本發(fā)明公開了厚樸酚的一種新的用途，進(jìn)一步講涉及厚樸酚在制備ndm-1酶抑制劑中的醫(yī)用用途，屬于醫(yī)學(xué)制藥技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)：

細(xì)菌耐藥性的不斷增加，造成了許多治療上較為困難的細(xì)菌性感染病例的出現(xiàn)，其中以產(chǎn)超廣譜β內(nèi)酰胺酶的革蘭氏陰性菌感染所導(dǎo)致的病情較為嚴(yán)重，常規(guī)情況下人們使用碳青霉烯類抗生素對產(chǎn)超β內(nèi)酰胺酶的革蘭氏陰性菌感染進(jìn)行治療，但是幾乎耐所有抗生素的超級耐藥菌如ndm-1等的出現(xiàn)，導(dǎo)致治療失敗和較高的死亡率，給治療院內(nèi)感染、特別是治療icu感染帶來了更大的壓力。表達(dá)ndm-1的細(xì)菌對臨床常用的絕大多數(shù)抗生素均具有耐藥性，如美羅培南、亞胺培南、頭孢噻肟、頭孢吡咯、環(huán)丙沙星、阿米卡星等。目前尚無有效的ndm-1抑制劑的報(bào)道，因此，開發(fā)新的安全有效的藥物具有十分重要的意義。

厚樸酚是傳統(tǒng)中藥厚樸干樹皮及果實(shí)提取物中一種主要的活性成分，是中醫(yī)常用的單味藥。厚樸酚具有活血化瘀、消除腹脹、散濕退熱等多種功效。作為新型的天然功效因子，厚樸酚具有鎮(zhèn)靜、陣痛、止瀉、降壓、抗炎、抗氧化、抗腫瘤等多種生物學(xué)活性,在臨床醫(yī)學(xué)中具有重要地位。但截至目前國內(nèi)外未見厚樸酚在制備ndm-1抑制劑中的相關(guān)報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明提供了一種厚樸酚在制備ndm-1酶抑制劑中的醫(yī)用用途，公開了厚樸酚能夠抑制ndm-1酶的活性，恢復(fù)美羅培南對ndm-1大腸桿菌的殺菌活性。

本發(fā)明所述的厚樸酚，其分子式：c18h18o2，分子量：266.32；

本發(fā)明所述的美羅培南，其分子式：c17h25n3o5s·3h2o，分子量：437.51。

本發(fā)明通過酶抑制試驗(yàn)、棋盤法及時(shí)間-殺菌曲線法驗(yàn)證厚樸酚能夠抑制ndm-1酶的活性并恢復(fù)美羅培南對ndm-1陽性大腸桿菌的抗菌活性。進(jìn)一步通過建立小鼠腹膜炎感染模型證明厚樸酚聯(lián)用美羅培南對能夠產(chǎn)生ndm-1的大腸桿菌造成的感染具有良好的治療效果。

本發(fā)明的積極效果在于：

提供了厚樸酚在制備ndm-1酶抑制劑中的新醫(yī)用用途，公開了厚樸酚能夠抑制ndm-1酶的活性，恢復(fù)美羅培南對ndm-1大腸桿菌的殺菌活性。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，厚樸酚聯(lián)用美羅培南對表達(dá)ndm-1的細(xì)菌性感染，尤其是ndm-1陽性大腸桿菌引起的腹膜炎等感染具有良好的治療效果，具有廣泛的醫(yī)用用途。

附圖說明

圖1為本發(fā)明厚樸酚對ndm-1酶的抑制效果圖；

圖2為本發(fā)明時(shí)間-殺菌曲線。

具體實(shí)施方式

通過以下實(shí)施例進(jìn)一步舉例描述本發(fā)明，并不以任何方式限制本發(fā)明，在不背離本發(fā)明的技術(shù)解決方案的前提下，對本發(fā)明所作的本領(lǐng)域普通技術(shù)人員容易實(shí)現(xiàn)的任何改動或改變都將落入本發(fā)明的權(quán)利要求范圍之內(nèi)。

實(shí)施例1

厚樸酚作為ndm-1酶抑制劑用于藥學(xué)上可接受的任何載體。

實(shí)施例2

厚樸酚作為ndm-1酶抑制劑用于制備治療感染性疾病的藥物。

實(shí)施例3

厚樸酚作為ndm-1酶抑制劑用于治療細(xì)菌引起的感染性疾病，特別是ndm-1陽性大腸桿菌引起的感染。

試驗(yàn)例1

酶抑制試驗(yàn)

取96孔無菌微孔板，將表達(dá)純化的ndm-1酶1μl、不同濃度的厚樸酚加入孔中，用pbs（pbs,ph=7.4,補(bǔ)充10mmzncl2）將總體積補(bǔ)至200μl，使得每孔內(nèi)厚樸酚的終濃度分別為2、4、8及16μg/ml，另設(shè)立不加酶的陰性對照組及不加厚樸酚的陽性對照組。混勻，37℃孵育10min，之后加入頭孢硝噻吩25μl，混勻，繼續(xù)37℃孵育30min，于492nm處測定吸光值，計(jì)算厚樸酚對ndm-1酶的抑制效果（圖1）；

結(jié)論：厚樸酚能夠劑量依賴性地抑制ndm-1酶的活性。

試驗(yàn)例2

最小抑菌濃度試驗(yàn)

于96孔無菌微孔板內(nèi)按棋盤法進(jìn)行厚樸酚、美羅培南單用及二者聯(lián)用抗產(chǎn)ndm-1大腸桿菌的抑菌活性實(shí)驗(yàn)，確定二者單獨(dú)應(yīng)用及聯(lián)合應(yīng)用mic值，計(jì)算部分抑菌濃度指數(shù)(fici)。fici=mic(美羅培南聯(lián)合)/mic(美羅培南單用)+mic(厚樸酚聯(lián)合)/mic(厚樸酚單用)，結(jié)果見表1：

結(jié)論：厚樸酚單獨(dú)應(yīng)用不具備抑菌效果，與美羅培南聯(lián)用能夠降低美羅培南對ndm-1陽性大腸桿菌的mic值4倍，fici數(shù)值表明二者具有協(xié)同作用。

試驗(yàn)例3

時(shí)間-殺菌曲線試驗(yàn)

取ndm-1陽性大腸桿菌分離株過夜培養(yǎng)物，調(diào)整至10⁷cfus/ml，備用。取無菌試管3組（無抗生素對照組、8μg/ml美羅培南組及32μg/ml厚樸酚聯(lián)用8μg/ml美羅培南組），每組標(biāo)記為1、3、5、7h，所有試管內(nèi)均加入1ml高壓滅菌的lb培養(yǎng)基，之后，每管內(nèi)均加入10μl調(diào)整后的菌液，使每個(gè)試管內(nèi)的菌液濃度為10⁵cfus/ml。其中8μg/ml美羅培南組及32μg/ml厚樸酚聯(lián)用8μg/ml美羅培南組分別加入對應(yīng)用量的抗生素及抑制劑，混勻之后立即將無抗生素對照組的菌液進(jìn)行涂板計(jì)數(shù)，作為0h的菌落數(shù)。之后，每1、3、5及7h分別取對應(yīng)試管內(nèi)的菌液，涂板計(jì)數(shù)，繪制時(shí)間-殺菌曲線（圖2）。

結(jié)論：厚樸酚聯(lián)用美羅培南能夠在3h內(nèi)徹底殺死ndm-1陽性大腸桿菌。

試驗(yàn)例4

小鼠腹膜炎的實(shí)驗(yàn)治療學(xué)研究

小鼠大腸桿菌腹膜炎模型

balb/c小鼠（雌性，約20g）保定后，經(jīng)腹腔注射ndm-1陽性大腸桿菌懸液（1×10⁸cfus），建立小鼠腹膜炎的模型。

保護(hù)率試驗(yàn)

小鼠腹腔接種ndm-1陽性大腸桿菌后，立即分別皮下注射10mg/kg（50μl）的溶解于滅菌水的美羅培南、腹腔注射20mg/kg（50μl）的厚樸酚納米乳，及美羅培南（10mg/kg）聯(lián)用厚樸酚（20mg/kg），每8h給藥一次，一共給藥三次。陽性對照組給與50μl的納米乳空白溶劑，不給予任何藥物進(jìn)行治療；另單獨(dú)設(shè)立未感染小鼠的溶劑對照組，腹腔給予50μl的納米乳空白溶劑以考察所用納米乳溶劑的安全性。按給藥方案給藥后，分別記錄小鼠感染ndm-1陽性大腸桿菌5天后的死亡率（每隔12小時(shí)記錄），結(jié)果見表2。

表2.厚樸酚聯(lián)用美羅培南對小鼠大腸桿菌腹膜炎死亡率的影響：

結(jié)論：經(jīng)厚樸酚聯(lián)用美羅培南治療后，顯著降低小鼠腹膜炎的死亡率，厚樸酚或美羅培南單獨(dú)治療組不具有顯著的保護(hù)效果。