專利名稱：多價在卵內接種的禽疫苗的制作方法
背景技術：
家禽疾病在世界大多數(shù)地區(qū)都要例行為商用雞群接種疫苗以預防在環(huán)境中感染病原體。引起家禽疾病的一些最常見的病毒包括Marek氏疾病病毒(MDV)，傳染性粘液囊疾病病毒(IBDV)，紐卡斯爾疾病病毒(NDV)，傳染性支氣管炎病毒(IBV)，傳染性喉氣管炎病毒(ILTV)，禽腦脊髓炎(AEV)，雞貧血病毒(CAV)，雞痘病毒(FPV)，禽流感病毒(AIV)，呼腸孤病毒，禽類白血病病毒(ALV)，網狀內皮組織增生病毒(REV)，禽類腺病毒和出血性腸炎病毒(HEV)。對養(yǎng)禽業(yè)來說這些疾病在經濟上是非常重要的。目前，可以使用疫苗以預防商用家禽感染上大多數(shù)這些疾病。(家禽疾病，第10版，(Calneck等編)，衣阿華州立大學出版社，美國，衣阿華州(1997))。
在經濟上最重要的疾病之一是Marek氏疾病(MD)。MD是在雞群容易發(fā)生的淋巴組織增生病。這一疾病是由極易接觸傳染的水平傳播的皰疹病毒引起的，曾經對養(yǎng)禽業(yè)造成了重大的經濟損失。雞對這種疾病具有敏感性，不分品系或性別，此外還有報道說小雞的敏感性更高，遭受病毒受到的損傷更大。MD的癥狀廣泛表現(xiàn)在被感染的鳥的神經、生殖器官、內臟、眼和皮膚上，當神經被侵襲時由于麻痹引起運動神經障礙，假如內臟被病毒侵襲，由于腫瘤引起內臟功能障礙，和慢性營養(yǎng)不良。雞一般會死亡。MD是養(yǎng)禽業(yè)經濟損失的主要原因之一。
孵化后接種在大多數(shù)商用家禽中，在孵化室給新孵化出的雞注射某些疫苗。因為感染病原體通常發(fā)生在非常小的禽齡，在把這些小雞放在飼養(yǎng)室或育雛室之前它們通常需要接種。這種接種方案需要處理單只鳥，并可能有偶然的自我注射的危險。這一接種方法的另一個問題是疫苗并不總是有效的。小雞可能在接種后很快即，在它們有機會建立足夠的保護免疫之前感染上病毒性疾病。
卵內接種已經表明可以在禽類孵化之前在蛋內施用某些活病毒疫苗。這一方法被成為“卵內接種”。卵內接種的禽類對目標疾病建立了抵抗性。胚胎接種引起對孵化中的攻擊有提高的抗性的準確機制還不清楚。在美國國內外的養(yǎng)禽業(yè)已經響應卵內接種的優(yōu)點，這一方法迅速獲得普及。在美國每年有超過70億只禽類接受疫苗。在1994年，約30％美國總商用雞通過卵內接種方法接種了抗MD疫苗。在1997年，這一數(shù)字已經上升到超過75％或約60億只雞。
應當注意到，以前對孵化的禽類使用的許多疫苗不能進行卵內接種，因為疫苗制劑對胚胎來說是致病的。胚胎后期對大多數(shù)檢測出的病毒都非常敏感。并非所有對剛孵化出的雞是非致病的疫苗病毒對后期胚胎也是安全的。例如，例行用作剛孵化出的雞的新生疫苗的BV和NDV病毒株疫苗在卵內接種后對胚胎是致死的。這些病毒已經被修飾以使它們安全用于卵內使用。目前只有MD疫苗在卵內施用。
滅活對活疫苗的使用用礦物油制備的油-乳疫苗是以各種單價和多價形式廣泛用來治療禽類疾病的高效制劑。但是，礦物油疫苗會造成過度的組織反應。另外，這種油持續(xù)時間太長，實際上是不能消化的，并且被認為是致癌的。假如施用礦物油疫苗，在宰殺家禽前需要42天的保持時間。已經發(fā)展了動物油和植物油疫苗代替礦物油疫苗。但是，這也會引起組織反應。
活的，也被稱作傳染性的病毒疫苗含減毒的或分離的天然非致病病毒。疫苗自身不會引起疾病。由活疫苗激發(fā)的免疫反應預防在環(huán)境中存在的致命目標病毒。用活疫苗不需要輔劑例如礦物油。
單對組合疫苗的使用組合或多價疫苗相對于單價疫苗具有許多明顯的優(yōu)點。多價疫苗的一個優(yōu)點是需要的疫苗接種較少。在一次接種中可以只是施用一個制品，并對幾種疾病有效。由于潛在的疫苗范圍增加，為了降低接種數(shù)量，組合疫苗就變得更應遵循。當疫苗組合后所需接種數(shù)目的降低導致更易于遵守接種方案。這又導致疫苗覆蓋面的增加，最終使得疾病更好地得到控制。
組合疫苗的另一個優(yōu)點是儲存、運輸和用藥成本的降低，因為將需要較少的病毒、安瓿、注射器和針頭。考慮到基于全世界的情況超過90％的接種費用是由這種后勤費用造成的，這一優(yōu)點就當然不能忽略了。另外，假如組合了幾種疫苗，就簡化了疫苗方案和所做的記錄。
組合疫苗的問題最近發(fā)現(xiàn)了組合疫苗的一個意想不到的問題，這就是一種疫苗可能對另一種疫苗有負面影響。已經發(fā)現(xiàn)當兩種疫苗簡單混合，其中之一或二者可能喪失其效能(Andre，F(xiàn).E.“組合疫苗的發(fā)展制造商的觀點”，生物制品，22415-418(1994)；Goldenthal，K，L.，等，“綜述”C組合疫苗和同時用藥，過去，現(xiàn)在，和未來”，出自組合疫苗和同時用藥，當前問題和前景(Willaliams，J.C.等編)，紐約科學學會，紐約，第91到95頁(1995)；Clemen，J.等，“抗流感嗜血桿菌b的PRP-T疫苗與常規(guī)嬰兒疫苗的相互作用，同時免疫和組合疫苗的未來研究教程”，出自組合疫苗和同時用藥，當前問題和前景(Willaliams，J.C.等編)，紐約科學學會，紐約，第255到266頁(1995)；Insel，R.A.“組合和同時施用疫苗成分免疫原性潛在的改變”，出自組合疫苗和同時用藥，當前問題和前景(Willaliams，J.C.等編)，紐約科學學會，紐約，第35到47頁(1995))。
另人遺憾的是，不能總是通過使用在實驗室目前建立的效能檢測預測各個疫苗成分是否保留其效能。開發(fā)一個多價疫苗可以如開發(fā)一個新單價疫苗那樣困難。例如，據幾個獨立的報道當Hib疫苗與全細胞百日咳疫苗組合，這兩種疫苗沒有干擾，但是當Hb疫苗與無細胞百日咳疫苗組合，Hib免疫原性就會顯著喪失。這就表明當Hib疫苗與DtaP組合，假如在不同的部位給藥，它就保持其免疫原性，而當疫苗在同一部位組合，免疫原性就降低5-15倍。這一意想不到的結果證實了把兩個現(xiàn)存疫苗組合并不是簡單的，經常產生非常意想不到的結果，這在起初的研究中是檢測不出的，只能在廣泛的臨床檢測中檢測。
已有實驗證實抗體滴度和保護效能之間可能并不直接相關。這一發(fā)現(xiàn)表明測定的抗體滴度可能與疫苗的保護效能之間不相關，因此疫苗的任何改變(例如，添加另一種成分制成組合疫苗)，可能影響疫苗的效能但不改變抗體的滴度。
在發(fā)展組合疫苗中的另一主要困難是開發(fā)組合疫苗意想不到的巨大成本(Andre，F(xiàn).E.，組合疫苗的發(fā)展制造商的觀點”，生物制品，22317-321(1994))。在幾年前據認為兩種已經存在的疫苗的組合是簡單和花費不多的操作，而很明顯組合的發(fā)展需要較長的時間和預算，經常與開發(fā)一種新疫苗必需的時間和預算類似。
因此，還沒有滿足對“多價”疫苗的需要，這種多價疫苗即含多種制劑的疫苗，可以被卵內施用到禽類上。
本發(fā)明提供了一種具有兩種或兩種以上活生物制劑或微生物成分的多價家禽疫苗。例如，該疫苗可以含兩種活生物制劑，或可以含兩種微生物成分，或含每種中的一種。在該多價疫苗中每種活生物制劑或微生物成分能有效預防或治療不同的家禽疾病，并且該多價疫苗對卵內免疫家禽是安全和有效的。疫苗的劑量可以容易地通過臨床醫(yī)師或獸醫(yī)采用動物模型或其他本領域公知的檢測系統(tǒng)測定。
活生物制劑可以是病毒、細菌、真菌或寄生生物。優(yōu)選活生物制劑是一種減毒的病毒。微生物成分可以來源于病毒、細菌、真菌或寄生原的微生物。微生物成分，例如，可以是微生物蛋白或其它亞基，或包括微生物多肽或融合多肽在內的重組多肽。該微生物成分能產生活性免疫反應。在本文中使用的術語“重組”是指微生物成分的多肽(或蛋白質)是通過基因工程技術獲得的。例如，蛋白質可以是從一種微生物，例如細菌細胞中分離的，該細菌細胞已經被具有從所感興趣的病毒株的基因組獲得的外源DNA片段的合適的載體轉化。正如本領域技術人員所知，不必使用整個蛋白質。可以使用與整個蛋白質的部分相對應的特殊的多肽。在疫苗中存在足夠量的多肽或在其中有含其它制品的基因致免疫基因的載體的重組體，以誘發(fā)對相關抗原的免疫反應，從而保護動物免受所關心疾病的感染。
可用于多價疫苗中的減毒的病毒優(yōu)選包括MDV、IBDV、NDV、IBV、ILTV、AEV、CAV、FPV、AIV、禽呼腸孤病毒、ALV、REV、禽腺病毒、HEV、和其重組體。更優(yōu)選包括MDV病毒血清型1、2和3，IBDV、IBV、也可能包括含NDV的F和HN基因的痘載體。
本發(fā)明的疫苗可以施用到任何禽類動物上，不管是家養(yǎng)的還是野生的。尤其是，它可以施用到商用飼養(yǎng)的產肉或蛋的禽類上。禽類的例子包括雞、火雞、鵝、鴨、雉、鵪鶉、鴿子、鴕鳥等，不受限制。優(yōu)選禽類是雞或火雞。在高密度育雛室飼養(yǎng)的禽類，例如肉雞和蛋雞，尤其容易受到環(huán)境中傳染物的感染，將極大地受到孵化前接種的好處。
本發(fā)明也提供了一種通過卵內施用可有效產生免疫的量的活多價疫苗接種家禽的方法。可以在胚胎孵化期的后四分之一施用多價疫苗。優(yōu)選，疫苗含MDV病毒血清型1、2和3以及IBDV(例如可以購得的疫苗例如Bursine II(Bur II))。除了MDV病毒血清型1、2和3以及IBDV外，疫苗可以含NDV非致病株或含NDV致免疫基因的重組疫苗?；蛘撸呙缈梢园ê琋DV基因和MDV基因的HVT，含ILTV、流感病毒、IBDV的FPV，或含其它預防基因的載體。對大多數(shù)禽類疾病，設計用來孵化后施用的已知疫苗將依照本發(fā)明的方法使用，必要時調節(jié)劑量。
如前所述，在養(yǎng)禽業(yè)中最流行和具有經濟破壞性的疾病之一是Marek氏病(MD)。已經發(fā)現(xiàn)火雞皰疹病毒(HVT)疫苗可以有效預防MD。這一疫苗已常規(guī)地在把剛孵化的雞放到育雛室之前接種到它們身上。盡管HVT疫苗通常非常有效，但有時接種的雞群還是經受MD造成的嚴重損失。有幾個因素可以是疫苗的失效原因。因為疫苗的預防是通過免疫反應調節(jié)的，在疫苗有時間產生足夠的免疫反應之前感染到致病的MDV可以造成臨床MD。另外，定量研究已經表明，假如接受接種的雞有抗HVT抗體，尤其如果疫苗是無細胞的，HVT疫苗的保護效力就受到損害。因為HVT在種群中廣泛使用，大多數(shù)雞孵化時具有這種母體產生的抗體。
另外，已經發(fā)現(xiàn)通常使用的HVT疫苗對高致病性的MDV株提供的預防作用很差，并可能是接種的雞群的一些MD損失的原因(Sharma，J.M.，“單獨或組合使用MDV病毒血清型1、2和3疫苗胚胎接種預防Marek氏病，”禽類疾病，27453-463(1983)；Calnek，B.W.和R.L.Witter，“Marek氏病，”出自禽類疾病，第10版，(Calnek，B.W.等編)，衣阿華州立大學出版社，Ames，衣阿華，美國(1997))。含兩種或三種血清型的多價疫苗對致病性非常強的MDV提供的保護作用比只含有HVT的單價疫苗更強(Sharma，J.M.，“單獨或組合使用MDV病毒血清型1、2和3疫苗胚胎接種預防Marek氏病，”禽類疾病，27453-463(1983)；Calnek，B.W.和R.L.Witter，“Marek氏病，”出自禽類疾病，第10版，(Calnek，B.W.等編)，衣阿華州立大學出版社，Ames，衣阿華，美國(1997))。已經證明可以在胚胎后期，即在胚胎天數(shù)(ED)第17到18天把MD注射到卵內。
在取決于免疫反應的預防機制內，胚胎免疫能力的形成是與接種時間相關的關鍵決定性因素之一。通常，這一能力是在孵化期的后四分之一，胚胎對傳染物的有害影響高度易感之前形成的。已經發(fā)現(xiàn)，假如接種發(fā)生在這一時期之前，不僅在新孵出的禽類中的預防程度降低，而且疫苗也可能在胚胎中和/或胚胎外膜中誘發(fā)傷害。例如，在發(fā)育較早時期用HVT注射的孵化前雞出現(xiàn)明顯的免疫抑制，并產生病理傷害。雖然接種可以在孵化期的后25％任何時間進行，但應當理解到免疫反應并不是馬上進行的。為了最優(yōu)化預防剛孵化的禽類感染疾病，因此應當把卵在孵化前至少3-4天接種。例如，在雞群中轉化為在21天孵化期的第17或18天注射，對應于當把胚胎卵例行轉移到孵化盤中的時間。與轉移步驟結合，注射可以非常方便。
另一個與接種時間范圍有關的重要考慮是卵內部結構對有效接種的接受性。注射的部位必須在由羊膜限定的區(qū)域內，包括羊膜或尿囊液，或者在卵黃囊內。在孵化的第四個四分之一開始時，羊膜充分擴大，當從卵的大端沿縱軸注射時幾乎始終確保了在其中的穿刺。當雞蛋在孵化的第18天，沿縱軸的中途和垂直于縱軸的注射造成的羊膜穿透頻率是約80％，而卵黃囊或胚胎自身是約20％。
另外，在后四分之一期，胚胎充分發(fā)育和分化，能忍受實際注射位置所固有的隨機性，而對孵化率或生命機能沒有顯著的負面影響。另外，在這一孵化期，胚胎被始終如一地固定在卵內，這樣從大端中央的入插可以肯定地導致注射在孵化前小雞的背上部。由于在孵化的最后幾天胚胎沐浴在羊水中并繼續(xù)攝取羊水，當羊水接受注射后容易激發(fā)疫苗感染。類似地，在孵化前的卵黃吸收過程中注射到卵黃囊的疫苗可以感染胚胎。一般地，尿囊或羊水區(qū)是注射的優(yōu)選位點，因為卵黃可能攜帶母體的抗體，這樣就具有部分中和非細胞結合疫苗的作用。
只要沒有不適當?shù)仄茐慕M織或胚胎或包饒胚胎的外膜，注射的用具并不是特別重要的。一個與約#22規(guī)格的針頭匹配的皮下注射器就能達到這一目的。當完全插入時，一個1至11/4英寸的針頭將穿透殼，包圍氣室和羊水的外和內殼膜。取決于胚胎發(fā)育的準確時期和位置，這一長度的針頭將終止在雞上的流體中或在雞自身中?？梢栽跉ど洗蚧蜚@一個導流孔，以避免使針頭損傷或變鈍。在自動化系統(tǒng)中，可以預想一種例如Mliier(美國專利4,040,388)所講授的穿透設備將是有效的。雖然如所建議的那樣以滅活疫苗或燒熟卵內部的任何部分為限度，把針頭加熱并不是必須的，但在注射之間的殺菌在預防交叉污染上是有利的。交叉污染可以通過對人全體接種領域公知的高壓射流注射來避免。在注射后一般不需要重新密封孔洞，盡管石蠟或其它類似物將適合此目的。適合注射步驟的自動系統(tǒng)目前可以購得(INOVOJECT，Embrex Inc.)。
孵化前施用疫苗并不對孵化率或雞存活率有負面影響。它在雞還在卵內時較早有效激發(fā)預防免疫。已經證實向后期胚胎化的卵注射疫苗可以誘發(fā)對單一感染疾病的預防作用(Sharma，J.M.，“單獨使用傳染性粘液囊疾病病毒或與Marek氏病疫苗組合進行胚胎接種，”禽類疾病，29453-463(1985)；Waken，P.S.和J.M.Sharma，“用禽感染支氣管炎病毒對雞胚胎進行預防接種對接種的組織和超結構損害反應和免疫反應”，禽類疾病，39752-756(1995)；Ahmad，J.，和Sharma，J.M.，“卵內施用修飾的活病毒疫苗以預防雞患紐卡斯爾疾病，”美國獸醫(yī)研究雜志，531999-2004(1992)；Ahmad，J.，和Sharma，J.M.，“用單價和雙價疫苗對火雞進行胚胎接種預防出血性腸炎和紐卡斯爾疾病，”禽類疾病，37485-491(1993))。
將胚胎化的卵在ED16-18天暴露在IBDV、NDV和IBV非致病株下，引起病毒在各種胚胎組織的活性復制。一些病毒在胚胎組織中產生短暫的病理損害。減毒IBV的細胞培養(yǎng)液引起胚胎的損傷(Waken，P.S.和J.M.Sharma，“用禽感染支氣管炎病毒對雞胚胎進行預防接種對接種的組織和超結構損害反應和免疫反應”，禽類疾病，39752-756(1995))。
胚胎對HVT和MDV這兩種血清學相關的皰疹病毒的反應不同。在ED17天暴露到HVT后，病毒在胚胎中大量復制，首先在胚胎肺中達到最大滴度，然后擴展到其它組織(Sharma，J.M.等，“用火雞皰疹病毒接種在胚胎或在孵化時雞的病毒、免疫和致病反應比較，”美國獸醫(yī)研究雜志，451619-123(1984))。當把在感染峰值的肺組織單細胞懸液體外培養(yǎng)，在零星的貼附細胞中可以看到抗原。(Sharma，J.M.，用火雞皰疹病毒對雞進行胚胎接種“在胚胎肺中早期病毒復制的靶細胞的特性”，禽病理學，16567-579(1987))。
晚期胚胎對MDV的反應與HVT的非常不同。當把MDV在ED17天進行卵內注射，沒有證據表明病毒在組織內復制。通過把病毒與允許的單層細胞一起培養(yǎng)將病毒從胚胎分離出的很多努力都沒有成功。(Sharma，J.M.，“胚胎發(fā)育后期卵內接種后Marek氏病病毒的復制滯后”，禽類疾病，31570-576(1987))。
在卵內接種后疫苗誘發(fā)的預防作用的機制還不清楚。因為大多數(shù)病毒在胚胎期復制，病毒容易激發(fā)胚胎免疫系統(tǒng)并在雞孵出前激發(fā)預防反應。當18天的胚胎暴露到NDV上，在脾和盲腸扁桃體以及一些這樣的細胞中增殖的具有IgM的細胞使得特異的表面結合到生物素標記的病毒上，從而表明細胞參與一個NDV特異免疫反應(Sharma，J.M.，和Ahmad，J.，“18天的胚胎對卵內紐卡斯爾疾病疫苗的反應”，禽類免疫研究進展，(Davison，T.F.等)，Cafex國際期刊出版社，pp.273-277(1994))。這一反應的動力學還沒有仔細檢驗，也沒有證實胚胎免疫反應是對所有孵化的小雞預防作用的先決條件。
在上述條件下胚胎接種的特征是具有與沒有處理的卵相當?shù)姆趸省Ｒ虼藙偡醭龅慕臃N的小雞比孵化后接種的雞在預防率上的任何提高都代表比現(xiàn)有技術的肯定的提高。從18天接種的胚胎孵出，在孵出后三天接受攻擊的小雞對MD的抗性是在孵化后一天注射的小雞的四倍或更多。后來進行攻擊的效果就不讓人感到驚人了，因為在孵化時接種的小雞在4-到8天日齡時的免疫反應大致等于在孵化前三天接種的1日齡時的免疫反應。
實施例含三種血清型Marek氏疾病病毒和傳染性粘液囊疾病病毒的多價疫苗通過把四種病毒合并到一種制品中開發(fā)了一種多價疫苗(MV)。疫苗含每種分離的Marek氏疾病病毒的血清型1，2，3和一種傳染性粘液囊疾病病毒(IBDV)。使用的病毒如下MDV血清型1CV1988MDV血清型2301BMDV血清型3HVTIBDVBursine II這些病毒由Solvay Animal Health惠贈。這些病毒也可以從其他來源購得。
用可以購得的無特定病原體的來亨雞蛋進行卵內接種。在胚胎約18天手工把疫苗注射進蛋中。在蛋的大端打一個孔插入一個#22規(guī)格，11/4英寸的針頭通過孔輸入接種物。把注射疫苗和注射減毒液的卵放在孵化盤中。孵化的雞翼是有條紋的(wing-babded)，并把它放到隔離器中。
對于常規(guī)接種，在孵化出時在每一只雞的脖后皮下注射0.2ml的疫苗。兩種方法的病毒空斑形成單位的劑量相同。每個卵或雞的劑量是每種Marek氏疾病病毒血清型是1000 PFU，和1000 50％組織培養(yǎng)感染劑量(TClD50)IBDV。
記錄每組的孵化率。在實驗期限內把在不同組的雞放在分別的隔離器中。在7日齡腹膜內(I/P)接種MD攻擊病毒(RB1B株，每只鳥500PFU)。在7周齡停止攻擊。在3周齡眼內(I/O)接種IBDV攻擊病毒(IM株，每只鳥500ELD50)。在4周齡停止攻擊。在通常孵化的胚胎后期用MV注射胚胎化的雞蛋。見下表1-3。
表1項目編號115-1的孵化率結果<
>ED＝胚胎天數(shù)a每種病毒1000 PFUb1000 TCID50表2項目編號115-2的孵化率結果<
表3項目編號115-3的孵化率結果<
>從多價疫苗注射的蛋孵化的雞對致病性的MDV和IBDV有抗性。見下表4-6。可接受單獨或組合的病毒的各個組具有相當?shù)腗DV和IBDV抗體水平?？贵w數(shù)據表明從給予多價疫苗的蛋中孵出的鳥的免疫系統(tǒng)是完整的。
表4含MDV血清型1，2和3以及IBDV的多價疫苗的功效項目編號115-1
ED＝胚胎天數(shù)Bur.Atr.in surv.＝幸存者的總粘液囊萎縮Bl of surv.＝幸存者的粘液囊指數(shù)(粘液囊重/體重×1000)ND＝未做表5含MDV血清型1，2和3以及IBDV的多價疫苗的功效項目編號115-2
ED＝胚胎天數(shù)Bur.Atr.in surv.＝幸存者的總粘液囊萎縮Bl of surv.＝幸存者的粘液囊指數(shù)(粘液囊重/體重×1000)ND＝未做*在6周死亡，基于總損傷診斷。
表6含MDV血清型1，2和3以及IBDV的多價疫苗的功效項目編號115-3
ED＝胚胎天數(shù)Bur.Atr.in surv.＝幸存者的總粘液囊萎縮BI of surv.＝幸存者的粘液囊指數(shù)(粘液囊重/體重×1000)ND＝未做盡管多價MDV+IBDV疫苗以前已經可以用于孵化后使用，但是本發(fā)明是第一個適合卵內使用的有效的多價疫苗。而且，本發(fā)明的多價疫苗含三種MDV血清型，使得它比缺少一個或兩個血清型的疫苗具有更廣泛的預防能力。
參照多種特殊的和優(yōu)選的實施方案和技術描述了本發(fā)明。但是，應當理解到可以進行許多該變和修改，而仍保留在本發(fā)明的范圍之內。
權利要求
1.一種含兩種或多種活生物制劑或微生物成分的多價家禽疫苗，其特征在于每種活生物制劑或微生物成分能有效預防或治療一種家禽疾病，并且其中所述多價疫苗對卵內接種是安全的。
2.根據權利要求1所述的多價疫苗，其特征在于所述禽類選自雞、火雞、鵝、鴨、雉、鵪鶉、鴿子和鴕鳥。
3.根據權利要求2所述的多價疫苗，其特征在于所述禽類是雞。
4.根據權利要求2所述的多價疫苗，其特征在于所述禽類是火雞。
5.根據權利要求1所述的多價疫苗，其特征在于所述生物制劑選自病毒、細菌、真菌或寄生生物。
6.根據權利要求5所述的多價疫苗，其特征在于所述病毒是減毒的病毒。
7.根據權利要求6所述的多價疫苗，其特征在于所述病毒選自Marek氏疾病病毒(MDV)，傳染性粘液囊疾病病毒(IBDV)，紐卡斯爾疾病病毒(NDV)，傳染性支氣管炎病毒(IBV)，傳染性喉氣管炎病毒(ILTV)，禽腦脊髓炎(AEV)，雞貧血病毒(CAV)，雞痘病毒(FPV)，禽流感病毒(AIV)，呼腸孤病毒，禽類白血病病毒(ALV)，網狀內皮組織增生病毒(REV)，禽類腺病毒和出血性腸炎病毒(HEV)，以及它們的重組體。
8.根據權利要求6所述的多價疫苗，其特征在于疫苗含MDV血清型1，2和3以及IBDV。
9.根據權利要求6所述的多價疫苗，其特征在于疫苗含MDV血清型1，2和3以及Bursine II(BurII)。
10.根據權利要求6所述的多價疫苗，其特征在于疫苗含MDV血清型1，2和3，Bur II和含NDV的F和HN基因的痘病毒載體。
11.根據權利要求1所述的多價疫苗，其特征在于所述微生物成分來源于選自病毒、細菌、真菌或寄生生物的微生物。
12.根據權利要求11所述的多價疫苗，其特征在于所述微生物成分來源于減毒的病毒。
13.根據權利要求12所述的多價疫苗，其特征在于所述病毒選自Marek氏疾病病毒(MDV)，火雞皰疹病毒(HVT)，傳染性粘液囊疾病病毒(IBDV)，紐卡斯爾疾病病毒(NDV)，傳染性支氣管炎病毒(IBV)，傳染性喉氣管炎病毒(ILTV)，禽腦脊髓炎(AEV)，雞貧血病毒(CAV)，雞痘病毒(FPV)，禽流感病毒(AIV)，呼腸孤病毒，禽類白血病病毒(ALV)，網狀內皮組織增生病毒(REV)，禽類腺病毒和出血性腸炎病毒(HEV)，以及它們的重組體。
14.根據權利要求12所述的多價疫苗，其特征在于疫苗含MDV血清型1，2和3以及IBDV。
15.根據權利要求12所述的多價疫苗，其特征在于疫苗含MDV血清型1，2和3以及Bursine II(Bur II)。
16.根據權利要求12所述的多價疫苗，其特征在于疫苗含MDV血清型1，2和3，Bur II和含NDV的F和HN基因的痘病毒載體。
17.一種為家禽接種的方法，其特征在于包括向所述家禽卵內施用可有效產生免疫的量如權利要求1所述的多價疫苗。
18.根據權利要求17所述的方法，其特征在于在胚胎孵化期的后四分之一施用所述多價疫苗。
19.根據權利要求17所述的方法，其特征在于疫苗含MDV血清型1，2和3以及IBDV。
20.根據權利要求17所述的方法，其特征在于疫苗含MDV血清型1，2和3以及Bur II。
21.根據權利要求17所述的方法，其特征在于疫苗含MDV血清型1，2和3，Bur II和含NDV的F和HN基因的痘病毒載體。
全文摘要
提供了具有兩種活生物制劑或微生物成分的多價家禽疫苗。每種活性物制劑或微生物成分都能有效預防或治療家禽疾病,并且該多價疫苗對體內免疫的家禽是安全和有效的。也提供了施用這一多價疫苗為家禽卵內接種的方法。
文檔編號A61K39/295GK1261283SQ9880651
公開日2000年7月26日 申請日期1998年6月4日 優(yōu)先權日1997年6月12日
發(fā)明者賈格迪夫·M·夏爾馬 申請人:明尼蘇達大學董事會