功效的其他這類方法是本領(lǐng)域的技術(shù)人員所公知的。
權(quán)利要求
1.化學(xué)式(I)的化合物； 或者其藥學(xué)上合適的鹽或前藥，其中A是選自-O-或-NRA的單元，其中RA是選自氫和烷基的單元；R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7是獨(dú)立選自氫、(C1-C6)-烷基、烯基、炔基、烷氧基、羥基、烷氧烷基、羥基烷基和鹵素的單元；且R8、R9和R10是獨(dú)立選自氫、烷基、烯基、炔基、烷氧基、羥基、氰基、鹵素和-NRBRC的單元，其中RB和RC是獨(dú)立選自氫和烷基的單元。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R1、R2、R3、R4是氫；且R5是選自氫和烷基的單元。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R1、R2、R3、R4、R8、R9和R10是氫；R5是選自氫和烷基的單元；R6是OH；且R7是炔基。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R1、R2、R3、R4、R8、R9和R10是氫；R5是選自氫和烷基的單元；R6是OH；且R7是-C≡C-CH3。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R1、R2、R3、R4、R8、R9和R10是氫；R5是選自氫和烷基的單元；R6是OH；R7是-C≡C-CH3；且A是-NCH3。
6.根據(jù)權(quán)利要求5的化合物，選自(3β，5β，7α，12α)-7，12-二羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}24-膽烷酸；(3β，5β，7α，12α)-7，12-二羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]-2-氟苯基}(甲基)氨基]乙氧基}24-膽烷酸；和(3β，5β，7α，12α)-7，12-二羥基-3-{2-[{4-[(11β，16α，17α)-17-羥基-16-甲基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}24-膽烷酸。
7.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R6是OH；且R7是-C≡C-CH3；且A是-O-。
8.根據(jù)權(quán)利要求7的化合物，是(3β，7α，12α)-7，12-二羥基-3-(2-(4-((11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基)-2-甲基苯氧基)乙氧基)24-膽烷酸。
9.化學(xué)式(II)的化合物， 或者其藥學(xué)上合適的鹽，其中A是選自-O-和-NRA的單元；R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7是獨(dú)立選自氫、(C1-C6)-烷基、烯基、炔基、烷氧基、羥基、烷氧烷基、羥基烷基和鹵素的單元；R8、R9和R10是獨(dú)立選自氫、烷基、烯基、炔基、烷氧基、羥基、氰基、鹵素和-NRBRC的單元；RA是選自氫和烷基的單元；RB和RC是選自氫和烷基的單元；且PD1和PD2中的一個或多個在體內(nèi)被切割。
10.化學(xué)式(II)的化合物； 或者其藥學(xué)上合適的鹽，其中A是選自-O-或-NRA的單元；R1、R2、R3、R4、R5、R6和R7是獨(dú)立選自氫、(C1-C6)-烷基、烯基、炔基、烷氧基、羥基、烷氧烷基、羥基烷基和鹵素的單元；R8、R9和R10是選自氫、烷基、烯基、炔基、烷氧基、氰基、羥基、鹵素和-NRBRC的單元；RA是選自氫和烷基的單元；RB和RC是獨(dú)立選自氫和烷基的單元；且PD1和PD2中的一個或多個是在消化道中被體內(nèi)切割的部分。
11.根據(jù)權(quán)利要求10的化合物，其中R1、R2、R3、R4、R8、R9和R10是氫；R5是選自氫和烷基的單元；R6是OH；且R7是-C≡C-CH3。
12.根據(jù)權(quán)利要求11的化合物，選自(3β，5β，7α，12α)-7-[(2-氨根乙氧基)羰基氧基]-12-羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基}乙氧基}24-膽烷酸；(3β，5β，7α，12α)-7-[(3-氨根丙氧基)羰基氧基]-12-羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}24-膽烷酸；(3β，5β，7α，12α)-7-磷酰氧基-12-羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基]乙氧基}24-膽烷酸；(3β，5β，7α，12α)-7-磷酰氧基甲氧基-12-羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基}乙氧基}24-膽烷酸；(3β，5β，7α，12α)-7-(4-氨根丁酰氧基)-12-羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基}乙氧基}24-膽烷酸；(3β，5β，7α，12α)-7-(5-氨根戊酰氧基)-12-羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基}乙氧基}24-膽烷酸；和(3β，5β，7α，12α)-7-(4-氨根丁酰氧基甲氧基)-12-羥基-3-{2-[{4-[(11β，17α)-17-羥基-3-氧-17-丙-1-炔基-4，9-雌二烯-11-基]苯基}(甲基)氨基}乙氧基}24-膽烷酸。
13.一種選擇性拮抗哺乳動物中糖皮質(zhì)激素受體的效應(yīng)的方法，包括施用治療有效量的化學(xué)式(I)的化合物。
14.一種選擇性拮抗哺乳動物中糖皮質(zhì)激素受體的效應(yīng)的方法，包括施用治療有效量的化學(xué)式(II)的化合物。
15.一種選擇性拮抗哺乳動物中肝臟糖皮質(zhì)激素受體的效應(yīng)的方法，包括施用治療有效量的化學(xué)式(I)的化合物。
16.一種選擇性拮抗哺乳動物中肝臟糖皮質(zhì)激素受體的效應(yīng)的方法，包括施用治療有效量的化學(xué)式(II)的化合物。
17.一種治療哺乳動物中糖尿病、肥胖癥或X綜合征的方法，包括施用治療有效量的化學(xué)式(I)的化合物。
18.一種治療哺乳動物中糖尿病、肥胖癥或X綜合征的方法，包括施用治療有效量的化學(xué)式(II)的化合物。
19.一種治療哺乳動物中高血糖、葡萄糖清除不充分、高胰島素血癥、高脂血癥、糖尿病性高血壓或肝臟糖皮質(zhì)激素水平升高的方法，包括施用治療有效量的化學(xué)式(I)的化合物。
20.一種治療哺乳動物中高血糖、葡萄糖清除不充分、高胰島素血癥、高脂血癥、糖尿病性高血壓或肝臟糖皮質(zhì)激素水平升高的方法，包括施用治療有效量的化學(xué)式(II)的化合物。
21.一種藥用組合物，包含治療有效量的化學(xué)式(I)的化合物和藥學(xué)上合適的載體。
22.一種藥用組合物，包含治療有效量的化學(xué)式(II)的化合物和藥學(xué)上合適的載體。
全文摘要
本發(fā)明涉及用作肝臟選擇性糖皮質(zhì)激素受體拮抗劑的新型化合物、這種化合物的制備方法和使用這種化合物調(diào)節(jié)代謝，尤其是降低血清中葡萄糖水平、胰島素水平或脂質(zhì)水平和/或減輕體重的方法。
文檔編號C07J41/00GK1662549SQ03814137
公開日2005年8月31日 申請日期2003年6月17日 優(yōu)先權(quán)日2002年6月19日
發(fā)明者托馬斯·W·范格爾頓, 詹姆士·T·林克, 諾亞·子, 菲利普·R·許姆, 賴春秋, 史蒂文·J·理查茲, 皮爾·B·雅各布森, 理查德·D·畢曉普, 布雷德利·D·蓋茨 申請人:卡羅生物股份公司