專(zhuān)利名稱(chēng)：抗微生物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及抗微生物制劑的組合物，組成這種抗微生物組合物的物質(zhì)，以及抗微生物組合物的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
牙周疾病和齲齒是全球主要的公眾健康和經(jīng)濟(jì)問(wèn)題。目前廣泛認(rèn)為這兩種牙周疾病都是由細(xì)菌引起的，而這些細(xì)菌成團(tuán)狀滋生于牙齒上和牙齦區(qū)內(nèi)，對(duì)于這些細(xì)菌團(tuán)，通常所用的描述術(shù)語(yǔ)是“齒斑”。對(duì)于牙周疾病，Schluger等(Schluger,Yuodelis,Page&Johnson，牙周疾病，第二版，153-262頁(yè)，Lea&Fbiger,1990)報(bào)道了滋生于牙齒與牙齦交界區(qū)域的齒斑細(xì)菌引起牙齦的炎癥，稱(chēng)為牙齦炎，其特征在于牙齦(“齦”)腫脹、水腫、發(fā)紅、易出血。如果齒斑未被完全清除，許多人的牙齦炎可能發(fā)展成牙周炎或牙周疾病。牙周炎的特征通常在于牙齒周?chē)M織的慢性炎癥，這種炎癥導(dǎo)致了支持骨的吸收。牙周疾病是成人缺齒的首要原因。齲齒(牙洞)也是由細(xì)菌引起的，主要致病成分是變異鏈球菌(McGhee,Michalek&Cassell，牙齒微生物學(xué)，第279頁(yè)，Harper&Row,1982)。
防止齒斑或去除齒斑一直是研究的焦點(diǎn)，其最終目的是抑制齲齒和牙周疾病。雖然經(jīng)常刷牙能夠在一定程度上防止齒斑的形成，但是僅靠刷牙并不足以有效地防止齒斑的形成或基本上去除牙齒上已經(jīng)形成的齒斑。既然刷牙本身通常不足以有效預(yù)防由致病齒斑菌引起的齲齒或牙周疾病，那么現(xiàn)已提出應(yīng)用抗細(xì)菌物質(zhì)如洗必太，氯化苯甲烴銨，氯化十六烷基吡啶嗡的化學(xué)方法。
本領(lǐng)域古老技術(shù)是將天然物質(zhì)用于牙齒和牙齦的治療，這自19世紀(jì)80年代中期已有記載并已進(jìn)行應(yīng)用。從那時(shí)起，有許多專(zhuān)利公開(kāi)了含天然物質(zhì)提取物的口腔產(chǎn)品組合物。
現(xiàn)在已知扁柏酚、檸檬醛、香葉醇、cocamidopropyl甜菜堿、小檗堿和刺柏子油(Juniper berries oil)單獨(dú)都表現(xiàn)對(duì)某種細(xì)菌的抗微生物效應(yīng)。
美國(guó)專(zhuān)利號(hào)3,940,476描述了一種抑制齒斑形成的方法，它包括將下列物質(zhì)中的一種或幾種的組合作為活性制劑局部施用給牙齒，這些物質(zhì)包括(a)異硫氰酸丙烯酯，(b)uranine,(c)obtusastyrene,(d)檸檬醛，(e)香茅醇，(f)橙花醇，或(g)香葉醇。
美國(guó)專(zhuān)利號(hào)4,913,895描述了一種口腔組合物，它在水性介質(zhì)中含線性聚磷酸鹽或環(huán)狀聚磷酸鹽及薄荷醇，anethol，或其混合物。有報(bào)道這種組合物具有抗細(xì)菌效應(yīng)，并預(yù)防結(jié)石和牙周疾病的發(fā)生。
美國(guó)專(zhuān)利號(hào)4,966,754描述某些香料油和它們的組合具有對(duì)黑曲霉、白色念珠菌、金黃色葡萄球菌和銅綠假單胞菌的抗微生物效應(yīng)，因而可用作化妝品組合物中的防腐劑。報(bào)道了14種精油的混合能夠提供針對(duì)普通微生物的抗微生物效力。公開(kāi)了上述組合物適于作為化妝品組合物中的防腐劑。
美國(guó)專(zhuān)利號(hào)4,999,184描述了含某種焦磷酸鹽的組合物，據(jù)報(bào)道焦磷酸鹽提供抗結(jié)石效應(yīng)。
美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5,316,760描述了含大蕁麻提取物和歐洲杜松提取物組合的口腔護(hù)理產(chǎn)品，據(jù)描述這些提取物的組合導(dǎo)致協(xié)同減少齒斑的形成和牙齦的炎癥或出血。也已描述千葉蕃提取物可作為大蕁麻提取物及歐洲杜松提取物組合的合適添加劑。
美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5,472,684描述含麝香草酚和丁子香酚，以及選擇性地倍半萜烯醇，如法呢醇的組合物。據(jù)報(bào)道這種組合物有抗齒斑和抗牙齦炎效應(yīng)。澳大利亞茶樹(shù)油、鼠尾草油和桉葉油已描述為能增強(qiáng)漱口液的抗齒斑活性及抗牙齦炎活性，因而配制在公開(kāi)的組合物中。
鑒定作為抗齒斑和抗結(jié)石制劑的抗微生物制劑的效果的一個(gè)特征是它的最小抑制濃度或MIC。MIC是當(dāng)沒(méi)有觀察到細(xì)菌生長(zhǎng)時(shí)以毫克每毫升表示的抗微生物制劑的最小濃度。當(dāng)濃度低于MIC時(shí)，抗微生物制劑不能有效殺死細(xì)菌或抑制細(xì)菌生長(zhǎng)和繁殖；當(dāng)濃度高于MIC時(shí)，抗微生物制劑能有效地殺死細(xì)菌或抑制細(xì)菌生長(zhǎng)和繁殖。
典型地，抗微生物制劑以初始濃度導(dǎo)入口腔。由于口腔中的動(dòng)態(tài)變化，初始濃度隨即開(kāi)始下降。實(shí)際上，口腔內(nèi)抗微生物制劑的濃度將降至低于MIC。因此，研究抗齒斑及抗結(jié)石配方工作的目標(biāo)是使用MIC較低的抗微生物制劑。
洗必太的MIC約為1μg/ml，并且它是衡量其它抗微生物制劑的標(biāo)準(zhǔn)。雖然洗必太的MIC較為理想，但它有令人不快的味道和牙齒染色的副作用。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及這一發(fā)現(xiàn)，即將一種下述抗微生物制劑加入另一種下述抗微生物制劑中，導(dǎo)致未預(yù)料地和令人驚訝地減少其中至少一種制劑在組合中，即存在其它制劑時(shí)測(cè)定的最低抑制濃度。換而言之，在制劑B存在時(shí)測(cè)定的制劑A的MIC低于制劑A單獨(dú)存在時(shí)，即無(wú)制劑B存在時(shí)測(cè)定的制劑A的MIC。因此，在與制劑B組合時(shí)，抗微生物制劑A可在低于其單獨(dú)存在時(shí)所測(cè)的MIC的濃度下有效抑制或防止細(xì)菌的生長(zhǎng)。如果制劑A和B的組合導(dǎo)致制劑B的MIC低于制劑B單獨(dú)存在時(shí)所測(cè)的MIC，那么抗微生物制劑B可在低于其單獨(dú)存在時(shí)所測(cè)的MIC的濃度下有效抑制或防止細(xì)菌的生長(zhǎng)。換而言之，當(dāng)制劑A和B組合時(shí)，至少其中一種制劑能夠在低于其單獨(dú)存在時(shí)抑制或防止細(xì)菌生長(zhǎng)所需濃度的濃度下抑制或防止細(xì)菌生長(zhǎng)。
根據(jù)本發(fā)明組成的抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的組合物包括有效抑制細(xì)菌生長(zhǎng)含量的抗微生物制劑A和抗微生物制劑B，其中制劑A和制劑B從含以下物質(zhì)的一組中選取小檗堿、香柏油、氯霉素、檸檬醛、香茅油、cocamidopropyl-二甲基甘氨酸、光果甘草提取物、扁柏酚、漿果羅勒油、刺柏子油、檸檬羅勒油、檸檬油和迷迭香油。根據(jù)本發(fā)明組成的另一種抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的組合物包括香葉醇和選自下列物質(zhì)的抗微生物制劑小檗堿、香柏油、氯霉素、香茅油、cocamidopropyl-二甲基甘氨酸、光果甘草提取物、扁柏酚、漿果羅勒油、刺柏子油、檸檬羅勒油、檸檬油和迷迭香油。
根據(jù)本發(fā)明，制劑B存在時(shí)，制劑A的最小抑制濃度低于制劑A單獨(dú)的最小抑制濃度。此外，優(yōu)選地當(dāng)制劑A存在時(shí)制劑B的最小抑制濃度低于制劑B單獨(dú)的最小抑制濃度。本發(fā)明的組合物有效抑制或防止細(xì)菌的生長(zhǎng)，如粘性放線菌，直腸彎曲桿菌，具核梭桿菌，牙齦卟啉單胞菌，變異鏈球菌和血鏈球菌。
此外，根據(jù)本發(fā)明組成的組合物包含第三種不同于制劑A和B的抗微生物制劑C，其選自小檗堿、香柏油、氯霉素、檸檬醛、香茅油、cocarmidopropyl-二甲基甘氨酸、香葉醇、光果甘草提取物、扁柏酚、漿果羅勒油、刺柏子油、檸檬羅勒油、檸檬油和迷迭香油。
根據(jù)本發(fā)明組成的組合物可用于多種產(chǎn)品，如清潔劑、擦凈劑、藥品和口腔衛(wèi)生產(chǎn)品?？谇恍l(wèi)生產(chǎn)品的例子包括牙膏，漱口液。
根據(jù)本發(fā)明組成的抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的組合物可通過(guò)與表面接觸使用。
附圖
簡(jiǎn)述附圖是關(guān)于三種抗微生物制劑A、B和C的組合在96孔板中稀釋情況的圖解說(shuō)明。
優(yōu)選實(shí)施方案詳述如本文所用的，以下術(shù)語(yǔ)具有下列含義“小檗堿”是指5,6-二氫-9,10-二甲氧基苯[g]-1,3-苯并間二氧雜環(huán)戊烯[5,6-a]喹嗪及其鹽。小檗堿是從北美黃連和小檗科中其它幾種植物中分離的生物堿，典型的小檗堿鹽包括鹽酸小檗堿，硫酸氫小檗堿和硫酸小檗堿。小檗堿的化學(xué)摘要作用登記(CAS)號(hào)是84603-60-1。
“香柏油”是指主要從鉛筆柏或Juniperus ashei的心材中提取的揮發(fā)性全油提取物，該全油提取物的成分包括thujopsene，雪松醇，α-烯，α-雪松烯，β-雪松烯和韋得醇，香柏油的CAS號(hào)為8000-27-9。
“氯霉素”是指2,2-二氯-N-[2-羥基-1-(羥甲基)-2-(4-硝基苯基)乙基]乙酰胺，氯霉素來(lái)自委內(nèi)瑞拉鏈霉菌或經(jīng)有機(jī)合成。氯霉素的CAS號(hào)是56-75-7。
“檸檬醛”是指3,7-二甲基-2,6-octadienal，它是禾本科的香茅和Cymbopogon flexuosus的揮發(fā)性油，檸檬醛可從商業(yè)途徑買(mǎi)到純化合物，檸檬醛的CAS號(hào)是5392-40-5。
“香茅油”是指通過(guò)Cymbopogon nardus或Cymbopogon winterianus的蒸汽蒸餾生產(chǎn)的商業(yè)上可買(mǎi)到的油。香茅油的CAS號(hào)為8000-29-1。
″香葉醇″是指對(duì)-3,7-二甲基-2,6-辛二烯-1-醇，香葉醇的CAS號(hào)是106-24-1。香葉醇是作為其它香料油，如香茅，檸檬草，玫瑰油和玫瑰草中的成分被發(fā)現(xiàn)的。
“cocamidopropyl二甲基甘氨酸”的CAS號(hào)為61789-40-0,83138-0-3和86438-79-1。
“光果甘草提取物”也被稱(chēng)作甘草根提取物，是指來(lái)自光果甘草的粗提取粉。存在包括G.typica和G.glandulifera幾個(gè)品種。光果甘草提取物含有甘草酸和甘草次酸成分。全提取物可從商業(yè)途徑買(mǎi)到或通過(guò)溶劑抽提得到，如以下所述的乙醇提取法。
“扁柏酚”是指β-thujuplicin，是北美香柏的提取物。
“漿果羅勒油”是指一種有漿果成分的羅勒植物的所選品種的全提取物，漿果羅勒是矮糠羅勒的栽培品種。
“刺柏子油”是指來(lái)自成熟的檜屬歐洲杜松干果的具檸檬醛成分的揮發(fā)性全油提取物，刺柏子油又被稱(chēng)為檜樹(shù)提取物，歐洲杜松提取物和檜樹(shù)浸膏。刺柏子油的CAS注冊(cè)號(hào)為84603-69-0。
“檸檬羅勒油”是指從含有檸檬醛成分的所選羅勒屬品種中提取的揮發(fā)性全油提取物。檸檬羅勒是矮糠羅勒的人工栽培品種，該品種具有較高的檸檬醛含量。
“檸檬油”是指從檸檬新鮮果皮提取的揮發(fā)性全油提取物。檸檬油也稱(chēng)為檸檬的油。檸檬油的CAS注冊(cè)號(hào)為8008-56-8。
“迷迭香油”是指從迷迭香的花頂端提取的全油提取物。迷迭香油也被稱(chēng)為迷迭香提取物或迷迭香油的提取物。迷迭香油的CAS注冊(cè)號(hào)為84606-14-8。
有關(guān)上述精油的其它信息可查閱kirk-Othmer化學(xué)技術(shù)百科全書(shū)，第4版，第7冊(cè)，603-674頁(yè)，John Wiley&Sons有限公司。
所有前述的都可從商業(yè)來(lái)源得到。
“最低抑制濃度或MIC”是指當(dāng)觀察不到細(xì)菌生長(zhǎng)時(shí)抗微生物制劑的最低濃度，該濃度用每毫升中抗微生物制劑的毫克數(shù)表示。濃度低于最低抑制濃度時(shí)，抗微生物制劑不能有效地殺死或抑制細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖，高于最低抑制濃度的抗微生物制劑能有效地殺死或抑制細(xì)菌生長(zhǎng)繁殖。
觀察到與組合中的特定制劑單獨(dú)存在時(shí)，即不存在其它制劑時(shí)的最低抑制濃度相比，根據(jù)本發(fā)明組成的抗微生物制劑組合表現(xiàn)出令人驚訝和出乎意料地降低組合中至少一種，優(yōu)選地所有抗微生物制劑的最低抑制濃度。所觀察到的驚人的最低抑制濃度的降低涉及代表性的革蘭氏陽(yáng)性和革蘭氏陰性口腔病原細(xì)菌，如粘性放線菌，具核梭桿菌，牙齦卟啉單胞菌，變異鏈球菌，血鏈球菌和直腸彎曲桿菌。舉例來(lái)說(shuō)，如果制劑A單獨(dú)存在時(shí)的最低抑制濃度是10，制劑B單獨(dú)存在時(shí)的最低抑制濃度是20，根據(jù)本發(fā)明，將制劑A和制劑B組合后，在制劑B存在時(shí)，制劑A的最低抑制濃度相對(duì)于制劑A單獨(dú)存在時(shí)的最低抑制濃度降低了出乎預(yù)料和驚人的數(shù)量。另外，優(yōu)選地，在制劑A存在時(shí)，制劑B的最低抑制濃度相對(duì)于制劑B單獨(dú)存在時(shí)的最低抑制濃度顯著出乎意料地降低。在組合中制劑A和制劑B最低抑制濃度的降低使得制劑A，和優(yōu)選地制劑B，能夠在與僅抗微生物制劑A或僅抗微生物B存在時(shí)相比更低濃度下抑制和/或預(yù)防微生物的生長(zhǎng)和繁殖。如發(fā)明背景中所述，通?？刮⑸镏苿闹苿╅_(kāi)始施用時(shí)起濃度即下降。因此，通過(guò)有效降低抗微生物制劑的最低抑制濃度，能夠延長(zhǎng)該抗微生物制劑預(yù)期的抑制或預(yù)防細(xì)菌生長(zhǎng)的時(shí)間范圍。以下將更詳細(xì)地描述與本發(fā)明相結(jié)合的令人吃驚且出乎意料的結(jié)果，并在隨后的實(shí)施例中舉例說(shuō)明。
根據(jù)本發(fā)明組成的抗微生物制劑組合包含(1)選自小檗堿，香柏油，氯霉素，檸檬醛，香茅油，cocamidopropyl-二甲基甘氨酸，光果甘草提取物，扁柏酚，漿果羅勒油，刺柏子油，檸檬羅勒油，檸檬油和迷迭香油的抗微生物制劑A；和(2)選自同樣目錄的不同于抗微生物制劑A的抗微生物制劑B。另外，根據(jù)本發(fā)明組成的組合包含香葉醇以及選自小檗堿，香柏油，氯霉素，香茅油，cocamidopropyl-二甲基甘氨酸，光果甘草提取物，扁柏酚，漿果羅勒油，刺柏子油，檸檬羅勒油，檸檬油和迷迭香油的抗微生物制劑。
以上列出的抗微生物制劑的很多組合中，優(yōu)選的組合包括香柏油以及選自小檗堿，氯霉素，檸檬醛，cocamidopropyl-二甲基甘氨酸，香葉醇，光果甘草提取物，扁柏酚，漿果羅勒油和迷迭香油的抗微生物制劑，最優(yōu)選的是香柏油與小檗堿，氯霉素，檸檬醛，cocamidopropyl-二甲基甘氨酸，香葉醇和光果甘草提取物的組合。
另一組優(yōu)選的組合包括小檗堿和選自氯霉素，檸檬醛，香葉醇，光果甘草提取物，扁柏酚，漿果羅勒油，刺柏子油和檸檬羅勒油的抗微生物制劑。與小檗堿組合最優(yōu)選的是氯霉素，香葉醇，光果甘草提取物和檸檬羅勒油。
其它優(yōu)選的組合包括扁柏酚與氯霉素，檸檬醛，cocamidopropyl-二甲基甘氨酸，香葉醇，光果甘草提取物，刺柏子油和檸檬羅勒油的組合。與扁柏酚組合最優(yōu)選的是選自氯霉素，cocamidopropyl-二甲基甘氨酸，香葉醇和光果甘草提取物的抗微生物制劑。
將光果甘草提取物與選自香柏油，氯霉素，香葉醇，漿果羅勒油，刺柏子油，檸檬羅勒油，檸檬油和迷迭香油的抗微生物制劑組合時(shí)得到優(yōu)選的結(jié)果。與光果甘草提取物組合最優(yōu)選的是選自香柏油，香葉醇，刺柏子油和迷迭香油抗微生物制劑。
前述的著名抗細(xì)菌制劑組合是優(yōu)選的和最優(yōu)選的，因?yàn)?1)組合中特定抗微生物制劑的最低抑制濃度較其單獨(dú)存在時(shí)所測(cè)的最低抑制濃度降低的程度；及(2)由于制劑組合得到的各個(gè)抗微生物制劑的最低抑制濃度。
除了上述包含兩種抗微生物制劑的組合物以外，本發(fā)明也涉及包含兩種以上抗微生物制劑，如三種或四種抗微生物制劑的組合物，其中組合中至少一種，優(yōu)選地所有組成制劑的最低抑制濃度低于這些組分單獨(dú)存在時(shí)所測(cè)的最低抑制濃度。同樣地，選自以上列出的一組物質(zhì)不同于抗微生物制劑A和制劑B的抗微生物制劑C可加入到抗微生物制劑A和制劑B中以提供根據(jù)本發(fā)明的組合物的第三種制劑。根據(jù)本發(fā)明組成的抗微生物制劑A,B和C的組合，其中至少一種優(yōu)選地所有組成制劑的最低抑制濃度低于這些組分單獨(dú)存在時(shí)所測(cè)的最低抑制濃度。此外在某些情況下，三種抗微生物制劑的組合中組分的最低抑制濃度低于三種組分制劑的兩兩不同配對(duì)時(shí)的最低抑制濃度。
只要得到如上所述組合的成分的最低抑制濃度的降低，根據(jù)本發(fā)明組成的組合物中抗微生物制劑的比例并限于任何特定值。已觀察到兩種組成成分的比例在約1∶500到約500∶1的范圍內(nèi)能提供最低抑制濃度驚人而出乎預(yù)料的降低。根據(jù)本發(fā)明，在三種組分系統(tǒng)中，任一制劑相對(duì)于另外兩種制劑的比例在約1∶500到約500∶1的范圍內(nèi)能降低其最低抑制濃度。
在根據(jù)本發(fā)明配制的組合物中存在的抗微生物制劑具體含量并不限于任何特定的值，只要其含量能有效地抑制和/或預(yù)防細(xì)菌的生長(zhǎng)，即抗微生物制劑的含量大于對(duì)應(yīng)于特定細(xì)菌的最低抑制濃度。當(dāng)在根據(jù)本發(fā)明組成的組合物中加入各種載體時(shí)，抗微生物制劑的含量?jī)?yōu)選地選擇保證一旦該組合物被施用或提供后，抗微生物制劑濃度大于其針對(duì)特定細(xì)菌的最低抑制濃度的含量。每種制劑恰當(dāng)?shù)暮糠秶院苿┑慕M合物的總重量為基礎(chǔ)，按重量百分比，從約0.001％到約5.0％，優(yōu)選地約0.01％到約2.5％。
根據(jù)本發(fā)明組成的組合物可施用于需要抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的表面，用于控制表面細(xì)菌生長(zhǎng)的產(chǎn)品的例子包括清潔劑，擦凈劑，藥品，和優(yōu)選地治療產(chǎn)品，如口腔衛(wèi)生產(chǎn)品，包括牙膏，洗口液和漱口液。與根據(jù)本發(fā)明的組合物結(jié)合的這些產(chǎn)品的成分優(yōu)選地選擇對(duì)根據(jù)本發(fā)明組成的組合物降低最低抑制濃度的方法沒(méi)有拮抗效應(yīng)的成分。
牙膏通常是在水性致濕體系中含磨擦增亮劑的增稠漿液。典型地，牙膏含磨擦劑(能夠去除污染的菌膜)，致濕劑(香味劑、磨擦劑和增稠劑的載體，以使牙膏具有一定的結(jié)構(gòu)和穩(wěn)定性)，表面活性劑(主要在使用時(shí)產(chǎn)生泡沫)，氟化物(預(yù)防牙洞)，和香味劑(賦予牙膏香味)。
有多種磨擦劑可用于牙膏中，如硅膠、硅沉淀物、磷酸氫二鈣、二水合磷酸氫二鈣、三水合氫氧化鋁、焦磷酸鈣、碳酸鈣和不溶性偏磷酸鈣。
合適的致濕劑的例子包括山梨糖醇，甘油和聚乙二醇。
硅氣凝膠、焦化硅、硅沉淀物、羧甲基纖維素、羧基乙烯多聚體、黃原膠和角叉藻聚糖適于作為增稠劑。
典型表面活性劑包括十二烷基磺酸鈉和十二烷基苯磺酸鹽。
多種香味劑可由商業(yè)途徑得到，含香味劑能提供薄荷味和其它清新香味，常用的如桂皮。
漱口液或洗口液通常是含水的有香味的可傾倒的乳劑，在大多數(shù)情況下?lián)饺肓丝刮⑸镏苿?。典型的漱口液成分包括使人?lè)于使用并加強(qiáng)治療或新鮮質(zhì)量的香味劑，保持香味劑穩(wěn)定分散的表面活性劑，改善口感的致濕劑，增稠劑和活性劑。漱口液中也常用表面活性劑以產(chǎn)生少量泡沫。
摻入了根據(jù)本發(fā)明組成的抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的組合物的牙膏和漱口液按常規(guī)方法與抗微生物制劑一起配制，抗微生物制劑存在的含量超過(guò)在其組合中測(cè)定的MIC。
以下實(shí)施例說(shuō)明根據(jù)本發(fā)明組成的抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的組合物中的成分的MIC令人吃驚且出乎意料降低。實(shí)施例1單獨(dú)抗微生物制劑和組合中兩種抗微生物制劑最低抑制濃度的測(cè)定本實(shí)施例說(shuō)明了如何測(cè)定要結(jié)合形成根據(jù)本發(fā)明的組合物的單獨(dú)抗微生物制劑的最低抑制濃度并且也說(shuō)明了如何測(cè)定組合中抗微生物制劑最低抑制濃度。
為了測(cè)定這些抗微生物制劑單獨(dú)的最低抑制濃度和當(dāng)這些制劑組合形成根據(jù)本發(fā)明的組合物時(shí)其最低抑制濃度，使用微量滴定板將抗微生物制劑稀釋到多種濃度。
細(xì)菌培養(yǎng)物在37℃培養(yǎng)。在如下所述稀釋抗微生物制劑以前，將細(xì)菌培養(yǎng)物在2000轉(zhuǎn)/分離心形成沉淀并懸浮于磷酸緩沖液中。用分光光度計(jì)將接種物標(biāo)準(zhǔn)化到550納米下光密度在0.180-0.220之間(相當(dāng)于每毫升5.0×107克隆形成單位，CFU)。接種物被放置在一邊直至完成抗微生物制劑的稀釋。
使用無(wú)菌的聚苯乙烯96孔板以稀釋抗微生物制劑A和抗微生物制劑B的組合物。采用無(wú)菌技術(shù)，在每一個(gè)所測(cè)加樣孔中加入100微升蒸餾水?？刮⑸镏苿┑南♂尫桨阜謨蓚€(gè)部分，第一部分為抗微生物制劑A的稀釋?zhuān)诙糠譃榭刮⑸镏苿〣的稀釋。將100微升制劑A的貯備液加入每列的第一個(gè)孔中。這是基于貯備液濃度的1/2稀釋。然后將第一孔中的100微升液體轉(zhuǎn)移到下一個(gè)孔中，并依次轉(zhuǎn)移到每一個(gè)測(cè)試加樣孔中，每一次轉(zhuǎn)移將前一個(gè)加樣孔的濃度稀釋了一半。然后在每行的第一個(gè)孔中加入100微升制劑B的貯備液，并依照與制劑A相同的稀釋方法在垂直方向交叉向下稀釋。在完成制劑B的稀釋以后，將80微升與所研究細(xì)菌對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)基加入每個(gè)孔中。
滴定板的每一列的第一個(gè)孔中都加入100微升制劑A的儲(chǔ)存液，隨后將100微升液體轉(zhuǎn)移到下一個(gè)加樣孔中并依次至該列的每一個(gè)加樣孔。每一次轉(zhuǎn)移都將前一個(gè)孔的制劑A的濃度稀釋了一半。然后用制劑B在另一列重復(fù)以上操作。這兩列孔用于測(cè)定制劑A和制劑B單獨(dú)存在時(shí)的最低抑制濃度。在完成制劑A單獨(dú)和制劑B單獨(dú)的稀釋以后，將80微升與所研究細(xì)菌對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)基加入這兩列的每個(gè)孔中。
隨后將20微升接種物加入到每一個(gè)孔中，這使得第一個(gè)孔的最終稀釋度為貯備液濃度的1/4，其余孔為每次轉(zhuǎn)移的前一孔的1/2稀釋。將96孔板在根據(jù)特定微生物變化的條件下培養(yǎng)。需氧細(xì)菌粘性放線菌、變異鏈球菌和血鏈球菌在周?chē)覝貤l件下培養(yǎng)。厭氧細(xì)菌具核梭桿菌和牙齦卟啉單胞菌在10％氫氣，5％二氧化碳，其余為氮?dú)獾臍怏w條件下培養(yǎng)。
經(jīng)過(guò)48小時(shí)的培養(yǎng)后，用分光光度計(jì)測(cè)定培養(yǎng)滴定板的光密度值(OD)以測(cè)定微生物的生長(zhǎng)。對(duì)于每種制劑，分光光度計(jì)讀出值在0.05OD以下(即未檢測(cè)到微生物生長(zhǎng))的孔中，最低稀釋度的孔被認(rèn)為代表該組合。通過(guò)計(jì)算起始貯備液的濃度和96孔板中所得稀釋度，確定組合中每種制劑的最低抑制濃度。
表1中列出了96孔板中接種的特定細(xì)菌以及對(duì)應(yīng)于該微生物的培養(yǎng)基和培養(yǎng)條件。表1微生物/生長(zhǎng)培養(yǎng)基/培養(yǎng)條件
1 3.0％(重量/體積比)胰胨豆胨培養(yǎng)液，0.1％酵母提取物和999毫升蒸餾水；2 3.0％(重量/體積比)3.0％胰胨豆胨培養(yǎng)液，0.5％酵母提取物，0.05％ L-半胱氨酸，0.0005％氯化高鐵血紅素，0.00002％維生素K3和999毫升蒸餾水；3 3.0％(重量/體積比)胰胨豆胨培養(yǎng)液，0.5％酵母提取物，1.0％蛋白胨，L-半胱氨酸提取物，0.0005％氯化高鐵血紅素，0.00002％維生素K3和999毫升蒸餾水。
抗微生物制劑A和B由表2列出的物質(zhì)中選出。表2鹽酸小檗堿(BX1)香柏油(RC1)氯霉素(CR1)檸檬醛(CIT1)香茅油(CTR1)cocamidopropyl二甲基甘氨酸(TB1)香葉醇(GRA1)光果甘草提取物(GLY)扁柏酚(HK1)漿果羅勒油(JFB1)刺柏子油(JPE1)檸檬羅勒油(LMB1)檸檬油(LMO1)迷迭香油(ROF1)在以下表格中，代表性的抗微生物制劑A和B對(duì)應(yīng)于表2中列出的縮寫(xiě)識(shí)別，另外，引用表1中列出的5種微生物時(shí)采用表1中列出的縮寫(xiě)。
根據(jù)上述方案，對(duì)表2中列出的抗微生物制劑的各種組合進(jìn)行檢測(cè)，以確定那些抑制可見(jiàn)的微生物體外生長(zhǎng)的制劑的組合，并測(cè)定在組合中制劑的最低抑制濃度。另外，根據(jù)上述方案測(cè)定在兩種成分組合中所用的每個(gè)抗微生物制劑抑制可見(jiàn)的微生物體外生長(zhǎng)的最低濃度，例如MIC。所得結(jié)果總結(jié)于表3-16中。在每個(gè)表中，給出了制劑A單獨(dú)存在時(shí)的最低抑制濃度的平均值。因?yàn)楦鶕?jù)上述方案，接種并培養(yǎng)了多孔滴定板以確定關(guān)于多個(gè)組合的信息，在每個(gè)實(shí)驗(yàn)中，制劑A單獨(dú)存在時(shí)的MIC得到測(cè)定所以表3-16中列出的制劑A單獨(dú)存在時(shí)的最低抑制濃度代表這些數(shù)值的平均值。表3香柏油單獨(dú)及與抗微生物制劑B組合時(shí)的最低抑制濃度
表4鹽酸小檗堿單獨(dú)及與抗微生物制劑B組合時(shí)的最低抑制濃度
表5扁柏酚單獨(dú)及與抗微生物制劑B組合時(shí)的最低抑制濃度
表6光果甘草提取物單獨(dú)及與抗微生物制劑B組合時(shí)的最低抑制濃度
表7香葉醇單獨(dú)及與抗微生物制劑B組合時(shí)的最低抑制濃度
表8氯霉素單獨(dú)及與抗微生物制劑B組合時(shí)的最低抑制濃度
表9檸檬醛單獨(dú)及與抗微生物制劑B組合時(shí)的最低抑制濃度
表10香茅油單獨(dú)及與抗微生物制劑B組合時(shí)的最低抑制濃度
表11漿果羅勒油單獨(dú)及與抗微生物制劑B組合時(shí)的最低抑制濃度
表12刺柏子油單獨(dú)及與抗微生物制劑B組合時(shí)的最低抑制濃度
表13檸檬羅勒油單獨(dú)及與抗微生物制劑B組合時(shí)的最低抑制濃度
表14檸檬油單獨(dú)及與抗微生物制劑B組合時(shí)的最低抑制濃度
表15迷迭香油單獨(dú)及與抗微生物制劑B組合時(shí)的最低抑制濃度
表16 Cocamidopropyl-二甲基甘氨酸單獨(dú)及與抗微生物制劑B組合時(shí)其最低抑制濃度
本實(shí)例闡述了將抗微生物制劑B加入抗微生物制劑A中對(duì)抗微生物制劑A的最低抑制濃度的影響。所得結(jié)果說(shuō)明了當(dāng)與制劑B結(jié)合時(shí)制劑A的最低抑制濃度低于其單獨(dú)存在時(shí)的最低抑制濃度。實(shí)施例2單個(gè)抗微生物制劑和組合物中三種抗微生物制劑最低抑制濃度的測(cè)定本實(shí)例闡述了根據(jù)本發(fā)明配制的三種抗微生物制劑的組合如何抑制可見(jiàn)的口腔微生物的體外生長(zhǎng)。此外本實(shí)例還描述了組合中抗微生物制劑的最低抑制濃度低于這些抗微生物制劑單獨(dú)存在時(shí)和這些制劑在各種兩兩配對(duì)中的最低抑制濃度。此處描述了抗微生物制劑的大量組合以形成含三種抗微生物制劑的組合或三聯(lián)組合，每種形成的三聯(lián)組合包含香柏油、鹽酸小檗堿或扁柏酚。
所用方案是上述實(shí)施例1方案的改進(jìn)。在96孔板的二維方向上進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。為了評(píng)估三種制劑，針對(duì)第三種制劑將其中的兩種制劑配對(duì)。例如，針對(duì)不同濃度的抗微生物制劑C，在96孔板上評(píng)估不同濃度的抗微生物制劑A加抗微生物制劑B。針對(duì)另外兩種可能的配對(duì)重復(fù)此過(guò)程，即A+C與B,B+C與A。這樣，對(duì)每種三聯(lián)組合需要三次實(shí)驗(yàn)以評(píng)估三種可能的配對(duì)方式。
細(xì)菌接種物如實(shí)施例1所述的得到制備。
無(wú)菌的聚苯乙烯96孔滴定板用于稀釋抗微生物制劑A、B和C。使用無(wú)菌技術(shù)，在每一加樣孔中加入100微升蒸餾水。稀釋方案分為兩部分。首先是組合的制劑A和B的稀釋?zhuān)缓笫侵苿〤的稀釋。如下所述進(jìn)行制劑A和B的稀釋先在每列的第一個(gè)孔中加入50微升制劑A的貯備液，再將50微升制劑B的貯備液加入每列的第一個(gè)孔中。這樣每列的第一個(gè)孔中含有50微升制劑A的貯備液和50微升制劑B的貯備液。然后從每列第一個(gè)孔取100微升溶液轉(zhuǎn)移到該列的下一個(gè)加樣孔中，并依次在此列轉(zhuǎn)移下去。每次轉(zhuǎn)移是前一個(gè)孔濃度的1/2稀釋。
如下所述進(jìn)行制劑C的稀釋將100微升制劑C的貯備液加入每行的第一個(gè)孔中，然后從每行第一個(gè)孔取100微升溶液轉(zhuǎn)移到下一個(gè)孔中，并依次在此行的加樣孔中轉(zhuǎn)移下去。每次轉(zhuǎn)移是前一個(gè)孔濃度的1/2稀釋。附圖是按上述稀釋方案得到的抗微生物制劑A、B和C的濃度圖示。每種抗微生物制劑貯備液的起始濃度為每毫升2500微克。如圖所示，制劑A和制劑B的濃度在所給列中由上至下降低。制劑C的濃度在每行中由左至右降低。完成制劑C的稀釋后，至少有一列含有稀釋的制劑A和B和任何制劑C。該列孔用于測(cè)定制劑A和制劑B在組合中的最低抑制濃度，另外，將制劑C的貯備液沿一列進(jìn)行稀釋以測(cè)定制劑C單獨(dú)存在時(shí)的最低抑制濃度。向每孔中加入80微升與所研究細(xì)菌對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)基。表1列出了與細(xì)菌對(duì)應(yīng)的培養(yǎng)基。
然后將20微升接種物加入每個(gè)孔中，這導(dǎo)致第一孔中制劑A和制劑B的終濃度為貯備液濃度的1/8，制劑C是貯備液濃度的1/4稀釋。
96孔板在根據(jù)微生物變化的條件下培養(yǎng)。表1列出了微生物及其特定培養(yǎng)條件，除了表1所列細(xì)菌，還用到了直腸彎曲桿菌(CR)。CR的培養(yǎng)基為0.74％(重量/體積比)腦心浸出液，0.01％的酵母提取物，0.2％甲酸鈉，0.03％延胡索酸鈉，0.005％氯化高鐵血紅素，和999毫升蒸餾水。CR的培養(yǎng)條件為37℃，厭氧條件下48小時(shí)。然后用分光光度計(jì)測(cè)定滴定板的光密度以確定微生物的生長(zhǎng)情況。對(duì)于每種制劑，含分光光度計(jì)讀出值低于0.05OD的最低稀釋度的加樣孔被認(rèn)為代表該組合。通過(guò)計(jì)算起始貯備液的濃度和96孔板中所得稀釋度測(cè)定每種制劑的最低抑制濃度。
所得數(shù)據(jù)總結(jié)于表17-35。表17香柏油、檸檬醛和香葉醇單獨(dú)使用，兩兩配對(duì)及在組合中的最低抑制濃度
1其左側(cè)表示每種制劑單獨(dú)使用時(shí)的最低抑制濃度；2其左側(cè)表示每種制劑在第二種制劑存在的時(shí)最低抑制濃度；3其左側(cè)表示每種制劑在另外兩種制劑存在時(shí)的最低抑制濃度表18香柏油、鹽酸小檗堿和香葉醇單獨(dú)使用，兩兩配對(duì)及在組合中的最低抑制濃度
表19紅香柏油、鹽酸小檗堿和扁柏酚單獨(dú)使用，兩兩配對(duì)及在組合中的最低抑制濃度<
表20紅香柏油、鹽酸小檗堿和漿果羅勒油單獨(dú)使用，兩兩配對(duì)及在組合中的最低抑制濃度
表21香柏油、扁柏酚和香葉醇單獨(dú)使用，兩兩配對(duì)及在組合中的最低抑制濃度
表22香柏油、扁柏酚和檸檬醛單獨(dú)使用，兩兩配對(duì)及在組合中的最低抑制濃度
表23香柏油、扁柏酚和漿果羅勒油單獨(dú)使用，兩兩配對(duì)及在組合中的最低抑制濃度
表24香柏油、鹽酸小檗堿和檸檬醛單獨(dú)使用，兩兩配對(duì)及在組合中的最低抑制濃度
表25鹽酸小檗堿、扁柏酚和香葉醇單獨(dú)使用，兩兩配對(duì)及在組合中的最低抑制濃度
表26鹽酸小檗堿、扁柏酚和漿果羅勒油單獨(dú)使用，兩兩配對(duì)及在組合中的最低抑制濃度
表13檸檬羅勒油單獨(dú)及與抗微生物制劑B組合時(shí)的最低抑制濃度
表14檸檬油單獨(dú)及與抗微生物制劑B組合時(shí)的最低抑制濃度
表28扁柏酚、香葉醇和檸檬醛單獨(dú)使用，兩兩配對(duì)及在組合中的最低抑制濃度<
表29香柏油、香葉醇和漿果羅勒油單獨(dú)使用，兩兩配對(duì)及在組合中的最低抑制濃度
表30香柏油、漿果羅勒油和檸檬醛單獨(dú)使用，兩兩配對(duì)及在組合中的最低抑制濃度
表31鹽酸小檗堿、漿果羅勒油和檸檬醛單獨(dú)使用，兩兩配對(duì)及在組合中的最低抑制濃度
表32鹽酸小檗堿、漿果羅勒油和香葉醛單獨(dú)使用，兩兩配對(duì)及在組合中的最低抑制濃度
表33鹽酸小檗堿、檸檬醛和香葉醇單獨(dú)使用，兩兩配對(duì)及在組合中的最低抑制濃度
表34扁柏酚、漿果羅勒油和檸檬醛單獨(dú)使用，兩兩配對(duì)及在組合中的最低抑制濃度
表35扁柏酚、漿果羅勒油和香葉醇單獨(dú)使用，兩兩配對(duì)及在組合中的最低抑制濃度
<p>本實(shí)施例舉例說(shuō)明抗微生物制劑A、B和C在組合中的最低抑制濃度低于在缺少其它抗微生物制劑時(shí)單獨(dú)抗微生物制劑的最低抑制濃度。實(shí)施例3牙膏配方以下實(shí)施例描述了根據(jù)本發(fā)明配制的含抗微生物制劑A、B和C的牙膏。表36配方18-12∶0.2％香柏油，0.1％漿果羅勒油,0.02％檸檬醛(重量比)
表37配方18-36∶0.4％香柏油，0.01％小檗堿(重量比)
表38配方18-35∶0.4％香柏油，0.1％香葉醇和0.01％小檗堿(w/w
表39配方18-37∶0.4％香柏油，0.1％香葉醇和0.05％檸檬醛(重量比)
卡波姆是指由丙稀酸與丙稀基蔗糖交聯(lián)組成的多聚體，所得到的如CARBOPOL940。CARBOPOL904是B.F.Goodrich公司的產(chǎn)品，SYLODENT750和SYLODENT15是硅膠(二氧化硅)。SYLODENT可從W.R.Grace&amp;Co.-Conn.Davison Chemical Division購(gòu)買(mǎi)。表40配方18-58∶0.4％香柏油，0.1％香葉醇(重量比)
泊洛沙姆407可從BASF公司得到，商標(biāo)為PLURONICF127。PLURONICF127是一種非離子的雙功能嵌斷共聚物，在伯羥基團(tuán)上終止，分子量在1,000至約15,000之間變動(dòng)。它們包括丙二醇的聚氧乙烯衍生物。
在真空混合器中配制如上配制物，抽真空的同時(shí)，加入去離子水并分散卡波姆，當(dāng)卡波姆很好混勻后，加入氫氧化鈉。在另一個(gè)容器中，將70％的山梨醇和泊洛沙姆加熱并混勻。隨后將泊洛沙姆溶液加入真空混合器并與卡波姆混合物混合。將黃原膠加入甘油中，將所得溶液加入真空混合器并摻入混合物中。然后將鹽類(lèi)加入真空混合器中，緩慢混入二氧化硅。隨后加入活性成分、香味劑、十二烷基磺酸鈉及著色劑，使之混勻直至完全分散。實(shí)施例4用戶(hù)認(rèn)可本實(shí)施例說(shuō)明了根據(jù)本發(fā)明配制的含抗微生物制劑A、B和選擇性地C的組合的牙膏的用戶(hù)認(rèn)可程度。
對(duì)表36-40列出的配方進(jìn)行用戶(hù)認(rèn)可評(píng)估。配方5-99是一種商品牙膏，名為L(zhǎng)isterineCool Mint gel。
對(duì)一組約20人進(jìn)行偏愛(ài)研究。每人發(fā)給一管牙膏配制物并使用一周。參與者在周末填寫(xiě)一個(gè)問(wèn)卷表，結(jié)果總結(jié)于下表41中。評(píng)分范圍為1-10，其中1表示差，10表示好。記錄并計(jì)算評(píng)分的平均值。表41用戶(hù)評(píng)價(jià)
本實(shí)例說(shuō)明含有根據(jù)本發(fā)明的抗微生物制劑的配制物的用戶(hù)總滿(mǎn)意度，優(yōu)于商業(yè)產(chǎn)品ListerineCool Mint gel的用戶(hù)總滿(mǎn)意度。實(shí)施例5光果甘草的乙醇提取將25克光果甘草植物材料粉未與250克95∶5的乙醇/水混合物組合，室溫下將混合物攪拌過(guò)夜，在布氏漏斗中用Whatman4號(hào)濾紙濾除混合物中的固體，隨后用Whatman5號(hào)濾紙?jiān)诓际下┒分羞M(jìn)一步除去固體。用Whatman 1μm濾膜在布氏漏斗中除去其它的固體。最后用真空泵裝置和0.2微米濾膜使溶液澄清。澄清溶液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器濃縮得到固體。大約得到2.5克赭色固體，為光果甘草粗取物。
雖然本文說(shuō)明并描述了發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案，但可預(yù)期在不超出本發(fā)明的精神和范圍的情況下可進(jìn)行各種修改。
權(quán)利要求
1．一種抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的治療組合物，包含有效抑制細(xì)菌生長(zhǎng)含量的抗微生物制劑A和抗微生物制劑B，制劑A和B選自小檗堿、香柏油、氯霉素、檸檬醛、香茅油、cocamidopropyl-二甲基甘氨酸、光果甘草提取物、扁柏酚、漿果羅勒油、刺柏子油、檸檬羅勒油，檸檬油和迷迭香油。
2．根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中當(dāng)制劑B存在時(shí)，制劑A的最低抑制濃度低于制劑A單獨(dú)存在時(shí)的最低抑制濃度。
3．根據(jù)權(quán)利要求2所述的組合物，其中當(dāng)制劑A存在時(shí)，制劑B的最低抑制濃度低于制劑B單獨(dú)存在時(shí)的最低抑制濃度。
4．根據(jù)權(quán)利要求3所述的組合物，其中細(xì)菌為選自粘性放線菌，具核梭桿菌，牙齦卟啉單胞菌，變異鏈球菌和血鏈球菌的口腔致病細(xì)菌。
5．根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中制劑A為香柏油。
6．根據(jù)權(quán)利要求5所述的組合物，其中制劑B選自小檗堿、氯霉素、檸檬醛、cocamidopropyl-二甲基甘氨酸、光果甘草提取物、扁柏酚、漿果實(shí)羅勒油和迷迭香油。
7．根據(jù)權(quán)利要求6所述的組合物，其中制劑B選自小檗堿、氯霉素、檸檬醛、cocamidopropyl-二甲基甘氨酸和光果甘草提取物。
8．根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中制劑A為小檗堿。
9．根據(jù)權(quán)利要求8所述的組合物，其中制劑B選自氯霉素、檸檬醛、光果甘草提取物、扁柏酚、漿果羅勒油、刺柏子油和檸檬羅勒油。
10．根據(jù)權(quán)利要求9所述的組合物，其中制劑B選自氯霉素、光果甘草提取物、檸檬羅勒油。
11．根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中制劑A為扁柏酚。
12．根據(jù)權(quán)利要求11所述的組合物，其中制劑B選自氯霉素、檸檬醛、cocamidopropyl-二甲基甘氨酸、光果甘草提取物、刺柏子油和檸檬羅勒油。
13．根據(jù)權(quán)利要求12所述的組合物，其中制劑B選自氯霉素、cocamidopropyl-二甲基甘氨酸和光果甘草提取物。
14．根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其中制劑A為光果甘草提取物。
15．根據(jù)權(quán)利要求14所述的組合物，其中制劑B選自氯霉素、cocamidopropyl-二甲基甘氨酸、漿果羅勒油和檸檬羅勒油。
16．根據(jù)權(quán)利要求15所述的組合物，其中制劑B選自氯霉素、cocamidopropyl-二甲基甘氨酸。
17．根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，進(jìn)一步包含不同于抗微生物制劑A和抗微生物制劑B的抗微生物制劑C，制劑C以有效抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的含量存在，并選自小檗堿、香柏油、氯霉素、檸檬醛、香茅油、cocamidopropyl-二甲基甘氨酸、光果甘草提取物、扁柏酚、漿果羅勒油、刺柏子油，檸檬羅勒油、檸檬油和迷迭香油。
18．一種抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的組合物，包含含香葉醇的抗微生物制劑A；和選自小檗堿、香柏油、氯霉素、檸檬醛、香茅油、cocamidopropyl-二甲基甘氨酸、光果甘草提取物、扁柏酚、漿果羅勒油、刺柏子油、檸檬羅勒油、檸檬油和迷迭香油的抗微生物制劑B。
19．根據(jù)權(quán)利要求18所述的組合物，進(jìn)一步包含不同于抗微生物制劑A和抗微生物制劑B的抗微生物制劑C，選自小檗堿、香柏油、氯霉素、檸檬醛、香茅油、cocamidopropyl-二甲基甘氨酸、光果甘草提取物、扁柏酚、漿果羅勒油、刺柏子油、檸檬羅勒油、檸檬油和迷迭香油。
20．一種口腔衛(wèi)生產(chǎn)品，包含根據(jù)權(quán)利要求18所述的組合物。
21．一種表面抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的方法，該方法包括表面接觸根據(jù)權(quán)利要求18所述的組合物的步驟。
22．一種口腔衛(wèi)生產(chǎn)品，包含以有效抑制細(xì)菌生長(zhǎng)含量的抗微生物制劑A和抗微生物制劑B，其中制劑A和B選自小檗堿、香柏油、氯霉素、檸檬醛、香茅油、cocamidopropyl-二甲基甘氨酸、光果甘草提取物、扁柏酚、漿果羅勒油、刺柏子油、檸檬羅勒油，檸檬油和迷迭香油。
23．根據(jù)權(quán)利要求22所述的口腔衛(wèi)生產(chǎn)品，其中當(dāng)制劑B存在時(shí)，制劑A的最低抑制濃度低于制劑A單獨(dú)存在時(shí)的最低抑制濃度。
24．根據(jù)權(quán)利要求23所述的口腔衛(wèi)生產(chǎn)品，其中當(dāng)制劑A存在時(shí)，制劑B的最低抑制濃度低于制劑B單獨(dú)存在時(shí)的最低抑制濃度。
25．根據(jù)權(quán)利要求24所述的口腔衛(wèi)生產(chǎn)品，其中細(xì)菌為選自粘性放線菌，具核梭桿菌，牙齦卟啉單胞菌，變異鏈球菌和血鏈球菌的口腔致病細(xì)菌。
26．根據(jù)權(quán)利要求22所述的口腔衛(wèi)生產(chǎn)品，其中制劑A選自香柏油、小檗堿、扁柏酚和光果甘草提取物。
27．根據(jù)權(quán)利要求22所述的口腔衛(wèi)生產(chǎn)品，進(jìn)一步包含不同于抗微生物制劑A和B的抗微生物制劑C，制劑C以有效抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的含量存在，并選自小檗堿、香柏油、氯霉素、檸檬醛、香茅油、cocamidopropyl-二甲基甘氨酸、光果甘草提取物、扁柏酚、漿果羅勒油、刺柏子油、檸檬羅勒油、檸檬油和迷迭香油。
28．一種表面抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的方法，包括以下步驟用以有效抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的含量包含抗微生物制劑A和抗微生物制劑B的組合物進(jìn)行表面接觸，其中制劑A和B選自小檗堿、香柏油、氯霉素、檸檬醛、香茅油、cocamidopropyl-二甲基甘氨酸、光果甘草提取物、扁柏酚、漿果羅勒油、刺柏子油、檸檬羅勒油，檸檬油和迷迭香油。
29．根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中當(dāng)制劑B存在時(shí)，制劑A的最低抑制濃度低于制劑A單獨(dú)存在時(shí)的最低抑制濃度。
30．根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，其中當(dāng)制劑A存在時(shí)，制劑B的最低抑制濃度低于制劑B單獨(dú)存在時(shí)的最低抑制濃度。
31．根據(jù)權(quán)利要求30所述的方法，其中細(xì)菌為選自粘性放線菌，具核梭桿菌，牙齦卟啉單胞菌，變異鏈球菌和血鏈球菌的口腔致病細(xì)菌。
32．根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中制劑A選自香柏油、小檗堿、扁柏酚和光果甘草提取物。
33．根據(jù)權(quán)利要求28所述的方法，其中含抗微生物制劑A和B的組合物進(jìn)一步包含不同于抗微生物制劑A和B的抗微生物制劑C，制劑C以有效抑制細(xì)菌生長(zhǎng)的含量存在，并選自小檗堿、香柏油、氯霉素、檸檬醛、香茅油、cocamidopropyl-二甲基甘氨酸、光果甘草提取物、扁柏酚、漿果羅勒油、刺柏子油、檸檬羅勒油、檸檬油和迷迭香油。
34．一種降低抗微生物制劑A的最低抑制濃度的方法，其中制劑A選自小檗堿、香柏油、氯霉素、檸檬醛、香茅油、cocamidopropyl二甲基甘氨酸、香葉醇、光果甘草提取物、扁柏酚、漿果羅勒油、刺柏子油、檸檬羅勒油，檸檬油和迷迭香油，該方法包括將制劑A與一種不同于制劑A的抗微生物制劑B結(jié)合，制劑B選自小檗堿、香柏油、氯霉素、檸檬醛、香茅油、cocamidopropyl二甲基甘氨酸、香葉醇、光果甘草提取物、扁柏酚、漿果羅勒油、刺柏子油、檸檬羅勒油，檸檬油和迷迭香油，當(dāng)制劑B存在時(shí)，制劑A的最低抑制濃度低于制劑A單獨(dú)存在時(shí)的最低抑制濃度。
35．根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其中將制劑A與制劑B的結(jié)合的步驟導(dǎo)致制劑A的最低抑制濃度協(xié)同性降低。
全文摘要
包含至少兩種抗微生物制劑的組合物,表現(xiàn)了相對(duì)于其組成制劑單獨(dú)所測(cè)的最低抑制濃度更低的最低抑制濃度。這種組合物可用作治療制劑,如在口腔衛(wèi)生產(chǎn)品中使用。
文檔編號(hào)A61K8/97GK1225585SQ98800567
公開(kāi)日1999年8月11日 申請(qǐng)日期1998年4月1日 優(yōu)先權(quán)日1997年4月4日
發(fā)明者L·M·艾耶, J·R·斯考特, D·F·懷特菲爾德 申請(qǐng)人:奧普蒂瓦公司