烏靈菌粉在制備用于防治骨質(zhì)疏松癥、骨壞死藥物或保健食品中的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了烏靈菌粉在制備用于防治骨質(zhì)疏松癥、骨壞死藥物或保健食品中的應(yīng)用。動(dòng)物藥效實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，烏靈菌粉能增加骨質(zhì)疏松模型大鼠骨密度及骨鈣、磷含量，使骨量增加，骨組織顯微結(jié)構(gòu)趨于正常。烏靈菌粉能顯著增加激素性股骨頭壞死模型大鼠股骨頭毛細(xì)血管分布，減少激素性股骨頭壞死模型大鼠股骨頭骨組織內(nèi)脂肪沉積。烏靈菌粉可使酒精性股骨頭壞死模型大鼠骨小梁面積分?jǐn)?shù)顯著增高，空骨陷窩計(jì)數(shù)顯著降低，骨陷窩內(nèi)骨細(xì)胞形態(tài)正常。臨床研究結(jié)果表明，烏靈菌粉對(duì)骨質(zhì)疏松、激素性股骨頭壞死、酒精性股骨頭壞死骨具有顯著的治療作用。烏靈菌粉療效可靠、安全性高，具有很好的臨床應(yīng)用前景。
【專利說(shuō)明】
烏靈菌粉在制備用于防治骨質(zhì)疏松癥、骨壞死藥物或保健食 品中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于中藥技術(shù)領(lǐng)域，設(shè)及烏靈菌粉的新用途，具體設(shè)及烏靈菌粉在制備用 于防治骨質(zhì)疏松癥、骨壞死藥物和保健食品中的新用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 骨質(zhì)疏松癥(osteoporosis,0P)是一種常見(jiàn)的老年性疾病，由于其早期常無(wú)特殊 的臨床表現(xiàn)，但在中老年人中發(fā)病卻較為普遍，因此，被稱為"無(wú)聲無(wú)息的流行病"。1994年 世界衛(wèi)生組織對(duì)骨質(zhì)疏松癥的定義是:一種W骨量低下、骨微結(jié)構(gòu)破壞、骨脆性增加，易于 發(fā)生骨折的全身性骨病。2001年，美國(guó)NIH修正的骨質(zhì)疏松定義為:一種W骨強(qiáng)度受損、骨折 危險(xiǎn)增加的骨骼疾病;而骨強(qiáng)度是骨密度和骨質(zhì)量的綜合反映。該病W疼痛，身高變短，甚 至脊柱崎形，或出現(xiàn)骨折為臨床表現(xiàn)，W疼痛癥狀為主，腰背部常見(jiàn)。其中致病病因明確者 約占10%，為繼發(fā)性骨質(zhì)疏松癥。而致病原因未完全明確者約占90%，為原發(fā)性骨質(zhì)疏松 癥。引起繼發(fā)性骨質(zhì)疏松癥的病因很多，臨床上W內(nèi)分泌代謝疾病、結(jié)締組織疾病、腎臟疾 病、消化道疾病和藥物所致者多見(jiàn)。原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥又可分為兩個(gè)亞型，即絕經(jīng)后骨質(zhì)疏 松癥(I型)和老年型骨質(zhì)疏松癥（Π 型）。
[0003] 目前，全世界有超過(guò)2億人患有骨質(zhì)疏松癥，其發(fā)病率已躍居世界各種常見(jiàn)疾病的 第7位。伴隨我國(guó)人口老齡化進(jìn)程，骨質(zhì)疏松癥已成為危害我國(guó)人口公共健康最嚴(yán)重的問(wèn)題 之一。我國(guó)現(xiàn)有老齡人口約1.3億，骨質(zhì)疏松癥患者達(dá)8400萬(wàn)人，占總?cè)丝跀?shù)量的6.6 %，預(yù) 計(jì)到2050年，我國(guó)老齡人口將達(dá)到2.5億，其中25 %~70 %可能患有骨質(zhì)疏松癥。因此，防治 骨質(zhì)疏松癥已經(jīng)成為中老年人群的重要問(wèn)題。
[0004] 目前，該病的主要治療藥物有基礎(chǔ)藥物(巧劑、維生素 D)、抑制骨轉(zhuǎn)換劑(二憐酸鹽 類、降巧素、雌激素等）、骨形成促進(jìn)劑（甲狀旁腺激素、氣化物)和解偶聯(lián)劑(鎖鹽）。其中雌 激素服藥時(shí)間較長(zhǎng)，同時(shí)可能引發(fā)乳腺癌及子宮內(nèi)膜癌，長(zhǎng)期應(yīng)用毒副作用較大。降巧素對(duì) 骨質(zhì)疏松癥有一定療效，但價(jià)格昂貴，難W為廣大患者接受。
[0005] 骨壞死又稱骨缺血性壞死，是由于多種原因?qū)е碌墓蔷植垦\(yùn)不良而引起骨細(xì)胞 進(jìn)一步缺血、壞死、骨小梁斷裂、骨頭塌陷的一種病變，中醫(yī)稱之為骨蝕癥。骨壞死按照致病 因素不同可W分為兩類:創(chuàng)傷性骨壞死及非創(chuàng)傷性骨壞死。前者主要是患者遭受外力作用， 特別是直接遭受到強(qiáng)大暴力后，導(dǎo)致局部血液循環(huán)直接中斷，骨組織得不到血液供應(yīng)造成 成骨細(xì)胞、骨髓細(xì)胞、脂肪細(xì)胞等發(fā)生不可逆轉(zhuǎn)的死亡，骨小梁塌陷，骨陷窩形成，骨的結(jié)構(gòu) 力學(xué)改變，骨內(nèi)壓增高，最終形成死骨，造成骨壞死。相關(guān)流行病學(xué)研究表明，在發(fā)病率最高 的股骨頭壞死病因構(gòu)成因素中創(chuàng)傷占20%左右，在高齡人群(68-82歲）中，創(chuàng)傷甚至占到2/ 3的比例。非創(chuàng)傷性骨壞死發(fā)病的病因中，長(zhǎng)期使用糖皮質(zhì)激素占多數(shù)，其次是醒酒，還包括 高血壓、血管炎、遭受福射、長(zhǎng)期潛水人員等。研究結(jié)果顯示，我國(guó)在股骨頭壞死病因構(gòu)成中 激素性占36.17 %，酒精性占28.72 %，創(chuàng)傷性占20.21 %，病因不明性占14.90 %，激素和醒 酒已經(jīng)成為骨壞死的主要原因。
[0006] 骨壞死任何年齡段群體均可發(fā)病，主要集中在30-50歲。任何部位均可發(fā)病，其中 W股骨頭發(fā)病率最高且對(duì)患者危害最重，亦可發(fā)生于全身關(guān)節(jié)骨骼，如肩關(guān)節(jié)、膝關(guān)節(jié)、踩 關(guān)節(jié)、腕關(guān)節(jié)和椎體等部。據(jù)統(tǒng)計(jì)，我國(guó)的股骨頭壞死病例在500萬(wàn)-750萬(wàn)，每年新發(fā)病例在 7.5萬(wàn)-15萬(wàn)。由于其病因復(fù)雜，治療困難，一旦治療不及時(shí)，幾乎為100%的高致殘率，嚴(yán)重 影響患者生存質(zhì)量和勞動(dòng)能力。
[0007] 目前于針對(duì)骨壞死，前期主要采取保守療法，晚期則采用人工置換術(shù)，存在著成本 高、療程長(zhǎng)、副作用大、療效不理想等缺點(diǎn)。
[0008] 烏靈菌粉是從我國(guó)珍稀藥用真菌烏靈參中分離獲得的菌種粉末，或者通過(guò)深層發(fā) 酵技術(shù)人工培養(yǎng)的烏靈菌絲體，加工制成的烏靈菌粉。烏靈菌粉內(nèi)含腺巧、多糖、醬醇類及 谷氨酸、丫-氨基下酸、賴氨酸等19種氨基酸。還含有維生素(￥^6、81、86、1(1等)和微量元素 Un、FeXa等)等多種成份。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明，烏靈菌粉能明顯增強(qiáng)中樞的鎮(zhèn)靜作用，能使腦攝 取谷氨酸、丫一氨基下酸的數(shù)量增加，并增強(qiáng)谷氨酸脫簇酶的活性，使抑制性神經(jīng)遞質(zhì)丫一 氨基下酸的合成增加，同時(shí)提高大腦皮層T-氨基下酸受體的結(jié)合活性，能有效治療改善 抑郁、焦慮癥狀。烏靈菌粉能明顯地改善各種記憶障礙(記憶獲得、記憶鞏固、記憶再現(xiàn)缺 失），具有腦保護(hù)作用，表明有益智健腦功能。多項(xiàng)免疫試驗(yàn)亦顯示，本品能增強(qiáng)機(jī)體免疫功 能;在失血性貧血的情況下，能顯著地回升血紅蛋白和紅細(xì)胞的數(shù)量;有耐缺氧和抗疲勞作 用。急毒、長(zhǎng)毒和Ξ致試驗(yàn)證明烏靈菌粉無(wú)任何毒副作用和致癌、致崎、致突變作用。由烏靈 菌粉制成的中成藥烏靈膠囊具有補(bǔ)腎健腦，養(yǎng)屯、安神之功效。用于屯、腎不交所致的失眠、健 忘、屯、煩屯、惇、神疲乏力、腰膝酸軟、頭暈耳鳴、少氣懶言、脈細(xì)或沉無(wú)力；神經(jīng)衰弱見(jiàn)上述證 候者等。現(xiàn)有技術(shù)中還沒(méi)有關(guān)于烏靈菌粉在防治骨質(zhì)疏松、骨壞死方面的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0009] 發(fā)明目的：本發(fā)明的目的是在烏靈菌粉現(xiàn)有的藥理作用基礎(chǔ)上，通過(guò)大量實(shí)驗(yàn)深 入研究開發(fā)其藥理功效，提供烏靈菌粉在防治骨質(zhì)疏松、骨壞死方面的新用途，W進(jìn)一步提 升其藥用價(jià)值;實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明烏靈菌粉在防治骨質(zhì)疏松、骨壞死方面療效顯著，且無(wú)明顯毒 副作用和不良反應(yīng)，安全性高。
[0010] 技術(shù)方案:為了實(shí)現(xiàn)W上目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為：
[0011] 烏靈菌粉在制備用于防治骨質(zhì)疏松、骨壞死藥物和保健食品中的應(yīng)用。
[0012] 優(yōu)選地，本發(fā)明所述的應(yīng)用，其中所述的骨質(zhì)疏松癥包括原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥和繼 發(fā)性骨質(zhì)疏松癥。
[0013] 更優(yōu)選地，本發(fā)明所述的應(yīng)用，其中所述的原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥包括女性絕經(jīng)后骨 質(zhì)疏松和老年退化性骨質(zhì)疏松。
[0014] 更優(yōu)選地，本發(fā)明所述的應(yīng)用，其中所述的繼發(fā)性骨質(zhì)疏松癥包括由內(nèi)分泌代謝 疾病、結(jié)締組織疾病、腎臟疾病、消化道疾病和藥物引起的骨質(zhì)疏松癥。
[0015] 優(yōu)選地，本發(fā)明所述的應(yīng)用，其中所述的骨壞死包括股骨頭壞死、膝關(guān)節(jié)壞死、肩 關(guān)節(jié)壞死、脊柱骨壞死、化骨壞死、足舟骨壞死、距骨壞死、巧骨壞死、手舟骨壞死和月骨壞 死。
[0016] 優(yōu)選地，本發(fā)明所述的應(yīng)用，其中所述的骨壞死包括酒精性骨壞死和激素性骨壞 死。
[0017] -種具有防治骨質(zhì)疏松癥、骨壞死的藥物或保健食品，它包括烏靈菌粉、巧劑、維 生素 D、抑制骨轉(zhuǎn)換劑、骨形成促進(jìn)劑和/或解偶聯(lián)劑。
[0018] 優(yōu)選地，所述的抑制骨轉(zhuǎn)換劑包括二憐酸鹽類、降巧素或雌激素;骨形成促進(jìn)劑包 括甲狀旁腺激素或氣化物;解偶聯(lián)劑包括鎖鹽。
[0019] 優(yōu)選地，本發(fā)明所述的應(yīng)用，其中所述的烏靈菌粉可W和藥劑學(xué)上可接受輔料制 成丸劑、片劑、膠囊劑、顆粒劑等。
[0020] 有益效果：
[0021] 本發(fā)明通過(guò)大量實(shí)驗(yàn)研究開發(fā)烏靈菌粉新的臨床用途。藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，① 烏靈菌粉顯著增加維甲酸所致骨質(zhì)疏松模型大鼠骨骨化、骨P含量(P<〇.01)，使骨量增加， 骨組織顯微結(jié)構(gòu)趨于正常，對(duì)大鼠骨質(zhì)疏松有防治作用。②烏靈菌粉能顯著降低激素性股 骨頭壞死模型大鼠股骨頭髓腔脂肪組織沉積，與模型組比較均有顯著差異。<〇.〇5或口< 0.01)，其中高劑量烏靈菌粉降低脂肪沉積作用最顯著，可使股骨頭內(nèi)毛細(xì)血管幾乎恢復(fù)正 常水平，頭內(nèi)密布毛細(xì)血管，排列規(guī)律。③烏靈菌粉可使酒精性股骨頭壞死模型大鼠骨小梁 面積分?jǐn)?shù)顯著增高，空骨陷窩計(jì)數(shù)顯著降低，與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<〇. 05或P <0.01)，治療組股骨頭軟骨厚度大致均勻，表面光滑，骨髓腔內(nèi)脂肪細(xì)胞輕度增生，但數(shù)量 較A組減少，形態(tài)大致正常;骨髓腔內(nèi)骨小梁致密、分布均勻;骨陷窩內(nèi)骨細(xì)胞形態(tài)正常，分 布均勻。
[0022] 臨床研究證明：烏靈菌粉治療骨質(zhì)疏松、激素性股骨頭壞死、酒精性股骨頭壞死均 有顯著療效，在試驗(yàn)過(guò)程中未出現(xiàn)明顯不良反應(yīng)，安全性高。
[0023] 本發(fā)明公開了烏靈菌粉在防治骨質(zhì)疏松、骨壞死方面的新用途，為烏靈菌粉的產(chǎn) 品開發(fā)提供了新的方向。
【具體實(shí)施方式】
[0024] 下面結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步闡明本發(fā)明，應(yīng)理解運(yùn)些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而 不用于限制本發(fā)明的范圍，在閱讀了本發(fā)明之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員對(duì)本發(fā)明的各種等價(jià)形 式的修改均落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求所限定的范圍。
[0025] 實(shí)施例1烏靈菌粉治療骨質(zhì)疏松藥效學(xué)研究
[002引 1材料
[0027] 1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
[0028] Wistar雄性大鼠，體重180~220邑。
[00巧]1.2藥品與試劑
[0030] 烏靈菌粉:杭州眾芝康茹生物技術(shù)有限公司提供，批號(hào)JC16011401。陽(yáng)性藥:骨疏 康膠囊，0.32g/粒，迂寧康辰藥業(yè)有限公司生產(chǎn)，批號(hào)150501。維甲酸片，lOmg/片，山東良福 制藥有限公司生產(chǎn)，批號(hào)140230。W上藥物臨用前用蒸饋水配制成一定濃度供灌胃給藥藥 液。
[0031] 1.3儀器和設(shè)備
[0032] 原子吸收分光光度，單光子骨礦物密度測(cè)定儀，多功能真彩色病理圖像分析儀，電 子天平。
[0033] 2實(shí)驗(yàn)方法
[0034] 2.1分組及給藥
[0035] Wistar大鼠60只，按體重隨機(jī)分為6組，每組10只，分別為空白對(duì)照組、模型組、陽(yáng) 性對(duì)照組(骨疏康膠囊，1.5g/kg/d)，烏靈菌粉Ξ個(gè)劑量組(低劑量組0.5g/kg/d、中劑量組 l.Og/kg/d、高劑量組2.0g/kg)?？瞻讓?duì)照組灌服同體積蒸饋水，其余各組于實(shí)驗(yàn)第1天至第 14天灌服維甲酸（7〇111邑/1^)。14天后各組停用維甲酸，空白對(duì)照組、模型組給予同體積生理 鹽水，其他各組給予相應(yīng)藥物，連續(xù)給藥4周。
[0036] 定指標(biāo)
[0037] 治療結(jié)束后，取左側(cè)股骨稱重，計(jì)算骨重系數(shù)；取左側(cè)部分股骨烤干恒重，精確稱 重，酸消化后用原子吸收分光光度計(jì)測(cè)定骨巧、憐含量;用單光子骨礦物密度測(cè)定儀測(cè)定右 偵搬骨中段和下1/3處骨密度;取左側(cè)腔骨，常規(guī)固定，脫巧，切片，肥染色。應(yīng)用多功能真彩 色病理圖像分析儀于100倍下，在干號(hào)端生長(zhǎng)板下1~4mm近皮質(zhì)處取視野為測(cè)量范圍，進(jìn)行 骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)測(cè)定，計(jì)算平均骨小梁寬度(mean habecular plate thickness,MTPT, 皿）、平均骨小梁間距(mean 1:rabe州lar plate s邱aration,MTPS,皿）、骨小梁體積百分比 (trabecular bone volume,TBV,% )。
[0038] 3數(shù)據(jù)處理
[0039] 采用SPSS14.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析。計(jì)算結(jié)果表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。
[0040] 4結(jié)果
[0041] 4.1骨礦含量和骨密度的改變
[0042] 與對(duì)照組比較，模型組的骨化、骨P含量明顯降低，而烏靈菌粉高劑量組(2.Og/kg) 能明顯增加骨化含量和骨P含量(P<〇.01)。烏靈菌粉能明顯逆轉(zhuǎn)維甲酸所致骨量降低和骨 密度下降，高劑量烏靈菌粉的作用明顯優(yōu)于陽(yáng)性藥骨疏康膠囊組。具體結(jié)果見(jiàn)表1和表2。
[0043] 表1烏靈菌粉對(duì)骨質(zhì)疏松大鼠骨礦含量的影響G ±s，n = 10)
[0044]
[0045] 注:與模型組比較，沖<0.05，*沖<0.01;與陽(yáng)性藥組比較，ΔΡ<0.05;表2-5同。
[0046] 表2烏靈菌粉對(duì)骨質(zhì)疏松大鼠骨密度的影響林巧，η = 10)
[0047]
[004引4.2骨組織靜態(tài)計(jì)量學(xué)指標(biāo)觀察
[0049] 骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)靜態(tài)指標(biāo)觀察結(jié)果表明，模型組大鼠（維甲酸70mg/kg)發(fā)生了 骨質(zhì)疏松改變。經(jīng)不同劑量組烏靈菌粉治療的大鼠，與模型組比較，骨組織靜態(tài)計(jì)量學(xué)指標(biāo) 都出現(xiàn)了明顯的改善:骨量明顯增加，骨小梁形態(tài)發(fā)生逆轉(zhuǎn);骨小梁數(shù)量明顯增多，寬度增 加，小梁之間的連接增多，且垂直于號(hào)板方向排列有序。結(jié)果見(jiàn)表3。
[0050] 表3烏靈菌粉對(duì)骨質(zhì)疏松大鼠腔骨近端骨小梁靜態(tài)指標(biāo)的影響G±s'，n = 10)
[0化1 ]
[0053] 實(shí)施例2烏靈菌粉防治激素性股骨頭壞死藥效學(xué)研巧
[0054] 1、材料 [0化5] 1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 [0化6] Wistar大鼠乳鼠。
[0057] 1.2藥品與試劑
[005引烏靈菌粉:杭州眾芝康茹生物技術(shù)有限公司提供，批號(hào)JC16011401。陽(yáng)性藥:仙靈 骨碟膠囊，0.5g/粒，貴州同濟(jì)堂制藥有限公司，批號(hào)141203。醋酸潑尼松片，5mg/片，天津藥 業(yè)集團(tuán)新鄭股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)140516。W上藥物臨用前用蒸饋水配制成一定濃度供 灌胃給藥藥液。
[0化9] 2、實(shí)驗(yàn)方法
[0060]取Wistar大鼠乳鼠，雌雄各半。將其隨機(jī)分為6組，每組10只，分別為空白對(duì)照組、 模型組、陽(yáng)性對(duì)照組(仙靈骨碟膠囊，1.5g/kg)，烏靈菌粉高中低劑量組(低劑量組0.5g/kg、 中劑量組l.Og/kg、高劑量組2.0g/kg)?？瞻讓?duì)照組灌服同體積蒸饋水，共30天。股骨頭壞死 模型對(duì)照組為乳鼠剪肢1.5個(gè)月后，只灌服醋酸潑尼松，不給其他任何藥物。烏靈菌粉Ξ個(gè) 劑量組在灌服醋酸潑尼松的同時(shí)，開始灌服不同劑量烏靈菌粉，1次/天。共灌服3個(gè)月。陽(yáng)性 藥組在灌服醋酸潑尼松的同時(shí)開始灌服仙靈骨碟膠囊，1次/天。共灌服3個(gè)月。①觀察股骨 頭毛細(xì)血管分布情況:將股骨頭壞死試驗(yàn)各組動(dòng)物在戊己比妥鋼麻醉下，向一側(cè)股動(dòng)脈注 入墨汁約5mL，取下股骨頭置中性甲醒液中固定后，經(jīng)乙醇梯度脫水處理，用甲基丙締酸甲 醋包埋，聚合，使用低速骨銀制成0.3-0.5mm骨片。觀察毛細(xì)血管形態(tài)及分布。②觀察股骨頭 內(nèi)脂肪沉積情況:將上述動(dòng)物另側(cè)股骨頭取下依次按700-900ml/L乙醇中固定，行冷凍切 片，Lillie油紅0染色，觀察脂肪分布，并計(jì)算脂肪著色的軟骨細(xì)胞、骨細(xì)胞的比例。
[0061 ] 3數(shù)據(jù)處理
[0062] 采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析。計(jì)算結(jié)果W 7 ±5表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。
[006；3] 4 結(jié)果
[0064] 4.1股骨頭毛細(xì)血管分布
[0065] 正常組大鼠股骨頭毛細(xì)血管分布成網(wǎng)，有大量毛細(xì)血管直通軟骨下層，呈扇狀分 布，并有橫枝溝通，股骨頭壞死模型動(dòng)物的股骨頭內(nèi)毛細(xì)血管明顯稀疏，排列素亂，單位面 積內(nèi)毛細(xì)血管所占比例明顯下降。灌服不同劑量烏靈菌粉后，股骨頭內(nèi)毛細(xì)血管幾乎恢復(fù) 正常水平，頭內(nèi)密布毛細(xì)血管，排列也較規(guī)律。
[0066] 4.2股骨頭骨組織內(nèi)脂肪沉積測(cè)定
[0067] 股骨頭壞死模型大鼠股骨頭髓腔脂肪組織增多，骨小梁稀疏、變細(xì)，軟骨細(xì)胞及骨 細(xì)胞內(nèi)著脂肪染色的比例明顯增加。正常大鼠未見(jiàn)或僅見(jiàn)少量脂肪滴。服用不同劑量烏靈 菌粉后的大鼠未見(jiàn)或僅見(jiàn)少量脂肪滴。不同劑量烏靈菌粉脂肪著色率與模型組比較均有顯 著差異(P<〇.05或P<0.01)，其中高劑量烏靈菌粉降低脂肪著色率作用最顯著。具體結(jié)果見(jiàn) 表4。
[0068] 表4烏靈菌粉對(duì)激素性股骨頭壞死模型大鼠骨組織脂肪沉積的影響（7b，n = 10)
[0069]
[0070] 實(shí)施例3烏靈菌粉防治酒精性股骨頭壞死藥效學(xué)研究
[0071] 1 材料
[0072] 1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
[0073] 清潔級(jí)8-10周齡新西蘭雄性大白兔65只，體質(zhì)量(2.5 ± 0.化g)。
[0074] 1.2藥品與試劑
[0075] 烏靈菌粉:杭州眾芝康茹生物技術(shù)有限公司提供，批號(hào)JC16011401。陽(yáng)性藥:仙靈 骨碟膠囊，〇.5g/粒，貴州同濟(jì)堂制藥有限公司，批號(hào)141203。W上藥物臨用前用蒸饋水配制 成一定濃度供灌胃給藥藥液。
[0076] 2實(shí)驗(yàn)方法
[0077] 采用灌胃法給予烈性白酒(含乙醇56%)8mL/化g· d)，4周后，隨機(jī)抽取5只，病理 學(xué)檢查證實(shí)造模成功。將剩余60只隨機(jī)分為空白對(duì)照組、模型組、陽(yáng)性對(duì)照組(仙靈骨碟膠 囊，1.5g/kg)，烏靈菌粉高中低劑量組（低劑量組0.5g/kg、中劑量組1 .Og/kg、高劑量組 2.Og/kg)。在所有動(dòng)物右側(cè)大轉(zhuǎn)子區(qū)皮膚處行常規(guī)備皮、消毒，用自制8號(hào)骨穿針經(jīng)皮穿刺 至股骨頭下拔出內(nèi)忍，然后用注射器推注藥物，按O.lmL/化g.w)體積連續(xù)治療4周，每天給 藥1次。所有動(dòng)物均于治療4周后W空氣栓塞處死，在無(wú)菌的條件下取兔右側(cè)股骨頭，從冠狀 面剖開，肉眼觀察關(guān)節(jié)軟骨變化情況。大體觀察后，股骨頭W體積分?jǐn)?shù)為10%的甲醒固定， 5%硝酸脫巧，梯度乙醇脫水，石蠟包埋，切片，厚度扣m，蘇木精一伊紅染色。在光鏡下觀察 軟骨厚度、軟骨下區(qū)和骨髓腔內(nèi)骨小梁結(jié)構(gòu)和各種細(xì)胞成分如骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞等的變化 情況。①空骨陷窩計(jì)數(shù):皿染色切片上隨機(jī)計(jì)數(shù)200個(gè)骨陷窩，計(jì)算其中空骨陷窩所占的百 分比。②骨小梁面積分?jǐn)?shù):肥染色切片在100倍鏡下隨機(jī)選擇5個(gè)視野攝影，通過(guò)計(jì)算機(jī)圖像 分析軟件測(cè)算各視野的骨小梁面積分?jǐn)?shù)，取其平均值。
[007引 3數(shù)據(jù)處理
[00巧]采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行分析。計(jì)算結(jié)果WTb表示，組間比較采用t檢驗(yàn)。
[0080] 4結(jié)果
[0081] 模型組大鼠股骨頭軟骨輕度變薄，欠光滑，軟骨下區(qū)髓內(nèi)造血組織減少，脂肪物質(zhì) 增多；骨小梁變細(xì)、稀疏，結(jié)構(gòu)稍素亂，部分骨小梁斷裂，骨小梁面積分?jǐn)?shù)降低，空骨陷窩增 多。經(jīng)不同劑量烏靈菌粉治療后，股骨頭軟骨厚度大致均勻，表面光滑，骨髓腔內(nèi)脂肪細(xì)胞 輕度增生，但數(shù)量較A組減少，形態(tài)大致正常;骨髓腔內(nèi)骨小梁致密、分布均勻;骨陷窩內(nèi)骨 細(xì)胞形態(tài)正常，分布均勻。與模型組比較，不同劑量烏靈菌粉組骨小梁面積分?jǐn)?shù)顯著增高， 空骨陷窩計(jì)數(shù)顯著降低，與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<〇.05或P<0.01)。結(jié)果見(jiàn)表5。
[0082] 表5烏靈菌粉對(duì)酒精性股骨頭壞死模型大鼠股骨頭組織形態(tài)學(xué)的影響C7b，n = 10)
[0083]
[0084] 實(shí)施例4烏靈菌粉治療骨質(zhì)疏松、骨壞死的臨床研究 [00化]1治療藥物
[0086] W下病例服用的烏靈膠囊(浙江佐力藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)，批號(hào)20130115,國(guó)藥 準(zhǔn)字:Z19990048) 口服，一次3粒，一日3次。Ξ個(gè)月為一療程。
[0087] 2典型病例
[0088] ①治療骨質(zhì)疏松
[0089] 病例1:患者陸某某，女，60歲，患絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥。腰背疼痛，膝關(guān)節(jié)軟弱無(wú)力， 經(jīng)補(bǔ)巧治療半年無(wú)效；口服烏靈膠囊（內(nèi)容物為烏靈菌粉)治療半年后，癥狀完全消失，活動(dòng) 后無(wú)任何不適，全身無(wú)陽(yáng)性體征可查，隨訪一年無(wú)復(fù)發(fā)。
[0090] 病例2:患者許某某，男，67歲，患老年退化性骨質(zhì)疏松癥，腰膝酸軟兩年余，口服大 量的補(bǔ)巧劑、維生素 D等藥物治療無(wú)效;2014年開始口服烏靈膠囊治療，半年后半年痊愈，活 動(dòng)后無(wú)任何不適，隨訪一年無(wú)復(fù)發(fā)。
[0091] 病例3:患者王某某，女，55歲，因長(zhǎng)期服用糖皮質(zhì)激素被診斷為繼發(fā)性骨質(zhì)疏松 證，給予補(bǔ)巧、補(bǔ)充性激素等治療半年收效甚微，2014年開始口服烏靈膠囊治療，治療半年 痊愈，隨訪一年未復(fù)發(fā)。
[0092] ②治療激素性股骨頭壞死
[0093] 病例1:薛某某，女，48歲。系江蘇鹽城人?；颊?年前因患類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，長(zhǎng)期大 量應(yīng)用腎上腺皮質(zhì)激素藥物，引起髓關(guān)節(jié)疼痛，販行，行走困難兩年半。先后到多家醫(yī)院和 診所治療，均未見(jiàn)明顯療效。治療前患者雙髓關(guān)節(jié)均有壓痛，右髓關(guān)節(jié)壓痛較明顯，局部肌 肉疫李，髓運(yùn)動(dòng)受限，不能持重站立。髓關(guān)節(jié)屈曲、內(nèi)收、外旋有崎形李縮，X光片示股骨頭變 平，軟骨下塌陷。臨床診斷為雙側(cè)股骨頭壞死。服用烏靈膠囊一個(gè)療程癥狀明顯減輕，兩個(gè) 療程后疼痛消失，一年后功能恢復(fù)，服用2年后，臨床癥狀完全消失。
[0094] 病例2:王某某，男，53歲，有類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病史，長(zhǎng)期服用強(qiáng)的松龍，出現(xiàn)右髓關(guān) 節(jié)疼痛，X片示:右股骨頭軟骨下囊性變、硬化，關(guān)節(jié)間隙正常。服用烏靈膠囊1個(gè)療程后，右 髓疼痛明顯減輕，再繼續(xù)服用兩個(gè)療程后，疼痛消失。繼續(xù)服用Ξ個(gè)療程鞏固療效，臨床癥 狀完全消失，隨訪無(wú)復(fù)發(fā)。
[00M]病例3:徐某某，男，53歲。2005年患風(fēng)濕性腰腿疼服過(guò)量激素類藥物導(dǎo)致雙側(cè)股骨 頭壞死。經(jīng)治療兩年多時(shí)間沒(méi)有好轉(zhuǎn)，該患者已邸床，巧雙拐可W站立，但腳抬不起來(lái)，不能 行走，髓關(guān)節(jié)疼痛嚴(yán)重，肌肉萎縮，股骨頭塌陷Ξ分之二。服用烏靈膠囊兩個(gè)療程后4個(gè)療程 后，身體各項(xiàng)功能恢復(fù)正常。
[0096] ③治療酒精性股骨頭壞死
[0097] 病例1:張某，男，48歲，江蘇南通人，經(jīng)常醒酒，2010年去醫(yī)院就診，當(dāng)時(shí)，發(fā)現(xiàn)左側(cè) 髓關(guān)節(jié)間隙變窄，診斷為"股骨頭無(wú)菌性壞死"，前期給針灸治療半年，未見(jiàn)好轉(zhuǎn)。2015年開 始服用服用烏靈膠囊治療，半年W后骨小梁修復(fù)，疼痛及販行癥狀改善，繼續(xù)服藥至今，X片 顯示已痊愈。
[0098] 病例2:徐某，男，55歲，上海人，于2015年就診，病因?yàn)樾丫?，雙側(cè)股骨頭壞死2期， 疼痛難忍，難W正常工作，曾采用西醫(yī)和針灸治療，未能治愈。服用烏靈膠囊3個(gè)療程后痛感 消失，功能改善，一年后去醫(yī)院檢查，壞死部分基本康復(fù)，現(xiàn)行動(dòng)自如，能正常工作，痊愈至 今。
[0099] 病例3:劉某，男，46歲，安徽人，長(zhǎng)期飲酒，診斷為右側(cè)股骨頭壞死，右腿疼痛，行動(dòng) 不便，曾在多家醫(yī)院治療，長(zhǎng)時(shí)間服用西藥治療，均不見(jiàn)好轉(zhuǎn)，2014年6月開始服用烏靈膠 囊，一個(gè)療程疼痛減輕，治療兩個(gè)療程后，疼痛消失，右腿功能基本正常，一年后復(fù)查壞死區(qū) 域明顯改觀，一年半后功能恢復(fù)正常。
[0100] W上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人 員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可W做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，運(yùn)些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng) 視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 烏靈菌粉在制備用于防治骨質(zhì)疏松癥、骨壞死藥物或保健食品中的應(yīng)用。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的烏靈菌粉在制備用于防治骨質(zhì)疏松癥、骨壞死藥物或保健食 品中的應(yīng)用，其特征在于，所述的骨質(zhì)疏松癥包括原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥和繼發(fā)性骨質(zhì)疏松癥。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的烏靈菌粉在制備用于防治骨質(zhì)疏松癥、骨壞死藥物或保健食 品中的應(yīng)用，其特征在于，所述的原發(fā)性骨質(zhì)疏松癥包括女性絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥和老年退 化性骨質(zhì)疏松癥。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的烏靈菌粉在制備用于防治骨質(zhì)疏松癥、骨壞死藥物或保健食 品中的應(yīng)用，其特征在于，所述的繼發(fā)性骨質(zhì)疏松癥包括由內(nèi)分泌代謝疾病、結(jié)締組織疾 病、腎臟疾病、消化道疾病和藥物引起的骨質(zhì)疏松癥。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的烏靈菌粉在制備用于防治骨質(zhì)疏松癥、骨壞死藥物或保健食 品中的應(yīng)用，其特征在于，所述的骨壞死包括股骨頭壞死、膝關(guān)節(jié)壞死、肩關(guān)節(jié)壞死、脊柱骨 壞死、肱骨壞死、足舟骨壞死、距骨壞死、跖骨壞死、手舟骨壞死或月骨壞死。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的烏靈菌粉在制備用于防治骨質(zhì)疏松癥、骨壞死藥物或保健食 品中的應(yīng)用，其特征在于，所述的骨壞死包括酒精性骨壞死和激素性骨壞死。7. 根據(jù)權(quán)利要求1至6任一項(xiàng)所述的烏靈菌粉在制備用于防治骨質(zhì)疏松癥、骨壞死藥物 或保健食品中的應(yīng)用，其特征在于，將烏靈菌粉和藥劑學(xué)上可接受輔料制成丸劑、片劑、膠 囊劑或顆粒劑。8. -種具有防治骨質(zhì)疏松癥、骨壞死的藥物或保健食品，其特征在于，它包括烏靈菌 粉、鈣劑、維生素 D、抑制骨轉(zhuǎn)換劑、骨形成促進(jìn)劑和/或解偶聯(lián)劑。9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種具有防治骨質(zhì)疏松癥、骨壞死的藥物或保健食品，其特征 在于，抑制骨轉(zhuǎn)換劑包括二磷酸鹽類、降鈣素或雌激素;骨形成促進(jìn)劑包括甲狀旁腺激素或 氟化物;解偶聯(lián)劑包括鍶鹽。
【文檔編號(hào)】A61K36/062GK105998088SQ201610584187
【公開日】2016年10月12日
【申請(qǐng)日】2016年7月22日
【發(fā)明人】王恒斌, 羅年翠, 李全, 張方寧, 葉華, 祝倩倩, 孫翔
【申請(qǐng)人】雷允上藥業(yè)有限公司