一種per2蛋白激動劑多肽及其應用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及藥物領域，具體涉及具有促進PER2蛋白表達，治療治療食道癌的多肽。其序列為TQTDPLYIGGSALF是全新的序列，該多肽可體外抑制食道癌細胞TE1和Eca109細胞增殖，治療食道癌；在體荷瘤模型實驗中成功的增加了小鼠的生存率，具有潛在的新藥開發(fā)價值。
【專利說明】一種PER2蛋白激動劑多肽及其應用
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及PER2蛋白激動劑多肽I及其應用，具體涉及具有促進PER2蛋白表達、治療食道癌的多肽。
【背景技術】
[0002]食管癌的治療上根據(jù)病灶的不同位置、疾病分期可以選擇手術、放療、化療、生物靶向治療方式。食管癌的手術常切除癌變組織與轉移淋巴結，管狀胃代替其功能。但是手術難以完全切除癌組織與亞臨床病灶。其次就是放化療，但是這兩種治療方式均對正常組織器官有明顯副反應，進一步提高療效并減少對正常組織的損傷是值得研究的課題。目前生物靶向治療腫瘤是非常有前景的，靶向治療是針對腫瘤發(fā)生過程中阻斷某個或多個信號通路，達到治療腫瘤的目的。
[0003]在探索腫瘤病因，尋找對腫瘤的治療方法過程中，發(fā)現(xiàn)生物節(jié)律的紊亂與腫瘤的發(fā)生發(fā)展有很大關系。生物節(jié)律的紊亂與食管癌的發(fā)生發(fā)展有一定關系。在用現(xiàn)代時間生物學手段來探測腫瘤節(jié)律基因的變化已成為食管癌治療的新興研究課題。
[0004]生物節(jié)律基因/--?表達的PER2蛋白與正常光暗循環(huán)條件下均成自發(fā)性節(jié)律變化。/--?在/--系列基因中與腫瘤關系最為密切。研究表明，PER2蛋白在食管癌組織中低表達，而在癌旁組織中高表達，PER2可以看做是一個保護性基因，其表達可以上調(diào)抑癌基因P53，下調(diào)癌基因c-cmyc的表達。PER2的表達可以抑制瘤細胞的增殖、使永生化能力的喪失，同時可以通過阻滯瘤細胞的G2/M期，達到調(diào)控細胞周期增加放療敏感性的目的。 [0005]PER2蛋白功能降低是食管癌發(fā)生的一個重要因素。因此，促進PER2蛋白表達，抑制食管癌發(fā)展，是治療食管癌的新靶點。但是，尚未有開發(fā)成熟的PER2蛋白激動劑多肽的治療食管癌的藥物
本專利中的PER2蛋白激動劑多肽已證明在食管癌中有效，具有在其他腫瘤模型中開發(fā)的前景。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]發(fā)明目的
本發(fā)明提供全新的序列，該序列PER2蛋白激動劑，對食管癌具有很好的療效。
[0007]技術方案
PER2蛋白激動劑多肽，其特征在于其序列為TQTDPLYIGGSALF。
[0008]PER2蛋白激動劑多肽在制備治療食管癌藥物中的應用。
[0009]有益效果
利用固相合成法化學合成PER2蛋白激動劑多肽，該多肽具有全新的序列，該多肽可體外抑制食道癌細胞TEl和Ecal09細胞增殖，治療食道癌；在體荷瘤模型實驗中成功的增加了小鼠的生存率，具有潛在的新藥開發(fā)價值?！揪唧w實施方式】
[0010]本發(fā)明涉及的多肽由吉爾生化(上海)合成。
[0011]實施例1
PER2蛋白激動劑多肽對人食道癌細胞TEl增殖的作用。
[0012]采用MTT比色法。將對數(shù)生長的TEl細胞，以1.0X105加入96孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)24h，實驗孔、陽性藥物對照孔分別加入不同濃度的實驗藥物PER2蛋白激動劑多肽和陽性對照藥物長春新堿；空白組加入相同體積的溶劑。每孔設五個復孔，培養(yǎng)48h，分別在Oh、2h、8h、14h、20h、24h、36h、48h每孔加入MTT，作用4h后，加入DMS0，孵育30min，在酶標儀620nm處測定吸光度A值，按公式腫瘤細胞生長抑制率=(1_實驗組吸光值/對照組吸光值)X100%。計算出實驗藥物的IC50為6.40 μ Μ。當濃度為6.40 μ M時，對Ecal09增殖抑制率為70.3%。
[0013]實施例2
PER2蛋白激動劑多肽對人食道癌細胞ECA109增殖的作用。
[0014]采用MTT比色法。將對數(shù)生長的ECA109細胞，以1.0X 105加入96孔培養(yǎng)板中，培養(yǎng)24h，實驗孔、陽性藥物對照孔分別加入不同濃度的實驗藥物PER2蛋白激動劑多肽和陽性對照藥物長春新堿；空白組加入相同體積的溶劑。每孔設五個復孔，培養(yǎng)48h，分別在0h、2h、8h、14h、20h、24h、36h、48h 每孔加入 MTT，作用 4h 后，加入 DMS0，孵育 30min，在酶標 儀620nm處測定吸光度A值，按公式腫瘤細胞生長抑制率=(1_實驗組吸光值/對照組吸光值)X 100%。計算出實驗藥物的IC50為7.13μΜ。當濃度為7.13 μ M時，對Ecal09增殖抑制率為66.4%。
[0015]實施例3
用腫瘤模型檢測PER2蛋白激動劑多肽的體內(nèi)活力。
[0016]建立Ecal09腫瘤模型，陽性對照藥物長春新堿；空白組加入相同體積的溶劑，實驗組設3個劑量:6、12、24 mg/Kg。21天后，觀察小鼠存活數(shù)量，計算存活率。結果顯示，PER2蛋白激動劑多肽可有效地保護小白鼠，提高荷瘤小鼠的生存率，生存率達到78.4%。
[0017]實施例4
多肽對人食道癌細胞TEl裸鼠異種移植腫瘤生長的抑制試驗
取對數(shù)生長期的人食道癌細胞TEl細胞株，在無菌條件下制備成5X 107/ml細胞懸液，以0.1ml接種于裸鼠右側腋窩皮下。用游標卡尺測量裸鼠移植瘤直徑，待腫瘤生長至100-200mm3后將動物隨機分組。使用測量瘤徑的方法，動態(tài)觀察被試多肽的抗腫瘤效果。腫瘤直徑的測量次數(shù)為每2天測I次。給藥方式均采用尾靜脈注射。陰性對照組注射等量生理鹽水，每天I次；紫杉醇組10mg/kg,每周給藥I次；恩度組2.5mg/kg,每天給藥I次；多肽高中低組分別以20mg/kg、10mg/kg、5mg/kg,每天給藥I次。試驗結束后，小鼠處死,手術剝?nèi)×鰤K稱重。
[0018]表1多肽對人食道癌細胞TEl裸鼠異種移植腫瘤生長的抑制作用
【權利要求】
1.PER2蛋白激動劑多肽，其特征在于其序列為TQTDPLYIGGSALF。
2.一種藥物組合物，其特征在于其包含如權利要求1所述多肽與一種以上藥學上可接受的賦形劑、填充劑、粘合劑、潤滑劑、崩解劑、或穩(wěn)定劑。
3.如權利要求2所述的藥物組合物，其特征在于，所述組合物為注射劑。
4.如權利要求1所述的多肽，其特征在于有效劑量為10mg/kg。
5.如權利要求1所 述的PER2蛋白激動劑多肽I在制備治療食道癌藥物中的應用。
【文檔編號】A61K38/10GK104017053SQ201410288283
【公開日】2014年9月3日 申請日期:2014年6月25日 優(yōu)先權日:2014年6月25日
【發(fā)明者】羅瑞雪 申請人:蘇州普羅達生物科技有限公司