專利名稱：非腸道給藥的穩(wěn)定的生長(zhǎng)激素的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種含有生長(zhǎng)激素(也稱為促生長(zhǎng)素)和芳香醛的復(fù)合物。更具體地說，本發(fā)明涉及一種豬生長(zhǎng)激素(PST)-芳香醛復(fù)合物以及生產(chǎn)一種可改善豬的飼養(yǎng)率(feedefficiency)并使PST持續(xù)釋放的穩(wěn)定的PST組合物的方法。
當(dāng)每天以顯著提高飼養(yǎng)率(即飲料與增量比)的基量(basis)給豬使用豬生長(zhǎng)激素(PST)時(shí)，與對(duì)照動(dòng)物相比，服藥動(dòng)物進(jìn)食較少而體重增加卻相同或較高。然而，由于給一大批動(dòng)物中的每只提供該藥物需要很高的代價(jià)和大量的時(shí)間，每天以基量給豬服藥是很麻煩的。因此，使用單劑量并在一個(gè)較長(zhǎng)時(shí)期內(nèi)釋放PST會(huì)更為方便。服用PST最容易的方法似乎是放入飼料中。然而，象大多蛋白質(zhì)和大分子藥物一樣，PST口服不被生物吸收。一般地，文獻(xiàn)中沒有描述過經(jīng)口服途徑提供蛋白質(zhì)類和肽類的重要性。在歐州申請(qǐng)0177342中公開了使用水楊性酸鹽和礦物油類來提高這些藥物的口腔釋放。美國(guó)專利4，548，922，還公開了使用甾類化合物增強(qiáng)劑如梭鏈孢酸。
非腸道給藥，例如植入劑已用于其它大分子藥物而得到了如美國(guó)專利4，666，704號(hào)中所公開的持續(xù)性釋放效果。PST是一種不穩(wěn)定的蛋白，易被酶解和水解。它自身能夠反應(yīng)并容易被蛋白酶裂解。的確，PST植入劑的不穩(wěn)定性被認(rèn)為是因在植入部位發(fā)生炎性反應(yīng)而生成蛋白酶的緣故(美國(guó)專利5，015，627)。因?yàn)檫@種不穩(wěn)定性，給豬使用PST，至今為止，即使真正成功，也僅是勉強(qiáng)地(如見美國(guó)專利4，837，381;4，857，505;5，045，312，和歐州申請(qǐng)0193917和0458064)。
商業(yè)上需要改進(jìn)具有生長(zhǎng)激素活性的大分子藥物非腸道給藥的持續(xù)釋放植入劑。
所以，本發(fā)明一個(gè)目的就是提供一種在動(dòng)物體內(nèi)長(zhǎng)時(shí)期穩(wěn)定并釋放生物活性的生長(zhǎng)激素的組合物及制備方法。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種PST的穩(wěn)定形式，它能在豬體內(nèi)長(zhǎng)時(shí)期釋放并使生物利用度和飼養(yǎng)率得到改善。
按照本發(fā)明，已發(fā)現(xiàn)當(dāng)PST與一種芳香醛反應(yīng)而形成一種復(fù)合物時(shí)，可提高動(dòng)物的飼養(yǎng)率(即，增重以及飼料與增重比)。這種新的復(fù)合物不僅具有與PST相同的生物活性，也在一個(gè)持續(xù)時(shí)期內(nèi)提供了類似于每天注射PST的效力。
如上所述，已進(jìn)行了許多嘗試來制備一種PST產(chǎn)品，使它能克服上述所提到的不足并能成功地給豬使用。例如，美國(guó)專利5，015，627公開了PST和亮肽素(一種三肽醛)以干粉形式混合，制粒并由該顆粒形成植入劑。這些植入劑是無效的。
意外地發(fā)現(xiàn)，當(dāng)將PST和一種本發(fā)明的芳香醛溶于水中并從該溶液中分離復(fù)合物，所得到的結(jié)晶產(chǎn)物能使該生長(zhǎng)激素持續(xù)釋放。該復(fù)合物可以從水溶液中采用現(xiàn)有技術(shù)公知的任何方法來分離，例如，濃縮、蒸發(fā)、或冷凍干燥。由該復(fù)合物制備植入劑并給予豬，可使血漿PST水平持續(xù)長(zhǎng)達(dá)7天。
該復(fù)合物中所存在的和本發(fā)明方法所用的芳香醛優(yōu)選由下式表示
其中X是CHO或CH2CHO，而R1和R2各自是氫、羥基、甲氧基、乙氧基、甲基或乙基。
體現(xiàn)在復(fù)合物和本發(fā)明方法中優(yōu)選的芳香醛是式Ⅰ的化合物，其中X是CHO而R1和R2各自為羥基或甲氧基。體現(xiàn)在復(fù)合物和本發(fā)明方法中最佳的芳香醛是2-羥基-3-甲氧基苯甲醛。該醛也常稱為鄰一香草醛。
制備本發(fā)明穩(wěn)定的PST復(fù)合物所采用的芳香醛及其制備方法是現(xiàn)有技術(shù)中公知的。
在本發(fā)明優(yōu)選體現(xiàn)的復(fù)合物中也含有一種動(dòng)物生長(zhǎng)激素，例如，人、牛、鳥、豬、馬或羊的生長(zhǎng)激素。有利地，該復(fù)合物和方法適用于豬的生長(zhǎng)激素。
最有利地，本發(fā)明的復(fù)合物含有2-羥基-3-甲氧基苯甲醛和豬生長(zhǎng)激素。
式Ⅰ的芳香醛可以約0.5%到約10%(按重量計(jì))的含量存在于該復(fù)合物中。優(yōu)選地，該芳香醛以約0.5%到約5.0%(按重量計(jì))存在。
本發(fā)明的式Ⅰ芳香醛和PST復(fù)合物是如下制備的實(shí)施例1豬生長(zhǎng)激素99.0%w/w式Ⅰ的芳香醛1.0%w/w將該P(yáng)ST和醛溶于水中，并在39℃下反應(yīng)6到24小時(shí)，慢慢將水分離并把所得到的產(chǎn)物懸浮于乙醇中。過濾該懸浮液并在一個(gè)真空箱中過夜干燥該沉淀，得到干燥的晶體。
把該晶體復(fù)合物用一臺(tái)3/16英寸沖壓機(jī)和沖模制成35mg小丸(植入劑)并壓制約500個(gè)PST實(shí)施例2豬生長(zhǎng)激素99.0w/w2-羥基-3-甲氧基苯甲醛1.0%w/w按實(shí)施例1中的方法制備該復(fù)合物和植入劑。
實(shí)施例3豬生長(zhǎng)激素99.0w/w4-羥基-3-甲氧基苯甲醛1.0%w/w實(shí)施例4豬生長(zhǎng)激素99.0w/w4-甲氧基苯甲醛1.0%w/w按照實(shí)施例1的方法制備上述復(fù)合物。
小丸或植物劑的形狀并不重要，任何適于植入的形狀都可使用。除該生長(zhǎng)激素和該芳香醛外，本發(fā)明組合物中包括其它藥物賦形劑也是有益的。例如，該植入劑可以包含潤(rùn)滑劑，如，硬脂酸鎂或硬脂酸;填充劑，如，蔗糖或乳糖以及粘合劑，如阿拉伯膠、聚乙烯吡咯烷酮或明膠。
本發(fā)明組合物可以采用任何已知植入的方法非腸道給予動(dòng)物，如皮下、肌肉內(nèi)、腹膜內(nèi)。優(yōu)選地，使用任一公知技術(shù)給動(dòng)物皮下植入該植入劑組合物。
用此方法處理的動(dòng)物可以包括(并不局限于此)哺乳動(dòng)物如牛、羊、山羊、豬等，和鳥如家禽。
以下方法是用來測(cè)定血漿PST水平，耗食量，平均每日增量以及飼料與增量比。
把豬圈在谷倉中并于每圈有7-8頭豬的圈中適應(yīng)3-4周。在各圈中，豬都有進(jìn)入熱棚和隨意進(jìn)食和飲水的機(jī)會(huì)。
當(dāng)這些大多數(shù)豬達(dá)到約75Kg重時(shí)，統(tǒng)計(jì)比較其體重并分為4個(gè)不同的處理組，每組9頭豬。起始日計(jì)為0天，記錄這天的體重，取對(duì)照血樣并引入植入劑。在21天結(jié)束時(shí)，停止這些豬的實(shí)驗(yàn)。
使用一種商業(yè)上出售的家畜植入注射器給這些豬的耳后皮下注入1個(gè)小丸(取決于治療組)并用70%EtoH擦凈給藥部位。在頸部用11/2英寸16g針頭以5mg/頭/天給豬每天注射。如下處理;
1.對(duì)照-假植入劑。
2.PST-每天注射-(5mg/頭/天)3.PST-鄰-香草醛植入劑-1小丸(35mgPST)4.PST-亮肽素植入劑-1小丸(35mgPST)。
用一只有11/2英寸針頭的Vacutainer從捕獲的豬頸脈抽取血樣。把該血液凝固，離心并分出血漿。冷凍該血漿試樣為日后測(cè)定PST所用。
耗食量(feedConsumption)在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中所有的豬得到EnhancedFinisherdiet＃634。在0天，給喂料器中加入兩袋飼料并稱得起始重量。每天檢查該喂料器并按需(不允許喂料器空著)加入一袋預(yù)先稱重的飼料。記下從圈中除去所有豬當(dāng)天的喂料器的最終重量。用初始重量減去最終重量并與所加的總飼料相加得每圈的總耗食量。
喂料器的初始重量(－ 喂料器的最終重量)/(總量)(＋ 所加飼料袋的總重量)/(每圈的總耗食量)在0天和整個(gè)實(shí)驗(yàn)中的七天間隔時(shí)分別給這些豬稱重(用干克表示)。每天增量總平均值是從這些豬的最終重量減去在0天的初始重量并除以實(shí)驗(yàn)的天數(shù)得到的。
在實(shí)驗(yàn)過程中每圈的飼料與增量比是由每圈所有耗食量相加并除以每圈的總的體重增加量得到的。
下表顯示了平均每天的增量(ADG)和飼料與增量比的結(jié)果表1平均每天與對(duì)照相比飼料與增量對(duì)照PST處理組增量(Kg)增長(zhǎng)的百分率的比的百分率對(duì)照(無PST)0.71～4.4～5mg/頭/天0.86212.739鄰-香草醛/PST(1小丸)0.7911.93.5221(35mg)亮肽素/PST(1小丸)0.70-1.44.120(35mg)血漿中PST水平結(jié)果每天注射PST24小時(shí)后(如果有的話)血漿PST水平是非常小的。相對(duì)應(yīng)的，本發(fā)明小丸植入后，表現(xiàn)出一個(gè)持續(xù)的血漿PST水平。
以上結(jié)果清楚表明當(dāng)用植入法給予豬鄰-香草醛/PST復(fù)合物時(shí)，在這些豬中所觀察的平均每日增量和飼料與增量比較對(duì)照組都有所增加。
而且，該結(jié)果表明在此PST中不需加入蛋白酶抑制劑。我們現(xiàn)在看到一種非蛋白酶抑制劑(鄰-香草醛)以一種積極的方式與PST相互作用而能夠在21天期間內(nèi)維持功效。
按照本發(fā)明的方法包括一個(gè)足以延長(zhǎng)PST血液水平并提高飼養(yǎng)率的量的上述PST-芳香醛復(fù)合物非腸道給予動(dòng)物體。該劑量取決于好幾種因素，例如，動(dòng)物的大小和所需的效果。至于給予豬，該復(fù)合物優(yōu)選為10mg到約500mg的用量，更好地為約30mg到約75mg，以約7到約42天的間隔給予相同劑量。
權(quán)利要求
1.一種使生長(zhǎng)激素持續(xù)釋放的方法，它包括非腸道給予動(dòng)物足以產(chǎn)生所述釋放量的生長(zhǎng)促進(jìn)劑，該生長(zhǎng)促進(jìn)劑是一種生長(zhǎng)激素和一種具有下式的芳香醛的復(fù)合物
其中X是CHO或CH2CHO，而R1和R2各自是氫、羥基、甲氧基、乙氧基、甲基或乙基。
2.權(quán)利要求1的方法，其中X是CHO，而R1和R2各自是羥基或甲氧基，且生長(zhǎng)激素選自豬、人、牛、鳥、馬或羊的生長(zhǎng)激素。
3.權(quán)利要求2的方法，其中醛是2-羥基-3-甲氧基苯甲醛而生長(zhǎng)激素是豬生長(zhǎng)激素。
4.權(quán)利要求1的方法，其中芳香醛在復(fù)合物中存在的量是從約0.5%到約10%(按重量計(jì))。
5.權(quán)利要求1的方法，其中給予復(fù)合物的量是從約10mg到約500mg。
6.權(quán)利要求5的方法，其中以約7到約42天的間隔進(jìn)行給藥。
7.權(quán)利要求1的方法，其中復(fù)合物是以一種植入劑皮下給藥。
8.一種能夠使生長(zhǎng)激素持續(xù)釋放的生長(zhǎng)促進(jìn)復(fù)合物，它含有一種生長(zhǎng)激素和一種具有下式的芳香醛
其中X是CHO或CH2CHO，而R1和R2各自是氫、羥基、甲氧基、乙氧基、甲基或乙基。
9.權(quán)利要求8的復(fù)合物，其中X是CHO而R1和R2各自是羥基或甲氧基且生長(zhǎng)激素選自豬、人、牛、鳥、馬和羊生長(zhǎng)激素。
10.權(quán)利要求9的復(fù)合物，其中醛是2-羥基-3-甲氧基苯甲醛而生長(zhǎng)激素是豬生長(zhǎng)激素。
11.一種提高動(dòng)物飼養(yǎng)率的方法，它包括給予動(dòng)物體內(nèi)足以產(chǎn)生所述功效的量的權(quán)利要求8的復(fù)合物。
12.權(quán)利要求11的方法，其中復(fù)合物是豬生長(zhǎng)激素和2-羥基-3-甲氧基苯甲醛。
13.權(quán)利要求11的方法，其中復(fù)合物的使用量是從約10mg到約500mg。
14.權(quán)利要求13的方法，其中以約7到42天的間隔進(jìn)行給藥。
15.權(quán)利要求11的方法，其中芳香醛是以從約0.5%到約10%(按重量計(jì))的量存在于復(fù)合物中。
全文摘要
一種含有生長(zhǎng)激素和芳香醛的穩(wěn)定的復(fù)合物。特別是，該復(fù)合物含有豬生長(zhǎng)激素和一種取代的苯甲醛并提供一種持續(xù)釋放該生長(zhǎng)激素且改善動(dòng)物飼養(yǎng)率的方法。
文檔編號(hào)A61P15/00GK1085804SQ93108908
公開日1994年4月27日 申請(qǐng)日期1993年6月11日 優(yōu)先權(quán)日1992年6月11日
發(fā)明者M·T·克拉克, R·J·蓋尤里克, S·K·路易斯, M·C·默雷, M·J·雷蒙 申請(qǐng)人:史密絲克萊恩比徹姆公司