本發(fā)明涉及中藥應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及玉屏風(fēng)散在制備抗衰老或老年性癡呆癥藥物中的用途。

背景技術(shù)：

衰老是人類生命過程中的必然規(guī)律，會(huì)導(dǎo)致腦部的神經(jīng)元的數(shù)目逐漸減少，甚至產(chǎn)生老年性癡呆癥等與衰老密切相關(guān)的神經(jīng)退行性疾病。衰老可能是老年癡呆癥等神經(jīng)系統(tǒng)退行性改變的最初級(jí)階段。衰老是整個(gè)機(jī)體、多個(gè)方面的功能退化，這正與中醫(yī)藥的作用特點(diǎn)相契合，深入挖掘傳統(tǒng)補(bǔ)益中藥，并將傳統(tǒng)抗衰老理論與現(xiàn)代醫(yī)藥學(xué)測(cè)試手段有機(jī)結(jié)合，將有助于找到理想的抗衰老方法（宋朝春,等. 衰老及抗衰老藥物的研究進(jìn)展. 中國(guó)生化藥物雜志, 2015, 35(1): 163-170）。

老年性癡呆癥系發(fā)生于老年期或老年前期的一種慢性進(jìn)行性精神衰退性疾病，病理改變是以大腦的萎縮和變性為主，發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，發(fā)病過程涉及環(huán)節(jié)較多。20世紀(jì)80年代開始了中醫(yī)藥防治老年癡呆的研究，現(xiàn)已取得很大進(jìn)展，對(duì)老年性癡呆病因病理達(dá)成了較為一致的觀點(diǎn)：癡呆病位在腦，病性屬本虛標(biāo)實(shí)。中醫(yī)認(rèn)為老年性癡呆病因是因年老腎衰，五臟氣衰終至髓虧，而髓虧又耗及腎精，進(jìn)而“腎虛髓虧”發(fā)病。腎虛水無所主，脾虛不運(yùn)水濕，濕聚生痰，痰擾清靈則昏蒙呆鈍。因此，補(bǔ)腎填精益髓功效的中藥可以抗衰延年；逐瘀化痰，疏通脈絡(luò)，以祛邪之法破除痰瘀互結(jié)，得以清竅安神（蘇芮，等. 中醫(yī)對(duì)老年性癡呆病因病機(jī)及中藥治療研究. 中華中醫(yī)藥雜志, 2011, 26(9): 1917-1920.）。

玉屏風(fēng)散系中醫(yī)扶正固本的經(jīng)典名方，始創(chuàng)于元代，藥雖三味，然藥簡(jiǎn)效宏，集治療與預(yù)防與一體，倍受歷代醫(yī)藥學(xué)家推崇。玉屏風(fēng)散具有益氣，固表，止汗之功效，用于表虛不固，自汗惡風(fēng)，面色咣白，或體虛易感風(fēng)邪者，還可以用以防治過敏性鼻炎、上呼吸道感染等疾病，臨床療效顯著（中國(guó)藥典（2015年版，一部），2015：743-746）。黃芪具有補(bǔ)氣升陽，生津養(yǎng)血之功效；白術(shù)健脾益氣。防風(fēng)祛風(fēng)散寒，增強(qiáng)方劑的滲透力，以這三味藥組成的玉屏風(fēng)散具有補(bǔ)氣健脾之功效。針對(duì)老年性癡呆的腎虛髓虧之病本，玉屏風(fēng)散能通過補(bǔ)氣特別是補(bǔ)充人體之元?dú)舛鸺ぐl(fā)全身臟腑經(jīng)絡(luò)形體官竅的生理活動(dòng)；脾主運(yùn)化水谷精微，腎中之精氣有賴于水谷精微不斷充養(yǎng)，而髓由腎精所化生，玉屏風(fēng)能通過健脾而運(yùn)化水谷精微，讓腎中之精氣充盛，腦髓亦得以充養(yǎng)。玉屏風(fēng)可以從物質(zhì)與功能兩方面對(duì)腎虛髓虧起到治療作用。而對(duì)于老年性癡呆的痰瘀阻滯之表，玉屏風(fēng)能通過健脾補(bǔ)氣起到脾運(yùn)水谷，使體內(nèi)水不聚而成濕生痰，氣盛血行不留瘀。根據(jù)傳統(tǒng)中醫(yī)的“補(bǔ)腎填精益髓”理論，玉屏風(fēng)存在基于健脾益腎、生精補(bǔ)髓機(jī)制的抗衰老和防治老年性癡呆癥的潛力。

端粒酶（Telomerase）是一種核酸蛋白復(fù)合體，是端粒復(fù)制所必須的一種特殊的DNA聚合酶，若激活端粒酶，就可以增加細(xì)胞分裂次數(shù)，從而延長(zhǎng)壽命。在老年性癡呆（Alzheimer’s Disease，AD）病人及實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ椭邪l(fā)現(xiàn)，端?？s短是引發(fā)淀粉樣蛋白（Aβ）聚集和Tau蛋白過度磷酸化以及認(rèn)知功能障礙的重要因素，通過清除氧化應(yīng)激和神經(jīng)炎癥以及激活端粒酶等手段，延長(zhǎng)端粒長(zhǎng)度或延緩端?？s短的速度，有可能對(duì)防治老年性癡呆癥具有重要意義（Jaskelioff et al., Telomerase reactivation reverses tissue degeneration in aged telomerase-deficient mice, Nature, 2010, 469, 102–106 ; Cai et al., Telomere Shortening and Alzheimer’s Disease, Neuromol Med, 2013, 15: 25–48）。

因此，本申請(qǐng)中提供了玉屏風(fēng)散在制備基于端粒酶機(jī)制的抗衰老和抗老年性癡呆癥藥物中的應(yīng)用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)中的缺陷，提供玉屏風(fēng)散用于抗衰老和防治老年癡呆癥的醫(yī)藥新用途，為臨床用藥提供精準(zhǔn)的依據(jù)。

本發(fā)明所述的玉屏風(fēng)散包含下列重量份的原料：1-3份黃芪，1-3份白術(shù)，1-2份防風(fēng)。

本發(fā)明所述的玉屏風(fēng)散可以制成多種制劑：如口服液、顆粒劑、片劑、膠囊劑等。

所述的藥物制劑包括藥學(xué)上可接受的載體或輔料，所述載體和/或輔料為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知曉，在此不做贅述。

本發(fā)明所述的玉屏風(fēng)散，其制備技術(shù)屬于現(xiàn)有技術(shù)，可以從現(xiàn)有專利公開文獻(xiàn)中獲得或根據(jù)公開的藥品標(biāo)準(zhǔn)制備。

本發(fā)明提供的玉屏風(fēng)散在抗衰老和老年性癡呆方面的新用途，是基于端粒酶以及與端粒酶相關(guān)的氧化應(yīng)激及神經(jīng)炎癥機(jī)制，具有溫和有效的激活端粒酶作用，在抗衰老和抗老年性癡呆方面具有良好的應(yīng)用潛力。玉屏風(fēng)散是傳統(tǒng)中藥，具有長(zhǎng)期的臨床使用記錄，安全有效，長(zhǎng)期使用未出現(xiàn)明顯的副作用。

附圖說明

圖1為玉屏風(fēng)散對(duì)BJ成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)的促進(jìn)作用結(jié)果；左圖為對(duì)22PD的BJ細(xì)胞（BJ 22PD）的細(xì)胞增長(zhǎng)率的影響；右圖為對(duì)27PD的BJ細(xì)胞（BJ 27PD）的的細(xì)胞增長(zhǎng)率的影響。

圖2為玉屏風(fēng)散對(duì)端粒酶活性的影響結(jié)果，圖中，A為凝膠成像的結(jié)果；B為玉屏風(fēng)散對(duì)端粒酶激活影響的數(shù)據(jù)直觀圖。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施方式和附圖來對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行描述，以使本發(fā)明技術(shù)人員更好的理解，下列實(shí)施例用來說明本發(fā)明，但不限制本發(fā)明的范圍。

本發(fā)明中涉及的藥材均購(gòu)自藥材公司，經(jīng)專業(yè)藥師鑒定均符合《中華人民共和國(guó)藥典》標(biāo)準(zhǔn)。

BJ 成纖維細(xì)胞購(gòu)自美國(guó)ATCC；

TRAPEZE^?端粒酶試劑盒購(gòu)自美國(guó)EMD millipore；

黑腹果蠅 購(gòu)自第二軍醫(yī)大學(xué)；

CAT、SOD和MDA試劑盒購(gòu)自南京建成生物工程研究所。

實(shí)施例1：

將黃芪、炒白術(shù)、防風(fēng)按質(zhì)量份數(shù) 1:1:1 配制而成的玉屏風(fēng)散組方，干燥后粉碎至20目，將3 kg 該組方藥材浸泡于30 L蒸餾水中，回流提取2 h，抽濾后藥渣再加入30 L 蒸餾水，回流提取 2h抽濾。兩次濾液合并濃縮至稠膏。該稠膏經(jīng)真空減壓干燥機(jī)(60℃，-0.06 MPa) 后粉碎，過100 目篩，即得玉屏風(fēng)散組方提取物。

實(shí)施例2：

取上述實(shí)施例1中的組方提取物制備成片劑，包括以下具體步驟：組方提取物中加入其質(zhì)量的 3％糊精、3％淀粉，混合均勻后用體積濃度為 60-70％的乙醇為粘合劑，依次經(jīng)高速混合制粒機(jī)制粒、沸騰干燥機(jī)干燥、振蕩篩整粒，并加入組方提取物質(zhì)量的 0.1％滑石粉，混合均勻后用壓片機(jī)壓片，即得玉屏風(fēng)散片劑。 實(shí)施例3：

取上述實(shí)施例1中的組方提取物制備成膠囊劑，包括以下具體步驟： 60 g組方提取物干燥粉末，加入30 g可溶性淀粉和90 mL 70%乙醇，混勻，60℃烘干，粉碎。按每粒0.45 g 制成膠囊。

實(shí)施例4：

玉屏風(fēng)散口服液的制備，具體步驟：實(shí)施例1中合并后的濾液500 mL，濃縮至100 mL后，離心，上清液中加入蔗糖糖漿適量，罐裝，滅菌，即得。

實(shí)施例5：

將黃芪、炒白術(shù)和防風(fēng)按3:1:1 的比例配伍。防風(fēng)單獨(dú)提取揮發(fā)油，所得藥渣與黃芪和炒白術(shù)加10倍質(zhì)量的蒸餾水煎煮，煎煮兩次，時(shí)間分別為1.5 h和1 h，合并煎液。過濾后濃縮，加乙醇至70%，靜置，過濾，濾液減壓回收乙醇，所得濃縮液與防風(fēng)的水露混勻，靜置，取上清，濃縮至相對(duì)密度1.30-1.33（70℃），加適量輔料制成顆粒，冷卻后噴灑上述防風(fēng)揮發(fā)油，混勻后即得。

實(shí)施例6：

玉屏風(fēng)散對(duì)BJ成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)的促進(jìn)作用：BJ成纖維細(xì)胞是一種快速衰老的細(xì)胞，經(jīng)常用來做為一種篩選用的細(xì)胞模型，評(píng)價(jià)抗衰老物質(zhì)，故本實(shí)施例選用BJ細(xì)胞模型測(cè)定玉屏風(fēng)散的抗衰老作用。

BJ 成纖維細(xì)胞（20-25 PD）接種于 12 孔板中，置于37 ℃，5% CO₂孵箱培養(yǎng)36 h，加入實(shí)施例1中制備的玉屏風(fēng)散，濃度為0.01，0.1，1.0，10，100 μg/mL，空白組為0.1% DMSO，復(fù)孔。繼續(xù)孵育36 h后用MTT法測(cè)定其吸光度，結(jié)果如圖1所示，可見，玉屏風(fēng)散對(duì)22PD的BJ細(xì)胞（BJ 22PD）的細(xì)胞增長(zhǎng)率相對(duì)空白對(duì)照組分別為：-1.6%，4.8%，0%，5.1%和-3.3%（圖1A），說明玉屏風(fēng)散在0.1-10 μg/mL范圍內(nèi)對(duì)BJ 22PD細(xì)胞具有微弱的促生長(zhǎng)作用；對(duì)27PD的BJ細(xì)胞（BJ 27PD）的細(xì)胞增長(zhǎng)率相對(duì)空白對(duì)照組分別為：2.7%，12.0%，11.4%，14.4%和14.4%（圖1B），說明在0.01-100 μg/mL范圍內(nèi)對(duì)BJ 27PD細(xì)胞具有溫和的促生長(zhǎng)作用。

采用TRAP實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)玉屏風(fēng)散對(duì)端粒酶活性的影響：BJ 成纖維細(xì)胞（30-35 PD）接種于 12 孔板中，分別加入加入實(shí)施例1中制備的玉屏風(fēng)散（0.01，0.1，1，10，100 μg/mL），37 ℃下 5% CO2 孵箱培養(yǎng)，每 24 h 更換一半含藥物的培養(yǎng)基。細(xì)胞增加至 75%時(shí)收集細(xì)胞，離心除去培養(yǎng)液，PBS 洗滌，Chaps 裂解，離心，取上清液，參照TRAPEZE^?端粒酶試劑盒操作說明，凝膠在 Storm?成像系統(tǒng)中掃描，利用 ImageQuant TL 軟件計(jì)算玉屏風(fēng)散對(duì)端粒酶激活的影響，空白組為 0.1 % DMSO，結(jié)果見圖2A。

在0.01，0.1，1.0，10和100 μg/mL濃度下，端粒酶活性分別增加14.9%，42.3%，43.4%，-11.4%和-16.0%（圖2B）。說明玉屏風(fēng)散在0.01μg/mL-1.0 μg/mL 濃度下具有顯著的激活端粒酶的作用，但在較高濃度下（10 μg/mL 和100 μg/mL）反而表現(xiàn)抑制端粒酶的作用。上述結(jié)果表明玉屏風(fēng)散在合適的濃度范圍內(nèi)具有基于端粒酶機(jī)制的抗神經(jīng)細(xì)胞衰老和防治衰老及與衰老相關(guān)的疾病的潛力。

實(shí)施例7：

采用果蠅實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)玉屏風(fēng)散對(duì)氧化應(yīng)激效應(yīng)的影響：采用果蠅培養(yǎng)基（HB8590）飼養(yǎng)黑腹果蠅；設(shè)置空白組，藥物組（玉屏風(fēng)散組）：在培養(yǎng)基中分別添加濃度為100 mg/L和30 mg/L的玉屏風(fēng)散。

果蠅壽命實(shí)驗(yàn) 收集48 h羽化黑腹果蠅成蟲，隨機(jī)分組，每組果蠅400只，雌雄各半。每96 h更換新鮮培養(yǎng)基。實(shí)驗(yàn)開始后，每天定點(diǎn)觀察，記錄果蠅死亡數(shù)，直到各組果蠅全部死亡為止。計(jì)算果蠅的半數(shù)死亡時(shí)間、最高壽命、平均壽命和平均延壽率，其中平均延壽率(% )= (給藥組平均壽命-對(duì)照組平均壽命) /對(duì)照組平均壽命×100%。實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見表1，說明玉屏風(fēng)散具有良好的延長(zhǎng)果蠅壽命的作用。

表1. 玉屏風(fēng)散對(duì)果蠅壽命的影響

^**與對(duì)照組比較，p<0.01, ^*與對(duì)照組比較，p<0.05

過氧化氫酶（Catalase ，CAT）、超氧物歧化酶（Superoxide dismutase ，SOD）和丙二醛（malondialdehvde，MDA）的測(cè)定：收集48 h羽化黑腹果蠅成蟲，隨機(jī)分組試驗(yàn)。每組果蠅200只，雌雄各半。每96 h更換新鮮培養(yǎng)基。在給藥后第30天時(shí)，用生理鹽水制成8%的組織勻漿；以4000 rpm 離心10 min，按照CAT、 SOD 和MDA試劑盒說明分別測(cè)定每組上清液CAT、SOD及MDA水平，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)見表2。

表2. 玉屏風(fēng)散對(duì)果蠅中CAT、SOD及MDA的影響

^**為與對(duì)照組比較，p<0.01；^*為與對(duì)照組比較，p<0.05。

由表1和2可見，玉屏風(fēng)散可以延長(zhǎng)果蠅壽命，可以提高果蠅體內(nèi)CAT和SOD的水平，降低脂質(zhì)過氧化物的降解產(chǎn)物MDA的含量，表明玉屏風(fēng)散有較好的抗ROS能力。

以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果說明玉屏風(fēng)散具有良好的激活端粒酶和抗體內(nèi)氧化應(yīng)激能力，在抗衰老和防治老年癡呆癥方面具有良好的應(yīng)用潛力。