本發(fā)明涉及一種注射針的制備方法，尤其是涉及一種用于睪丸輸出管注射的注射針制備方法。
背景技術(shù)：
轉(zhuǎn)基因小鼠已是醫(yī)學(xué)和生命科學(xué)研究重要的研究工具。原核顯微注射法制備轉(zhuǎn)基因小鼠是傳統(tǒng)經(jīng)典方法，但是其操作比較繁瑣，技術(shù)要求高。精子介導(dǎo)法制備轉(zhuǎn)基因小鼠是一種新思路，該方法成本低、操作簡(jiǎn)便、周期短。睪丸注射是精子介導(dǎo)制備轉(zhuǎn)基因小鼠的重要方法。目前，利用該方法已成功制備了小鼠、大鼠及兔等實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。通過(guò)睪丸注射法，可以有效地解決當(dāng)前制備轉(zhuǎn)基因小鼠操作復(fù)雜、成本高和效率低等問(wèn)題，將會(huì)推動(dòng)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物在人類疾病建模的應(yīng)用。另外，睪丸注射也是曲細(xì)精管內(nèi)干細(xì)胞移植的重要方法，為研究精子發(fā)生過(guò)程和男性不育發(fā)治療提供了新思路。
睪丸輸出管注射是睪丸注射的重要方法。該注射方法是將外源基因通過(guò)游離的、韌性強(qiáng)的輸出小管注射到睪丸曲細(xì)精管內(nèi)，進(jìn)而轉(zhuǎn)染生精細(xì)胞建立轉(zhuǎn)基因精子。該注射方法操作簡(jiǎn)便可靠，而且不需要昂貴的儀器就能完成，只需要玻璃針就可以完成注射。注射針的質(zhì)量對(duì)注射效率影響非常大。好的注射針不但能提高注射效率，還能減少輸出管的損傷，提高制備轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的成功率。所以，注射針的制備非常重要，但是目前還沒(méi)有成熟的制備睪丸輸出管注射針的方法。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種制備方法簡(jiǎn)單、獨(dú)特，而且用本方法制成的注射針?lè)浅Ｈ菀撞迦氩G丸輸出管，樣品滲漏少，提高注射效率，還能減少輸出管的損傷，提高制備轉(zhuǎn)基因動(dòng)物的成功率、減少或避免動(dòng)物死亡的一種用于睪丸輸出管注射的注射針制備方法。
本發(fā)明通過(guò)如下方式實(shí)現(xiàn)：
一種用于睪丸輸出管注射的注射針制備方法，其特征在于：該方法為將外徑為1mm的薄玻璃管，首先用sutterp-1000拉針儀拉制成內(nèi)徑為1-3um的注射針，再用mf-900煅針儀將針尖在5um處切斷，用eg-400磨針儀磨制針尖角度為30度，最后用mf-900煅針儀將斜面拉尖即可；
所述薄玻璃管是外徑為1mm，內(nèi)徑為0.58mm，長(zhǎng)10cm，內(nèi)徑含玻璃絲的玻璃管；
所述拉針儀具體參數(shù)如下：heat：ramp+30；pull：10；velocit：120；time：0；pressure：200；
所述針尖的磨制為將針內(nèi)徑5μm部位與玻璃珠剛好接觸，踩下腳控開(kāi)關(guān)加熱，當(dāng)看到玻璃針與玻璃珠剛好粘在一起時(shí)，松開(kāi)腳控開(kāi)關(guān)，玻璃珠即可斷開(kāi)玻璃管的尖端，得到內(nèi)徑在5μm的平口針，將得到的平口針再用eg-400磨針儀將針尖磨制成30度的斜面，將注射針固定在持針器上，并調(diào)整持針器與磨石的夾角為30度，磨削速度選擇為1000r/min，顯微鏡下仔細(xì)觀察，直到磨制出30度斜面，且邊緣整齊；
所述針尖的拉尖為用mf-900將注射針頭的斜面做成1-2μm的尖頭，將上述注射針安裝在煅針儀上，調(diào)節(jié)針尖位于玻璃珠上方，踩下腳控開(kāi)關(guān)，當(dāng)發(fā)現(xiàn)針尖端有粘在玻璃珠的跡象時(shí)，快速拉開(kāi)玻璃針，并松開(kāi)腳控開(kāi)關(guān)。
本發(fā)明具有如下效果：
1)方法簡(jiǎn)單獨(dú)特：本發(fā)明提供的方法為該方法為將外徑為1mm的薄玻璃管，首先用sutterp-1000拉針儀拉制成內(nèi)徑為1-3um的注射針，再用mf-900煅針儀將針尖在5um處切斷，用eg-400磨針儀磨制針尖角度為30度，最后用mf-900煅針儀將斜面拉尖即可。
2)提高注射成功率高，進(jìn)而減少或避免動(dòng)物的死亡：動(dòng)物的睪丸輸出管有一定的韌性和游離性，普通注射針需要反復(fù)穿刺才能刺入睪丸輸出管，對(duì)輸出管造成嚴(yán)重?fù)p傷，導(dǎo)致樣品滲漏，嚴(yán)重時(shí)會(huì)導(dǎo)致注射失敗和動(dòng)物死亡。
本技術(shù)：
提供的方法將針尖磨制成30度的斜面，并將斜面拉尖，可以一次性刺入睪丸輸出管，大大減少對(duì)輸出管的損傷和樣品滲漏，提高注射成功率高，進(jìn)而減少或避免動(dòng)物的死亡。
3)制備方法簡(jiǎn)單、成本低，有利于商業(yè)化生產(chǎn)：目前，國(guó)內(nèi)外還未見(jiàn)有同類產(chǎn)品的生產(chǎn)制造。本方法不需要特殊材料，而且原材料玻璃管來(lái)源方便，只需要幾分錢(qián)，成本低。另外，本方法使用儀器制備注射針，并提供了儀器的所有制備參數(shù)，保證了制備針的一致性，有利于商業(yè)化生產(chǎn)。
具體實(shí)施方式
一種用于睪丸輸出管注射的注射針制備方法，該方法為如下步驟：
a.玻璃管的選擇：選擇外徑為1mm，內(nèi)徑為0.58mm，長(zhǎng)10cm的薄玻璃管，玻璃管內(nèi)徑應(yīng)含細(xì)玻璃絲，可以通過(guò)毛吸作用使液體充滿注射針管。玻璃管應(yīng)注意防塵，避免用手直接觸摸玻璃管，也不要用帶有滑石粉的手套操作玻璃管。
b.玻璃管的拉制：用sutterp-1000拉針儀將上述玻璃管拉制成內(nèi)徑為1-3um的注射針。拉針儀具體參數(shù)如下：heat：ramp+30；pull：10；velocit：120；time：0；pressure：200。
c.針尖的磨制：先用mf-900煅針儀將針尖在5um處切斷。將針內(nèi)徑5μm部位與玻璃珠剛好接觸。踩下腳控開(kāi)關(guān)加熱，當(dāng)看到玻璃針與玻璃珠剛好粘在一起時(shí)，松開(kāi)腳控開(kāi)光，玻璃珠即可斷開(kāi)玻璃管的尖端，得到內(nèi)徑在5μm的平口針。將得到的平口針再用eg-400磨針儀將針尖磨制成30度的斜面。將注射針固定在持針器上，并調(diào)整持針器與磨石的夾角為30度。磨削速度選擇為1000r/min,太快或太慢均不利于針的制備。顯微鏡下仔細(xì)觀察，直到磨制出30度斜面，且邊緣整齊。
d.針尖的拉尖：用mf-900將注射針頭的斜面做成1-2μm的尖頭。將上述注射針安裝在煅針儀上，調(diào)節(jié)針尖位于玻璃珠上方，踩下腳控開(kāi)關(guān)，當(dāng)發(fā)現(xiàn)針尖端有粘在玻璃珠的跡象時(shí)，快速拉開(kāi)玻璃針，并松開(kāi)腳控開(kāi)關(guān)。拉尖的針?lè)浅ｄh利，有利于刺入游離的輸出管。
本發(fā)明提供的注射針應(yīng)為一次產(chǎn)品，而且注射針如果有玻璃碎片，應(yīng)淘汰。在睪丸輸出管注射時(shí)，應(yīng)平行進(jìn)針，緩慢增加注射壓力，使注射樣品逐漸充滿曲精細(xì)管。用本方法制成的注射針?lè)浅Ｈ菀撞迦氩G丸輸出管，樣品滲漏少，注射成功率高，而且可以大大減少對(duì)輸出管的損失，減少或避免動(dòng)物的死亡。