本發(fā)明涉及疏水性抗癌藥物載體技術(shù)領(lǐng)域，尤其是涉及一種半胱氨酸/四氧化三鐵/硫化銅/牛血清白蛋白納米復(fù)合粒子及其制備和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

高劑量的化療藥物對人體副作用較為明顯，且非特異性的藥物運輸會對正常組織造成傷害?？拱┬Ч己玫乃幬镒仙即?簡稱“PTX”)水溶性極差，現(xiàn)有臨床應(yīng)用的劑型(溶解于聚氧乙烯蓖麻油和無水乙醇以1:1混合的液體)也已被證實溶劑蓖麻油會對正常組織和細(xì)胞引起嚴(yán)重的副作用。而納米技術(shù)的發(fā)展特別是納米載體在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用中取得了跨越式的發(fā)展，催生出了“納米醫(yī)藥”新領(lǐng)域的發(fā)展。因此，為減小毒副作用，取得更好的治療效果，利用藥物載體進(jìn)行聯(lián)合治療(化療與其他治療方式結(jié)合)已成為一項很有潛力的策略，其既能夠保護(hù)化療藥物及溶劑，又能將藥物靶向運輸至腫瘤位置，同時發(fā)揮其他治療方式如光熱治療的作用以達(dá)到協(xié)同治療效果。

中國專利201510038139.X公開了一種蛋白-聚合物復(fù)合納米載體及其制備方法，所述納米載體包括聚合物內(nèi)核和靶向蛋白質(zhì)外殼；所述聚合物內(nèi)核為氰基丙烯酸烷酯內(nèi)核，所述氰基丙烯酸烷酯內(nèi)核包載著脂溶性抗腫瘤藥物；所述靶向蛋白質(zhì)外殼包裹在所述氰基丙烯酸烷酯內(nèi)核的表面；所述靶向蛋白質(zhì)外殼為親水蛋白質(zhì)外殼。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的就是為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷而提供一種半胱氨酸/四氧化三鐵/硫化銅/牛血清白蛋白納米復(fù)合粒子及其制備和應(yīng)用。

本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案來實現(xiàn)：

一種半胱氨酸/四氧化三鐵/硫化銅/牛血清白蛋白納米復(fù)合粒子，所述的納米復(fù)合粒子由Cys、Fe₃O₄、CuS和BSA組成殼狀結(jié)構(gòu)，其中，含有巰基的半胱氨酸Cys修飾Fe₃O₄后，與BSA長鏈的巰基以二硫鍵結(jié)合，而CuS通過靜電作用吸附于BSA，因此形成的內(nèi)部空間用于負(fù)載難溶于水的抗癌藥物。

優(yōu)選的，用于負(fù)載的抗癌藥物為PTX，所述納米復(fù)合粒子對PTX的負(fù)載率為5％～9％；

所述的納米復(fù)合粒子的直徑為200～400nm。

半胱氨酸/四氧化三鐵/硫化銅/牛血清白蛋白納米復(fù)合粒子的制備方法，包括以下步驟：

(1)取Fe₃O₄納米粒子超聲分散于PBS(0.02M，pH6.0)中，然后加入半胱氨酸水溶液，超聲，再加入碳二亞胺鹽酸鹽，保持室溫水浴，攪拌，離心，洗滌，即得到Cys-Fe₃O₄，分散于去離子水中得到Cys-Fe₃O₄膠體溶液；

(2)取銅鹽與檸檬酸鹽溶于去離子水中，攪拌并加入硫化鹽溶液，攪拌加熱反應(yīng)，然后冷卻至室溫，即得到CuS納米晶體溶液；

(3)取BSA溶于去離子水中，配成BSA溶液；

(4)將步驟(3)制成的BSA溶液、步驟(2)制成的CuS溶液加入步驟(1)制成的Cys-Fe₃O₄膠體溶液中，再加入聚氧乙烯蓖麻油，在超聲降解作用下，Cys-Fe₃O₄與BSA因各自擁有的巰基基團(tuán)相互作用形成二硫鍵而結(jié)合，大量的Cys-Fe₃O₄將會結(jié)合于BSA分子長鏈上，而CuS則會通過靜電作用吸附于BSA表面，聚氧乙烯蓖麻油與水兩種互不相溶的溶劑在超聲作用下形成油滴并被大分子BSA包裹，因而形成了大量半胱氨酸/四氧化三鐵/硫化銅/牛血清白蛋白納米復(fù)合粒子，分離并收集沉淀物，即得到所述納米復(fù)合粒子。

優(yōu)選的，步驟(1)中所述的Fe₃O₄納米粒子通過以下方法制成：

取FeCl₂·4H₂O和FeCl₃·6H₂O加入去離子水，在氮氣保護(hù)下劇烈攪拌并加熱至50℃，然后迅速加入氨水，溶液升溫至80℃并保持2.5小時，冷卻至室溫，收集黑色沉淀物，洗滌，干燥，即得到所述Fe₃O₄納米粒子。

優(yōu)選的，步驟(1)中加入的Fe₃O₄納米粒子和半胱氨酸的質(zhì)量比為(0.8～1.2)：1，半胱酸與碳二亞胺鹽酸鹽的摩爾比為1：(4～5)，所述的PBS的濃度為0.02M，pH＝6；

攪拌時間為20h。

優(yōu)選的，步驟(2)中銅鹽、檸檬酸鹽和硫化鹽的摩爾比為1：(0.5～0.7)：(1～1.5)，攪拌加熱反應(yīng)的工藝條件為：溫度80～95℃，時間為15～25min。

優(yōu)選的，步驟(4)中BSA、CuS和Cys-Fe₃O₄的質(zhì)量比0.002：(2～2.5)：(0.04～0.06)；

超聲降解為：超聲波是垂直縱波，插入太深不容易形成對流，因此需將超聲波細(xì)胞粉碎儀尖端插入水油交界面，獲得最佳超聲效率。超聲時間2秒，間隙時間2秒，并且需要外加冰水浴降溫，將反應(yīng)溫度控制在20℃以下，防止反應(yīng)溫度過高使蛋白變性。超聲強(qiáng)度設(shè)置為750W·cm^-1，強(qiáng)度太大不利于形成納米微乳，強(qiáng)度太小形成的納米粒子粒徑將偏大。

優(yōu)選的，步驟(4)中所述的聚氧乙烯蓖麻油中還可以加入抗癌藥物，并繼續(xù)超聲降解，分離并收集沉淀物，此時，得到以半胱氨酸/四氧化三鐵/硫化銅/牛血清白蛋白納米復(fù)合粒子為載體，抗癌藥物為負(fù)載物的納米藥物。

更優(yōu)選的，加入的抗癌藥物與BSA的質(zhì)量比為(2～5)：0.002。

半胱氨酸/四氧化三鐵/硫化銅/牛血清白蛋白納米復(fù)合粒子在核磁成像、藥物負(fù)載、近紅外光熱治療和聯(lián)合治療方面的應(yīng)用。

本發(fā)明的主要目的在于提供一種半胱氨酸/四氧化三鐵/硫化銅/牛血清白蛋白(Cys-Fe₃O₄/CuS@BSA)納米藥物載體的制備方法和應(yīng)用，該納米載體制備方法為一步微乳液法，反應(yīng)步驟較為簡單。通過近紅外激光照射和pH調(diào)控可以把化療藥物和光熱試劑有效傳輸?shù)侥[瘤部位，在減小對正常組織和細(xì)胞毒副作用的同時，有效的殺死癌細(xì)胞。此載體在核磁成像、載藥、靶向給藥和光熱治療方面具有廣大的應(yīng)用前景。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點：

1)用本發(fā)明的方法制備得到的Cys-Fe₃O₄/CuS@BSA納米復(fù)合粒子采用一步微乳液法，工藝簡單，成本較低，明顯縮短了納米藥物載體的制備周期。

2)用本發(fā)明的方法制備得到的Cys-Fe₃O₄/CuS@BSA納米復(fù)合粒子具有良好的生物相容性和較大的內(nèi)部空間，能夠很好的負(fù)載疏水性化療藥物紫杉醇(PTX)，并且保護(hù)藥物的溶劑，大大降低藥物及其溶劑對正常組織和細(xì)胞的毒副作用。經(jīng)過計算，其有較高的PTX負(fù)載率，為6.63％；且具有pH響應(yīng)的和近紅外光可控的藥物釋放性能。在916nm的激光的安全功率密度(1.0W/cm²)照射下，能有效的將近紅外激光的能量轉(zhuǎn)換成熱量殺死癌細(xì)胞進(jìn)行光熱治療，實現(xiàn)化療和光熱治療協(xié)同作用。

3)用本發(fā)明的方法制備得到的Cys-Fe₃O₄/CuS@BSA納米復(fù)合粒子同時也是優(yōu)良的MRI造影劑，有很好的T₂加權(quán)像和r₂弛豫率，同時在磁場作用下具備較強(qiáng)的磁響應(yīng)性能。

附圖說明

圖1為本發(fā)明的Cys-Fe₃O₄/CuS@BSA納米復(fù)合粒子的顯微鏡圖；

圖2為本發(fā)明的Cys-Fe₃O₄/CuS@BSA納米復(fù)合粒子的SEM圖；

圖3為本發(fā)明的Cys-Fe₃O₄/CuS@BSA納米復(fù)合粒子的TEM圖；

圖4為本發(fā)明的Cys-Fe₃O₄/CuS@BSA納米復(fù)合粒子的體外實驗的光熱性能圖；

圖5為本發(fā)明的負(fù)載藥物的Cys-Fe₃O₄/CuS@BSA納米復(fù)合粒子的升溫圖；

圖6為本發(fā)明中負(fù)載藥物PTX的Cys-Fe₃O₄/CuS@BSA納米復(fù)合材料的藥物緩釋曲線；

圖7為本發(fā)明的Cys-Fe₃O₄/CuS@BSA納米復(fù)合粒子的T₂加權(quán)像；

圖8為本發(fā)明的Cys-Fe₃O₄/CuS@BSA納米復(fù)合粒子的r₂弛豫率；

圖9為本發(fā)明的Cys-Fe₃O₄/CuS@BSA納米復(fù)合粒子的樣品外加磁體效果圖；

圖10為HeLa細(xì)胞與自由PTX、負(fù)載等量PTX的Cys-Fe₃O₄/CuS@BSA納米復(fù)合材料培育24小時的細(xì)胞存活率圖；

圖11為Cys-Fe₃O₄/CuS@BSA納米復(fù)合粒子和負(fù)載PTX的Cys-Fe₃O₄/CuS@BSA納米復(fù)合材料的化療、光熱治療以及化療和光熱治療協(xié)同作用效果圖。

具體實施方式

下面結(jié)合附圖和具體實施例對本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。

實施例1

一種半胱氨酸/四氧化三鐵/硫化銅/牛血清白蛋白納米復(fù)合粒子，以BSA結(jié)合半胱氨酸修飾Fe₃O₄、CuS納米晶為殼，內(nèi)部空間用于負(fù)載難溶于水的抗癌藥物(如PTX)。該納米復(fù)合粒子對PTX的負(fù)載率為5％～9％。

該半胱氨酸/四氧化三鐵/硫化銅/牛血清白蛋白納米復(fù)合粒子的制備方法包括如下步驟：

(1)磁性Fe₃O₄粒子按照傳統(tǒng)共沉淀法進(jìn)行制備：1.4g的FeCl₂·4H₂O和2.0g的FeCl₃·6H₂O加入100mL去離子水，在氮氣保護(hù)下劇烈攪拌并加熱至50℃，接著迅速加入30mL氨水，溶液升溫至80℃并保持2.5小時。然后冷卻至室溫，通過外加磁鐵得到黑色沉淀物，用乙醇清洗數(shù)次后凍干備用。

(2)將半胱氨酸修飾到四氧化三鐵納米粒子上制備Cys-Fe₃O₄：首先，240mgFe₃O₄納米粒子超聲1小時分散在80mL的PBS(0.02M，pH6.0)中；其次加入12mL的半胱氨酸水溶液(20mg/mL)，在氮氣保護(hù)下劇烈超聲30分鐘；然后將240mg的半胱氨酸與EDC以1:4.5的摩爾比例加入上述溶液，保持室溫水浴并劇烈攪拌20小時；最后11000rpm離心收集Cys-Fe₃O₄并水洗數(shù)次，分散在去離子水中以4℃條件保存。

(3)CuS納米晶的制備：室溫條件下，68.2mg的CuCl₂與80mg的檸檬酸鈉溶解在360mL的去離子水中，然后邊攪拌邊加入40mL硫化鈉的水溶液(2.4mg/mL)；攪拌5分鐘后將溶液升溫至90℃并保持20min；然后，轉(zhuǎn)移至冰水浴中冷卻到室溫。

(4)Cys-Fe₃O₄/CuS@BSA的制備：首先將牛血清白蛋白溶解于去離子水形成1wt％的BSA溶液；其次將200μL的BSA溶液，20ml的CuS溶液和300μL的聚氧乙烯蓖麻油加入Cys-Fe₃O₄膠體溶液中(1wt％，5mL)；然后將超聲波細(xì)胞粉碎儀尖端插入水油交界面，超聲強(qiáng)度設(shè)置為750W·cm^-1，反應(yīng)過程應(yīng)保持在冰水浴中進(jìn)行以控制反應(yīng)溫度在20℃以下，防止蛋白變性；超聲降解30分鐘后水油微乳液將轉(zhuǎn)變?yōu)樯钭厣珣腋∫?，將此懸浮液保存?℃。

(制備Cys-Fe₃O₄/CuS@BSA和負(fù)載藥物PTX的Cys-Fe₃O₄/CuS@BSA均使用一步法，步驟相同，因此區(qū)別只在于加入純的聚氧乙烯蓖麻油或是加入含PTX的聚氧乙烯蓖麻油)

(5)復(fù)合納米材料粒徑大小：所制得的Cys-Fe₃O₄/CuS@BSA納米復(fù)合粒子的顯微鏡圖、SEM圖、低倍和高倍TEM圖分別見圖1～圖3，可以看出Cys-Fe₃O₄/CuS@BSA磁性納米復(fù)合粒子粒徑約為300nm，這種納米級別的粒徑對于細(xì)胞實驗和體內(nèi)腫瘤治療是較為合適的。

(6)光熱性能：Cys-Fe₃O₄/CuS@BSA納米復(fù)合粒子的光熱性能及升溫情況分別見圖4和圖5，隨著不同材料濃度的增加(25、50、100、200及400μg/mL)，溶液溫度的升高數(shù)值分別為5.5，10.7，14.5，18.1和23.5℃?？梢姴牧蠞舛瘸^50μg/mL的溫度變化已經(jīng)足夠可以殺死癌細(xì)胞。

(7)藥物負(fù)載：通過將含有形成Cys-Fe₃O₄/CuS@BSA核殼結(jié)構(gòu)納米復(fù)合粒子所需試劑的水溶液中加入300μL含PTX的聚氧乙烯蓖麻油溶液(10mg/mL)，并將混合物在冰水浴中超聲降解，用外部磁場分離得到沉淀物分散于去離子水中，得到10ml濃度為4.4mg/mL負(fù)載PTX的Cys-Fe₃O₄/CuS@BSA納米藥物(即僅本實施例的步驟(4)中的)。

計算得出Cys-Fe₃O₄/CuS@BSA納米復(fù)合材料PTX的包封率為97.3％，負(fù)載率為6.63％。

(8)藥物釋放：取4份10mL負(fù)載藥物的Cys-Fe₃O₄/CuS@BSA納米復(fù)合藥物的水溶液(1.0mg/mL)于透析袋中，并分別置入90mLpH7.4和pH5.0的磷酸緩沖液中，恒溫振蕩，每隔一定的時間取出50mL緩沖液測量PTX濃度，加入新的等量緩沖液作為補(bǔ)充。為了研究激光照射對藥物釋放的影響，各選取1份置于pH7.4和pH5.0的緩沖液中的樣品在每個時段內(nèi)增加一次5分鐘的近紅外激光照射(916nm，1.0W/cm²)，即pH7.4+NIR和pH5.0+NIR樣品，藥物釋放結(jié)果見圖6。癌細(xì)胞和正常細(xì)胞周圍的酸堿值分別接近pH5.0和pH7.4，由圖6可知，pH5.0(癌細(xì)胞周圍)條件下在有或無激光照射情況下的藥物釋放量大概在95.92％和81.83％；而pH7.4(正常細(xì)胞周圍)條件下在有或無激光照射情況下的藥物釋放量大概在58.43％和38.44％；所以該納米復(fù)合載體負(fù)載的藥物不僅在特定的癌細(xì)胞偏酸性環(huán)境中可得到更多的釋放，而且近紅外照射也可加速其釋放。

(9)核磁成像與磁性能：取Fe濃度分別為0、0.0125、0.025、0.05、0.1、0.2和0.4mM的Cys-Fe₃O₄/CuS@BSA納米復(fù)合粒子水溶液置于核磁共振分析與成像系統(tǒng)中，最終得到T₂加權(quán)成像圖和r₂弛豫率，結(jié)果見圖7和圖8。結(jié)果證明材料具有明暗梯度較為明顯的T₂加權(quán)像和高達(dá)124.96m/(Ms)的r₂弛豫率，與此同時圖9中外加磁鐵20秒后的效果圖，都很好的說明了制備的納米復(fù)合粒子具備很好的磁性。

(10)細(xì)胞毒性實驗：結(jié)果見圖10和圖11。由圖可知，即使在納米復(fù)合材料濃度很高的情況下，細(xì)胞仍有很高的存活率，可見材料對細(xì)胞的毒性是可以忽略的。而納米復(fù)合材料負(fù)載一定濃度藥物后對HeLa細(xì)胞的毒性與相同濃度的自由藥物相當(dāng)，說明載體對藥物進(jìn)行保護(hù)后并不會降低化療藥物本身的藥性。

實施例2

一種半胱氨酸/四氧化三鐵/硫化銅/牛血清白蛋白納米復(fù)合粒子，所述的納米復(fù)合粒子由Cys、Fe₃O₄、CuS和BSA組成殼狀結(jié)構(gòu)，其中，Cys修飾Fe₃O₄后，與BSA以二硫鍵結(jié)合形成殼，CuS吸附與BSA，殼內(nèi)空間用于負(fù)載難溶于水的抗癌藥物PTX，所述的納米復(fù)合粒子的直徑約為300nm。

上述半胱氨酸/四氧化三鐵/硫化銅/牛血清白蛋白納米復(fù)合粒子的制備方法，包括以下步驟：

(1)取Fe₃O₄納米粒子超聲分散于PBS(0.02M，pH6.0)中，然后加入半胱氨酸水溶液，超聲，再加入碳二亞胺鹽酸鹽，保持室溫水浴，攪拌，離心，洗滌，即得到Cys-Fe₃O₄，分散于去離子水中得到Cys-Fe₃O₄膠體溶液；

(2)取銅鹽(本實施例為氯化銅)與檸檬酸鹽(檸檬酸鈉)溶于去離子水中，攪拌并加入硫化鹽(硫化鈉)溶液，攪拌加熱反應(yīng)，然后冷卻至室溫，即得到CuS納米晶體溶液；

(3)取BSA溶于去離子水中，配成BSA溶液；

(4)將步驟(3)制成的BSA溶液、步驟(2)制成的CuS溶液加入步驟(1)制成的Cys-Fe₃O₄膠體溶液中，再加入聚氧乙烯蓖麻油，超聲降解，分離并收集沉淀物，即得到所述納米復(fù)合粒子。

步驟(1)中所述的Fe₃O₄納米粒子通過以下方法制成：

取FeCl₂·4H₂O和FeCl₃·6H₂O加入去離子水，在氮氣保護(hù)下劇烈攪拌并加熱至50℃，然后迅速加入氨水，溶液升溫至80℃并保持2.5小時，冷卻至室溫，收集黑色沉淀物，洗滌，干燥，即得到所述Fe₃O₄納米粒子。

步驟(1)中加入的Fe₃O₄納米粒子和半胱氨酸的質(zhì)量比為0.8：1，半胱氨酸與碳二亞胺鹽酸鹽的摩爾比為1：4，所述的PBS的濃度為0.02M，pH＝6；

攪拌時間為20h。

步驟(2)中銅鹽、檸檬酸鹽和硫化鹽的摩爾比為1：0.5：1，攪拌加熱反應(yīng)的工藝條件為：溫度90℃，時間為20min。

步驟(4)中BSA、CuS和Cys-Fe₃O₄的質(zhì)量比0.002：2：0.04；

超聲降解為：將超聲波細(xì)胞粉碎儀尖端插入水油交界面，反應(yīng)溫度控制在20℃以下，超聲強(qiáng)度設(shè)置為750W·cm^-1。

步驟(4)中所述的聚氧乙烯蓖麻油中還可以加入抗癌藥物，并繼續(xù)超聲降解，分離并收集沉淀物，此時，得到負(fù)載有抗癌藥物的半胱氨酸/四氧化三鐵/硫化銅/牛血清白蛋白納米復(fù)合材料。加入的抗癌藥物與BSA的質(zhì)量比為2：0.002。

實施例3

一種半胱氨酸/四氧化三鐵/硫化銅/牛血清白蛋白納米復(fù)合粒子，所述的納米復(fù)合粒子由Cys、Fe₃O₄、CuS和BSA組成殼狀結(jié)構(gòu)，其中，Cys修飾Fe₃O₄后，與BSA以二硫鍵結(jié)合形成殼，CuS吸附與BSA，殼內(nèi)空間用于負(fù)載難溶于水的抗癌藥物PTX，所述的納米復(fù)合粒子的直徑約為300nm。

上述半胱氨酸/四氧化三鐵/硫化銅/牛血清白蛋白納米復(fù)合粒子的制備方法，包括以下步驟：

(1)取Fe₃O₄納米粒子超聲分散于PBS(0.02M，pH6.0)中，然后加入半胱氨酸水溶液，超聲，再加入碳二亞胺鹽酸鹽，保持室溫水浴，攪拌，離心，洗滌，即得到Cys-Fe₃O₄，分散于去離子水中得到Cys-Fe₃O₄膠體溶液；

(2)取銅鹽與檸檬酸鹽溶于去離子水中，攪拌并加入硫化鹽溶液，攪拌加熱反應(yīng)，然后冷卻至室溫，即得到CuS納米晶體溶液；

(3)取BSA溶于去離子水中，配成BSA溶液；

(4)將步驟(3)制成的BSA溶液、步驟(2)制成的CuS溶液加入步驟(1)制成的Cys-Fe₃O₄膠體溶液中，再加入聚氧乙烯蓖麻油，超聲降解，分離并收集沉淀物，即得到所述納米復(fù)合粒子。

步驟(1)中所述的Fe₃O₄納米粒子通過以下方法制成：

取FeCl₂·4H₂O和FeCl₃·6H₂O加入去離子水，在氮氣保護(hù)下劇烈攪拌并加熱至50℃，然后迅速加入氨水，溶液升溫至80℃并保持2.5小時，冷卻至室溫，收集黑色沉淀物，洗滌，干燥，即得到所述Fe₃O₄納米粒子。

步驟(1)中加入的Fe₃O₄納米粒子和半胱氨酸的質(zhì)量比為1.2：1，半胱酸與碳二亞胺鹽酸鹽的摩爾比為1：5，所述的PBS的濃度為0.02M，pH＝6；

攪拌時間為20h。

步驟(2)中銅鹽、檸檬酸鹽和硫化鹽的摩爾比為1：0.7：1.5，攪拌加熱反應(yīng)的工藝條件為：溫度80℃，時間為25min。

步驟(4)中BSA、CuS和Cys-Fe₃O₄的質(zhì)量比0.002：2.5)：0.06；

超聲降解為：將超聲波細(xì)胞粉碎儀尖端插入水油交界面，反應(yīng)溫度控制在20℃以下，超聲強(qiáng)度設(shè)置為750W·cm^-1。

步驟(4)中所述的聚氧乙烯蓖麻油中還可以加入抗癌藥物，并超聲降解，分離并收集沉淀物，此時，得到負(fù)載有抗癌藥物的半胱氨酸/四氧化三鐵/硫化銅/牛血清白蛋白納米復(fù)合材料。加入的抗癌藥物與BSA的質(zhì)量比為5：0.002。

實施例4

一種半胱氨酸/四氧化三鐵/硫化銅/牛血清白蛋白納米復(fù)合粒子，所述的納米復(fù)合粒子由Cys、Fe₃O₄、CuS和BSA組成殼狀結(jié)構(gòu)，其中，Cys修飾Fe₃O₄后，與BSA以二硫鍵結(jié)合形成殼，CuS吸附與BSA，殼內(nèi)空間用于負(fù)載難溶于水的抗癌藥物PTX，所述的納米復(fù)合粒子的直徑約為300nm。

上述半胱氨酸/四氧化三鐵/硫化銅/牛血清白蛋白納米復(fù)合粒子的制備方法，包括以下步驟：

(1)取Fe₃O₄納米粒子超聲分散于PBS(0.02M，pH6.0)中，然后加入半胱氨酸水溶液，超聲，再加入碳二亞胺鹽酸鹽，保持室溫水浴，攪拌，離心，洗滌，即得到Cys-Fe₃O₄，分散于去離子水中得到Cys-Fe₃O₄膠體溶液；

(2)取銅鹽與檸檬酸鹽溶于去離子水中，攪拌并加入硫化鹽溶液，攪拌加熱反應(yīng)，然后冷卻至室溫，即得到CuS納米晶體溶液；

(3)取BSA溶于去離子水中，配成BSA溶液；

(4)將步驟(3)制成的BSA溶液、步驟(2)制成的CuS溶液加入步驟(1)制成的Cys-Fe₃O₄膠體溶液中，再加入聚氧乙烯蓖麻油，超聲降解，分離并收集沉淀物，即得到所述納米復(fù)合粒子。

步驟(1)中所述的Fe₃O₄納米粒子通過以下方法制成：

取FeCl₂·4H₂O和FeCl₃·6H₂O加入去離子水，在氮氣保護(hù)下劇烈攪拌并加熱至50℃，然后迅速加入氨水，溶液升溫至80℃并保持2.5小時，冷卻至室溫，收集黑色沉淀物，洗滌，干燥，即得到所述Fe₃O₄納米粒子。

步驟(1)中加入的Fe₃O₄納米粒子和半胱氨酸的質(zhì)量比為1：1，半胱酸與碳二亞胺鹽酸鹽的摩爾比為1：4.5，所述的PBS的濃度為0.02M，pH＝6；

攪拌時間為20h。

步驟(2)中銅鹽、檸檬酸鹽和硫化鹽的摩爾比為1：0.6：1.25，攪拌加熱反應(yīng)的工藝條件為：溫度95℃，時間為15min。

步驟(4)中BSA、CuS和Cys-Fe₃O₄的質(zhì)量比0.002：2.3：0.05；

超聲降解為：將超聲波細(xì)胞粉碎儀尖端插入水油交界面，反應(yīng)溫度控制在20℃以下，超聲強(qiáng)度設(shè)置為750W·cm^-1。

步驟(4)中所述的聚氧乙烯蓖麻油中還可以加入抗癌藥物，并繼續(xù)超聲降解，分離并收集沉淀物，此時，得到負(fù)載有抗癌藥物的半胱氨酸/四氧化三鐵/硫化銅/牛血清白蛋白納米復(fù)合材料。加入的抗癌藥物與BSA的質(zhì)量比為3：0.002。

上述的對實施例的描述是為便于該技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能理解和使用發(fā)明。熟悉本領(lǐng)域技術(shù)的人員顯然可以容易地對這些實施例做出各種修改，并把在此說明的一般原理應(yīng)用到其他實施例中而不必經(jīng)過創(chuàng)造性的勞動。因此，本發(fā)明不限于上述實施例，本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)本發(fā)明的揭示，不脫離本發(fā)明范疇所做出的改進(jìn)和修改都應(yīng)該在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。