專利名稱：用于改進(jìn)胰島素和胰島素類似物的制備方法的c肽的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種胰島素原C肽的合成衍生物。含有該衍生物的胰島素原在多方面具有優(yōu)于傳統(tǒng)猴胰島素原的特性，尤其是通過重組制備，特定胰島素衍生物的終產(chǎn)率得到了提高。
世界上糖尿病患者的數(shù)目在不斷增加。對胰島素或胰島素衍生物的需求也在成比例增加。因此目的是優(yōu)化現(xiàn)有的與活性成分產(chǎn)生相關(guān)的方法。歐洲專利EP-B1 0 489 780提供了一種制備胰島素或其衍生物的方法。其中所述的載體為用來制備人胰島素的質(zhì)粒pINT90d，或其它用于構(gòu)建記載在歐洲專利EP-A 0 821 006中并被用于制備一種His(B31)His(B32)Gly(A21)-胰島素衍生物的質(zhì)粒pINT302d的起始質(zhì)粒，或被用來構(gòu)建記載在歐洲專利EP-A 0 885 961中的并被用于制備Lys(B3)Glu(B29)-胰島素衍生物的載體pINT329d。
目前已發(fā)現(xiàn)特別優(yōu)選的胰島素原衍生物是式I所示的衍生物，F(xiàn)us-B(1-30)-RDVP-Yn-A(1-21)(I)；其中Fus是一種任一合適序列的任選存在的融合部分；B(1-30)是人胰島素的B鏈；Y 是一種C端終止于一個堿性氨基酸的氨基酸鏈；n 從2至50，表示氨基酸鏈Y的長度；和A(1-21)是人胰島素的A鏈，并且A和/或B鏈可通過氨基酸的交換、缺失和/或插入來進(jìn)行修飾。令人驚奇地是，在本文中觀察到的相同和相互不同的優(yōu)點取決于A或B鏈的組成。
人的B鏈通過優(yōu)選的C肽與人的A鏈連接產(chǎn)生一種胰島素原，該胰島素原在表達(dá)率方面與野生型胰島素原類似，但其轉(zhuǎn)化為胰島素的酶加工過程可被更容易地控制，因而不產(chǎn)生裂解痕量的通過精氨酸延伸的B鏈，并且在制備過程中也不需要引起產(chǎn)率損失的將其去除步驟。
具有C-端雙組氨酸延伸的B鏈通過利用本發(fā)明的C肽與在位點A21含有甘氨酸的人胰島素A鏈進(jìn)行連接，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其表達(dá)率比通過質(zhì)粒pINT90d獲得的表達(dá)率高大約20％，并且產(chǎn)率幾乎比通過pINT302d獲得的產(chǎn)率高5倍。另外，如上所述，酶加工的控制同樣被簡化了。
Lys(B3)Glu(B29)-修飾的B鏈通過修飾的C肽與人胰島素A鏈進(jìn)行連接，結(jié)果發(fā)現(xiàn)與由pINT329d編碼的胰島素原相比，胰島素原衍生物的折疊特性得到改進(jìn)。粗制融合蛋白的產(chǎn)率增加了并且發(fā)現(xiàn)達(dá)到與質(zhì)粒pINT90d相同的水平。另外，酶加工的控制被簡化了。
一個特定優(yōu)選技術(shù)方案的新型C肽的特征在于以下氨基酸序列CGCGATGTTCCTCAGGTGGAGCTGGGCGGGGGCCCTGGCGCAGGCAGCCTGCAGCCCTTGR D V P Q V E L G G G P G A G S L Q P L -GCGCTGGAGGGGTCCCTGCAGAAGCGC(SEQ ID NO.1)A L E G S L Q K R (SEQ ID NO.2)同樣也表示了多種編碼所示C肽的可能DNA序列中的一種。
本發(fā)明的一方面涉及一種人胰島素的前體或一種式I所示胰島素類似物的前體Fus-B(1-30)-RDVP-Yn-A(1-21)(I)；其中Fus 是一種任一合適序列的任選存在的融合部分；B(1-30) 是人胰島素的B鏈；Y 是一種C端終止于一個堿性氨基酸的氨基酸鏈；n 從2至50，并表示氨基酸鏈Y的長度；和A(1-21) 是人胰島素的A鏈，
并且A和/或B鏈可通過氨基酸的交換、缺失和/或插入來進(jìn)行修飾。特別是其中Yn是人或猴胰島素的C肽中的第5至35位氨基酸，優(yōu)選地其中Yn是人胰島素的第11至35位氨基酸。
本發(fā)明的另一方面涉及如上所述的前體，其中人胰島素的B鏈含有修飾部分Lys(B3)Glu(B29)，或其中人胰島素的B鏈和A鏈含有修飾部分His(B31)His(B32)Gly(A21)。
本發(fā)明的另一方面是一種編碼上述前體的DNA。
本發(fā)明的另一方面還涉及一種含有編碼上述前體的DNA的載體，優(yōu)選地其中載體是一種適合于在大腸桿菌中表達(dá)的載體。
本發(fā)明的另一方面還涉及一種含有上述載體的大腸桿菌細(xì)胞。
本發(fā)明的另一方面還涉及一種制備上述前體的方法，其中(a)將一種上述DNA導(dǎo)入上述載體中；(b)將由(a)得到的載體導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞中；(c)由(b)得到的含有由(a)得到的載體之大腸桿菌細(xì)胞被用來進(jìn)行表達(dá)；和(d)從培養(yǎng)基上清液中分離出所述的前體。
本發(fā)明的另一方面還涉及一種制備上述DNA的方法，其中(a)通過PCR手段和其它的分子生物學(xué)技術(shù)從人或猴胰島素的cDNA中制備所述DNA；和(b)分離所述DNA。
本發(fā)明的另一方面還涉及一種制備人胰島素或胰島素類似物的方法，其中(a)通過上述方法制備一種上述前體；(b)由(a)得到的前體在適當(dāng)?shù)臈l件下進(jìn)行折疊，以便能夠象在人胰島素中一樣形成二硫鍵和RDVP-Yn部分，如果合適，所述融合部分Fus被酶解切除；和(c)純化人胰島素或胰島素類似物。
本發(fā)明的另一方面還涉及上述前體用于制備胰島素或胰島素類似物的用途，優(yōu)選地其中通過上述方法進(jìn)行胰島素或胰島素類似物的制備。
本發(fā)明的另一方面還涉及利用上述DNA制備上述前體。
本發(fā)明的另一方面還涉及上述載體用于制備上述前體的用途。
本發(fā)明的另一方面還涉及上述大腸桿菌細(xì)胞用于制備上述前體的用途。
本發(fā)明通過實施例方式被進(jìn)行詳盡的解釋，但并不受實施例的限制。實施例1胰島素原衍生物的表達(dá)表達(dá)按照EP-B1 0 489 780中記載的方式進(jìn)行。在這種情況下，通過大容量發(fā)酵培養(yǎng)能夠引進(jìn)修飾。然而，為了比較表達(dá)率，需要一直保持相同的條件。
下列發(fā)酵通式用于大規(guī)模的操作，該操作通過7.5升體積的實施例進(jìn)行描述發(fā)酵體積7.5l；滅菌條件121℃，20分鐘，pH3.5，滅菌后采用NH3調(diào)到7.0；發(fā)酵溫度37℃；Ph控制pH7.0，采用25％的氨水調(diào)節(jié)；攪拌速率1500rpm；通氣15 Sl/分鐘(2vvm)；周期大約24小時；補料當(dāng)OTR達(dá)到200mmol-1h-1時，以計量器控制的65％葡萄糖溶液的流速恒定在12gl-1h-1；預(yù)培養(yǎng)用種子安瓿接種振蕩培養(yǎng)基并在37℃下，以250rpm培養(yǎng)3-4小時直至OD A540大約為1；接種采用大約40ml的預(yù)培養(yǎng)物接種發(fā)酵罐；誘導(dǎo)在A540≥40時，采用40mg/l(300mg/發(fā)酵罐)溶解在大約10ml的Na2CO3水溶液(0.17g Na2CO3)中的吲哚丙酸。
其中的含義為Sl＝標(biāo)準(zhǔn)條件的升，vvm＝體積/體積/分鐘，OTR＝氧氣傳遞速率。發(fā)酵培養(yǎng)基配方序號GAI 100/95-000 含量g/l葡萄糖1-水合物，D(+)最小80％44檸檬酸1-水合物 3.48硫酸銨最小95％ 6.0正磷酸，85％2.99磷酸氫二鉀 1.18硫酸鈉 3.0硫酸鎂7-水合物，最小98％2.0硫酸鐵(III)x H2O 0.5痕量元素溶液RL 1/85-000 1.0ml硫胺素HCl 0.005Desmophen3600 0.5痕量元素溶液RL 1/85-000 含量g/l硫酸銅(II)5-水合物 1.6碘化鉀 4.0鉬酸銨4-水合物 8.0硫酸鎂(II)1-水合物 12.3硫酸鋅7-水合物 16硼酸20在搖瓶中的含量 含量g/l酵母抽提物 8.0葡萄糖 1.0NaCl3.5KH2PO41.32K2HPO43.68實施例2 胰島素的制備通過例如在EP-B1 D 489 780或EP-A 0 885 961中記載或建議的已知方法制備胰島素。EP-B1 0 668 282中記載的方法(參見實施例2)適于特定融合蛋白的折疊和加工。此外在折疊后和進(jìn)一步加工前可以根據(jù)EP 0 288 809過濾所述混合物。實施例3 編碼C-鏈衍生的人胰島素原B-RDVP C11-35-A的質(zhì)粒pINT358d的構(gòu)建利用EP-B1 0 489 780中記載的引物Tir和Insu11制備所述質(zhì)粒。另外，合成兩種新的引物序列。
引物PINT358fIII具有下列序列5′-CCC AAG ACC CGC GAT GTT CCT CAG GTG GAG CTG GGC GGG GGC CCT-3′(SEQ ID NO.3)B28 B29 B30 Arg Asp Val Pro C11 C12 C13 C14 C15 C16 C17 C18(SEQ ID NO.4)引物PINT358revII具有序列5′-CAGCTCCACCTGAGGAACATCGCGGGTCTTGGGTGTGTAG-3′(SEQ ID NO.5)采用引物對Tir/PINT358revII和Insu11/PINT358FIII中的每一種并以質(zhì)粒pINT90d作為模板，按照EP-B1 0 489 780中的方法進(jìn)行PCR。合并兩個反應(yīng)的產(chǎn)物等分并用來與引物對Tir/Insu11進(jìn)行第三個PCR。用Sal1/Nco1酶雙消化該反應(yīng)的產(chǎn)物，并且該限制性消化的產(chǎn)物經(jīng)純化后被插入Nco1/Sal1酶切的質(zhì)粒pINT91d之載體DNA中，如在EP-B1 0 489 780中所述。以這種方式構(gòu)建的質(zhì)粒被稱作pINT358d.。通過DNA序列分析證實了所述結(jié)構(gòu)。感受態(tài)大腸桿菌細(xì)胞被所述質(zhì)粒的DNA所轉(zhuǎn)化。如實施例1，在細(xì)菌中進(jìn)行胰島素原的表達(dá)。按照實施例2中方式折疊后，所述胰島素原被酶促轉(zhuǎn)化為胰島素，并按照EP-B1 0 347 781中記載的方法進(jìn)一步進(jìn)行純化。此外，通過參照源于pINT90d的方法能夠另外收集到離子交換層析步驟中的一種邊界(marginal)級分，這是由于該級分沒有受到Arg(B31)-胰島素的污染。實施例4 用于制備Lys(B3)Glu(B29)-RDVP-C11-35-胰島素原的質(zhì)粒pINT362d的構(gòu)建構(gòu)建質(zhì)粒所需的是作為模板的質(zhì)粒pINT329d和pINT358d的DNA以及引物Tir和Insu11。另外，合成了兩種引物Salforward和329rev。
引物Salforward具有序列5′-TACACACCCGAGACCCGCGATGTTCCTCAGG-3′ (SEQ ID NO.6)其中粗體印刷的序列部分表示與質(zhì)粒pINT358d雜交的序列，而其余部分與質(zhì)粒pINT329d的B鏈-編碼區(qū)段的序列同源。
引物329rev具有序列5′- CCTGAGGAACATCGCGGGTCTCGGGTGTGTAG -3′ (SEQ ID NO.7)其中粗體印刷的區(qū)段表示與形成B鏈端點的反義鏈同源的區(qū)域，并且描述了質(zhì)粒pINT329d中的編碼精氨酸的三聯(lián)體。其余的序列與質(zhì)粒pINT358d雜交。進(jìn)行兩個PCR循環(huán)。在所述循環(huán)中，質(zhì)粒pINT329d的DNA用作引物對Tir/329rev的模板，并且pINT358d DNA用作引物對Salforward/Insu11的模板。
兩個反應(yīng)產(chǎn)生了通過引物Salforward的序列而重疊的片段。因而在第三個PCR循環(huán)中能夠?qū)蓚€片段連接起來，并且借助Tir和Insu11，能夠?qū)⑺鼈冞B成編碼胰島素類似物的DNA序列。該反應(yīng)產(chǎn)物用限制性酶NcoI/SalI進(jìn)行切割后插入到用SalI/NcoI打開的pINT91d載體片段中。大腸桿菌K12 MM294的感受態(tài)細(xì)胞被合適的連接混合物所轉(zhuǎn)化。從轉(zhuǎn)化體中分離質(zhì)粒DNA并進(jìn)行表征。正確的質(zhì)粒被稱作pINT362d。
發(fā)現(xiàn)融合蛋白表達(dá)后的粗產(chǎn)率與pINT90d相當(dāng)。然而，卻發(fā)現(xiàn)折疊率比pINT329d高大約40％。
由pINT362d編碼的融合蛋白的結(jié)構(gòu)如下MATTSTGNSAR FVKQHLCGSHLVEALYLVCGERGFFYTPET RDVPQVELGGGPG融合蛋 B鏈 C鏈AGSLQPLALEGSLQKR GIVEQCCTSICSLYQLENYCN (SEQ ID NO.8)C鏈(續(xù)) A鏈實施例5用于制備His(B31)His(B32)Gly(A21)-RDVP-C11-35-胰島素原的質(zhì)粒pINT349d的結(jié)構(gòu)首先制備其DNA編碼胰島素類似物Gly(A21)胰島素的質(zhì)粒pINT140d。
此目的所需要的是兩個在PCR中被用作引物的寡核苷酸寡核苷酸Tir被用作有義引物而寡核苷酸140drev被用作反義引物140drev5′-AAAGGTCGACTATTAGCCGCAGTA-3′(SEQ ID NO.9)終止 終止 Gly Cys TyrA21 A20 A19所述兩種引物與來源于質(zhì)粒pINT90d的DNA共同被用于一個標(biāo)準(zhǔn)的PCR中。所述反應(yīng)產(chǎn)物按照EP-B1 0 489 780中記載的方法與限制性酶NcoI和SalI反應(yīng)，然后被插入到相應(yīng)切開的載體pINT69d中。結(jié)果產(chǎn)生質(zhì)粒pINT140d，該質(zhì)粒被轉(zhuǎn)化到大腸桿菌K12 MM294中后又被分離出來，并且通過限制性酶切和序列分析而被表征。
進(jìn)行兩個PCR循環(huán)，起始于質(zhì)粒pINT140d的DNA。第一個反應(yīng)使用了引物Tir和作為反向引物且具有以下序列的PINT349aVal Gln Pro Val Asp Arg His His Thr Lys Pro Thr Tyr(SEQ ID NO.10)5′- CACCTGAGGAACATCGCGGTGGTGGGTCTTGGGTGTGTAG-3′ (SEQ ID NO.11)C12 C11 * * * * * * B30 B29 B28 B27 B26其中被星號標(biāo)記的序列是指編碼新插入的氨基酸的密碼子。
利用引物Inu11和PINT349b進(jìn)行第二個PCR。
引物PINT349b具有序列Pro Lys Thr His His Arg Asp Val Pro Gln Val Glu Leu (SEQ ID NO.12)5′- ACCCAAGACCCACCACCGCGATGTTCCTCAGGTGGAGCTG - 3′(SEQ ID NO.13)B28 B29 B30 * * * * * * C11 C12 C13 C14從DNA的序列位點34至位點1，引物與PINT349a互補。因此能夠在第三個PCR中將來源于兩個PCR的產(chǎn)物與引物Tir和Insu11連接起來，以便產(chǎn)生編碼所需胰島素原衍生物的DNA片段。該反應(yīng)產(chǎn)物按照所記載的方法與酶NcoI和SalI進(jìn)行反應(yīng)，然后被插入到被所述酶切開的PINT91d載體片段中，并且被轉(zhuǎn)化到大腸桿菌K12中。對來源于轉(zhuǎn)化體的質(zhì)粒表征后，正確的質(zhì)粒構(gòu)建體被稱作pINT349d。
融合蛋白的表達(dá)在融合蛋白的產(chǎn)率方面顯示出明顯的增加。令人驚奇地是，該產(chǎn)率比通過pINT90d獲得的產(chǎn)率高大約20％，并且比通過質(zhì)粒pINT30d獲得的產(chǎn)率高大約5倍。此外，折疊率相當(dāng)于通過由pINT90d編碼的猴胰島素原所獲得的折疊率。
序列表<110>Aventis Pharma Deutschland GmbH<120>用于改進(jìn)胰島素和胰島素類似物的制備方法的C肽<130>1999/L059<140>19947456.7<141>1999-10-02<160>13<170>PatentIn Ver.2.1<210>1<211>87<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列描述編碼C肽變異體的DNA<400>1cgcgatgttc ctcaggtgga gctgggcggg ggccctggcg caggcagcct gcagcccttg 60gcgctggagg ggtccctgca gaagcgc 87<210>2<211>29<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述變異的C肽胰島素<400>2Arg Asp Val Pro Gln Val Glu Leu Gly Gly Gly Pro Gly Ala Gly Ser1 5 10 15Leu Gln Pro Leu Ala Leu Glu Gly Ser Leu Gln Lys Arg20 25<210>3<211>45<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列描述引物PINT 358fIII<400>3cccaagaccc gcgatgttcc tcaggtggag ctgggcgggg gccct 45<210>4<211>4<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述源于PINT 358fIII的蛋白部分序列<400>4Arg Asp Val Pro1<210>5<211>40<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列描述引物PINT 358revII<400>5cagctccacc tgaggaacat cgcgggtctt gggtgtgtag 40<210>6<211>31<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列描述引物Salforward
Salforward<400>6tacacacccg agacccgcga tgttcctcag g 31<210>7<211>32<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列描述引物329rev<400>7cctgaggaac atcgcgggtc tcgggtgtgt ag 32<210>8<211>91<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述變異的胰島素前體<400>8Met Ala Thr Thr Ser Thr Gly Asn Ser Ala Arg Phe Val Lys Gln His1 5 10 15Leu Cys Gly Ser His Leu Val Glu Ala Leu Tyr Leu Val Cys Gly Glu20 25 30Arg Gly Phe Phe Tyr Thr Pro Glu Thr Arg Asp Val Pro Gln Val Glu35 40 45Leu Gly Gly Gly Pro Gly Ala Gly Ser Leu Gln Pro Leu Ala Leu Glu50 55 60Gly Ser Leu Gln Lys Arg Gly Ile Val Glu Gln Cys Cys Thr Ser Ile65 70 75 80Cys Ser Leu Tyr Gln Leu Glu Ash Tyr Cys Asn85 90<210>9<211>24<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列描述引物140drev<400>9aaaggtcgac tattagccgc agta24<210>10<211>13<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述源于PINT 349a的蛋白部分序列<400>10Val Gln Pro Val Asp Arg His His Thr Lys Pro Thr Tyr1 5 10<210>11<211>40<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列描述引物349a<400>11cacctgagga acatcgcggt ggtgggtctt gggtgtgtag 40<210>12<211>13<212>PRT<213>人工序列<220><223>人工序列描述源于PINT 349b的蛋白部分序列<400>12Pro Lys Thr His His Arg Asp Val Pro Gln Val Glu Leu1 5 10<210>13<211>40<212>DNA<213>人工序列<220><223>人工序列描述引物PINT 349b<400>13acccaagacc caccaccgcg atgttcctca ggtggagctg 40
權(quán)利要求
1.一種式I所示的胰島素類似物或人胰島素的前體，F(xiàn)us-B(1-30)-RDVP-Yn-A(1-21)(I)；其中Fus 是一種任何合適序列的任選存在的融合部分；B(1-30) 是人胰島素的B鏈；Y 是一種C端終止于一個堿性氨基酸的氨基酸鏈；n 從2至50，并表示氨基酸鏈Y的長度；和A(1-21) 是人胰島素的A鏈，并且A和/或B鏈能夠通過氨基酸的交換、缺失和/或插入被修飾。
2.如權(quán)利要求1所述前體，其中Yn是人或猴胰島素的C肽的第5至35位氨基酸。
3.如權(quán)利要求1所述前體，其中Yn是人胰島素的第11至35位氨基酸。
4.如權(quán)利要求1至3中任一項所述的前體，其中人胰島素的B鏈含有修飾部分Lys(B3)Glu(B29)。
5.如權(quán)利要求1至3中任一項所述的前體，其中人胰島素的B鏈和A鏈含有修飾部分His(B31)His(B32)Gly(A21)。
6.一種編碼如權(quán)利要求1至5中任一項所述前體的DNA。
7.一種含有權(quán)利要求6所述DNA的載體。
8.如權(quán)利要求7所述的載體，其中所述載體是一種適合于在大腸桿菌中表達(dá)的表達(dá)載體。
9.一種含有權(quán)利要求8所述載體的大腸桿菌細(xì)胞。
10.一種制備如權(quán)利要求1至5中任一項所述前體的方法，其中(a)將權(quán)利要求6所述的DNA導(dǎo)入權(quán)利要求7所述的載體中；(b)將由(a)得到的載體導(dǎo)入大腸桿菌細(xì)胞中；(c)由(b)得到的含有由(a)得到的載體之大腸桿菌細(xì)胞被用來進(jìn)行表達(dá)；和(d)從培養(yǎng)基上清液中分離出所述的前體。
11.一種制備權(quán)利要求6所述DNA的方法，其中(a)通過PCR手段和其它的分子生物學(xué)技術(shù)從人或猴胰島素的cDNA中制備權(quán)利要求6所述的DNA；和(b)分離所述DNA。
12.一種制備人胰島素或胰島素類似物的方法，其中(a)通過權(quán)利要求10所述的方法制備前體；(b)由(a)得到的前體在適當(dāng)?shù)臈l件下進(jìn)行折疊以便能夠象在人胰島素中一樣形成二硫鍵和RDVP-Yn部分，如果合適，所述融合部分Fus被酶解切除；和(c)純化人胰島素或胰島素類似物。
13.如權(quán)利要求1至5中任一項所述的前體用于制備胰島素或胰島素類似物的用途。
14.如權(quán)利要求13所述的用途，其中胰島素或胰島素類似物是通過權(quán)利要求12中所述的方法制備的。
15.權(quán)利要求6所述的DNA用于制備權(quán)利要求1至5中任一項所述的前體的用途。
16.權(quán)利要求8所述的載體用于制備權(quán)利要求1至5中任一項所述的前體的用途。
17.一種權(quán)利要求9所述的大腸桿菌細(xì)胞用于制備權(quán)利要求1至5中任一項所述的前體的用途。
18.如權(quán)利要求15、16或17任一項所述的用途，其中所述前體是通過權(quán)利要求10的方法制備的。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種式(I)所示的胰島素類似物或人胰島素前體:Fus－B(1－30)－RDVP－Yn－A(1－21)(I);其中Fus是一種任選存在的任一序列的融合部分,B(1－30)是人胰島素的B鏈,Y代表一種終止于一個C－末端堿性氨基酸的氨基酸鏈,n從2至50并表示氨基酸鏈Y的長度,且A(1－21)是人胰島素的A鏈。A和/或B鏈能夠通過氨基酸的交換、缺失和/或插入的手段來修飾。本發(fā)明還涉及一種編碼其的DNA。本發(fā)明進(jìn)一步涉及所述前體和DNA的生產(chǎn)和用途,以及生產(chǎn)人胰島素或胰島素類似物的方法。
文檔編號C07K19/00GK1377370SQ00813713
公開日2002年10月30日 申請日期2000年9月15日 優(yōu)先權(quán)日1999年10月2日
發(fā)明者P·哈伯曼, J·艾爾特, J·美韋斯, G·塞普克 申請人:阿文蒂斯藥物德國有限公司