本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥，尤其涉及干預circtacc3形成r-loop結(jié)構(gòu)的試劑在制備治療mash-hcc藥物中的應用。

背景技術(shù)：

1、r-loop指基因組中，dna:rna雜交鏈和游離單鏈dna共同形成的一種特殊結(jié)構(gòu)。隨著基因組學研究的進展，越來越多證據(jù)揭示了r-loop結(jié)構(gòu)在基因表達、染色質(zhì)結(jié)構(gòu)調(diào)節(jié)、dna損傷應答(dnadamage?response,ddr)和dna復制中發(fā)揮著至關(guān)重要的作用。

2、根據(jù)產(chǎn)生機制的差異，r-loop可分為生理和病理兩種形式。其中病理性r-loop被廣泛報道可導致dna損傷以及基因組不穩(wěn)定性的發(fā)生。病理性r-loop的積累以及調(diào)控與癌癥的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)，被認為是腫瘤分子診斷和治療的潛在靶點。

3、非編碼rna(non-coding?rna，ncrna)在多種生物學過程中發(fā)揮重要作用。環(huán)狀rna(circular?rnas,circrnas)是一種在細胞中豐富且穩(wěn)定的ncrna。circrnas并非均勻分布于整個細胞，而是具有與其作用相匹配的特定亞細胞定位。目前對于核定位的circrnas的功能仍然相對研究較少，之前有研究報道白血病細胞基因組中存在著circrna形成的r-loop(circr-loop)結(jié)構(gòu)。然而，目前對于實體瘤細胞中是否同樣存在circr-loop結(jié)構(gòu)，以及其在實體瘤發(fā)生發(fā)展過程中的生物學功能目前仍有待研究。

4、由于肥胖和代謝綜合征患病率的不斷上升，過去10年間，代謝相關(guān)脂肪性肝病(metabolic-associated?steatotic?liver?disease，masld)的全球發(fā)病率上升至20-25％。代謝功能障礙相關(guān)脂肪性肝炎(metabolic?dysfunction-associatedsteatohepatitis，mash)是masld的較嚴重表現(xiàn)，每年導致約2％的肝細胞癌(hepatocellular?carcinoma，hcc)；到2030年，mash預計成為hcc的主要病因。與其他病因相比，mash相關(guān)的hcc(mash-hcc)具有獨特的分子和免疫特征，其中肝細胞中過量脂質(zhì)引起的脂質(zhì)過載誘導氧化應激、復制應激和核苷酸池失衡，進一步促進dna損傷和突變積累，是mash-hcc的重要癌前事件。然而，目前對于mash-hcc中是否存在circr-loop，其與mash-hcc惡性進展過程中的dna損傷和突變積累是否存在機制上的關(guān)聯(lián)仍有待探究。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供干預circtacc3形成r-loop結(jié)構(gòu)的試劑在制備治療mash-hcc藥物中的應用。

2、為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案是：

3、提供干預circtacc3形成r-loop結(jié)構(gòu)的試劑在制備治療mash-hcc藥物中的應用。

4、進一步地，所述試劑包括強力霉素誘導性表達rnase?h1的載體，以及針對circtacc3特異性序列設(shè)計的crispr-cas9引導rna序列。

5、進一步地，所述治療mash-hcc藥物還包括藥學上可接受的輔料。

6、進一步地，所述試劑通過干預circtacc3形成r-loop結(jié)構(gòu)，可以抑制mash-hcc腫瘤細胞在脂質(zhì)過載環(huán)境中的生存。

7、本發(fā)明采用以上技術(shù)方案，與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有如下技術(shù)效果：

8、本發(fā)明證實了：人類mash-hcc的組織、類器官模型以及脂質(zhì)過載誘導的hcc模型中均驗證存在著circr-loop這一結(jié)構(gòu)，并進一步證明了具有細胞核內(nèi)定位特征的circtacc3可以在dna雙鏈斷裂(dnadouble-strandbreaks，dsbs)位點形成r-loop結(jié)構(gòu)，從而促進mash-hcc腫瘤細胞在脂質(zhì)過載環(huán)境中的生存；而針對r-loop結(jié)構(gòu)的干預可以顯著抑制mash-hcc腫瘤細胞在脂質(zhì)過載環(huán)境中的生存；為治療mash-hcc提供了新的靶點和用藥策略。

技術(shù)特征：

1.干預circtacc3形成r-loop結(jié)構(gòu)的試劑在制備治療mash-hcc藥物中的應用。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應用，其特征在于，所述試劑包括強力霉素誘導性表達rnaseh1的載體，以及針對circtacc3特異性序列設(shè)計的crispr-cas9引導rna序列。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應用，其特征在于，所述治療mash-hcc藥物還包括藥學上可接受的輔料。

4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應用，其特征在于，所述試劑通過干預circtacc3形成r-loop結(jié)構(gòu)，可以抑制mash-hcc腫瘤細胞在脂質(zhì)過載環(huán)境中的生存。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明公開了干預circTACC3形成R?loop結(jié)構(gòu)的試劑在制備治療MASH?HCC藥物中的應用。本發(fā)明證實了：人類MASH?HCC的原位癌組織、類器官模型以及脂質(zhì)過載條件下的HCC細胞模型中均驗證存在著circR?loop這一結(jié)構(gòu)，并進一步證明了具有細胞核內(nèi)定位特征的circTACC3可以在DNA雙鏈斷裂位點形成R?loop結(jié)構(gòu)，從而促進MASH?HCC腫瘤細胞在脂質(zhì)過載環(huán)境中的惡性增殖和適應性生存，最終促進腫瘤發(fā)生發(fā)展；而針對R?loop結(jié)構(gòu)的干預可以顯著抑制MASH?HCC腫瘤細胞的惡性增殖和適應性生存；為治療MASH?HCC提供了新的靶點和用藥策略。

技術(shù)研發(fā)人員：王紅陽,李亮,付靖波,危晏平,邢茂迎
受保護的技術(shù)使用者：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學第三附屬醫(yī)院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/26