加味二至湯治療更年期代謝紊亂及性功能障礙的醫(yī)療用途
【專利摘要】本發(fā)明涉及的是復(fù)方加味二至湯在治療婦女更年期性功能障礙及糖脂代謝紊亂中的醫(yī)療用途。加味二至湯優(yōu)選女貞子，墨旱蓮。淫羊藿，山茱萸，生地黃，等比例搭配制成水煎劑服用。利用大鼠卵巢摘除模型模擬更年期，針對其性功能及血脂水平、糖耐量、胰島素耐量、肝臟胰島素敏感性等進(jìn)行藥效考察。并利用乳腺癌細(xì)胞系對本復(fù)方進(jìn)行安全性評價。
【專利說明】加味二至湯治療更年期代謝紊亂及性功能障礙的醫(yī)療用途

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及天然藥物領(lǐng)域，具體涉及加味二至湯治療女性更年期血脂代謝紊亂及性功能障礙的醫(yī)療用途。

【背景技術(shù)】
[0002]更年期綜合癥(Menopausal syndrome)是由卵巢功能喪失、激素缺乏引起的一系列自主神經(jīng)功能紊亂的現(xiàn)象。女性更年期除潮熱、失眠、煩躁等癥狀外，常伴有性功能減退及代謝紊亂現(xiàn)象，嚴(yán)重影響女性的生活質(zhì)量和健康水平，尋找有效手段預(yù)防及治療極為重要。
[0003]代謝紊亂綜合癥(Metabolic syndrome, MS)是由于能量儲存和利用的過程發(fā)生紊亂而引發(fā)的病理狀態(tài)。MS的病理表現(xiàn)包括中心性肥胖、血壓升高、空腹血糖升高、血漿甘油三酯升高以及高密度膽固醇酯水平上升，患者通常會同時出現(xiàn)三個或以上的病理現(xiàn)象。MS嚴(yán)重影響患者的健康水平并誘發(fā)多種疾病，包括心血管疾病(特別是心力衰竭)、糖尿病坐寸。
[0004]一些大樣本統(tǒng)計(jì)性試驗(yàn)顯示MS在成年人中的發(fā)生與年齡的增長呈正相關(guān)性，并且發(fā)現(xiàn)患有卵巢功能障礙疾病或處于圍絕經(jīng)期婦女中摧患MS的幾率大大升高(HeidariR,Sadeghi M,Talaei M，et al.Metabolic syndrome in menopausal transit1n:IsfahanHealthy Heart Program, a populat1n based study[J].Diabetol Metab Syndr,2010,2:59.)，這可能與圍絕經(jīng)期婦女卵巢功能衰退、激素分泌不足造成，并且在前期工作中以發(fā)現(xiàn)摘除卵巢的大鼠模型顯示出多種MS的病理特征(Bailey C J, Matty A J.Glucosetolerance and plasma insulin of the rat in relat1n to the oestrous cycle andsex hormones[J].Hormone and Metabolic Research，1972，4(04):266-270.)。
[0005]根據(jù)中醫(yī)理論對女性更年期癥狀“肝腎陰虛，陽失潛藏，抗逆于上”的認(rèn)識，對傳統(tǒng)復(fù)方二至丸進(jìn)行改良，增加淫羊藿、山茱萸、生地黃三味藥物，以水煎煮制成加味二至湯。
[0006]本發(fā)明公開了加味二至湯的女性更年期糖脂代謝紊亂的作用，S卩加味二至湯可用于制備治療女性更年期糖脂代謝紊亂的藥物，且效果優(yōu)異。所述的加味二至湯優(yōu)選女貞子、墨旱蓮、生地黃、淫羊藿、山茱萸組成。
[0007]發(fā)明人在對加味二至湯的藥理活性研究中發(fā)現(xiàn)，其提取物具有顯著提高實(shí)驗(yàn)動物的性功能指標(biāo)；控制實(shí)驗(yàn)動物的體重，改善血脂指數(shù)、糖耐量，并緩解胰島素抵抗現(xiàn)象，而相較于傳統(tǒng)的激素藥物，對乳腺并無明顯副作用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明公開了加味二至湯治療女性更年期性功能障礙及血脂代謝紊亂的作用，SP加味二至湯可用于制備治療女性更年期性功能障礙及血脂代謝紊亂的藥物，且效果優(yōu)異。所述的加味二至湯優(yōu)選女貞子、墨旱蓮、生地黃、淫羊藿、山茱萸。發(fā)明人在對加味二至湯的藥理活性研究中發(fā)現(xiàn)，加味二至湯具有顯著地緩解激素缺乏引起的性功能障礙及一系列糖脂代謝紊亂的現(xiàn)象。更重要的是加味二至湯并不引起乳腺癌細(xì)胞的增殖，并無類似激素替代療法中出現(xiàn)的副作用。
[0009]下面結(jié)合實(shí)施例對加味二至湯的緩解女性更年期性功能障礙及血脂代謝紊亂進(jìn)行進(jìn)一步的闡述。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0010]圖1加味二至湯對卵巢摘除動物模型LQ指數(shù)的影響。
[0011]圖2加味二至湯對卵巢摘除動物模型ALA指數(shù)的影響。
[0012]圖3加味二至湯對卵巢摘除動物模型陰道分泌物水平的影響。
[0013]圖4加味二至湯對卵巢摘除動物模型進(jìn)食量的影響。
[0014]圖5加味二至湯對卵巢摘除動物模型體重的影響。
[0015]圖6加味二至湯對卵巢摘除動物模型血清甘油三酯水平的影響。
[0016]圖7加味二至湯對卵巢摘除動物模型血清低密度脂蛋白-膽固醇的影響。
[0017]圖8加味二至湯對卵巢摘除動物模型血清高密度脂蛋白-膽固醇的影響。
[0018]圖9加味二至湯對卵巢摘除動物模型糖耐量的影響。
[0019]圖10加味二至湯對卵巢摘除動物模型胰島素耐量的影響。。
[0020]圖11加味二至湯對卵巢摘除動物模型肝臟胰島素通路活性的影響。
[0021]圖12加味二至湯處理24小時對人乳腺癌細(xì)胞MCF-7細(xì)胞增殖的影響。
[0022]圖13加味二至湯處理48小時對人乳腺癌細(xì)胞MCF-7細(xì)胞增殖的影響。

【具體實(shí)施方式】
[0023]實(shí)施例1
[0024]卵巢摘除動物模型制備及給藥處理
[0025]選擇SPF級雌性SD大鼠，6只一組，設(shè)置對照組、模型組、給藥雌二醇組、給藥加味二至湯低劑量組、給藥加味二至湯高劑量組，于25°C、12小時白天/黑夜循環(huán)光照條件下飼養(yǎng)，每天更換食物、飲水，隔天更換墊料。待實(shí)驗(yàn)動物生長至8周齡進(jìn)行卵巢摘除手術(shù)，其中對照組進(jìn)行假手術(shù)操作。術(shù)后第5周開始按照組別設(shè)置進(jìn)行給藥處理，根據(jù)人體藥物用量換算得到各組實(shí)驗(yàn)動物的給藥量，其中雌二醇為0.2mg/kg/d ;所選女貞子、墨旱蓮、淫羊藿、山茱萸、生地黃粉碎后用水進(jìn)行熱回流提取，濃縮后獲得加味二至湯，其給藥劑量分別為4.5g/kg/d (給藥低劑量)及9g/kg/d (給藥高劑量)，連續(xù)給藥4周后進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)檢測。
[0026]實(shí)施例2
[0027]加味二至湯對模型動物性功能障礙的改善
[0028]各組動物給要處理結(jié)束后通過LQ指數(shù)、ALA指數(shù)及陰道分泌物水平對各組動物的性功能水平進(jìn)行評價。其中LQ指數(shù)的測算方法為:(脊柱前凸次數(shù)/騎跨次數(shù))X 100，圖1顯示模型組動物L(fēng)Q指數(shù)較低，而雌激素或加味二至湯處理后均可得到改善，且加味二至湯高劑量組效果明顯；ALA指數(shù)為交配過程中脊柱前凸程度的評分:0-3分；0分:無性交，不允許騎跨；1分:輕微脊柱前凸，或者背扁平、尾巴歪斜；2分:中等脊柱前凸、尾巴歪斜、雄鼠下來后脊柱前凸不能維持；3分:最大程度脊柱前凸、尾巴歪斜、背完全彎曲、騎跨結(jié)束后仍然維持脊柱前凸姿勢，圖2顯示加味二至湯高劑量組的評分顯著高于模型組，且優(yōu)于雌二醇給藥組。對陰道分泌物的檢測采用電刺激法，即下腹部中線4cm的切口，暴露盆腔神經(jīng)陰道支-電刺激(10V，16Hz, 0.8msec, 60s)(目的:模擬性喚起)，事先稱重、干燥的棉簽，刺激之前插在陰道遠(yuǎn)端，刺激之后立刻拿出來稱重，圖3顯示加味二至湯高劑量組可使刺激后的分泌水平增加，顯著改善模型動物的性功能。
[0029]實(shí)施例3
[0030]加味二至湯對模型動物體重的影響
[0031]卵巢功能喪失、雌激素分泌嚴(yán)重不足導(dǎo)致體內(nèi)代謝紊亂現(xiàn)象發(fā)生，其中一個主要的表現(xiàn)是由糖脂代謝紊亂導(dǎo)致的體重過快增加。自術(shù)后開始，每三天稱量一次各組實(shí)驗(yàn)動物的體重并進(jìn)行記錄，考慮體重的改變可能與進(jìn)食量有關(guān)，我們同時每日記錄各組動物的進(jìn)食量。
[0032]如圖4所示:對比各組實(shí)驗(yàn)動物的進(jìn)食量，給藥期間各組動物的進(jìn)食量并無顯著差異，說明體重的改變與進(jìn)食量并無關(guān)系。
[0033]圖5顯示:進(jìn)行卵巢摘除手術(shù)后的動物體重增加量明顯高于對照組，而進(jìn)行藥物處理后體重增加量有所下降，其中雌二醇組、加味二至湯高劑量組效果明顯，加味二至湯高劑量組對比模型組有顯著差異。
[0034]實(shí)施例4
[0035]加味二至湯對模型動物血脂指數(shù)的影響
[0036]各組動物給藥處理結(jié)束后，使用頸總動脈取血法采集血液并保留血清,使用試劑盒對血清甘油三酯、血清低密度脂蛋白-膽固醇、血清高密度脂蛋白-膽固醇進(jìn)行檢測。
[0037]如圖6所示:卵巢摘除后血液中甘油三酯(TG)含量明顯上升，與模型組相比，雌二醇及加味二至湯處理后血清甘油三酯含均有所下降，其中雌二醇及加味二至湯高劑量組對血清甘油三酯具有明顯降低效果。
[0038]當(dāng)體內(nèi)血脂代謝異常時，低密度脂蛋白-膽固醇(Low densitylipoprotein-Cholesterol,LDL-c)的含量會隨之升高,過多的LDL易沉積于血管壁而造成動脈粥樣硬化等病癥，可能是造成圍絕經(jīng)期婦女發(fā)生心血管疾病的因素之一。圖7顯示卵巢摘除后可導(dǎo)致血漿LDL水平異常升高，加味二至湯處理后可明顯降低LDL的水平使其恢復(fù)正常值，其作用具有劑量依賴性。
[0039]體內(nèi)的高密度脂蛋白-膽固醇(Highdensity 1 ipoprotein-Cholesterol,HDL-c)水平反映高密度脂蛋白(HDL)的量，HDL可運(yùn)載膽固醇經(jīng)肝臟代謝最終由腸道排出體外，圖8顯示摘除卵巢后HDL-c水平顯著下降，加味二至湯處理后可使HDL水平回復(fù)到正常水平。
[0040]實(shí)施例5
[0041]加味二至湯對模型動物糖耐量、胰島素耐量及胰島素敏感性的影響
[0042]糖耐量以及胰島素耐量反應(yīng)機(jī)體維持血糖平衡能力及胰島素敏感性，是糖脂代謝平衡重要的評價指標(biāo)，因此在各組動物給藥處理結(jié)束后進(jìn)行腹腔注射糖耐量檢測(IPGTT)以及胰島素耐量檢測(ITT)，即對實(shí)驗(yàn)動物進(jìn)行腹腔葡萄糖或胰島素注射，采用斷尾取血法在不同時間點(diǎn)取血檢測血糖值。
[0043]圖9中糖耐量檢測結(jié)果顯示缺乏雌激素的動物調(diào)節(jié)血糖平衡的能力明顯下降，力口味二至湯給藥處理后可明顯加快血糖恢復(fù)正常水平的速度，即加味二至湯可以改善激素缺乏引起的糖耐量下降。
[0044]圖10顯示缺乏雌激素的動物對胰島素敏感度下降，加味二至湯處理后實(shí)驗(yàn)動物的血糖水平相對模型組明顯降；同時在對實(shí)驗(yàn)動物注射胰島素后立即處并收集肝臟，對肝臟中Akt蛋白磷酸化水平進(jìn)行檢測，如圖11中顯示加味二至湯處理組在注射胰島素后肝臟Akt蛋白磷酸化水平明顯升高，加味二至湯緩解由激素缺乏造成的胰島素抵抗現(xiàn)象，提高了胰島素敏感性。
[0045]實(shí)施例6
[0046]加味二至湯對乳腺癌細(xì)胞增殖的影響
[0047]在女性更年期綜合征的治療種常使用激素替代療法，但有調(diào)查顯示使用激素替代療法有增加乳腺癌患病的風(fēng)險，因此所使用的緩解婦女更年期代謝綜合癥的藥物應(yīng)避免產(chǎn)生類似的副作用。
[0048]利用人乳腺癌細(xì)胞株MCF-7研究加味二至湯對乳腺癌細(xì)胞是否有促增殖的作用。MCF-7細(xì)胞培養(yǎng)至融合度為80%，更換無酚紅培養(yǎng)基，并添加5%活性炭處理的胎牛血清，繼續(xù)培養(yǎng)24小時后加入10_8M雌二醇或不同濃度的加味二至湯提取物共孵24小時或48小時，使用MTT法檢測細(xì)胞存活率。圖12顯示，藥物處理24小時后雌二醇明顯促進(jìn)MCF-7細(xì)胞增殖，而加味二至湯各濃度組并未對其產(chǎn)生影響。圖13顯示藥物處理48小時后雌二醇仍呈現(xiàn)促進(jìn)細(xì)胞增殖的效果，而加味二至湯可顯著抑制細(xì)胞增殖，說明加味二至湯作為改善女性更年期性功能障礙、治療更年期綜合癥的藥物具有一定的安全性。
【權(quán)利要求】
1.一種新復(fù)方加味二至湯在治療女性更年期性功能障礙及糖脂代謝紊亂的醫(yī)療用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求1中的加味二至湯，其特征為:女貞子，墨旱蓮，淫羊藿，生地黃，山茱萸；等比例搭配制成水煎劑。
【文檔編號】A61P15/12GK104274596SQ201410591923
【公開日】2015年1月14日 申請日期:2014年10月27日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月27日
【發(fā)明者】李萍, 徐曉軍, 張沐 申請人:中國藥科大學(xué)