秦艽丸方劑在制備抗衰老藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及秦究丸方劑在制藥中的新用途，具體涉及秦究丸方劑在制備抗衰老藥 物中的應(yīng)用，屬于中藥領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】
[0002] 秦椒丸來(lái)源于《普濟(jì)方》，由花椒、熟地黃、炙旋復(fù)花、白芷組方。
[0003] 衰老是生命的自然過(guò)程，主要指隨年齡增加，機(jī)體功能減退，內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定能力與應(yīng) 激能力下降，機(jī)體的細(xì)胞、組織、器官在結(jié)構(gòu)與功能上表現(xiàn)出來(lái)的種種退化。衰老的結(jié)果是 常常產(chǎn)生與衰老相關(guān)的疾病，直至死亡。面對(duì)早衰群體，要從根本上提高他們的生存質(zhì)量， 就要找到改善身體機(jī)能、延緩衰老的方法，使他們能夠健康衰老。
[0004] 然而多數(shù)藥物的功能和療效不明確，產(chǎn)品壽命周期較短，其中適合于早衰患者的 抗衰老藥物非常少，目前還無(wú)法滿足該類人群迫切的需求。衰老是由機(jī)體綜合水平調(diào)控的 復(fù)雜的、多因素的過(guò)程，相應(yīng)地要求抗衰老藥物對(duì)機(jī)體的作用應(yīng)是整體水平的調(diào)節(jié)。而中藥 復(fù)方具有的多環(huán)節(jié)、多靶點(diǎn)的整體調(diào)節(jié)作用，這也正是中藥抗衰老的特色和優(yōu)勢(shì)，在延緩衰 老方面有著巨大的潛力。本發(fā)明擺脫了現(xiàn)有抗衰老功效驗(yàn)證思路的束縛，采用線蟲(chóng)模型直 接證明了秦究丸方劑具有抗衰老的生物活性，可在制備抗衰老藥物中應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供秦艽丸方劑在制藥中的新用途，具體涉及秦艽丸方劑制備抗 衰老藥物中的應(yīng)用，以期提供一種功效明確的抗衰老藥物。
[0006] 所述秦艽丸方劑含有花椒、熟地黃、旋復(fù)花、白芷。
[0007] 所述的秦艽丸方劑在制備抗衰老藥物中的應(yīng)用，其特征在于秦艽丸方劑中所含的 各味藥的質(zhì)量比為花椒：熟地黃：旋復(fù)花：白芷=3 :3 :3 :3。
[0008] 本發(fā)明所述的秦艽丸方劑，其組方比例可以根據(jù)中藥組方原則合理改動(dòng)，而不改 變?cè)摲絼┰谥苽淇顾ダ纤幬镏械挠猛?，這是本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的。
[0009] 本發(fā)明所述的秦艽丸方劑在制備抗衰老藥物中的應(yīng)用，可以將秦艽丸方劑添加藥 學(xué)上可接受的載體如填充劑、潤(rùn)滑劑、濕潤(rùn)劑、促進(jìn)吸收劑、吸附載體、稀釋劑、賦形劑等，必 要時(shí)可加入甜味劑、香味劑等，制備成注射劑、散劑、顆粒劑、粉劑、丸劑、口服液、片劑等藥 物的多種劑型，這是本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的。
[0010] 本發(fā)明采用了秀麗隱桿線蟲(chóng)作為模式生物直接評(píng)價(jià)藥物的抗衰老活性，秀麗隱桿 線蟲(chóng)用于抗衰老模型具有以下優(yōu)點(diǎn)： 1.由于線蟲(chóng)60-80%的基因與人類的相關(guān)基因高度保守，而且至今發(fā)現(xiàn)的17條信號(hào)傳 導(dǎo)途徑，線蟲(chóng)具有其中的12條，因此本發(fā)明利用秀麗隱桿線蟲(chóng)作為篩選抗衰老藥物的模型 生物。可利用線蟲(chóng)豐富的遺傳資源，根據(jù)研究目的選擇合適的突變體，研究衰老及抗衰老機(jī) 制，實(shí)質(zhì)上衰老機(jī)制的幾大理論都是在線蟲(chóng)中被證明。因此，對(duì)線蟲(chóng)有抗衰老作用的藥物， 通常也被認(rèn)為對(duì)人類也具有同樣功效。
[0011] 2.秀麗隱桿線蟲(chóng)被用于壽命分析，至今已有30年的歷程。因其獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，成為 衰老研究的首推模型。線蟲(chóng)世代周期短，通常為3天左右；壽命短，通常為3周左右。這使 實(shí)驗(yàn)的重復(fù)穩(wěn)定性成為可能。為了確保實(shí)驗(yàn)方法的可靠性和實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性、藥物篩選 能得到更多準(zhǔn)確的、可信的信息，重復(fù)實(shí)驗(yàn)是必要的。
[0012] 由于秀麗隱桿線蟲(chóng)具有以上獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，而成為衰老研究的首推模型。因此線蟲(chóng) 可以被用于評(píng)價(jià)組合物的抗衰老作用，進(jìn)而判斷組合物被用于制備抗衰老藥物的可能性。
[0013] 本發(fā)明提供了一種秦艽丸方劑在制備抗衰老藥物的新用途，秦艽丸方劑可以顯 著延長(zhǎng)早衰群體的壽命，有望開(kāi)發(fā)成新一代的抗衰老藥物。
【附圖說(shuō)明】
[0014] 圖1為本發(fā)明中藥復(fù)方對(duì)突變體TK22早衰線蟲(chóng)壽命影響的壽命分析圖。
[0015] 其中圖中的實(shí)線為空白對(duì)照組，虛線為秦艽丸低劑量藥物組、半虛半實(shí)線為秦艽 丸高劑量藥物組。
【具體實(shí)施方式】
[0016] 以下提供具體實(shí)施例以實(shí)現(xiàn)本發(fā)明所述的秦艽丸方劑在制備抗衰老藥物中應(yīng)用， 但不限于這些實(shí)施例。
[0017] 實(shí)驗(yàn)材料 1.實(shí)驗(yàn)生物 秀麗隱桿線蟲(chóng)株系：突變體早衰秀麗隱桿線蟲(chóng)TK22購(gòu)自Caenorhabditis Genetics Center (CGC)。秀麗隱桿線蟲(chóng)TK22為早衰線蟲(chóng)，該株系線蟲(chóng)的壽命通常要比正常株系線蟲(chóng) 少15% -20%，TK22用于評(píng)價(jià)藥物對(duì)于早衰模型的抗衰老療效。
[0018] 細(xì)菌株：尿嘧啶滲漏突變型大腸桿菌0P50 (E. coli)，購(gòu)自Caenorhabditis Genetics Center(CGC)〇
[0019] 2.培養(yǎng)基、藥品 NGM 培養(yǎng)基：NaCl L 5g，K2HPO4L 3g，ΚΗ2Ρ048 · 5g，蛋白胨 L 4g，瓊脂粉 8. 5g，蒸餾水 50〇111匕滅菌后加入過(guò)濾除菌的50(^1^膽固醇（511^/1]11，無(wú)水乙醇配制），高壓蒸汽滅菌的 500 μ Llmol/L MgSO4, 500 μ Llmol/L CaCl2。
[0020] M9 緩沖液：NaCl I. 98g，Na2HP042. 38g，KH2PO4L 20g，MgSO40.0 48g，蒸餾水 400mL。
[0021] LB液體培養(yǎng)基：NaC12g，蛋白胨2g，酵母膏l(xiāng)g，蒸餾水200mL。溶解后用IMNaOH調(diào) 節(jié)pH為7.0,高壓蒸汽滅菌。
[0022] 藥品：秦艽丸，所用復(fù)方藥材購(gòu)自蘭州惠仁堂大藥房。
[0023] 3.儀器 高壓滅菌鍋（上海申安醫(yī)療器械廠） 單人單面超凈工作臺(tái)（蘇州凈化設(shè)備廠） 生化培養(yǎng)箱（寧波江南儀器廠） 隔水式恒溫培養(yǎng)箱（上海一恒科學(xué)儀器有限公司） 連續(xù)變倍體視顯微鏡（上海一恒科學(xué)儀器有限公司） 電子天平（北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司） 臺(tái)式離心機(jī)（CT15E，日立） 實(shí)施例一中藥復(fù)方秦艽丸水提液的制備 花椒3g、熟地黃3g、炙旋復(fù)花3g、白芷3g。先用蒸餾水浸泡20分鐘，然后文火煮沸，煎 熬30min，將終體積定容至IOOmL,離心，棄去沉淀，將上清無(wú)菌過(guò)濾，至4°C冰箱待用。
[0024] 實(shí)施例二中藥復(fù)方秦艽丸對(duì)突變體早衰TK22秀麗隱桿線蟲(chóng)壽命的影響 1.秀麗隱桿線蟲(chóng)同步化 將TK22株系秀麗隱桿線蟲(chóng)的孵卵成蟲(chóng)用M9緩沖液沖洗到I. 5mL離心管中，靜置或離 心棄掉上請(qǐng)，每個(gè)離心管中加入500 μ LlM NaOH和500 μ L6. 4% NaCIO,于渦旋儀上震蕩裂解 約7min，4000rpm離心4min，吸去上清后，用M9沖洗2次后加500 μ L的M9,置于20°C培養(yǎng) 箱孵化后，將其接種于涂有0P50的NGM固體培養(yǎng)皿中，經(jīng)20°C培養(yǎng)可得到同步生長(zhǎng)的秀麗 隱桿線蟲(chóng)。
[0025] 2.含中藥復(fù)方秦艽丸NGM板的制備 將實(shí)施例一制備好的中藥復(fù)方秦艽丸的提取液按下列方法配制： 秦艽丸低劑量藥物組：將〇. ImL原液加入I. 9mL蒸餾水后，加入18mL NGM中，搖勻，倒 板。
[0026] 秦艽丸高劑量藥物組：將0. 2mL原液加入I. 8mL蒸餾水后，加入18mL NGM中，搖勻， 倒板。
[0027] 空白對(duì)照組：2mL蒸餾水加入18mL NGM中，搖勻，倒板。
[0028] 3.壽命分析實(shí)驗(yàn)方法 將L4期同步化的TK22株系秀麗隱桿線蟲(chóng)，用鉬絲挑針轉(zhuǎn)移到空白組、陰性對(duì)照組、藥 物組培養(yǎng)皿中，每組三個(gè)平行，每個(gè)平行25條秀麗隱桿線蟲(chóng)，置于20°C培養(yǎng)，每天觀察并計(jì) 數(shù)存活數(shù)和死亡數(shù)，至線蟲(chóng)全部死亡。為防止世代交疊，NGM培養(yǎng)基中含有濃度為50μ M的 氟脲苷。秀麗隱桿線蟲(chóng)死亡的判斷標(biāo)準(zhǔn)是用挑針輕觸，線蟲(chóng)無(wú)反應(yīng)。爬到培養(yǎng)皿邊緣或皿 蓋干死、鉆到瓊脂里面的線蟲(chóng)從實(shí)驗(yàn)中排除。
[0029] 4.結(jié)果 實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分析采用SPSS17. 0軟件的Survival Analysis處理、分析。結(jié)果如下： 圖1為本發(fā)明中藥復(fù)方對(duì)突變體TK22早衰線蟲(chóng)壽命影響的壽命分析圖。
[0030] 其中圖中的實(shí)線為空白對(duì)照組，虛線為秦艽丸低劑量藥物組、半虛半實(shí)線為秦艽 丸高劑量藥物組。
[0031] 從圖1可以看出秦椒丸低、高劑量組都顯著延長(zhǎng)了早衰模型TK22線蟲(chóng)的壽命 (Ρ〈0· 01) 〇
[0032] 表1中藥復(fù)方作用下ΤΚ22線蟲(chóng)的半數(shù)存活時(shí)間和平均壽命
從表1中可以得出秦椒丸顯著延長(zhǎng)了早衰模型TK22線蟲(chóng)的壽命（P〈0. 01)。在本實(shí)驗(yàn) 的最佳濃度作用下，將早衰模型TK22線蟲(chóng)的平均壽命延長(zhǎng)了 21. 9% ;將早衰模型TK22線 蟲(chóng)的半數(shù)存活天數(shù)延長(zhǎng)了 14.8%。
[0033] 從以上實(shí)施例可以看出，秦艽丸方劑能顯著延長(zhǎng)了早衰模型TK22線蟲(chóng)的壽命，直 接證明了秦究丸方劑具有抗衰老的生物活性，可被應(yīng)用于制備抗衰老藥物。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 秦艽丸方劑在制備抗衰老藥物中的應(yīng)用。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的秦究丸方劑在制備抗衰老藥物中的應(yīng)用，其特征在于所述秦 艽丸方劑包括花椒、熟地黃、旋復(fù)花、白芷。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的秦究丸方劑在制備抗衰老藥物中的應(yīng)用，其特征在于秦究丸 方劑中所含的各味藥的質(zhì)量比為花椒：熟地黃：旋復(fù)花：白芷=3 :3 :3 :3。
【專利摘要】本發(fā)明屬中藥領(lǐng)域，涉及秦艽丸方劑在制藥中的新用途，具體涉及秦艽丸方劑在制備抗衰老藥物中的應(yīng)用。衰老是生命的自然過(guò)程，主要指隨年齡增加，機(jī)體功能減退，內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定能力與應(yīng)激能力下降，機(jī)體的細(xì)胞、組織、器官在結(jié)構(gòu)與功能上表現(xiàn)出來(lái)的種種退化。面對(duì)早衰群體，要從根本上提高他們的生存質(zhì)量，就要找到改善身體機(jī)能、延緩衰老的藥物，使他們能夠健康衰老。本發(fā)明提供了秦艽丸方劑在制備抗衰老藥物中的應(yīng)用。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明秦艽丸方劑可以顯著延長(zhǎng)早衰群體的壽命。本發(fā)明提供了一種秦艽丸方劑的新用途，可在制備抗衰老藥物中應(yīng)用，有望開(kāi)發(fā)成新一代的抗衰老藥物。
【IPC分類】A61K36/804, A61P39/06
【公開(kāi)號(hào)】CN105267402
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410244366
【發(fā)明人】李紅玉, 萬(wàn)鳳奇, 支德娟, 李洋, 李瑩輝, 陳曉雨
【申請(qǐng)人】蘭州大學(xué)
【公開(kāi)日】2016年1月27日
【申請(qǐng)日】2014年6月4日