本發(fā)明屬于藥物制劑
技術(shù)領(lǐng)域：
，具體而言，涉及一種藥物外用緩釋透皮制劑，尤其涉及一種含有單硝酸異山梨酯的緩釋透皮制劑及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：?jiǎn)蜗跛岙惿嚼骢橄跛岙惿嚼骢サ闹饕钚源x產(chǎn)物。與其他有機(jī)硝酸酯一樣，單硝酸異山梨酯釋放出一氧化氮，一氧化氮通過(guò)激活鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶，使cgmp增多，激活cgmp依賴性蛋白激酶，改變平滑肌細(xì)胞中各種蛋白的環(huán)磷化作用，從而松弛血管平滑肌。單硝酸異山梨酯通過(guò)松弛血管平滑肌使血管擴(kuò)張，可擴(kuò)張外周動(dòng)脈和靜脈。通過(guò)擴(kuò)張靜脈使靜脈容量增加，減少回心血量，從而降低心室舒張末壓力和體積(前負(fù)荷)。通過(guò)擴(kuò)張動(dòng)脈和小動(dòng)脈降低系統(tǒng)血管阻力(后負(fù)荷)，心肌作功減少；心臟前后負(fù)荷的降低，從而減少心肌耗氧量。而且，當(dāng)因動(dòng)脈硬化部分阻塞冠狀動(dòng)脈時(shí)，單硝酸異山梨酯可選擇性擴(kuò)張大冠狀動(dòng)脈，能促進(jìn)心肌血流的重新分布，使冠脈灌注量增加，硝酸酯類還能擴(kuò)張冠脈狹窄部位，以及緩解冠脈痙攣。單硝酸異山梨酯通過(guò)上述作用抗心肌缺血作用。對(duì)大鼠和小鼠的急性毒性研究表明，口服ld50約為2000-2500mg/kg，對(duì)鼠和狗分別進(jìn)行了78周和52周的長(zhǎng)期毒性研究，首次毒性反應(yīng)分別發(fā)生在劑量405mg/kg和90mg/kg。對(duì)兩代小鼠進(jìn)行了生殖力研究，對(duì)小鼠和兔進(jìn)行了致畸性研究，在母體致毒劑量下，未發(fā)現(xiàn)單硝酸異山梨酯有致畸作用。對(duì)單硝酸異山梨酯的體外、體內(nèi)的誘變性研究表明，所有誘變性實(shí)驗(yàn)均為陰性。不管是小鼠和兔的長(zhǎng)期毒性實(shí)驗(yàn)，還是對(duì)小鼠125周(雄性)，和138周(雌性)的致癌性研究均未發(fā)現(xiàn)致癌作用，表明單硝酸異山梨酯對(duì)人類的無(wú)致癌作用。單硝酸異山梨酯適應(yīng)于冠心病的長(zhǎng)期治療；心絞痛的預(yù)防；心肌梗死后持續(xù)心絞痛的治療；與洋地黃和/或利尿劑聯(lián)合應(yīng)用，治療慢性充血性心力衰竭；冠心病的長(zhǎng)期治療和預(yù)防心絞痛發(fā)作，也適用于心肌梗死后的治療?，F(xiàn)有國(guó)內(nèi)外上市的單硝酸異山梨酯制劑均為口服片劑、注射制劑。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，單硝酸異山梨酯口服吸收迅速，服藥后1小時(shí)血藥濃度達(dá)峰值，單次服用本品20mg片劑的cmax為360μg/l，食物對(duì)本品的吸收沒(méi)有影響，無(wú)肝臟首過(guò)效應(yīng)，生物利用度可達(dá)90-100％，半衰期為4～5小時(shí)，血漿蛋白結(jié)合率低(＜4％)。單硝酸異山梨酯在肝臟幾乎完全被代謝，脫硝后幾乎全部以代謝產(chǎn)物異山梨醇(大約為37％)和右旋山梨醇(大約7％)的形式經(jīng)腎由尿排出體外，此外25％以葡萄糖醛酸結(jié)合物形式排出，只有約2％的藥物以原形排出，糞便中排出＜1％，其代謝產(chǎn)物都無(wú)擴(kuò)血管作用。肝病患者不出現(xiàn)蓄積現(xiàn)象。有證據(jù)表明，健康受試者和患慢性穩(wěn)定性心絞痛患者的血液特性相似。單硝酸異山梨酯可經(jīng)透析清除。一般口服用藥，存在著血藥濃度不穩(wěn)，服藥的個(gè)體不同，同樣劑量而效果不同，且單硝酸異山梨酯半衰期短，一日需服藥2～3次，導(dǎo)致口服制劑的依從性(順從性)差，特別對(duì)于特殊患者很難做到按時(shí)服藥，更限制了單硝酸異山梨酯的治療應(yīng)用。因而迫切希望開(kāi)發(fā)新劑型的替代性藥物。中國(guó)專利公開(kāi)了以下貼劑：00130223.x硝酸異山梨酯急救型貼劑2000-10-31201010200120.8硝酸異山梨酯貼片及其制備方法2010-06-1398800181.0含硝酸異山梨酯的貼劑1998-01-06200580052536.7含有硝酸異山梨酯和比索洛爾的透皮貼劑2005-12-09現(xiàn)有技術(shù)公開(kāi)的貼劑主要用于急救，釋放速度快，但釋藥均恒度差，不能長(zhǎng)時(shí)間起作用，得到的貼劑穩(wěn)定性差，常出現(xiàn)結(jié)晶，降解等問(wèn)題。本發(fā)明的含單硝酸異山梨酯的緩釋透皮貼劑釋藥均恒，作用溫和而持久，與口服片劑相比給藥頻次明顯減少，患者依從性更好，使心絞痛長(zhǎng)期治療和預(yù)防較易成為現(xiàn)實(shí)，且本發(fā)明的外用緩釋透皮制劑由于給藥和撤藥方便，尤其適用于不能口服給藥的患者，如應(yīng)用于心臟手術(shù)中預(yù)防患者手術(shù)過(guò)程中可能產(chǎn)生的心絞痛，填補(bǔ)了此類臨床用藥的空白。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：本發(fā)明為改變單硝酸異山梨酯原有的口服給藥途徑，發(fā)明一種全新的、以單硝酸異山梨酯緩釋透皮貼片新劑型為藥物載體、通過(guò)皮膚給藥的新的給藥途徑和方法。本發(fā)明的目的在于，克服現(xiàn)有技術(shù)中單硝酸異山梨酯口服治療心絞痛時(shí)因存在半衰期短，給藥頻繁，難以實(shí)現(xiàn)心絞痛患者最理想的平穩(wěn)治療和預(yù)防效果，不能在長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)使藥物以接近恒定的速率進(jìn)入人體內(nèi)的缺點(diǎn)的問(wèn)題。提供一種穩(wěn)定性極佳，長(zhǎng)效、經(jīng)過(guò)皮膚吸收的、起效平緩、血藥濃度均衡、穩(wěn)定的治療效果，患者順應(yīng)性好，攜帶和使用方便的含單硝酸異山梨酯藥物的緩釋透皮貼劑。本發(fā)明的另一個(gè)目的，是提供一種該緩釋透皮貼劑的制備方法。本發(fā)明的目的通過(guò)下述技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)：本發(fā)明含有單硝酸異山梨酯的緩釋透皮貼劑，有效成分為單硝酸異山梨酯，本發(fā)明不限于任何單硝酸異山梨酯和/或其鹽的具體形式。本發(fā)明提供一種單硝酸異山梨酯緩釋透皮貼劑，其特征在于，所述緩釋透皮貼劑由背襯層、含藥儲(chǔ)庫(kù)層、防粘保護(hù)層構(gòu)成，所述的含藥儲(chǔ)庫(kù)層，其制備方法是，將單硝酸異山梨酯與高分子黏性材料或壓敏膠均勻混合，涂于背襯層上，加熱烘干，制成含藥儲(chǔ)庫(kù)層，其中高分子黏性材料或壓敏膠選自：水溶性丙烯酸壓敏膠、脂溶性丙烯酸壓敏膠，有機(jī)硅類壓敏膠，聚異丁烯壓敏膠，每平方厘米含高分子黏性材料或壓敏膠的量為1.0-30.0mg，占緩釋透皮貼劑重量的70.0～95.0％；所述含藥儲(chǔ)庫(kù)層中含有透皮促進(jìn)劑，其選自氮酮、油酸、三乙酸甘油酯、肉豆蔻酸異丙酯，其中每平方厘米含透皮促進(jìn)劑的量為0-1.0mg，占緩釋透皮貼劑重量的0-10.0％；所述含藥儲(chǔ)庫(kù)層中含有結(jié)晶抑制劑十八醇，其中每平方厘米含結(jié)晶抑制劑的量為0.05～0.4mg，占緩釋透皮貼劑重量的0.3-5.0％；每平方厘米含單硝酸異山梨酯的量為0.3～3.0mg。發(fā)明人驚奇地發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明制備的單硝酸異山梨酯緩釋透皮貼劑經(jīng)過(guò)人離體皮膚的體外透皮試驗(yàn)測(cè)定，其透皮速率最大可以達(dá)到每天9.12mg/10cm2，按照單硝酸異山梨酯口服制劑日用量20.0～60.0mg計(jì)算，僅需每天1貼22cm2～66cm2的貼片即可達(dá)到持續(xù)最大日給藥劑量治療的目的，不同的用藥劑量可以通過(guò)調(diào)節(jié)貼片面積很容易實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明含有單硝酸異山梨酯的緩釋透皮貼劑，每平方厘米含單硝酸異山梨酯的量為0.3～3.0mg，其中優(yōu)選0.3～2.5mg，更優(yōu)選0.5～2.0mg；本發(fā)明含有單硝酸異山梨酯的緩釋透皮貼劑，應(yīng)用于人體皮膚的透皮量為每日10.0～60.0mg，優(yōu)選20.0～60.0mg。本發(fā)明優(yōu)選的緩釋透皮貼劑，其中，所述壓敏膠選自：脂溶性丙烯酸壓敏膠，所述透皮促進(jìn)劑選自：氮酮，結(jié)晶抑制劑選自：十八醇，溶劑選自：乙酸乙酯；其中，各組分的重量配比如下：制備方法如下：①將單硝酸異山梨酯、氮酮、十八醇溶解于乙酸乙酯中，加入脂溶性丙烯酸酯壓敏膠混合均勻，②將混勻的膠漿涂于背襯材料，面積10000cm2，加熱烘干，再覆蓋上保護(hù)層，③按需要尺寸切割，包裝，即制成含單硝酸異山梨酯的緩釋透皮貼劑。本發(fā)明特別優(yōu)選的緩釋透皮貼劑，配方如下：制備方法如下：①將單硝酸異山梨酯、氮酮、十八醇溶解于乙酸乙酯中，加入脂溶性丙烯酸酯壓敏膠混合均勻，②將混勻的膠漿涂于背襯材料，面積10000cm2，加熱烘干，再覆蓋上保護(hù)層，③按需要尺寸切割，包裝，即制成含單硝酸異山梨酯的緩釋透皮貼劑；或配方如下：制備方法如下：①將單硝酸異山梨酯、氮酮、十八醇溶解于乙酸乙酯中，加入脂溶性丙烯酸酯壓敏膠混合均勻，②將混勻的膠漿涂于背襯材料，面積10000cm2，加熱烘干，再覆蓋上保護(hù)層，③按需要尺寸切割，包裝，即制成含單硝酸異山梨酯的緩釋透皮貼劑。發(fā)明人驚喜的發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的含有單硝酸異山梨酯的緩釋透皮貼劑，添加十八醇作為結(jié)晶抑制劑，使緩釋透皮貼劑系統(tǒng)免除結(jié)晶現(xiàn)象。而相反，比較例(沒(méi)有添加結(jié)晶抑制)，三個(gè)月后有大量的結(jié)晶，結(jié)晶將直接影響單硝酸異山梨酯的透皮速率。本發(fā)明的含有單硝酸異山梨酯的緩釋透皮貼劑，還包括適量的醫(yī)學(xué)上可接受的賦形劑和透皮促進(jìn)劑。本發(fā)明的含有單硝酸異山梨酯的緩釋透皮貼劑，其制備方法為：將單硝酸異山梨酯、透皮促進(jìn)劑與適宜的高分子黏性材料或壓敏膠、透皮促進(jìn)劑等輔料混合，涂于背襯材料上，加熱烘干，再覆蓋上保護(hù)層，按需要尺寸切割，包裝，即制成含單硝酸異山梨酯的緩釋透皮貼劑。本發(fā)明的單硝酸異山梨酯緩釋透皮貼劑，其中所述高分子黏性材料或壓敏膠，可以為水溶性丙烯酸壓敏膠、脂溶性丙烯酸壓敏膠，也可以為有機(jī)硅類壓敏膠、聚丙烯酸酯壓敏膠。本發(fā)明的單硝酸異山梨酯緩釋透皮貼劑，還包括適量的醫(yī)學(xué)上可接受的賦形劑，包括可以含有增塑劑如醋酸三乙酯、枸櫞酸三乙酯、液體石蠟以及各種甘油酯；可以含有抑菌劑如尼泊金酯類、山梨酸、苯甲酸；可以含有增溶劑如丙二醇、吐溫類、聚乙二醇類。本發(fā)明提供了一種單硝酸異山梨酯通過(guò)皮膚給藥的新的給藥方法。本發(fā)明還提供了一種單硝酸異山梨酯通過(guò)皮膚給藥的新的給藥方法用于冠心病的長(zhǎng)期治療、心絞痛的預(yù)防、心肌梗死后持續(xù)心絞痛的治療的用途。本發(fā)明所述的外用貼劑，其背襯層可以為鋁箔、pe膜、pet膜、eva膜或無(wú)紡布，保護(hù)層為防粘處理后的pet膜。本貼劑可以做成長(zhǎng)方形、正方形、圓形、橢圓形、三角形或兩種以上圖形的組合的各種形狀；貼劑的制備工藝為涂布成型工藝或擠壓成型工藝；貼劑貼于身體皮膚表面使用。本發(fā)明的積極效果本發(fā)明的含單硝酸異山梨酯的緩釋透皮貼劑與常規(guī)口服給藥方法相比，有其獨(dú)特的優(yōu)點(diǎn)：(1)一次給藥可以在長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)使藥物以接近恒定的速率進(jìn)入人體內(nèi)，類似于長(zhǎng)時(shí)間的靜脈滴注；(2)避免了胃腸道因素的干擾與降解作用，既減低了藥物對(duì)人體的毒副作用，又減少了用藥的個(gè)體差異；(3)可維持接近恒定有效的血藥濃度，避免了其它給藥方法產(chǎn)生的血藥濃度波峰波谷現(xiàn)象，實(shí)現(xiàn)了平穩(wěn)治療效果；(4)使用方便，容易被患者接受，即患者的依從性好。(5)可以隨時(shí)終止給藥，提高用藥安全性。(6)添加十八醇作為結(jié)晶抑制劑，使緩釋透皮貼劑系統(tǒng)免除結(jié)晶現(xiàn)象。而相反，比較例(沒(méi)有添加結(jié)晶抑制)，三個(gè)月后有大量的結(jié)晶，十八醇防止結(jié)晶產(chǎn)生的效果特別明顯，可更好地保證單硝酸異山梨酯緩釋緩釋透皮貼劑在長(zhǎng)期放置過(guò)程中的透皮速率的穩(wěn)定性。本發(fā)明的含單硝酸異山梨酯的緩釋透皮貼劑，其體外24小時(shí)釋放過(guò)程為接近零級(jí)速率過(guò)程，體外透皮速率接近恒速。穩(wěn)定性好，重現(xiàn)性好，粘貼性良好，特別是使用氮酮，十八醇，乙酸乙酯，脂溶性丙烯酸酯壓敏膠作為本發(fā)明貼劑配方其在各種檢測(cè)中均表現(xiàn)優(yōu)異，特別是含量和雜質(zhì)的變化極小，長(zhǎng)期放置顏色和粘貼性變化極小，表現(xiàn)優(yōu)于其他配方。附圖說(shuō)明：圖1本發(fā)明的含有硝酸異山梨酯的緩釋透皮貼劑在豚鼠和人離皮膚上的每日透皮量對(duì)比圖2本發(fā)明的含有單硝酸異山梨酯的緩釋透皮貼劑體外釋放曲線通過(guò)圖1、圖2看出，其線性回歸的相關(guān)系數(shù)均在0.99以上，說(shuō)明本品在豚鼠皮膚體外透皮過(guò)程和人體皮膚在體的透皮過(guò)程、體外釋放過(guò)程均符合零級(jí)速率過(guò)程，緩釋效果良好。達(dá)到了制劑控釋的設(shè)計(jì)目的。具體實(shí)施方式下面用實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，應(yīng)該理解的是，這些實(shí)施例僅僅是用于說(shuō)明本發(fā)明，而不是用于限制本發(fā)明。由于以下實(shí)施例的具體制備方法并無(wú)特殊要求，故不做單獨(dú)說(shuō)明。在實(shí)施例中，所用單硝酸異山梨酯、用作賦形劑、促透劑的原料，均為市售藥用級(jí)；所用的比例為重量百分比。制備方法為本行業(yè)普通工藝條件。實(shí)施例1：?jiǎn)蜗跛岙惿嚼骢サ木忈屚钙べN劑配方如下：制備方法如下：①將單硝酸異山梨酯、氮酮、十八醇溶解于乙酸乙酯中，加入有機(jī)硅類壓敏膠混合均勻，②將混勻的膠漿涂于背襯材料，面積10000cm2，加熱烘干，再覆蓋上保護(hù)層，③按需要尺寸切割，包裝，即制成含單硝酸異山梨酯的緩釋透皮貼劑。實(shí)施例2：?jiǎn)蜗跛岙惿嚼骢サ木忈屚钙べN劑配方如下：制備方法如下：①將單硝酸異山梨酯、十八醇溶解于乙酸乙酯中，加入有機(jī)硅類壓敏膠混合均勻。②將混勻的膠漿涂于背襯材料，面積10000cm2，加熱烘干，再覆蓋上保護(hù)層，③按需要尺寸切割，包裝，即制成含單硝酸異山梨酯的透皮貼劑。實(shí)施例3：?jiǎn)蜗跛岙惿嚼骢サ木忈屚钙べN劑配方如下：制備方法如下：①將單硝酸異山梨酯、氮酮、十八醇溶解于乙酸乙酯中，加入脂溶性丙烯酸酯壓敏膠混合均勻，②將混勻的膠漿涂于背襯材料，面積10000cm2，加熱烘干，再覆蓋上保護(hù)層，③按需要尺寸切割，包裝，即制成含單硝酸異山梨酯的緩釋透皮貼劑。實(shí)施例4：?jiǎn)蜗跛岙惿嚼骢サ木忈屚钙べN劑配方如下：制備方法如下：①將單硝酸異山梨酯、氮酮、十八醇溶解于乙酸乙酯中，加入脂溶性丙烯酸酯壓敏膠混合均勻，②將混勻的膠漿涂于背襯材料，面積10000cm2，加熱烘干，再覆蓋上保護(hù)層，③按需要尺寸切割，包裝，即制成含單硝酸異山梨酯的緩釋透皮貼劑。實(shí)施例5：?jiǎn)蜗跛岙惿嚼骢サ木忈屚钙べN劑配方如下：制備方法如下：①將單硝酸異山梨酯、三乙酸甘油酯、十八醇溶解于乙酸乙酯溶液中，加入有機(jī)硅類壓敏膠混合均勻，②將混勻的膠漿涂于背襯材料，面積10000cm2，加熱烘干，再覆蓋上保護(hù)層，③按需要尺寸切割，包裝，即制成含單硝酸異山梨酯的緩釋透皮貼劑。實(shí)施例6：?jiǎn)蜗跛岙惿嚼骢サ木忈屚钙べN劑配方如下：制備方法如下：①將單硝酸異山梨酯、肉豆蔻酸異丙酯、十八醇溶解于50％乙醇溶液中，加入乳液型丙烯酸壓敏膠混合均勻，②將混勻的膠漿涂于背襯材料，面積10000cm2，加熱烘干，再覆蓋上保護(hù)層，③按需要尺寸切割，包裝，即制成單硝酸異山梨酯的緩釋透皮貼劑。實(shí)施例7：?jiǎn)蜗跛岙惿嚼骢サ木忈屚钙べN劑配方如下：制備方法如下：①將單硝酸異山梨酯、水性氮酮、十八醇溶解于50％乙醇溶液中，加入乳液型丙烯酸壓敏膠混合均勻，②將混勻的膠漿涂于背襯材料，面積10000cm2，加熱烘干，再覆蓋上保護(hù)層，③按需要尺寸切割，包裝，即制成單硝酸異山梨酯的緩釋透皮貼劑。實(shí)施例8：?jiǎn)蜗跛岙惿嚼骢サ木忈屚钙べN劑配方如下：制備方法如下：①將單硝酸異山梨酯、油酸、十八醇溶解于乙酸乙酯溶液中，加入聚異丁烯壓敏膠混合均勻，②將混勻的膠漿涂于背襯材料，面積10000cm2，加熱烘干，再覆蓋上保護(hù)層，③按需要尺寸切割，包裝，即制成含單硝酸異山梨酯的緩釋透皮貼劑。對(duì)相關(guān)實(shí)施例進(jìn)行了皮膚刺激性實(shí)驗(yàn)和30℃條件下放置6個(gè)月進(jìn)行加速穩(wěn)定性考察，結(jié)果如下：以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，實(shí)施例4穩(wěn)定性好效果最佳，為本發(fā)明最優(yōu)選的配方和制備方法，本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)均以本發(fā)明最優(yōu)選的產(chǎn)品作為實(shí)驗(yàn)樣品的。實(shí)施例9：本發(fā)明的單硝酸異山梨酯的緩釋透皮貼劑的豚鼠離體皮膚體外透皮試驗(yàn)豚鼠離體皮膚的處理：將400克左右的豚鼠用乙醚麻醉，仔細(xì)剪去背部及腹部毛，處死豚鼠，剝離皮膚，除去皮下脂肪，生理鹽水洗凈后冷凍貯存?zhèn)溆?。豚鼠皮膚的透皮量測(cè)定：取面積為3.3005cm2的樣品固定在豚鼠背部皮膚上，采用franz透皮擴(kuò)散池進(jìn)行透皮試驗(yàn)，水浴溫度32℃，攪拌速度300rpm，接收池體積6ml，接收液為含0.9％nacl的生理鹽水溶液。分別于2、6、12、24小時(shí)取全部樣品，更換同溫度同體積的空白接收液。樣品采用高效液相色譜法進(jìn)行分析。試驗(yàn)結(jié)果表明見(jiàn)表1。表1本發(fā)明緩釋透皮貼劑在豚鼠皮膚上的透皮試驗(yàn)結(jié)果(n＝6)【說(shuō)明：測(cè)得每日透皮量＝實(shí)測(cè)接收液中樣品含量/試驗(yàn)樣品面積每小時(shí)透皮量＝每日透皮量/樣品試驗(yàn)時(shí)間】實(shí)施例10：本發(fā)明的含有單硝酸異山梨酯的緩釋透皮貼劑的人離體皮膚的體外透皮試驗(yàn)取面積為3.3005cm2的樣品固定在人離體胸部皮膚上，采用franz透皮擴(kuò)散池進(jìn)行透皮試驗(yàn)，水浴溫度32℃，攪拌速度300rpm，接收池體積6ml，接收液為含0.9％nacl的生理鹽水溶液。分別于2、6、12、24小時(shí)取全部樣品，更換同溫度同體積的空白接收液。樣品采用高效液相色譜法進(jìn)行分析。試驗(yàn)結(jié)果表明見(jiàn)表2。表2本發(fā)明外用緩釋透皮貼片在人離體皮膚上的透皮試驗(yàn)結(jié)果比較(n＝6)【說(shuō)明：測(cè)得每日透皮量＝實(shí)測(cè)接收液中樣品含量/試驗(yàn)樣品面積每小時(shí)透皮量＝每日透皮量/樣品試驗(yàn)時(shí)間】本發(fā)明的實(shí)施例4的單硝酸異山梨酯緩釋透皮貼劑在豚鼠和人體皮膚上的24小時(shí)透皮量對(duì)比見(jiàn)附圖1：實(shí)施例4的貼劑在豚鼠皮膚上的24小時(shí)透皮量線性：y＝0.0493x+0.0295；r2＝0.9968；實(shí)施例4的貼劑在人離體皮膚上的24小時(shí)透皮量線性：y＝0.0378x+0.0179；r2＝0.998。從上述結(jié)果可以看出，本發(fā)明的實(shí)施例4的的緩釋透皮貼劑在持續(xù)24小時(shí)的試驗(yàn)中，其活性成分單硝酸異山梨酯可保持接近恒速、均一透過(guò)豚鼠皮膚及人離體皮膚。按照其在人離體皮膚上的試驗(yàn)結(jié)果(0.912mg/cm2·d-1)推論，22～66cm2的制劑，24小時(shí)透皮量約為20.1mg～60.2mg/日，此濃度已達(dá)到單硝酸異山梨酯用于心絞痛的有效治療劑量。只需根據(jù)不同有效治療劑量的設(shè)定不同的貼片面積即可。實(shí)施例11：本發(fā)明的含有單硝酸異山梨酯的緩釋透皮貼劑的體外釋放度測(cè)定釋放條件：取本品6片，照《中國(guó)藥典》2005版(附錄xd，第三法)進(jìn)行，以1000ml的含0.9％nacl的生理鹽水溶液為釋放介質(zhì)，溫度32℃，轉(zhuǎn)速75轉(zhuǎn)/分鐘，分別于2、6、12、24小時(shí)定時(shí)取樣10ml，并立即補(bǔ)足同體積同溫度的水。樣品采用高效液相色譜法檢測(cè)。表3本發(fā)明的緩釋透皮貼劑釋放度測(cè)定結(jié)果取樣時(shí)間(h)2h6h12h24h釋放度％10.330.251.890.5本發(fā)明的單硝酸異山梨酯緩釋透皮貼劑體外釋放曲線見(jiàn)附圖2：?jiǎn)蜗跛岙惿嚼骢ゾ忈屚钙べN劑體外釋放度線性：y＝3.7198x+3.8253；r2＝0.9904；實(shí)施例12：本發(fā)明的單硝酸異山梨酯的緩釋透皮貼劑的藥效學(xué)試驗(yàn)家兔，雄性，2.0～2.6kg，4～5月齡。均購(gòu)自哈爾濱醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，在通風(fēng)、溫度、濕度適宜的動(dòng)物室內(nèi)單籠飼養(yǎng)。1、動(dòng)物分組和模型制備家兔42只，實(shí)驗(yàn)前隨機(jī)抽取7只作為空白對(duì)照組(a組)，其余35只作為模型組給予造模：給予高脂飲食(15％蛋黃粉、5％豬油，80％基礎(chǔ)飼料，外加0.5％膽固醇)共8周，8周末，經(jīng)彩色多普勒超聲檢測(cè)證實(shí)頸總動(dòng)脈粥樣斑塊形，然后應(yīng)用球囊損傷頸總動(dòng)脈的方法，建立穩(wěn)定動(dòng)脈硬化斑塊模型。將造模成功家兔隨機(jī)分為：模型對(duì)照組(b組)、單硝酸異山梨酯貼片小劑量組(c組)、單硝酸異山梨酯貼片中劑量組(d組)、單硝酸異山梨酯貼片大劑量組(e組)、單硝酸異山梨酯口服給藥組(f組)，每組7只。各治療組給藥2周，于實(shí)驗(yàn)第8周及第10周取血檢測(cè)，并于第10周進(jìn)行頸動(dòng)脈體表超聲檢查。所有模型組在造模成功后繼續(xù)給予高脂飲食2周?？瞻讓?duì)照組先喂養(yǎng)普通飼料8周，繼續(xù)喂養(yǎng)普通飼料2周。2、給藥方法：按人兔給藥劑量體表面積折算公式計(jì)算出給藥計(jì)量。各給藥組于模型制備后(第9周初)給予藥物治療，c組給予小劑量單硝酸異山梨酯貼片1貼/天(5cm2/貼，規(guī)格0.5mg/cm2，24小時(shí)透皮量1.5mg)，d組給予中劑量單硝酸異山梨酯貼片1貼/天(3cm2/貼，規(guī)格1.0mg/cm2，24小時(shí)透皮量2.0mg)，e組給予大劑量單硝酸異山梨酯貼片1貼/天(3cm2/貼，規(guī)格1.5mg/cm2，24小時(shí)透皮量3.0mg)，連續(xù)給藥2周。e組給予單硝酸異山梨酯片(1.09mg/kg/d)，藥物灌胃給藥2周。其余空白對(duì)照組和模型對(duì)照組均灌服同體積生理鹽水。3、觀察指標(biāo)及測(cè)定方法3.1家兔血清no、nos、et-1含量的測(cè)定：于實(shí)驗(yàn)第8周及第10周以一次性5ml注射器快速耳緣靜脈穿刺取血4ml，分別置于兩試管中，其中2ml置于一試管中離心(3000r/min,10min，分離出血清，置于-20℃冰箱保存；另2ml置于含edta-na230μl、抑肽酶40μl的試管中離心(-4℃，4000r/min，10min)分離出血漿，-70℃冰箱保存。所有標(biāo)本于收集后統(tǒng)一檢測(cè)。操作步驟嚴(yán)格按試劑盒說(shuō)明進(jìn)行。no、nos用酶標(biāo)法測(cè)定，et用放射免疫分析法測(cè)定，no試劑盒、nos試劑盒、et試劑盒均購(gòu)自南京森貝伽生物科技有限公司。3.2頸動(dòng)脈體表超聲檢查檢測(cè)前兔禁食12小時(shí)，仰臥四肢固定于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上，頸部備皮，應(yīng)用超聲診斷儀沿血管走行作橫向掃描，記錄頸總動(dòng)脈長(zhǎng)軸和短軸圖像，觀察動(dòng)脈內(nèi)膜是否光滑、有無(wú)增厚、斑塊部位、斑塊大小和回聲特點(diǎn)。以彩色多普勒顯示頸總動(dòng)脈血流情況，記錄血流頻譜，測(cè)量頸總動(dòng)脈內(nèi)中膜厚度(imt)、收縮期峰值流速(vs)、搏動(dòng)指數(shù)(pi)、阻力指數(shù)(ri)，對(duì)錄像資料進(jìn)行脫機(jī)分析。3.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：定量數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，數(shù)據(jù)處理用spss17.0統(tǒng)計(jì)軟件分析，組間比較采用t檢驗(yàn)，p＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。4、結(jié)果：4.1各組家兔血清no、nos的含量表1各組家兔血清no、nos的含量(x±s)注:與空白對(duì)照組比較▲p<0.01；與模型組比較★p<0.01；與本組8周比較*p<0.01。從表1可見(jiàn)，空白對(duì)照組家兔血清no、nos含量8周與10周無(wú)明顯改變。高脂喂養(yǎng)8周后b組與各給藥組家兔血清no、nos含量較正常組均顯著降低(p<0.01)。在高脂飲食基礎(chǔ)上，采用頸動(dòng)脈球囊擴(kuò)張方法復(fù)制模型，模型對(duì)照組血清no、nos進(jìn)一步明顯降低(p<0.01)，而各給藥組給藥2周后較之前有顯著升高(p<0.01)。結(jié)果表明，高脂飲食所引起的動(dòng)脈粥樣硬化可使內(nèi)皮損傷，使血清no、nos含量明顯降低，動(dòng)脈球囊擴(kuò)張可進(jìn)一步破壞內(nèi)皮細(xì)胞，促進(jìn)斑塊不穩(wěn)定的發(fā)生，從而使血清no、nos進(jìn)一步降低，而各給藥組可以明顯升高血清no、nos的含量。由表1可見(jiàn)，與正常組相比，模型組血et－1水平均顯著升高，et-1/no升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。各給藥組給藥2周后較之前有顯著降低(p<0.01)。4.2頸動(dòng)脈體表超聲檢查結(jié)果：5、分析總結(jié)：不穩(wěn)定型心絞痛是急性冠脈綜合征的臨床表現(xiàn)之一，冠心病(chd)的病理基礎(chǔ)是動(dòng)脈粥樣硬化(as)及血栓形成。近年來(lái)的研究表明，血管內(nèi)皮細(xì)胞功能異常是chd發(fā)生的重要因素之一。no和et是內(nèi)皮細(xì)胞(ec)分泌的兩種重要物質(zhì)。大量研究表明急性冠脈綜合征患者血管內(nèi)皮功能受損。血漿一氧化氮(no)濃度及內(nèi)皮素(et)水平能反映內(nèi)皮功能的變化。no是人體ec合成的最重要的物質(zhì)之一,它具有強(qiáng)大的舒張血管、抑制vsmcs增殖、抗血小板聚集、粘附和釋放活性物質(zhì)作用,可防止血管痙攣和血栓形成。et為ec分泌的最強(qiáng)大的縮血管因子,可引起各種血管收縮,其中冠脈最敏感,還可促進(jìn)血管vsmcs增殖。生理情況下，ec釋放的no占優(yōu)勢(shì)，可抵銷et的縮血管作用，et升高可使no合成增多，后者增多又可抑制et的合成，相互間存在著制約關(guān)系，維持相互間的動(dòng)態(tài)平衡，抑制血管收縮，血小板激活，白細(xì)胞粘附，平滑肌增生等，對(duì)心血管系統(tǒng)具有保護(hù)作用。在病理情況下，內(nèi)皮功能失調(diào)，內(nèi)皮的保護(hù)性機(jī)制被破壞，no和et釋放失衡，no水平下降，et分泌增加，no/et比值下降，從而促進(jìn)動(dòng)脈粥樣硬化(as)的發(fā)生發(fā)展，誘發(fā)血管痙攣，促進(jìn)血栓形成，加重心肌缺血，臨床出現(xiàn)心絞痛及心肌梗死。而nos是no合成的限速酶，當(dāng)內(nèi)皮功能不全時(shí)，nos翻譯障礙，nos表達(dá)密度減少，nos活性下降，使no生成減少。本研究通過(guò)首先應(yīng)用球囊損傷頸總動(dòng)脈+高脂飲食喂養(yǎng)8周末的方法，建立穩(wěn)定動(dòng)脈硬化斑塊模型，再以藥物觸發(fā)使斑塊發(fā)生實(shí)驗(yàn)性破裂，復(fù)制成近似人類不穩(wěn)定型心絞痛動(dòng)物模型。應(yīng)用本發(fā)明的含單硝酸異山梨酯的貼劑對(duì)不穩(wěn)定型心絞痛模型動(dòng)物進(jìn)行治療，觀察其血漿no、nos濃度及內(nèi)皮素水平的變化來(lái)評(píng)價(jià)其對(duì)其對(duì)內(nèi)皮功能的影響。本研究結(jié)果表明，本發(fā)明的含單硝酸異山梨酯的貼劑可以明顯降低模型家兔血清e(cuò)t的含量而升高no的含量，進(jìn)而保護(hù)血管內(nèi)皮細(xì)胞，從而達(dá)到防治ua的作用，本發(fā)明的含單硝酸異山梨酯的小劑量貼劑療效與口服給藥相當(dāng)。當(dāng)前第1頁(yè)12