本發(fā)明涉及生命科學(xué)領(lǐng)域，尤其是一種動(dòng)物頭顱快速解剖及完整腦部組織分離方法。
背景技術(shù)：
動(dòng)物的腦部是控制其行為和支配一切生命活動(dòng)的中樞，主要包括大腦、小腦、下丘腦、垂體等組織。大腦支配動(dòng)物的一切生命活動(dòng)(如：語(yǔ)言、運(yùn)動(dòng)、聽(tīng)覺(jué)、視覺(jué)、情感表達(dá)等)，夠調(diào)節(jié)消化、呼吸、循環(huán)、泌尿、生殖、運(yùn)動(dòng)等中樞；小腦通過(guò)它與大腦、腦干和脊髓之間豐富的傳入和傳出聯(lián)系，參與軀體平衡和肌肉張力(肌緊張)的調(diào)節(jié)，以及隨意運(yùn)動(dòng)的協(xié)調(diào)；下丘腦是大腦皮層下調(diào)節(jié)內(nèi)臟活動(dòng)的高級(jí)中樞，能把內(nèi)臟活動(dòng)和其它生理活動(dòng)聯(lián)系起來(lái)，調(diào)節(jié)體溫、采食、內(nèi)分泌腺活動(dòng)以及機(jī)體水平衡等重要生理功能；垂體是動(dòng)物體內(nèi)主要的內(nèi)分泌腺體，分泌多種激素，如促性腺激素、生長(zhǎng)激素、促甲狀腺激素、催產(chǎn)素、催乳素等，還能接受下丘腦分泌的促性腺激素釋放激素，這些激素對(duì)于動(dòng)物的新陳代謝、生長(zhǎng)發(fā)育、生殖生理等有重要作用。采集完整無(wú)污染的腦部組織對(duì)于提取組織rna，研究腦部功能有重大意義。
現(xiàn)有的動(dòng)物(如綿羊)腦部組織樣品的采集方法主要是用電鋸或者斧頭縱向劈開頭顱，將之分成兩半，在劈開后，尋找采集大腦、小腦、下丘腦、垂體等腦部組織。此方法獲得的腦部組織受機(jī)械損傷較大，易將大腦、小腦、下丘腦、垂體等組織弄碎，造成污染和損失，且操作人員的熟練程度對(duì)腦部組織的采集影響很大；由于腦部完整性較差，某些組織的尋找耗時(shí)較長(zhǎng)，降低采樣效率，同時(shí)樣品由于長(zhǎng)時(shí)間暴露在空氣中造成降解，對(duì)提取rna進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)的樣品有毀滅性的影響。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是提供一種解剖動(dòng)物頭顱并獲取完整腦部組織的方法，該方法操作時(shí)間短、樣品完整性好、污染和組織損傷機(jī)率低、簡(jiǎn)單易行，克服了現(xiàn)有技術(shù)的不足。
本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的：動(dòng)物頭顱快速解剖及完整腦部組織分離方法，包括以下步驟：
(1)取已屠宰的動(dòng)物頭部，固定在臺(tái)虎鉗上，在垂直于動(dòng)物鼻骨的方向用手術(shù)刀去除兩眼間的頭骨皮膚，同時(shí)去除兩耳間頭頂部至枕骨間的皮膚，使暴露的頭骨呈“t”字樣；
所述動(dòng)物包括綿羊、山羊、豬、牛等；
(2)用電鋸或手鋸入骨一定深度，以穿透頭骨且不損傷腦組織為準(zhǔn)，沿“t”字垂直于地面切入頭部；
對(duì)于綿羊和山羊以入骨0.5-1.0cm為佳；
(3)用手術(shù)刀從枕骨上緣0.5cm處至兩側(cè)眼眶沿臉頰切開皮膚，用手鋸沿切口入骨一定深度，以穿透頭骨且不損傷腦組織為準(zhǔn)，切入頭部；
對(duì)于綿羊和山羊以入骨1.0-1.5cm為佳；
(4)用骨鑿插入“t”字切口輕撬，將大腦外的兩側(cè)頭骨分離取走，暴露完整腦部組織；
(5)用手術(shù)剪和眼科鑷剝離腦膜，取出大腦、小腦、下丘腦及其它腦部組織；
(6)取出大腦后，可用眼科剪將垂體從垂體窩里取出。
進(jìn)一步地，上述方法還包括將取下的動(dòng)物大腦、小腦、下丘腦和垂體等組織取下后裝入凍存管中，立即放入液氮保存；或者將腦組織置于裝有4％多聚甲醛的50ml離心管盛裝后于4℃保存。
本發(fā)明方法適用于綿羊、山羊、豬、牛等；不同動(dòng)物鋸子的入骨深度、切開長(zhǎng)度等一些參數(shù)需要調(diào)整，不同動(dòng)物的開口位置基本一致。
具體地，本發(fā)明提供一種動(dòng)物頭顱快速解剖及完整腦部組織分離方法，包括以下步驟：
(1)取已屠宰的綿羊或山羊頭部，固定在臺(tái)虎鉗上，在垂直于綿羊鼻骨的方向用手術(shù)刀去除兩眼間的頭骨皮膚，同時(shí)去除兩耳間頭頂部至枕骨間的皮膚，使暴露的頭骨呈“t”字樣；
(2)用電鋸或手鋸入骨0.5-1.0cm，沿“t”字垂直于地面切入羊頭；
(3)用手術(shù)刀從枕骨上緣0.5cm處至兩側(cè)眼眶沿臉頰切開皮膚，用手鋸沿切口入骨1.0-1.5cm切入羊頭；
(4)用骨鑿插入“t”字切口輕撬，將大腦外的兩側(cè)頭骨分離取走，暴露完整腦部組織；
(5)用手術(shù)剪和眼科鑷剝離腦膜，取出大腦、小腦、下丘腦及其它腦部組織；
(6)取出大腦后，可用眼科剪將垂體從垂體窩里取出。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明能夠快速的將動(dòng)物的頭骨分開，獲取完整、無(wú)污染的大腦、小腦、垂體、下丘腦等腦部組織樣品，與傳統(tǒng)斧頭劈開頭骨的方法相比，提高了腦部各組織樣品采集的完整性，降低了操作污染和樣品損壞的風(fēng)險(xiǎn)，方法簡(jiǎn)單，耗時(shí)短，使用效果好，對(duì)于大規(guī)模動(dòng)物屠宰試驗(yàn)中樣品的采集有良好的應(yīng)用前景。
附圖說(shuō)明
圖1為實(shí)施例1切口位置示意圖；圖1中a、b、c表示切口，切口c為兩側(cè)對(duì)稱切口。
圖2a為實(shí)施例1采集到的綿羊腦部組織圖片；圖2b為現(xiàn)有方法采集到的綿羊腦部組織圖片。
具體實(shí)施方式
以下實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明，但不用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中未注明具體技術(shù)或條件者，按照本領(lǐng)域內(nèi)的文獻(xiàn)所描述的技術(shù)或條件，或者按照產(chǎn)品說(shuō)明書進(jìn)行。所用試劑或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可通過(guò)正規(guī)渠道商購(gòu)買得到的常規(guī)產(chǎn)品。
實(shí)施例1
本發(fā)明的實(shí)施例：綿羊頭顱快速解剖及完整腦部組織分離法，包括以下步驟：
(1)取已屠宰的綿羊頭部，固定在臺(tái)虎鉗上，在垂直于綿羊鼻骨的方向用手術(shù)刀去除兩眼間的頭骨皮膚，同時(shí)去除兩耳間頭頂部至枕骨間的皮膚，使暴露的頭骨呈“t”字樣；
(2)用電鋸或手鋸入骨0.5-1.0cm，沿“t”字垂直于地面切入羊頭，即圖1中切口a和b(也可以理解為由切口a和b構(gòu)成“t”字樣)；
(3)用手術(shù)刀從枕骨上緣0.5cm處至兩側(cè)眼眶沿臉頰切開皮膚，用手鋸沿切口入骨1.0-1.5cm切入羊頭，即圖1中切口c，切口c為兩側(cè)對(duì)稱切口；
(4)用骨鑿插入“t”字切口輕撬，將大腦外的兩側(cè)頭骨分離取走，暴露完整腦部組織；
(5)用手術(shù)剪和眼科鑷剝離腦膜，取出大腦、小腦、下丘腦及其它腦部組織，見(jiàn)圖2a；
(6)取出大腦后，可用眼科剪將垂體從垂體窩里取出。
將取下的綿羊大腦、小腦、下丘腦和垂體等組織取下后裝入凍存管中，立即放入液氮保存；或者用裝有4％多聚甲醛的50ml離心管盛裝后放入4℃。
實(shí)施例2
將實(shí)施例1采集的綿羊腦部組織與現(xiàn)有方法取得的綿羊腦部組織(見(jiàn)圖2b)進(jìn)行對(duì)比：分別采集綿羊的大腦等組織，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明完整性較好，且污染損傷較小，樣品定位和采集較易。