菠蘿葉提取物的新用途
【專利摘要】本發(fā)明涉及菠蘿葉提取物在制藥領(lǐng)域中的新用途，特別涉及菠蘿葉提取物在醫(yī)藥方面的第二種新用途。本發(fā)明經(jīng)過分離提取，得到含有30～80％的總酚成份的菠蘿葉提取物。經(jīng)實(shí)驗(yàn)研究表明，菠蘿葉提取物具有促進(jìn)小腸平滑肌蠕動(dòng)的作用，對(duì)于腸收縮力下降所引起的疾病有較好的緩解作用。具體的說，該提取物可在制備治療腸平滑肌收縮力下降、腸蠕動(dòng)減慢、腸輕癱及由此引起的一些疾病的藥物中的應(yīng)用。
【專利說明】菠蘿葉提取物的新用途

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種以菠蘿葉為原料制備的含有多種活性成分的中藥提取物、制備方 法及其在醫(yī)藥方面的新用途，屬中藥【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002] 菠蘿，為鳳梨科植物鳳梨 Ananas comosus (L. )Merr. [Bromelia comosa L.; A. sativus Schult. Et Schult. f.]的果實(shí)。原產(chǎn)美洲，現(xiàn)廣植于熱帶地區(qū)，我國福建、廣東、 海南、廣西、云南等地均有種植。本品始載于清.吳其睿《植物名實(shí)圖考》，以露兜子為名。 該書記載："露兜子產(chǎn)廣東，一名波羅，生山野間，實(shí)如蘿卜，上生葉一簇，尖長深齒，味色香 具佳。果熟金黃色，皮堅(jiān)如魚鱗狀，去皮食肉，香甜無渣，六月熟"。
[0003] 古時(shí)對(duì)于菠蘿葉無明確記載，現(xiàn)代人們常用菠蘿葉纖維作為編織和造紙 的原料（《中國高等植物圖鑒.第5冊(cè)》科學(xué)出版社1976)。近時(shí)有記載菠蘿葉具 有消食和胃，止瀉的功效，主治夏日暑瀉，消化不良，胃脘脹痛等（《中華本草.第 8卷》上?？茖W(xué)技術(shù)出版社1999)。近時(shí)的研宄報(bào)道菠蘿葉有明確的調(diào)血脂和降 血糖 作用(ffeidong Xie, et al. Hypolipidemic mechanisms of Ananas comosus L.leaves in mice!Different from fibrates but similar to statins. Journal of Pharmacological Sciences，2007，103,267-274 ;Weidong Xiej et al.Effect of ethanolic extracts of Ananas comosus L.leaves on insulin sensitivity in rats and HepG2. Comparative Biochemistry and Physiology Part C:Toxicology and Pharmacology，2006，143(4)，429-35 ;Weidong Xiej et al. Ananas comosus L.Leaf Phenols and p-Coumaric Acid Regulate Liver Fat Metabolism by Upregulating CPT-lExpression. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine，2014, Article ID 903258. 2014. doi :10. 1155/2014/903258.嚴(yán)孝金，等。菠蘿葉 酚對(duì)小鼠急性糖脂負(fù)荷吸收及其小腸脂肪酶活性的影響.世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化， 2014, 16(4) :796-800)。
[0004] 菠蘿葉作為藥用的記載比較少見，尤其未見報(bào)道菠蘿葉或菠蘿葉提取物在制備治 療因腸平滑肌收縮無力小腸蠕動(dòng)和排便異常等疾病的藥物中的應(yīng)用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供菠蘿葉提取物在醫(yī)藥方面的新用途，尤其是提供一種菠蘿葉 提取物的第二種醫(yī)藥方面的新用途，即在制藥中的新應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明的技術(shù)方案提供菠蘿葉提取物的醫(yī)藥方面的新用途，該用途為：
[0007] 菠蘿葉提取物在制備治療促進(jìn)腸蠕動(dòng)的藥物中的應(yīng)用。
[0008] 菠蘿葉提取物在制備治療大便不暢的藥物中的應(yīng)用。
[0009] 菠蘿葉提取物在制備治療高脂血癥和糖尿病人伴有大便不暢的藥物中的應(yīng)用。
[0010] 本發(fā)明的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，菠蘿葉提取物（該提取物含有30?80 %的總酚性成 分），對(duì)小鼠小腸蠕動(dòng)有明顯促進(jìn)作用；口服給藥后可出現(xiàn)小腸推進(jìn)能力增強(qiáng)；菠蘿葉提取 物對(duì)小腸平滑肌有直接地促進(jìn)收縮蠕動(dòng)的作用，對(duì)于促進(jìn)腸蠕動(dòng)、促進(jìn)排便有較好的作用。 [0011] 在治療大便不暢及其由此引起的疾病時(shí)，以菠蘿葉提取物為活性成分，以常規(guī)的 制劑工藝，單獨(dú)使用或與其他藥物配合制備成在臨床上可以使用的各種不同劑型的藥物。

【具體實(shí)施方式】
[0012] 本發(fā)明所述的菠蘿葉提取物含有30?80%的總酚性成分，可用下述方法得到：
[0013] 本發(fā)明提供的菠蘿葉提取物的制備工藝如下：首先用藥材重量的5-15倍水或各 種濃度的醇將菠蘿葉在30°C?100°C加熱提取3次，每次為1?3小時(shí)；或室溫浸泡2?10 天，得到提取液。所用的醇溶劑可以采用甲醇、乙醇、異丙醇、丁醇等或含水的醇溶劑。然后 將提取液在減壓（壓力90-98Kpa)，溫度在30?100°C下濃縮，再用藥材重量的1?10倍 水溶解，離心或靜止過濾，棄去沉淀，取上清液；使上清液通過交換柱（大孔吸附樹脂、離子 交換樹脂、聚酰胺等交換柱），先用水洗脫，洗脫液廢棄；再用濃度大于70 %洗脫，洗脫液在 溫度為30?90°C (壓力98Kpa)減壓濃縮，濃縮物減壓（壓力98Kpa)干燥或冷凍干燥，即 得到菠蘿葉提取物。
[0014] 菠蘿葉提取物的成分采用紫外分光光度法、比色法等進(jìn)行測(cè)定，總酚含量在30? 80 %之間，其中主要成分為酚酸和黃酮等。
[0015] 在藥劑應(yīng)用上就是將菠蘿葉提取物單獨(dú)地或者加入復(fù)方中以常規(guī)的制劑工藝制 備成藥劑；其藥劑可以是臨床上能夠使用的各種不同劑型，如散劑，丸劑，膠囊劑，片劑，微 囊劑，軟膠囊劑，膜劑，栓劑，注射劑，膏劑，酊劑，散劑，沖劑，氣霧劑，各種外用制劑等。
[0016] 下述實(shí)施例及藥效實(shí)驗(yàn)資料使本發(fā)明所說的菠蘿葉提取物的制備及其用途得以 證實(shí)，同時(shí)又不應(yīng)將下列實(shí)施例看作是對(duì)本發(fā)明的限制。
[0017] 實(shí)施例1 :
[0018] 取菠蘿葉1公斤用5倍量的水100°C加熱提取3次，每次3小時(shí)，提取液減壓（壓 力98Kpa)溫度在100°C濃縮后，用藥材重量的1倍水溶解，靜止，取上清，通過聚酰胺柱。先 用水洗脫，洗脫液廢棄，再用70%乙醇洗脫，洗脫液減壓（壓力98Kpa) 30°C濃縮，冷凍干燥， 得到提取物。菠蘿葉提取物的總酚性成分采用比色法進(jìn)行測(cè)定，提取物中總酚性成分含量 為30%左右。
[0019] 實(shí)施例2 :
[0020] 取菠蘿葉1公斤用15倍量的70%乙醇60°C加熱提取3次，每次2小時(shí)，提取液減 壓（壓力98Kpa)加熱60°C濃縮后，用用藥材重量的5倍水溶解，離心，取上清，通過大孔吸 附樹脂。先用水洗脫，洗脫液廢棄，再用95%乙醇洗脫，洗脫液減壓（壓力98Kpa) 90°C濃縮， 減壓（壓力98Kpa)干燥，得到提取物。菠蘿葉提取物的總酚性成分采用比色法進(jìn)行測(cè)定， 提取物中總酚性成分含量為80%左右。
[0021] 實(shí)施例3:
[0022] 取菠蘿葉1公斤用5倍量的甲醇30°C加熱提取3次，每次1小時(shí)，提取液減壓（壓 力90-Kpa)加熱30°C濃縮后，用用藥材重量的10倍水溶解，離心，取上清，調(diào)PH值為弱酸 性，通過陰離子交換樹脂。先用水洗脫，洗脫液廢棄，再用80 %乙醇洗脫，洗脫液減壓（壓力 98Kpa)30°C濃縮，減壓（壓力98Kpa)干燥，得到提取物。菠蘿葉提取物的總酚性成分采用 比色法進(jìn)行測(cè)定，提取物中總酚性成分含量為60%左右。
[0023] 實(shí)施例4 :
[0024] 取菠蘿葉1公斤用15倍量的95%乙醇室溫浸泡2天，提取液減壓（壓力90-Kpa) 加熱50°C濃縮后，用藥材重量的5倍水溶解，離心，取上清，通過大孔吸附樹脂。先用水洗 脫，洗脫液廢棄，再用80%乙醇洗脫，洗脫液減壓100°C濃縮，冷凍干燥，得到菠蘿葉提取 物，提取物中的總酚性成分采用比色法進(jìn)行測(cè)定，提取物中總酚性成分含量為50%左右。
[0025] 菠蘿葉提取物總酚性成分測(cè)定，采用比色法對(duì)其總酚性成分進(jìn)行含量測(cè)定。
[0026] 1、試藥與儀器
[0027] 紫外分光光度計(jì)（TU-1800PC);分析天平，咖啡酸對(duì)照品（購自中國藥品生物制品 檢定所），菠蘿葉總酚提取物；其余試劑均為分析純。
[0028] 2、方法與結(jié)果
[0029] ①測(cè)定波長的選擇：分別配置一定濃度的咖啡酸對(duì)照品及菠蘿葉總酚提取物供試 品，顯色前后，分別在200-800nm內(nèi)記錄吸收光譜。結(jié)果表明，咖啡酸對(duì)照品及菠蘿葉總酚 提取物供試品顯色后在720nm處均有最大吸收。故選擇720土nm作為測(cè)定波長。
[0030] ②測(cè)定條件中反應(yīng)時(shí)間的考察：吸取一定濃度的咖啡酸對(duì)照品，加入甲醇3. 5ml， 0. 3 %十二烷基磺酸鈉溶液2ml，0. 6 %鐵氰化鉀溶液lml，0. 9 %三氯化鐵溶液lml，搖勻暗 處靜置5min。用0.1mol/L的稀鹽酸稀釋至10ml。在720nm處，不同的時(shí)間測(cè)定其吸收度， 結(jié)果表明，30min基本反應(yīng)完全，所以選擇反應(yīng)為30min。
[0031] ③對(duì)照品溶液的配置：精密稱取咖啡酸對(duì)照品10mg，放入IOml容量瓶中，用甲醇 溶解定容，搖勻。精密吸取lml，置50ml容量瓶中加入甲醇定容，搖勻即得20ug/ml的標(biāo)準(zhǔn) 品。
[0032] ④標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：精密稱取咖啡酸對(duì)照品溶液0，Iml，1. 5ml，2. Oml，2. 5ml， 3. Oml，3. 5ml，分別置 IOml 棕色容量瓶中，分別加甲醇 3. 5ml，2. 5ml，2. Oml，L 5ml，Iml， 0. 5,0ml，再加0. 3%十二烷基磺酸鈉溶液2ml，0. 6%鐵氰化鉀溶液lml，0. 9%三氯化鐵溶 液lml，搖勾暗處靜置5min，再用0. lmol/L的稀鹽酸稀釋至10ml。搖勾暗處靜置30min。以 零號(hào)管作對(duì)照，置Icm的比色杯中，在720nm處測(cè)定其吸光度，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線?？Х人釋?duì)照 品濃度分別為 2ug，3ug，4ug，5ug，6ug，7ug/ml，吸光度分別為 0· 21，0· 34,0· 47,0· 58,0· 65， 0. 79。由于咖啡酸在2-7ug/ml范圍內(nèi)的吸光度為一通過原點(diǎn)的直線，故采用對(duì)照比較法計(jì) 算菠蘿葉總酚提取物中總酚含量。結(jié)果見表1。
[0033] ⑤樣品含量的測(cè)定：精密稱取菠蘿葉總酚提取物10mg，放入IOml棕色容量瓶中， 用甲醇溶解定容，搖勻。精密吸取〇. 〇5ml，分別加甲醇3ml，再加0. 3 %十二烷基磺酸鈉溶 液2ml，0. 6 %鐵氰化鉀溶液Iml，0. 9 %三氯化鐵溶液Iml，搖勻暗處靜置5min，再用0. Imol/ L的稀鹽酸稀釋至10ml。搖勻暗處靜置30min。在720nm處測(cè)定其吸光度，吸光度為0. 35。 按對(duì)照品比較法計(jì)算含量為62%。
[0034] 藥效實(shí)驗(yàn)例1 :對(duì)小鼠小腸蠕動(dòng)的作用
[0035] 觀察本發(fā)明菠蘿葉提取物對(duì)小鼠小腸蠕動(dòng)的促進(jìn)作用。菠蘿葉提取物，批號(hào)： 130906。用時(shí)以生理鹽水配制成所需濃度。試驗(yàn)動(dòng)物雄性為ICR小鼠。體重18-22g，由北 京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。動(dòng)物飼養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室室溫20-22 °C，相對(duì)濕度40 %?60%，換氣 扇通氣，自然光源12小時(shí)/日，籠養(yǎng)，每籠5只。
[0036] 取小鼠隨機(jī)分為4組。其中1組為對(duì)照組。另外3組為給藥組。取小鼠分別灌胃 含碳素墨汁標(biāo)記的不同藥物。給藥后15分鐘，處死小鼠，迅速取出小腸，分別測(cè)量各小鼠的 小腸全長和碳墨前沿的長度。
[0037] 本試驗(yàn)觀察指標(biāo)及指標(biāo)表達(dá)：小腸推進(jìn)百分率=(碳墨前沿的小腸長度cm/小腸 全長 cm) X 100%。
[0038] 本試驗(yàn)給藥劑量分別為150mg/kg, 300mg/kg和600mg/kg ;給藥途徑為灌胃給藥； 給藥體積為〇· 2ml/10g小鼠。
[0039] 本試驗(yàn)空白對(duì)照為等體積生理鹽水。
[0040] 本試驗(yàn)數(shù)據(jù)均以O(shè)ffice 2007Excel軟件處理。
[0041] 表1菠蘿葉提取物對(duì)正常小鼠小腸推進(jìn)的作用（J±s)
[0042]

【權(quán)利要求】
1. 菠蘿葉提取物在制備治療促進(jìn)腸蠕動(dòng)的藥物中的應(yīng)用。
2. 菠蘿葉提取物在制備治療大便不暢的藥物中的應(yīng)用。
3. 菠蘿葉提取物在制備治療高脂血癥和糖尿病人伴有大便不暢的藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61K36/88GK104435426SQ201410669897
【公開日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2014年11月20日 優(yōu)先權(quán)日:2014年11月20日
【發(fā)明者】余煊, 邢東明, 雷帆, 王欣佩, 杜力軍, 袁梽漪, 盧希, 姜敬非, 嚴(yán)孝金, 龐雨濃 申請(qǐng)人:清華大學(xué)