Icam?1單抗修飾辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體及制備與應用
【專利摘要】本發(fā)明提供一種ICAM?1單抗修飾辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，由：辛伐他汀、脂質(zhì)材料、聚乙二醇單硬脂酸酯、單氨基終端的聚乙二醇硬脂酸酯、N,N’?二琥珀酰亞胺基碳酸酯以及ICAM?1單克隆抗體所組成。本發(fā)明以辛伐他汀為藥物，以水性溶劑擴散法制備辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，通過對其表面進行ICAM?1單克隆抗體的修飾，構(gòu)建特異性靶向ALI肺血管內(nèi)皮細胞的ICAM?1單抗辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體。本發(fā)明的脂質(zhì)載體可靶向ALI肺血管內(nèi)皮細胞、延緩辛伐他汀的釋放，提高肺部病灶的藥物濃集量從而提高藥物治療效率，減少辛伐他汀的肝毒性、肌毒性。從逆轉(zhuǎn)ALI肺血管內(nèi)皮細胞損傷的發(fā)病機制出發(fā)，有效改善ALI病癥。
【專利說明】
I CAM-1單抗修飾辛伐他訂納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體及制備與應用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ]本發(fā)明屬于藥物新型給藥系統(tǒng)的制備，具體為對血管內(nèi)皮細胞的ICAM-1受體具有特異性結(jié)合能力的ICAM-1單克隆抗體修飾辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體及其制備方法，以及其在急性肺損傷的治療藥物制備中的應用。
【背景技術(shù)】
[0002]急性肺損傷(acutelung injury，ALI)是一種常見臨床綜合癥，其惡化階段即為急性呼吸窘迫綜合征(acute respiratory distress syndrome，ARDS)，具有較高的發(fā)病率及死亡率，迄今為止嚴重威脅著人類的生命健康。ALI的病理表征體現(xiàn)為大量彌漫性炎癥細胞肺內(nèi)浸潤、肺泡和肺實質(zhì)內(nèi)高度水腫、肺泡透明膜形成以及后期的肺間質(zhì)纖維化。在過去的十多年里，對于ALI的改善仍主要基于幾種支持治療技術(shù)，如小潮氣量通氣、給予PEEP、肺液體管理、抗菌療法等。在此期間一系列的藥物療法也被應用于ALI的改善，如血管舒張劑(一氧化氮、前列環(huán)素等)的吸入治療、腎上腺糖皮質(zhì)激素、酮康唑、抗氧化劑等，但迄今尚無可觀的臨床治療效果。這種令人不甚滿意的藥物治療結(jié)果，一定程度上可歸因于誘發(fā)ALI病因的多樣異質(zhì)性以及在ALI病發(fā)過程中肺泡持續(xù)的病理生理改變。因此從ALI的復雜的發(fā)病機制出發(fā)，解決ALI發(fā)病的根本原因，從而探求一個新的ALI治療途徑已得到越來越多的關(guān)注。
[0003]相對于諸如過度的炎癥級聯(lián)反應、氧化應激失衡、凝血纖溶異常等發(fā)病機理，肺血管損傷被廣泛視為ALI病發(fā)最起初的主導原因。有研究報道由ALI引起的血管內(nèi)皮改變在ALI發(fā)病中起著重要的調(diào)控作用。而中性粒細胞依賴途徑被廣泛視為肺內(nèi)皮損傷的主要途徑。由于固有免疫而積累于肺微血管系統(tǒng)的中性粒細胞伴隨其相應的激活，通過脫顆粒及釋放前炎性因子、活性氧物質(zhì)、蛋白酶以及促凝血分子等導致內(nèi)皮細胞損傷、肺血管通透性增強，進而誘發(fā)肺水腫發(fā)生。肺內(nèi)皮功能紊亂會進一步導致肺內(nèi)炎性細胞粘附及迀移增強、炎癥因子及促凝抗凝調(diào)節(jié)失衡的惡性循環(huán)。此外，基于肺血管內(nèi)皮細胞作為調(diào)節(jié)肺部及全身血管平衡的主要代謝器官，所以從逆轉(zhuǎn)肺血管內(nèi)皮細胞的損傷入手，尋找一種有效的治療ALI的手段具有十分重要的研究價值與臨床意義。
[0004]他汀類藥物作為傳統(tǒng)性的用于降低血脂的羥甲基戊二酸輔酶A還原酶抑制劑，現(xiàn)階段在ALI保護的研究中已得到越來越多的應用。這基于其所具有的多向的藥物特性，包括保護血管內(nèi)皮細胞細胞骨架、降低超氧化物的產(chǎn)生、促使NO合成、上調(diào)內(nèi)皮細胞炎癥衰減物質(zhì)integrin-M以及與細胞間緊密連接相關(guān)的claudin-5。他汀類藥物對ALI保護的臨床前研究同樣取得了顯著進展，包括對氣管內(nèi)滴注LPS、機械通氣、輻射等方式引發(fā)的ALI的改善，以及對其通常的初始階段肺炎病癥同樣起到了積極的藥物療效。盡管迄今為止他汀類藥物尚未在臨床上應用于ALI的治療，然而近年來的一些對人體ALI的改善研究取得了積極的成果。有研究顯示，預先進行他汀類藥物預防或治療的患者，可顯著降低ICU患者住院前4天膿毒癥及ALI/ARDS的發(fā)生率，充分證明了他汀類藥物用于預防或治療急性肺損傷的潛在臨床價值，從而使他汀類藥物有可能成為通過逆轉(zhuǎn)肺血管內(nèi)皮細胞損傷過程而治療ALI的新一代藥物。然而他汀類在真正成為ALI的治療藥物之前尚需克服下列問題:①療效不確定，2010年在愛爾蘭進行的一項隨機對照研究顯示:SOmg辛伐他汀用于治療ALI機械通氣患者，盡管第14天治療組患者具有更好的氧合指數(shù)和通氣參數(shù)，但與空白組相比無顯著性差異;②不良反應多，主要表現(xiàn)為肌肉溶解以及由于氧化應激及線粒體功能紊亂導致的肝毒性、中樞神經(jīng)系統(tǒng)毒性等?；谥苄运∷幬锟梢酝ㄟ^被動擴散的方式被細胞攝取從而更易于作用于細胞發(fā)揮藥效，故本發(fā)明選用他汀類藥物中親脂性最強的辛伐他汀為研究藥物。然而，同樣由于較高的組織滲透性，相對于水溶性他汀而言，脂溶性他汀具有更高的藥物副作用發(fā)生率。為克服他汀類藥物用于治療ALI的上述不足，本專利將他汀類藥物包裹于納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體中，通過納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體將藥物靶向輸送到ALI血管內(nèi)皮細胞，增強病灶部位的藥物積累，顯著提高藥物治療效率。在從ALI的發(fā)病機制出發(fā)逆轉(zhuǎn)血管內(nèi)皮細胞損傷的同時，減少他汀類藥物的不良反應。
[0005]研究報道ALI可誘導血管內(nèi)皮細胞產(chǎn)生各類生物標記物，包括von WiIIebrand因子、Ang-2以及細胞間粘附分子-1 (ICAM-1)t3ICAM-1作為表達于內(nèi)皮細胞表面的跨膜糖蛋白，其表達水平與炎癥強度密切相關(guān)。國外多位學者將其應用于納米載體的靶向設計中，他們的研究成果證實:通過對納米載體表面進行ICAM-1單克隆抗體的修飾，利用ICAM-1單抗與血管內(nèi)皮細胞表面ICAM-1受體特異性結(jié)合的原理，可實現(xiàn)納米載體對血管內(nèi)皮細胞的靶向輸送。本發(fā)明選用納米給藥系統(tǒng)中的納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體作為藥物遞送系統(tǒng)。納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體作為一種新型的給藥系統(tǒng)，具有下列給藥特性:①良好的生物相容性;②藥物緩、控釋釋放;③較低的生物毒性;④易于制備等等?；诩{米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的上述特性，通過對他汀類藥物的高效包載，并對納米載體表面進行ICAM-1單抗修飾，使他汀類藥物靶向輸送至IJALI血管內(nèi)皮細胞的設想成為現(xiàn)實。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的一個目的是提供一種ICAM-1單抗修飾辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體。該ICAM-1單抗修飾辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體主要由:辛伐他汀、脂質(zhì)材料、聚乙二醇單硬脂酸酯(MW 2000)、單氨基終端的聚乙二醇硬脂酸酯、N，N’_二琥珀酰亞胺基碳酸酯以及ICAM-1單克隆抗體所組成。處方成分質(zhì)量百分比為4.98%-14.95%辛伐他汀、83.72%-93.68%的脂質(zhì)材料、O % -9.97 %的聚乙二醇單硬脂酸酯(Mff 2000 )、1.00 %的單氨基終端的聚乙二醇硬脂酸酯、0.22%N，N’_二琥珀酰亞胺基碳酸酯和0.11%的ICAM-1單克隆抗體。所述的脂質(zhì)材料選用單硬脂酸甘油酯、硬脂酸、油酸、中鏈脂肪酸甘油酯中的一種或兩種。
[0007]本發(fā)明的第二個目的是提供ICAM-1單抗修飾辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的制備方法，具體通過以下方案實現(xiàn):
[0008]1.合成單氨基終端的聚乙二醇硬脂酸酯
[0009]稱取119.8mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽，24.011^ N-羥基琥珀酰亞胺，35.5mg硬脂酸溶于3ml無水二甲基亞砜，400rpm 60 °C條件下反應30min，將反應液緩慢滴加至2ml無水二甲基亞砜溶解的250mg雙氨基終端聚乙二醇溶液中，室溫下400rpm攪拌反應24h。反應結(jié)束后，反應液轉(zhuǎn)移至透析袋中(MffCO: 7kDa)，純凈水透析48h，除去水溶性副產(chǎn)物，冷凍干燥即得單氨基終端的聚乙二醇硬脂酸酯。
[0010]2.1CAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的制備[0011 ]溶劑擴散法制備辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，具體方法:精密稱取5-15mg的辛伐他汀、84-94mg的脂質(zhì)材料、O-1Omg的聚乙二醇硬脂酸酯(Mff 2000)以及Img合成的氨基終端的聚乙二醇單硬脂酸酯，共lOOmg，加入Iml乙醇溶解作為有機相，水浴60°C加熱，使材料完全融化。注射器吸取0.45ml融化的材料，乙醇稀釋至0.5ml，以去離子水為分散介質(zhì)，在400rpm攪拌速度下將有機相依次快速注入60°C水浴加熱的4.5ml的去離子水中，注射完畢攪拌30s后取出，自然冷卻至室溫，制得脂質(zhì)濃度9mg/ml的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體。加入0.1mg的N，N’-二琥珀酰亞胺基碳酸酯，渦旋Imin分散均勻后室溫下孵育反應3h，加入50μg ICAM-1單克隆抗體，渦旋Imin分散均勻后室溫下繼續(xù)孵育反應3h。本反應通過N，N’_二琥珀酰亞胺基碳酸酯連接藥物載體上聚乙二醇的氨基與ICAM-1單克隆抗體上的氨基，將抗體成功嫁接到藥物載體上，冷凍干燥即得ICAM-1單抗修飾辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體。
[0012]本發(fā)明的再一個目的是提供所述的ICAM-1單抗修飾辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體在制備靶向ALI肺血管內(nèi)皮細胞藥物中的應用。
[0013]本發(fā)明以辛伐他汀為藥物，以脂質(zhì)材料和聚乙二醇單硬脂酸酯為主要材料，以水性溶劑擴散法制備辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，通過對其表面進行ICAM-1單克隆抗體的修飾，構(gòu)建特異性革G向ALI肺血管內(nèi)皮細胞的ICAM-1單抗辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，并評價其對ALI的改善作用。從逆轉(zhuǎn)ALI肺血管內(nèi)皮細胞損傷的發(fā)病機制出發(fā)，探尋一種安全、高效的ALI他汀靶向治療新途徑。
[0014]本發(fā)明的有益之處，是所提供的ICAM-1單抗辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體可靶向ALI肺血管內(nèi)皮細胞、延緩辛伐他汀的釋放，提高肺部病灶的藥物濃集量從而提高藥物治療效率，減少辛伐他汀的肝毒性、肌毒性。從逆轉(zhuǎn)ALI肺血管內(nèi)皮細胞損傷的發(fā)病機制出發(fā)，有效改善ALI病癥。
【附圖說明】
[0015]圖1是辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體透射電子顯微鏡照片。
[0016]圖2是辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體釋藥曲線。
[0017]圖3是辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體體內(nèi)分布活體成像。
[0018]圖4是辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體對急性肺損傷的保護作用。
【具體實施方式】
[0019]本發(fā)明結(jié)合附圖和實施例作進一步的說明。
[0020]實施例1
[0021]1.合成單氨基終端的聚乙二醇硬脂酸酯
[0022]稱取119.8mg 1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽，24.011^ N-羥基琥珀酰亞胺，35.5mg硬脂酸溶于3ml無水二甲基亞砜，400rpm 60 °C條件下反應30min，將反應液緩慢滴加至2ml無水二甲基亞砜溶解的250mg雙氨基終端聚乙二醇溶液中，室溫下400rpm攪拌反應24h。反應結(jié)束后，反應液轉(zhuǎn)移至透析袋中(MffCO: 7kDa)，純凈水透析48h，除去水溶性副產(chǎn)物，冷凍干燥即得單氨基終端的聚乙二醇硬脂酸酯。
[0023]2.1CAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的制備
[0024]溶劑擴散法制備辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，具體方法:精密稱取5mg辛伐他汀、94mg單硬脂酸甘油酯，Img合成的單氨基終端的聚乙二醇硬脂酸酯，共lOOmg，加入Iml乙醇溶解作為有機相，水浴60°C加熱，使材料完全融化。注射器吸取0.45ml融化的材料，乙醇稀釋至0.5ml，以去離子水為分散介質(zhì)，在400rpm攪拌速度下將有機相依次快速注入60 °C水浴加熱的4.5ml的去離子水中，注射完畢攪拌30s后取出，自然冷卻至室溫，制得脂質(zhì)濃度9mg/ml的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體。加入0.1mg的N,N’-二琥?自酰亞胺基碳酸酯，禍旋Imin分散均勻后室溫下孵育反應3h，加入50yg ICAM-1單克隆抗體，渦旋Imin分散均勻后室溫下繼續(xù)孵育反應3h。本反應通過N，N’_二琥珀酰亞胺基碳酸酯連接藥物載體上聚乙二醇的氨基與ICAM-1單克隆抗體上的氨基，將抗體成功嫁接到藥物載體上，冷凍干燥即得ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體。
[0025]采用動態(tài)光散射法測定所制備納米粒的粒徑大小。將樣品以去離子水稀釋至0.lmg/ml，以馬爾文Zetasizer Nano_S90納米粒度分析儀測定ICAM-1單抗修飾前后的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的粒徑分別為204.5 ± 4.56nm，217.4 ± 24.25nm。
[0026]采用調(diào)酸離心法配合高效液相法測定辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率和載藥量。向制備完畢后靜置至室溫的未經(jīng)ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米粒分散液中加入適量0.1M的鹽酸，至體系的PH降至1.2以促使納米粒絮凝，20000rpm離心30min，HPLC測定上清液中藥物濃度，按以下公式計算辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率及載藥量。
[0027]包封率=(脂質(zhì)納米粒中的藥物質(zhì)量/總投藥量)X100%
[0028]載藥量=(脂質(zhì)納米粒中的藥物質(zhì)量/載藥納米?？傎|(zhì)量)X100%
[0029]經(jīng)測定，未經(jīng)ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率及載藥量分別為 81.32% 和 4.10%。
[0030]實施例2ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的制備
[0031]溶劑擴散法制備辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，具體方法:精密稱取1mg辛伐他汀、89mg單硬脂酸甘油酯，Img合成的單氨基終端的聚乙二醇硬脂酸酯，共lOOmg，加入Iml乙醇溶解作為有機相，水浴60°C加熱，使材料完全融化。注射器吸取0.45ml融化的材料，乙醇稀釋至0.5ml，以去離子水為分散介質(zhì)，在400rpm攪拌速度下將有機相依次快速注入60 °C水浴加熱的4.5ml的去離子水中，注射完畢攪拌30s后取出，自然冷卻至室溫，制得脂質(zhì)濃度9mg/ml的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體。加入0.1mg的N,N’-二琥?自酰亞胺基碳酸酯，禍旋Imin分散均勻后室溫下孵育反應3h，加入50yg ICAM-1單克隆抗體，渦旋Imin分散均勻后室溫下繼續(xù)孵育反應3h。本反應通過N，N’_二琥珀酰亞胺基碳酸酯連接藥物載體上聚乙二醇的氨基與ICAM-1單克隆抗體上的氨基，將抗體成功嫁接到藥物載體上，冷凍干燥即得ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體。
[0032]采用動態(tài)光散射法測定所制備納米粒的粒徑大小。將樣品以去離子水稀釋至0.lmg/ml，以馬爾文Zetasizer Nano_S90納米粒度分析儀測定ICAM-1單抗修飾前后的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的粒徑分別為245.6 ± 12.4nm，257.2 ± 20.7nm。
[0033]采用調(diào)酸離心法配合高效液相法測定辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率和載藥量。向制備完畢后靜置至室溫的未經(jīng)ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米粒分散液中加入適量0.1M的鹽酸，至體系的PH降至1.2以促使納米粒絮凝，20000rpm離心30min，HPLC測定上清液中藥物濃度，按以下公式計算辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率及載藥量。
[0034]包封率=(脂質(zhì)納米粒中的藥物質(zhì)量/總投藥量)X100%
[0035]載藥量=(脂質(zhì)納米粒中的藥物質(zhì)量/載藥納米?？傎|(zhì)量)X100%
[0036]經(jīng)測定，未經(jīng)ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率及載藥量分別為85.70% 和 8.69%。
[0037]實施例3ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的制備
[0038]溶劑擴散法制備辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，具體方法:精密稱取15mg辛伐他汀、84mg單硬脂酸甘油酯，Img合成的單氨基終端的聚乙二醇硬脂酸酯，共lOOmg，加入Iml乙醇溶解作為有機相，水浴60°C加熱，使材料完全融化。注射器吸取0.45ml融化的材料，乙醇稀釋至0.5ml，以去離子水為分散介質(zhì)，在400rpm攪拌速度下將有機相依次快速注入60 °C水浴加熱的4.5ml的去離子水中，注射完畢攪拌30s后取出，自然冷卻至室溫，制得脂質(zhì)濃度9mg/ml的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體。加入0.1mg的N,N’-二琥?自酰亞胺基碳酸酯，禍旋Imin分散均勻后室溫下孵育反應3h，加入50yg ICAM-1單克隆抗體，渦旋Imin分散均勻后室溫下繼續(xù)孵育反應3h。本反應通過N，N’_二琥珀酰亞胺基碳酸酯連接藥物載體上聚乙二醇的氨基與ICAM-1單克隆抗體上的氨基，將抗體成功嫁接到藥物載體上，冷凍干燥即得ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體。
[0039]采用動態(tài)光散射法測定所制備納米粒的粒徑大小。將樣品以去離子水稀釋至0.lmg/ml，以馬爾文Zetasizer Nano_S90納米粒度分析儀測定ICAM-1單抗修飾前后的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的粒徑分別為274.3 ± 7.3nm，278.9 ± 13.6nm。
[0040]采用調(diào)酸離心法配合高效液相法測定辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率和載藥量。向制備完畢后靜置至室溫的未經(jīng)ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米粒分散液中加入適量0.1M的鹽酸，至體系的PH降至1.2以促使納米粒絮凝，20000rpm離心30min，HPLC測定上清液中藥物濃度，按以下公式計算辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率及載藥量。
[0041]包封率=(脂質(zhì)納米粒中的藥物質(zhì)量/總投藥量)X100%
[0042]載藥量=(脂質(zhì)納米粒中的藥物質(zhì)量/載藥納米?？傎|(zhì)量)X100%
[0043]經(jīng)測定，未經(jīng)ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率及載藥量分別為 75.42% 和 11.75%。
[0044]實施例4ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的制備
[0045]溶劑擴散法制備辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，具體方法:精密稱取5mg辛伐他汀、94mg硬脂酸，Img合成的單氨基終端的聚乙二醇硬脂酸酯，共lOOmg，加入Iml乙醇溶解作為有機相，水浴60°C加熱，使材料完全融化。注射器吸取0.45ml融化的材料，乙醇稀釋至0.5mI，以去離子水為分散介質(zhì)，在400rpm攪拌速度下將有機相依次快速注入60 °C水浴加熱的4.5ml的去離子水中，注射完畢攪拌30s后取出，自然冷卻至室溫，制得脂質(zhì)濃度9mg/ml的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體。加入0.1mg的N,N’-二琥?自酰亞胺基碳酸酯，禍旋Imin分散均勻后室溫下孵育反應3h，加入50yg ICAM-1單克隆抗體，渦旋Imin分散均勻后室溫下繼續(xù)孵育反應3h。本反應通過N，N’_二琥珀酰亞胺基碳酸酯連接藥物載體上聚乙二醇的氨基與ICAM-1單克隆抗體上的氨基，將抗體成功嫁接到藥物載體上，冷凍干燥即得ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體。
[0046]采用動態(tài)光散射法測定所制備納米粒的粒徑大小。將樣品以去離子水稀釋至0.lmg/ml，以馬爾文Zetasizer Nano_S90納米粒度分析儀測定ICAM-1單抗修飾前后的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的粒徑分別為213.7 ± 10.5nm，223.9 ± 7.7nm。
[0047]采用調(diào)酸離心法配合高效液相法測定辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率和載藥量。向制備完畢后靜置至室溫的未經(jīng)ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米粒分散液中加入適量0.1M的鹽酸，至體系的PH降至1.2以促使納米粒絮凝，20000rpm離心30min，HPLC測定上清液中藥物濃度，按以下公式計算辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率及載藥量。
[0048]包封率=(脂質(zhì)納米粒中的藥物質(zhì)量/總投藥量)X100%
[0049]載藥量=(脂質(zhì)納米粒中的藥物質(zhì)量/載藥納米?？傎|(zhì)量)X100%
[0050]經(jīng)測定，未經(jīng)ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率及載藥量分別為 79.53% 和 4.02%。
[0051 ]實施例5 ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的制備
[0052]溶劑擴散法制備辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，具體方法:精密稱取1mg辛伐他汀、89mg硬脂酸，Img合成的單氨基終端的聚乙二醇硬脂酸酯，共lOOmg，加入Iml乙醇溶解作為有機相，水浴60°C加熱，使材料完全融化。注射器吸取0.45ml融化的材料，乙醇稀釋至0.5mI，以去離子水為分散介質(zhì)，在400rpm攪拌速度下將有機相依次快速注入60 °C水浴加熱的4.5ml的去離子水中，注射完畢攪拌30s后取出，自然冷卻至室溫，制得脂質(zhì)濃度9mg/ml的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體。加入0.1mg的N,N’-二琥?自酰亞胺基碳酸酯，禍旋Imin分散均勻后室溫下孵育反應3h，加入50yg ICAM-1單克隆抗體，渦旋Imin分散均勻后室溫下繼續(xù)孵育反應3h。本反應通過N，N’_二琥珀酰亞胺基碳酸酯連接藥物載體上聚乙二醇的氨基與ICAM-1單克隆抗體上的氨基，將抗體成功嫁接到藥物載體上，冷凍干燥即得ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體。
[0053]采用動態(tài)光散射法測定所制備納米粒的粒徑大小。將樣品以去離子水稀釋至0.lmg/ml，以馬爾文Zetasizer Nano_S90納米粒度分析儀測定ICAM-1單抗修飾前后的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的粒徑分別為252.7 ± 13.6nm，277.89 ± 11.5nm。
[0054]采用調(diào)酸離心法配合高效液相法測定辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率和載藥量。向制備完畢后靜置至室溫的未經(jīng)ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米粒分散液中加入適量0.1M的鹽酸，至體系的PH降至1.2以促使納米粒絮凝，20000rpm離心30min，HPLC測定上清液中藥物濃度，按以下公式計算辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率及載藥量。
[0055]包封率=(脂質(zhì)納米粒中的藥物質(zhì)量/總投藥量)X100%
[0056]載藥量=(脂質(zhì)納米粒中的藥物質(zhì)量/載藥納米?？傎|(zhì)量)X100%
[0057]經(jīng)測定，未經(jīng)ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率及載藥量分別為 83.11% 和 8.45%。
[0058]實施例6ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的制備
[0059]溶劑擴散法制備辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，具體方法:精密稱取15mg辛伐他汀、84mg硬脂酸，Img合成的單氨基終端的聚乙二醇硬脂酸酯，共lOOmg，加入Iml乙醇溶解作為有機相，水浴60°C加熱，使材料完全融化。注射器吸取0.45ml融化的材料，乙醇稀釋至0.5mI，以去離子水為分散介質(zhì)，在400rpm攪拌速度下將有機相依次快速注入60 °C水浴加熱的4.5ml的去離子水中，注射完畢攪拌30s后取出，自然冷卻至室溫，制得脂質(zhì)濃度9mg/ml的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體。加入0.1mg的N,N’-二琥?自酰亞胺基碳酸酯，禍旋Imin分散均勻后室溫下孵育反應3h，加入50yg ICAM-1單克隆抗體，渦旋Imin分散均勻后室溫下繼續(xù)孵育反應3h。本反應通過N，N’_二琥珀酰亞胺基碳酸酯連接藥物載體上聚乙二醇的氨基與I CAM-1單克隆抗體上的氨基，將抗體成功嫁接到藥物載體上，冷凍干燥即得ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體。
[0060]采用動態(tài)光散射法測定所制備納米粒的粒徑大小。將樣品以去離子水稀釋至0.lmg/ml，以馬爾文Zetasizer Nano_S90納米粒度分析儀測定ICAM-1單抗修飾前后的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的粒徑分別為280.2 ± 9.3nm，283.5 ± 3.5nm。
[0061]采用調(diào)酸離心法配合高效液相法測定辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率和載藥量。向制備完畢后靜置至室溫的未經(jīng)ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米粒分散液中加入適量0.1M的鹽酸，至體系的PH降至1.2以促使納米粒絮凝，20000rpm離心30min，HPLC測定上清液中藥物濃度，按以下公式計算辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率及載藥量。
[0062]包封率=(脂質(zhì)納米粒中的藥物質(zhì)量/總投藥量)X100%
[0063]載藥量=(脂質(zhì)納米粒中的藥物質(zhì)量/載藥納米粒總質(zhì)量)X100%
[0064]經(jīng)測定，未經(jīng)ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率及載藥量分別為 74.25% 和 11.58%。
[0065]實施例7ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的制備
[0066]溶劑擴散法制備辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，具體方法:精密稱取5mg辛伐他汀、84mg單硬脂酸甘油酯，1mg油酸，Img合成的單氨基終端的聚乙二醇硬脂酸酯，共lOOmg，加入Iml乙醇溶解作為有機相，水浴60°C加熱，使材料完全融化。注射器吸取0.45ml融化的材料，乙醇稀釋至0.5ml，以去離子水為分散介質(zhì)，在400rpm攪拌速度下將有機相依次快速注入60°C水浴加熱的4.5ml的去離子水中，注射完畢攪拌30s后取出，自然冷卻至室溫，制得脂質(zhì)濃度9mg/ml的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體。加入0.1mg的N，N’_二琥?自酰亞胺基碳酸酯，渦旋Imin分散均勻后室溫下孵育反應3h，加入50yg ICAM-1單克隆抗體，渦旋Imin分散均勻后室溫下繼續(xù)孵育反應3h。本反應通過N，N’_二琥珀酰亞胺基碳酸酯連接藥物載體上聚乙二醇的氨基與ICAM-1單克隆抗體上的氨基，將抗體成功嫁接到藥物載體上，冷凍干燥即得ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體。
[0067]采用動態(tài)光散射法測定所制備納米粒的粒徑大小。將樣品以去離子水稀釋至0.lmg/ml，以馬爾文Zetasizer Nano_S90納米粒度分析儀測定ICAM-1單抗修飾前后的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的粒徑分別為284.5 ± 5.7nm，290.4 ± 14.2nm。
[0068]采用調(diào)酸離心法配合高效液相法測定辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率和載藥量。向制備完畢后靜置至室溫的未經(jīng)ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米粒分散液中加入適量0.1M的鹽酸，至體系的PH降至1.2以促使納米粒絮凝，20000rpm離心30min，HPLC測定上清液中藥物濃度，按以下公式計算辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率及載藥量。
[0069]包封率=(脂質(zhì)納米粒中的藥物質(zhì)量/總投藥量)X100%
[0070]載藥量=(脂質(zhì)納米粒中的藥物質(zhì)量/載藥納米?？傎|(zhì)量)X100%
[0071 ]經(jīng)測定，未經(jīng)ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率及載藥量分別為83.53% 和 4.21%。
[0072]實施例8ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的制備
[0073]溶劑擴散法制備辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，具體方法:精密稱取5mg辛伐他汀、74mg單硬脂酸甘油酯，20mg油酸，Img合成的單氨基終端的聚乙二醇硬脂酸酯，共lOOmg，加入Iml乙醇溶解作為有機相，水浴60°C加熱，使材料完全融化。注射器吸取0.45ml融化的材料，乙醇稀釋至0.5ml，以去離子水為分散介質(zhì)，在400rpm攪拌速度下將有機相依次快速注入60°C水浴加熱的4.5ml的去離子水中，注射完畢攪拌30s后取出，自然冷卻至室溫，制得脂質(zhì)濃度9mg/ml的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體。加入0.1mg的N，N’_二琥?自酰亞胺基碳酸酯，渦旋Imin分散均勻后室溫下孵育反應3h，加入50yg ICAM-1單克隆抗體，渦旋Imin分散均勻后室溫下繼續(xù)孵育反應3h。本反應通過N，N’_二琥珀酰亞胺基碳酸酯連接藥物載體上聚乙二醇的氨基與ICAM-1單克隆抗體上的氨基，將抗體成功嫁接到藥物載體上，冷凍干燥即得ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體。
[0074]采用動態(tài)光散射法測定所制備納米粒的粒徑大小。將樣品以去離子水稀釋至0.lmg/ml，以馬爾文Zetasizer Nano_S90納米粒度分析儀測定ICAM-1單抗修飾前后的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的粒徑分別為312.5 ± 14.3nm，316.7 ± 17.Inm0
[0075]采用調(diào)酸離心法配合高效液相法測定辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率和載藥量。向制備完畢后靜置至室溫的未經(jīng)ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米粒分散液中加入適量0.1M的鹽酸，至體系的PH降至1.2以促使納米粒絮凝，20000rpm離心30min，HPLC測定上清液中藥物濃度，按以下公式計算辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率及載藥量。
[0076]包封率=(脂質(zhì)納米粒中的藥物質(zhì)量/總投藥量)X100%
[0077]載藥量=(脂質(zhì)納米粒中的藥物質(zhì)量/載藥納米?？傎|(zhì)量)X100%
[0078]經(jīng)測定，未經(jīng)ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率及載藥量分別為87.45% 和 4.40%。
[0079]實施例9ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的制備
[0080]溶劑擴散法制備辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，具體方法:精密稱取5mg辛伐他汀、64mg單硬脂酸甘油酯，30mg油酸，Img合成的單氨基終端的聚乙二醇硬脂酸酯，共lOOmg，加入Iml乙醇溶解作為有機相，水浴60°C加熱，使材料完全融化。注射器吸取0.45ml融化的材料，乙醇稀釋至0.5ml，以去離子水為分散介質(zhì)，在400rpm攪拌速度下將有機相依次快速注入60°C水浴加熱的4.5ml的去離子水中，注射完畢攪拌30s后取出，自然冷卻至室溫，制得脂質(zhì)濃度9mg/ml的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體。加入0.1mg的N，N’_二琥?自酰亞胺基碳酸酯，渦旋Imin分散均勻后室溫下孵育反應3h，加入50yg ICAM-1單克隆抗體，渦旋Imin分散均勻后室溫下繼續(xù)孵育反應3h。本反應通過N，N’_二琥珀酰亞胺基碳酸酯連接藥物載體上聚乙二醇的氨基與ICAM-1單克隆抗體上的氨基，將抗體成功嫁接到藥物載體上，冷凍干燥即得ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體。
[0081]采用動態(tài)光散射法測定所制備納米粒的粒徑大小。將樣品以去離子水稀釋至0.lmg/ml，以馬爾文Zetasizer Nano_S90納米粒度分析儀測定ICAM-1單抗修飾前后的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的粒徑分別為342.6 ± 24.6nm，347.8 ± 19.2nm。
[0082]采用調(diào)酸離心法配合高效液相法測定辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率和載藥量。向制備完畢后靜置至室溫的未經(jīng)ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米粒分散液中加入適量0.1M的鹽酸，至體系的PH降至1.2以促使納米粒絮凝，20000rpm離心30min，HPLC測定上清液中藥物濃度，按以下公式計算辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率及載藥量。
[0083]包封率=(脂質(zhì)納米粒中的藥物質(zhì)量/總投藥量)X100%
[0084]載藥量=(脂質(zhì)納米粒中的藥物質(zhì)量/載藥納米?？傎|(zhì)量)X100%
[0085]經(jīng)測定，未經(jīng)ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率及載藥量分別為85.32% 和 4.30%。
[0086]實施例10ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的制備
[0087]溶劑擴散法制備辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，具體方法:精密稱取5mg辛伐他汀、84mg單硬脂酸甘油酯，1mg中鏈脂肪酸甘油酯，Img合成的單氨基終端的聚乙二醇硬脂酸酯，共lOOmg，加入Iml乙醇溶解作為有機相，水浴60°C加熱，使材料完全融化。注射器吸取0.45ml融化的材料，乙醇稀釋至0.5ml，以去離子水為分散介質(zhì)，在400rpm攪拌速度下將有機相依次快速注入60°C水浴加熱的4.5ml的去離子水中，注射完畢攪拌30s后取出，自然冷卻至室溫，制得脂質(zhì)濃度9mg/ml的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體。加入0.1mg的N,N’-二琥?白酰亞胺基碳酸酯，渦旋Imin分散均勻后室溫下孵育反應3h，加入ICAM-150yg單克隆抗體，渦旋Imin分散均勻后室溫下繼續(xù)孵育反應3h。本反應通過N，N’_二琥珀酰亞胺基碳酸酯連接藥物載體上聚乙二醇的氨基與ICAM-1單克隆抗體上的氨基，將抗體成功嫁接到藥物載體上，冷凍干燥即得ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體。
[0088]采用動態(tài)光散射法測定所制備納米粒的粒徑大小。將樣品以去離子水稀釋至0.lmg/ml，以馬爾文Zetasizer Nano_S90納米粒度分析儀測定ICAM-1單抗修飾前后的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的粒徑分別為302.5 ± 12.5nm，311.5 ± 12.7nm。
[0089]采用調(diào)酸離心法配合高效液相法測定辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率和載藥量。向制備完畢后靜置至室溫的未經(jīng)ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米粒分散液中加入適量0.1M的鹽酸，至體系的PH降至1.2以促使納米粒絮凝，20000rpm離心30min，HPLC測定上清液中藥物濃度，按以下公式計算辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率及載藥量。
[0090]包封率=(脂質(zhì)納米粒中的藥物質(zhì)量/總投藥量)X100%
[0091]載藥量=(脂質(zhì)納米粒中的藥物質(zhì)量/載藥納米粒總質(zhì)量)X100%
[0092]經(jīng)測定，未經(jīng)ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率及載藥量分別為87.93% 和 4.42%。
[0093]實施例11ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的制備
[0094]溶劑擴散法制備辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，具體方法:精密稱取5mg辛伐他汀、74mg單硬脂酸甘油酯，20mg中鏈脂肪酸甘油酯，Img合成的單氨基終端的聚乙二醇硬脂酸酯，共lOOmg，加入Iml乙醇溶解作為有機相，水浴60°C加熱，使材料完全融化。注射器吸取0.45ml融化的材料，乙醇稀釋至0.5ml，以去離子水為分散介質(zhì)，在400rpm攪拌速度下將有機相依次快速注入60°C水浴加熱的4.5ml的去離子水中，注射完畢攪拌30s后取出，自然冷卻至室溫，制得脂質(zhì)濃度9mg/ml的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體。加入0.1mg的N,N’-二琥?白酰亞胺基碳酸酯，渦旋Imin分散均勻后室溫下孵育反應3h，加入50yg ICAM-1單克隆抗體，渦旋Imin分散均勻后室溫下繼續(xù)孵育反應3h。本反應通過N，N’_二琥珀酰亞胺基碳酸酯連接藥物載體上聚乙二醇的氨基與ICAM-1單克隆抗體上的氨基，將抗體成功嫁接到藥物載體上，冷凍干燥即得ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體。
[0095]采用動態(tài)光散射法測定所制備納米粒的粒徑大小。將樣品以去離子水稀釋至0.lmg/ml，以馬爾文Zetasizer Nano_S90納米粒度分析儀測定ICAM-1單抗修飾前后的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的粒徑分別為322.I ± 17.7nm，330.6 ± 20.2nm。
[0096]采用調(diào)酸離心法配合高效液相法測定辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率和載藥量。向制備完畢后靜置至室溫的未經(jīng)ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米粒分散液中加入適量0.1M的鹽酸，至體系的PH降至1.2以促使納米粒絮凝，20000rpm離心30min，HPLC測定上清液中藥物濃度，按以下公式計算辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率及載藥量。
[0097]包封率=(脂質(zhì)納米粒中的藥物質(zhì)量/總投藥量)X100%
[0098]載藥量=(脂質(zhì)納米粒中的藥物質(zhì)量/載藥納米?？傎|(zhì)量)X100%
[0099]經(jīng)測定，未經(jīng)ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率及載藥量分別為 92.19% 和 4.63%。
[0100]實施例12ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的制備
[0101]溶劑擴散法制備辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，具體方法:精密稱取5mg辛伐他汀、64mg單硬脂酸甘油酯，30mg中鏈脂肪酸甘油酯，Img合成的單氨基終端的聚乙二醇硬脂酸酯，共lOOmg，加入Iml乙醇溶解作為有機相，水浴60°C加熱，使材料完全融化。注射器吸取0.45ml融化的材料，乙醇稀釋至0.5ml，以去離子水為分散介質(zhì)，在400rpm攪拌速度下將有機相依次快速注入60°C水浴加熱的4.5ml的去離子水中，注射完畢攪拌30s后取出，自然冷卻至室溫，制得脂質(zhì)濃度9mg/ml的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體。加入0.1mg的N,N’-二琥?白酰亞胺基碳酸酯，渦旋Imin分散均勻后室溫下孵育反應3h，加入50yg ICAM-1單克隆抗體，渦旋Imin分散均勻后室溫下繼續(xù)孵育反應3h。本反應通過N，N’_二琥珀酰亞胺基碳酸酯連接藥物載體上聚乙二醇的氨基與ICAM-1單克隆抗體上的氨基，將抗體成功嫁接到藥物載體上，冷凍干燥即得ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體。
[0102]采用動態(tài)光散射法測定所制備納米粒的粒徑大小。將樣品以去離子水稀釋至0.lmg/ml，以馬爾文Zetasizer Nano_S90納米粒度分析儀測定ICAM-1單抗修飾前后的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的粒徑分別為345.I ± 12.7nm，355.6 ± 23.7nm。
[0103]采用調(diào)酸離心法配合高效液相法測定辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率和載藥量。向制備完畢后靜置至室溫的未經(jīng)ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米粒分散液中加入適量0.1M的鹽酸，至體系的PH降至1.2以促使納米粒絮凝，20000rpm離心30min，HPLC測定上清液中藥物濃度，按以下公式計算辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率及載藥量。
[0104]包封率=(脂質(zhì)納米粒中的藥物質(zhì)量/總投藥量)X100%
[0105]載藥量=(脂質(zhì)納米粒中的藥物質(zhì)量/載藥納米?？傎|(zhì)量)X100%
[0106]經(jīng)測定，未經(jīng)ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率及載藥量分別為 91.18% 和 4.58%。、
[0107]實施例13ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的制備
[0108]溶劑擴散法制備辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，具體方法:精密稱取5mg辛伐他汀、74mg單硬脂酸甘油酯，1mg油酸，1mg聚乙二醇單硬脂酸酯、Img合成的單氨基終端的聚乙二醇硬脂酸酯，共lOOmg，加入Iml乙醇溶解作為有機相，水浴60°C加熱，使材料完全融化。注射器吸取0.45ml融化的材料，乙醇稀釋至0.5ml，以去離子水為分散介質(zhì)，在400rpm攪拌速度下將有機相依次快速注入60°C水浴加熱的4.5ml的去離子水中，注射完畢攪拌30s后取出，自然冷卻至室溫，制得脂質(zhì)濃度9mg/ml的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體。加入0.1mg的N，N’-二琥珀酰亞胺基碳酸酯，渦旋Imin分散均勻后室溫下孵育反應3h，加入50yg ICAM-1單克隆抗體，渦旋Imin分散均勻后室溫下繼續(xù)孵育反應3h。本反應通過N，N’_二琥珀酰亞胺基碳酸酯連接藥物載體上聚乙二醇的氨基與ICAM-1單克隆抗體上的氨基，將抗體成功嫁接到藥物載體上，冷凍干燥即得ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體。
[0109]采用動態(tài)光散射法測定所制備納米粒的粒徑大小。將樣品以去離子水稀釋至
0.lmg/ml，以馬爾文Zetasizer Nano_S90納米粒度分析儀測定ICAM-1單抗修飾前后的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的粒徑分別為295.5 ± 13.7nm，310.4± 14.8nm。
[0110]采用調(diào)酸離心法配合高效液相法測定辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率和載藥量。向制備完畢后靜置至室溫的未經(jīng)ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米粒分散液中加入適量0.1M的鹽酸，至體系的PH降至1.2以促使納米粒絮凝，20000rpm離心30min，HPLC測定上清液中藥物濃度，按以下公式計算辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率及載藥量。
[0111]包封率=(脂質(zhì)納米粒中的藥物質(zhì)量/總投藥量)X100%
[0112]載藥量=(脂質(zhì)納米粒中的藥物質(zhì)量/載藥納米粒總質(zhì)量)X100%
[0113]經(jīng)測定，未經(jīng)ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率及載藥量分別為82.25% 和 4.15%。
[0114]實施例14ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的制備
[0115]溶劑擴散法制備辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，具體方法:精密稱取5mg辛伐他汀、64mg單硬脂酸甘油酯，20mg油酸，1mg聚乙二醇單硬脂酸酯、Img合成的單氨基終端的聚乙二醇硬脂酸酯，共lOOmg，加入Iml乙醇溶解作為有機相，水浴60°C加熱，使材料完全融化。注射器吸取0.45ml融化的材料，乙醇稀釋至0.5ml，以去離子水為分散介質(zhì)，在400rpm攪拌速度下將有機相依次快速注入60°C水浴加熱的4.5ml的去離子水中，注射完畢攪拌30s后取出，自然冷卻至室溫，制得脂質(zhì)濃度9mg/ml的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體。加入0.1mg的N，N’-二琥珀酰亞胺基碳酸酯，渦旋Imin分散均勻后室溫下孵育反應3h，加入50yg ICAM-1單克隆抗體，渦旋Imin分散均勻后室溫下繼續(xù)孵育反應3h。本反應通過N，N’_二琥珀酰亞胺基碳酸酯連接藥物載體上聚乙二醇的氨基與ICAM-1單克隆抗體上的氨基，將抗體成功嫁接到藥物載體上，冷凍干燥即得ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體。
[0116]采用動態(tài)光散射法測定所制備納米粒的粒徑大小。將樣品以去離子水稀釋至
0.lmg/ml，以馬爾文Zetasizer Nano_S90納米粒度分析儀測定ICAM-1單抗修飾前后的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的粒徑分別為320.7 ± 20.Inm，325.0 ± 19.2nm。
[0117]采用調(diào)酸離心法配合高效液相法測定辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率和載藥量。向制備完畢后靜置至室溫的未經(jīng)ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米粒分散液中加入適量0.1M的鹽酸，至體系的PH降至1.2以促使納米粒絮凝，20000rpm離心30min，HPLC測定上清液中藥物濃度，按以下公式計算辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率及載藥量。
[0118]包封率=(脂質(zhì)納米粒中的藥物質(zhì)量/總投藥量)X100%
[0119]載藥量=(脂質(zhì)納米粒中的藥物質(zhì)量/載藥納米?？傎|(zhì)量)X100%
[0120 ]經(jīng)測定，未經(jīng)ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率及載藥量分別為86.55% 和 4.36%。
[0121]實施例15ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的制備
[0122]溶劑擴散法制備辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，具體方法:精密稱取5mg辛伐他汀、54mg單硬脂酸甘油酯，30mg油酸，1mg聚乙二醇單硬脂酸酯、Img合成的單氨基終端的聚乙二醇硬脂酸酯，共lOOmg，加入Iml乙醇溶解作為有機相，水浴60°C加熱，使材料完全融化。注射器吸取0.45ml融化的材料，乙醇稀釋至0.5ml，以去離子水為分散介質(zhì)，在400rpm攪拌速度下將有機相依次快速注入60°C水浴加熱的4.5ml的去離子水中，注射完畢攪拌30s后取出，自然冷卻至室溫，制得脂質(zhì)濃度9mg/ml的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體。加入0.1mg的N，N’-二琥珀酰亞胺基碳酸酯，渦旋Imin分散均勻后室溫下孵育反應3h，加入50yg ICAM-1單克隆抗體，渦旋Imin分散均勻后室溫下繼續(xù)孵育反應3h。本反應通過N，N’_二琥珀酰亞胺基碳酸酯連接藥物載體上聚乙二醇的氨基與ICAM-1單克隆抗體上的氨基，將抗體成功嫁接到藥物載體上，冷凍干燥即得ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體。
[0123]采用動態(tài)光散射法測定所制備納米粒的粒徑大小。將樣品以去離子水稀釋至
0.lmg/ml，以馬爾文Zetasizer Nano_S90納米粒度分析儀測定ICAM-1單抗修飾前后的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的粒徑分別為340.2 ± 23.3nm，345.9 ± 15.Inm0
[0124]采用調(diào)酸離心法配合高效液相法測定辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率和載藥量。向制備完畢后靜置至室溫的未經(jīng)ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米粒分散液中加入適量0.1M的鹽酸，至體系的PH降至1.2以促使納米粒絮凝，20000rpm離心30min，HPLC測定上清液中藥物濃度，按以下公式計算辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率及載藥量。
[0125]包封率=(脂質(zhì)納米粒中的藥物質(zhì)量/總投藥量)X100%
[0126]載藥量=(脂質(zhì)納米粒中的藥物質(zhì)量/載藥納米粒總質(zhì)量)X100%
[0127]經(jīng)測定，未經(jīng)ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率及載藥量分別為85.22% 和 4.29%。
[0128]實施例16ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的制備
[0129]溶劑擴散法制備辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，具體方法:精密稱取5mg辛伐他汀、74mg單硬脂酸甘油酯，1mg中鏈脂肪酸甘油酯、1mg聚乙二醇單硬脂酸酯、Img合成的單氨基終端的聚乙二醇硬脂酸酯，共lOOmg，加入Iml乙醇溶解作為有機相，水浴60°C加熱，使材料完全融化。注射器吸取0.45ml融化的材料，乙醇稀釋至0.5ml，以去離子水為分散介質(zhì)，在400rpm攪拌速度下將有機相依次快速注入60°C水浴加熱的4.5ml的去離子水中，注射完畢攪拌30s后取出，自然冷卻至室溫，制得脂質(zhì)濃度9mg/ml的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體。加入0.1mg的N，N’-二琥珀酰亞胺基碳酸酯，渦旋Imin分散均勻后室溫下孵育反應3h，加入50μg ICAM-1單克隆抗體，渦旋Imin分散均勻后室溫下繼續(xù)孵育反應3h。本反應通過N，N’_二琥珀酰亞胺基碳酸酯連接藥物載體上聚乙二醇的氨基與ICAM-1單克隆抗體上的氨基，將抗體成功嫁接到藥物載體上，冷凍干燥即得ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體。
[0130]采用動態(tài)光散射法測定所制備納米粒的粒徑大小。將樣品以去離子水稀釋至
0.lmg/ml，以馬爾文Zetasizer Nano_S90納米粒度分析儀測定ICAM-1單抗修飾前后的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的粒徑分別為317.5 ± 15.8nm，323.9 ± 14.2nm。
[0131]采用調(diào)酸離心法配合高效液相法測定辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率和載藥量。向制備完畢后靜置至室溫的未經(jīng)ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米粒分散液中加入適量0.1M的鹽酸，至體系的PH降至1.2以促使納米粒絮凝，20000rpm離心30min，HPLC測定上清液中藥物濃度，按以下公式計算辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率及載藥量。
[0132]包封率=(脂質(zhì)納米粒中的藥物質(zhì)量/總投藥量)X100%
[0133]載藥量=(脂質(zhì)納米粒中的藥物質(zhì)量/載藥納米?？傎|(zhì)量)X100%
[0134]經(jīng)測定，未經(jīng)ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率及載藥量分別為86.72% 和 4.36%。
[0135]實施例17ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的制備
[0136]溶劑擴散法制備辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，具體方法:精密稱取5mg辛伐他汀、64mg單硬脂酸甘油酯，20mg中鏈脂肪酸甘油酯、1mg聚乙二醇單硬脂酸酯、Img合成的單氨基終端的聚乙二醇硬脂酸酯，共lOOmg，加入Iml乙醇溶解作為有機相，水浴60°C加熱，使材料完全融化。注射器吸取0.45ml融化的材料，乙醇稀釋至0.5ml，以去離子水為分散介質(zhì)，在400rpm攪拌速度下將有機相依次快速注入60°C水浴加熱的4.5ml的去離子水中，注射完畢攪拌30s后取出，自然冷卻至室溫，制得脂質(zhì)濃度9mg/ml的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體。加入0.1mg的N，N’-二琥珀酰亞胺基碳酸酯，渦旋Imin分散均勻后室溫下孵育反應3h，加入50μg ICAM-1單克隆抗體，渦旋Imin分散均勻后室溫下繼續(xù)孵育反應3h。本反應通過N，N’_二琥珀酰亞胺基碳酸酯連接藥物載體上聚乙二醇的氨基與ICAM-1單克隆抗體上的氨基，將抗體成功嫁接到藥物載體上，冷凍干燥即得ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體。
[0137]采用動態(tài)光散射法測定所制備納米粒的粒徑大小。將樣品以去離子水稀釋至
0.lmg/ml，以馬爾文Zetasizer Nano_S90納米粒度分析儀測定ICAM-1單抗修飾前后的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的粒徑分別為337.8 ± 25.8nm，354.7 ± 18.2nm。
[0138]采用調(diào)酸離心法配合高效液相法測定辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率和載藥量。向制備完畢后靜置至室溫的未經(jīng)ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米粒分散液中加入適量0.1M的鹽酸，至體系的PH降至1.2以促使納米粒絮凝，20000rpm離心30min，HPLC測定上清液中藥物濃度，按以下公式計算辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率及載藥量。
[0139]包封率=(脂質(zhì)納米粒中的藥物質(zhì)量/總投藥量)X100%
[0140]載藥量=(脂質(zhì)納米粒中的藥物質(zhì)量/載藥納米粒總質(zhì)量)X100%
[0141 ]經(jīng)測定，未經(jīng)ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率及載藥量分別為 91.04% 和 4.43%。
[0142]實施例18
[0143]1.1CAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的制備
[0144]溶劑擴散法制備辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，具體方法:精密稱取5mg辛伐他汀、54mg單硬脂酸甘油酯，30mg中鏈脂肪酸甘油酯、1mg聚乙二醇單硬脂酸酯、Img合成的單氨基終端的聚乙二醇硬脂酸酯，共lOOmg，加入Iml乙醇溶解作為有機相，水浴60°C加熱，使材料完全融化。注射器吸取0.45ml融化的材料，乙醇稀釋至0.5ml，以去離子水為分散介質(zhì)，在400rpm攪拌速度下將有機相依次快速注入60°C水浴加熱的4.5ml的去離子水中，注射完畢攪拌30s后取出，自然冷卻至室溫，制得脂質(zhì)濃度9mg/ml的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體。加入0.1mg的N，N’-二琥珀酰亞胺基碳酸酯，渦旋Imin分散均勻后室溫下孵育反應3h，加入50μg ICAM-1單克隆抗體，渦旋Imin分散均勻后室溫下繼續(xù)孵育反應3h。本反應通過N，N’_二琥珀酰亞胺基碳酸酯連接藥物載體上聚乙二醇的氨基與ICAM-1單克隆抗體上的氨基，將抗體成功嫁接到藥物載體上，冷凍干燥即得ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體。
[0145]采用動態(tài)光散射法測定所制備納米粒的粒徑大小。將樣品以去離子水稀釋至
0.lmg/ml，以馬爾文Zetasizer Nano_S90納米粒度分析儀測定ICAM-1單抗修飾前后的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的粒徑分別為342.5 ± 23.6nm，358.I ± 22.7nm。
[0146]采用調(diào)酸離心法配合高效液相法測定辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率和載藥量。向制備完畢后靜置至室溫的未經(jīng)ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米粒分散液中加入適量0.1M的鹽酸，至體系的PH降至1.2以促使納米粒絮凝，20000rpm離心30min，HPLC測定上清液中藥物濃度，按以下公式計算辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率及載藥量。
[0147]包封率=(脂質(zhì)納米粒中的藥物質(zhì)量/總投藥量)X100%
[0148]載藥量=(脂質(zhì)納米粒中的藥物質(zhì)量/載藥納米?？傎|(zhì)量)X100%
[0149]經(jīng)測定，未經(jīng)ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的包封率及載藥量分別為87.02% 和 4.38%。
[0150]2.辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的形態(tài)觀察
[0151]取實例十七中冷凍干燥前的脂質(zhì)納米粒稀釋至lOOyg/ml，將稀釋后納米粒分散液滴至銅網(wǎng)上，自然干燥，以I %的醋酸雙氧鈾溶液負染Imin，JEM-1200EX型透射電子顯微鏡觀察其形態(tài)。經(jīng)ICAM-1單抗修飾前后的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體形態(tài)如圖1所示，呈類球形;單抗修飾前后的納米粒粒徑大小相近。
[0152]3.辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的體外藥物釋放考察
[0153]取實例十七中冷凍干燥前的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體分散液稀釋9倍至分散液中藥物濃度為50yg/ml。精密稱定辛伐他汀10mg，一定乙醇溶解后以PH7.4的I3BS溶液稀釋至50yg/ml。采用透析袋法，分別取辛伐他汀標準品溶液以及稀釋后的經(jīng)抗體修飾或未修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體溶液Iml于透析袋中，置于含有15ml PH7.4的PBS釋放管內(nèi)，370C，60rpm恒溫震蕩。在設定時間點取樣Iml，并補足Iml新鮮PBS溶液。高效液相法測定釋放介質(zhì)中辛伐他汀濃度，計算辛伐他汀的累積釋放量。經(jīng)測定辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的釋放行為如圖2所示，與單純游離藥物相比，載藥納米粒對藥物具有緩釋作用；ICAM-1單抗修飾前后的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體體外釋放行為相似。
[0154]4.急性肺損傷動物模型的構(gòu)建以及ICAM-1單抗辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的肺部靶向性研究
[0155]以Balb/c小鼠構(gòu)建動物模型。將小鼠以5%水合氯醛進行麻醉(450mg/kg)，暴露式氣管滴注法，緩慢滴注溶于50μ1生理鹽水的脂多糖(2yg/g，bodyWeight)，6h后給藥進行藥效評價。
[0156]為評價實例十七中ICAM-1單抗辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的肺部革El向性，以Dir作為熒光探針將其包載入脂質(zhì)納米粒中。將Balb/c小鼠進行以下分組:A組:正常鼠+ICAM-1單抗辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體組;B組:滴注生理鹽水鼠+ICAM-1單抗辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體組;C組:模型鼠+ICAM-1單抗辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體組;D組:模型鼠+辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體組。造模6h后，尾靜脈靜注給藥。分別于給藥后5h、24h處死小鼠，活體成像儀觀察并拍照。經(jīng)觀察ICAM-1單抗修飾前后的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的體內(nèi)分布特性如圖3所示，ICAM-1單抗辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體在模型小鼠肺部分布明顯強于正常小鼠以及曝露氣管滴注生理鹽水的小鼠，說明經(jīng)LPS刺激后，模型組小鼠肺血管內(nèi)皮細胞高量表達了 ICAM-1粘附分子，且ICAM-1單抗成功嫁接到納米載體上，通過抗體受體特異性結(jié)合，ICAM-1單抗納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體得以大量分布于模型小鼠的肺中；同時ICAM-1單抗修飾的納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體較無ICAM-1單抗修飾的納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體在模型鼠的肺內(nèi)分布更多，體現(xiàn)出ICAM-1單抗辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的肺部革El向特性。
[0157]5.HE染色評價ICAM-1單抗辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體對急性肺損傷的保護作用為評價實例十七中ICAM-1單抗辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體對急性肺損傷的保護作用，將Balb/c小鼠進行以下分組，A組:對照組;B組:模型組;C組:模型+游離辛伐他汀給藥組;D組:模型+辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體給藥組;E組:模型+ICAM-1單抗辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體給藥組。小鼠造模6h后，A組、B組尾靜脈注射0.2ml生理鹽水;C組尾靜脈注射200yg/ml的游離辛伐他汀藥物溶液;D組尾靜脈注射辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體;E組尾靜脈注射ICAM-1單抗辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體(各個給藥組辛伐他汀的給藥劑量均為2mg/kg)。給藥24h后處死小鼠，取出肺部器官以4%中性甲醛固定48h，HE染色，光鏡下觀察各組肺部病理切片特征，評價藥物制劑對LPS誘導的小鼠急性肺損傷的改善情況。結(jié)果如圖4所示，游離辛伐他汀藥物溶液組、辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體組以及ICAM-1單抗辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體組小鼠的肺部組織切片病理情況較模型組均得到一定程度的改善。治療組小鼠的病理切片照片相對于模型組而言:肺泡內(nèi)浸潤的炎性細胞明顯減少，肺泡結(jié)構(gòu)可見，其中ICAM-1辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體實驗組改善情況最為顯著。分析結(jié)果表明，ICAM-1辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體對本課題中模型動物急性肺損傷病癥可以起到保護作用。
【主權(quán)項】
1.一種ICAM-1單抗修飾辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，其特征在于，所述脂質(zhì)載體由辛伐他汀、脂質(zhì)材料、聚乙二醇單硬脂酸酯(MW 2000)、單氨基終端的聚乙二醇硬脂酸酯、N，N’-二琥珀酰亞胺基碳酸酯以及ICAM-1單克隆抗體組成，質(zhì)量百分比為4.98%-14.95%辛伐他汀、83.72%-93.68%的脂質(zhì)材料、O %-9.97%的聚乙二醇單硬脂酸酯(MW 2000)、1.00%的單氨基終端的聚乙二醇硬脂酸酯、0.22%的N，N’_二琥珀酰亞胺基碳酸酯和0.11%的ICAM-1單克隆抗體。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種ICAM-1單抗修飾辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，其特征在于，所述的脂質(zhì)材料選用單硬脂酸甘油酯、硬脂酸、油酸、中鏈脂肪酸甘油酯中的一種或兩種。3.權(quán)利要求1所述的一種ICAM -1單抗修飾辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的制備方法，其特征在于，通過以下步驟實現(xiàn): (1)合成單氨基終端的聚乙二醇硬脂酸酯 稱取1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、N-羥基琥珀酰亞胺、硬脂酸溶于無水二甲基亞砜，400rpm 60°C條件下反應30min，將反應液緩慢滴加至無水二甲基亞砜溶解的雙氨基終端聚乙二醇溶液中，室溫下400rpm攪拌反應24h，反應結(jié)束后，反應液轉(zhuǎn)移至透析袋中，純凈水透析48h，除去水溶性副產(chǎn)物，冷凍干燥即得單氨基終端的聚乙二醇硬脂酸酷； (2)ICAM-1單抗修飾的辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的制備 溶劑擴散法制備辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，具體方法:稱取辛伐他汀、脂質(zhì)材料、聚乙二醇硬脂酸酯以及氨基終端的聚乙二醇單硬脂酸酯，加入乙醇溶解作為有機相，水浴60°C加熱，使材料完全融化，注射器吸取融化的材料，乙醇稀釋，以去離子水為分散介質(zhì)，在400rpm攪拌速度下將有機相依次快速注入60 V水浴加熱的的去離子水中，注射完畢攪拌30s后取出，自然冷卻至室溫，制得辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體，再加入N，N’_二琥珀酰亞胺基碳酸酯，渦旋Imin分散均勻后室溫下孵育反應3h，加入ICAM-1單克隆抗體，渦旋Imin分散均勻后室溫下繼續(xù)孵育反應3h，冷凍干燥即得ICAM-1單抗修飾辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種ICAM-1單抗修飾辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的制備方法，其特征在于，步驟(I)透析袋為MffCO: 7kDa。5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的一種ICAM-1單抗修飾辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體的制備方法，其特征在于，步驟(2)聚乙二醇硬脂酸酯選用Mff 2000。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種ICAM-1單抗修飾辛伐他汀納米結(jié)構(gòu)脂質(zhì)載體在制備革巴向ALI肺血管內(nèi)皮細胞藥物中的應用。
【文檔編號】A61P11/00GK106074389SQ201610530175
【公開日】2016年11月9日
【申請日】2016年6月30日
【發(fā)明人】姜賽平, 李淑娟, 杜永忠
【申請人】浙江大學