乳鐵蛋白單克隆抗體及其應用以及相關(guān)產(chǎn)品的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及抗體領域，特別涉及乳鐵蛋白單克隆抗體及其應用以及相關(guān)產(chǎn)品。該乳鐵蛋白的單克隆抗體由保藏號為CCTCC?NO：C201448的雜交瘤產(chǎn)生。本發(fā)明提供的單克隆抗體M-860可用于可溶性乳鐵蛋白的檢測，可用于特異性區(qū)分變性與非變性乳鐵蛋白，可作為探針應用于膜結(jié)合型乳鐵蛋白的檢測，可用于格蘭陰性菌誘導產(chǎn)生的敗血癥的治療，可用于輔助診斷類風濕關(guān)節(jié)炎。
【專利說明】乳鐵蛋白單克隆抗體及其應用以及相關(guān)產(chǎn)品
【技術(shù)領域】
[0001]本發(fā)明涉及抗體領域，特別涉及乳鐵蛋白單克隆抗體及其應用以及相關(guān)產(chǎn)品。
【背景技術(shù)】
[0002]敗血癥是指致病菌或條件致病菌侵入血循環(huán)，并在血中生長繁殖，產(chǎn)生毒素而發(fā)生的急性全身性感染。40%左右的革蘭陰性菌引起的敗血癥可以發(fā)生感染性休克。感染性休克，亦稱膿毒性休克，是指由微生物及其毒素等產(chǎn)物所引起的膿毒病綜合征伴休克，其主要原因是由革蘭氏陰性菌釋放的極低濃度的脂多糖(LPS)能非常有效的刺激巨噬細胞釋放炎性細胞因子、花生四烯酸的代謝產(chǎn)物及其他的炎性介質(zhì)，LPS侵入血循環(huán)，激活宿主的各種細胞和體液系統(tǒng)，產(chǎn)生的細胞因子和內(nèi)源性介質(zhì)，作用于機體各種器官、系統(tǒng)，影響其灌注，導致組織細胞缺血缺氧、代謝紊亂、功能障礙，甚至造成罹患敗血癥的病人多器官衰竭。
[0003]目前對于這類感染性休克類型敗血癥患者的治療主要是選用第3代頭孢菌素與氨基糖糖甙類聯(lián)合應用，染中毒癥狀嚴重者可在足量應用有效抗生素的同時給予腎上腺皮質(zhì)激素短程(3~5天)治療。由于這類感染致病菌株之間藥敏差異大，對常用的抗菌藥耐藥現(xiàn)象嚴重，病死率高，預后差。因此，能夠有效的抑制LPS刺激巨噬細胞釋放炎性細胞因子，并可聯(lián)合抗生素用于革蘭陰性菌引起的敗血癥治療的抗體藥物的研究成為了目前醫(yī)學研究的熱點。
[0004]LPS的免疫識別受體主要包括LBP和CD14，TolI樣家族的成員TLR2和TLR4以及整合素⑶11/⑶18。近年來，研究發(fā)現(xiàn)分泌型乳鐵蛋白能夠與LPS結(jié)合。乳鐵蛋白(Lactoferrin, LTF)是一種分子量為80KD的鐵結(jié)合性糖蛋白，一般情況下由中性粒細胞分泌，乳鐵蛋白根據(jù)來源可分為分泌型乳鐵蛋白(可溶性乳鐵蛋白)和膜結(jié)合型乳鐵蛋白(membrane-bound lactoferrin, mbLTF)。乳鐵蛋白廣泛分布于哺乳動物乳汁和其他多種組織及其分泌液中，如淚液、血液、唾液、精液等。乳鐵蛋白含量最高的是乳汁，由乳腺細胞合成，成熟母乳和初乳的濃度中的乳鐵蛋白濃度為I~7g/L。乳鐵蛋白也是嗜中性粒細胞次顆粒的主要成分，為血液中乳鐵蛋白的主要來源。該蛋白除了參與鐵的轉(zhuǎn)運，還具有抗細菌、抗真菌、抗寄生蟲、抑制腫瘤細胞生長、消除炎癥及參與免疫調(diào)節(jié)等多種生物學功能，在哺乳動物的固有免疫應答過程中起著重要作用。
[0005]盡管分泌型乳鐵蛋白能夠與LPS結(jié)合，但它們結(jié)合后不能直接誘導細胞活化，因此分泌型乳鐵蛋白不能被看做嚴格意義上的模式識別受體(PRR)，它可能作為PRRs的競爭者，或者某些情況下作為載體分子發(fā)揮作用。在對乳鐵蛋白在小鼠巨噬細胞表達的基礎上研究發(fā)現(xiàn)，膜結(jié)合型乳鐵蛋白是一種新型的LPS受體，也參與了 LPS活化巨噬細胞的過程。雖然目前的研究 對分泌型乳鐵蛋白的諸多功能已經(jīng)有了足夠多的認識，但對mbLTF的功能卻知之甚少，僅有少數(shù)報道探討了膜結(jié)合型乳鐵蛋白在細胞上的表達。Cho JK等人通過親和層析等方法從人乳脂肪球膜中純化出了膜結(jié)合型乳鐵蛋白，發(fā)現(xiàn)它的相對分子量，N端氨基酸序列與分泌性乳鐵蛋白一致，但并未對膜結(jié)合型乳鐵蛋白的功能進行研究。Butler Tff等人通過流式細胞術(shù)發(fā)現(xiàn)其在慢性B型淋巴細胞性白血病和扁桃腺來源的B細胞表面高表達，且在細胞不同的成熟階段表達水平會發(fā)生改變。Lucy V.Deriy等人用針對人乳鐵蛋白的單克隆抗體2B8及AHN-9對人外周血來源的中性粒細胞進行了表面染色，發(fā)現(xiàn)乳鐵蛋白在人靜息態(tài)中性粒細胞表面表達。但單克隆抗體2B8和AHN-9并不能識別人外周血單個核細胞(peripHeral blood mononuclear cell,PBMC)來源的單核細胞,不能作為探針檢測單核巨噬細胞表面的mbLTF。因此，提供一種能夠與mbLTF特異結(jié)合的單克隆抗體具有重要的現(xiàn)實意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]有鑒于此，本發(fā)明提供了乳鐵蛋白單克隆抗體及其應用以及相關(guān)產(chǎn)品。該單克隆抗體M-860除了能很好地識別可溶性乳鐵蛋白之外，可用于特異性區(qū)分變性與非變性乳鐵蛋白，還可作為探 針應用于膜結(jié)合型乳鐵蛋白的檢測，可用于格蘭陰性菌誘導產(chǎn)生的敗血癥的治療，可用于輔助診斷類風濕關(guān)節(jié)炎。
[0007]為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案:
[0008]本發(fā)明提供了一種乳鐵蛋白的單克隆抗體，由保藏號為CCTCC NO:C201448的雜
交瘤產(chǎn)生。
[0009]蛋白質(zhì)抗原的表位根據(jù)結(jié)構(gòu)特點可分為構(gòu)象表位和線性表位這兩種類型。其中構(gòu)象表位由抗原氨基酸序列上不連續(xù)排列、空間上形成特定構(gòu)象的短肽、多糖殘基或核苷酸所構(gòu)成。本發(fā)明提供的單克隆抗體的純度在95%以上，與乳鐵蛋白具有較高的親和力，且單克隆抗體M-860識別的是可溶性乳鐵蛋白或膜結(jié)合型乳鐵蛋白的構(gòu)象表位。
[0010]研究發(fā)現(xiàn)，單克隆抗體M-860能夠很好地識別人單核細胞及小鼠腹腔巨噬細胞表面的LTF，可作為探針應用于膜結(jié)合型乳鐵蛋白的檢測，從而可進一步確定膜結(jié)合型乳鐵蛋白的表達譜，為研究特定細胞上膜結(jié)合型乳鐵蛋白的功能提供依據(jù)。另外，單克隆抗體M-860可作為工具研究膜結(jié)合型乳鐵蛋白作為一種新型模式識別受體在LPS、β -葡聚糖活化免疫細胞如巨噬細胞中的作用。
[0011]研究發(fā)現(xiàn)，LPS能夠競爭抑制單克隆抗體Μ-860與LTF的結(jié)合，表明Μ-860和LTF的結(jié)合位點，與LPS和LTF的結(jié)合位點相同；且單克隆抗體Μ-860能夠在體外、體內(nèi)均可抑制LPS活化巨噬細胞釋放TNF- α，并可有效延長LPS誘導的敗血癥小鼠的壽命，且這種效應具有劑量依賴性，可用于格蘭陰性菌誘導產(chǎn)生的敗血癥的治療。
[0012]類風濕關(guān)節(jié)炎(RA)是一種常見的自身免疫性疾病，其病理特點為慢性進行性關(guān)節(jié)滑膜和關(guān)節(jié)軟骨損傷，往往累及終生，形成長期病痛。類風濕關(guān)節(jié)炎患者體內(nèi)存在多種抗自身抗體及免疫復合物，如類風濕因子、抗核抗體、抗角蛋白抗體、抗磷脂抗體及抗中性粒細胞胞漿抗體(ANCA)等。而抗乳鐵蛋白抗體屬于ANCA的一種，在部分RA患者血清中呈高表達。由于RA病人體內(nèi)乳鐵蛋白與其抗體均在血清中高表達，乳鐵蛋白與其抗體結(jié)合后產(chǎn)生的LTF免疫復合物的含量明顯升高。且該LTF免疫復合物能夠刺激人單核細胞活化，釋放TNF-α等炎性因子，在RA的疾病發(fā)展過程中發(fā)揮重要的作用，因此血清中LTF免疫復合物的含量可以成為一個良好的輔助診斷指標。研究發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明提供的單克隆抗體Μ-860能夠有效地結(jié)合血清中的LTF免疫復合物，結(jié)果表明該單克隆抗體用于類風濕關(guān)節(jié)炎病人血清中LTF免疫復合物的檢測具有很好地特異性和敏感性，從而可用于輔助診斷類風濕關(guān)節(jié)炎。
[0013]在本發(fā)明中，該單克隆抗體為IgGl型。
[0014]在本發(fā)明中，該單克隆抗體的重鏈序列如SEQ ID NO: 5所示，輕鏈序列如SEQ IDNO:6所示。
[0015]在本發(fā)明中，該單克隆抗體的重鏈⑶Rl序列如SEQ ID NO:7所示，重鏈⑶R2序列如SEQ ID NO:8所示，重鏈CDR3序列如SEQ ID NO:9所示，輕鏈CDRl序列如SEQ ID NO:10所示，輕鏈CDR2序列為GIS,輕鏈CDR3序列如SEQ ID NO:11所示。
[0016]本發(fā)明還提供了該單克隆抗體在制備檢測可溶性乳鐵蛋白產(chǎn)品中的應用；單克隆抗體由保藏號為 CCTCC NO:C201448的雜交瘤產(chǎn)生；該單克隆抗體為IgGl型；該單克隆抗體的重鏈序列如SEQ ID NO:5所示，輕鏈序列如SEQ ID NO:6所示；該單克隆抗體的重鏈CDRl序列如SEQ ID NO:7所示，重鏈CDR2序列如SEQ ID NO:8所示，重鏈CDR3序列如SEQID NO:9所示，輕鏈CDRl序列如SEQ ID NO:10所示，輕鏈CDR2序列為GIS，輕鏈CDR3序列如 SEQ ID NO:11 所示。
[0017]本發(fā)明還提供了該單克隆抗體在區(qū)分檢測變性可溶性乳鐵蛋白與非變性可溶性乳鐵蛋白的產(chǎn)品中的應用；單克隆抗體由保藏號為CCTCC NO:C201448的雜交瘤產(chǎn)生；該單克隆抗體為IgGl型；該單克隆抗體的重鏈序列如SEQ ID NO:5所示，輕鏈序列如SEQ IDNO:6所示；該單克隆抗體的重鏈CDRl序列如SEQ ID NO:7所示，重鏈CDR2序列如SEQ IDNO:8所示，重鏈CDR3序列如SEQ ID NO:9所示，輕鏈CDRl序列如SEQ ID NO:10所示，輕鏈CDR2序列為GIS，輕鏈CDR3序列如SEQ ID NO:11所示。
[0018]本發(fā)明還提供了該單克隆抗體在制備檢測膜結(jié)合型乳鐵蛋白產(chǎn)品中的應用；單克隆抗體由保藏號為CCTCC NO:C201448的雜交瘤產(chǎn)生；該單克隆抗體為IgGl型；該單克隆抗體的重鏈序列如SEQ ID NO:5所示,輕鏈序列如SEQ ID NO:6所示；該單克隆抗體的重鏈CDRl序列如SEQ ID NO:7所示，重鏈CDR2序列如SEQ ID NO:8所示，重鏈CDR3序列如SEQ ID NO:9所示，輕鏈CDRl序列如SEQ ID NO: 10所示，輕鏈CDR2序列為GIS，輕鏈CDR3序列如SEQ ID NO:11所示。
[0019]本發(fā)明還提供了該單克隆抗體在制備治療敗血癥藥物中的應用；單克隆抗體由保藏號為CCTCC NO:C201448的雜交瘤產(chǎn)生；該單克隆抗體為IgGl型；該單克隆抗體的重鏈序列如SEQ ID NO:5所示，輕鏈序列如SEQ ID NO:6所示；該單克隆抗體的重鏈⑶Rl序列如SEQ ID NO:7所示，重鏈CDR2序列如SEQ ID NO:8所示，重鏈CDR3序列如SEQ ID NO:9所示，輕鏈CDRl序列如SEQ ID NO: 10所示，輕鏈CDR2序列為GIS,輕鏈CDR3序列如SEQID NO:11 所示。
[0020]本發(fā)明還提供了該單克隆抗體在制備檢測乳鐵蛋白免疫復合物含量試劑盒中的應用；單克隆抗體由保藏號為CCTCC NO:C201448的雜交瘤產(chǎn)生；該單克隆抗體為IgGl型；該單克隆抗體的重鏈序列如SEQ ID NO: 5所示，輕鏈序列如SEQ ID NO:6所示；該單克隆抗體的重鏈CDRl序列如SEQ IDNO:7所示，重鏈CDR2序列如SEQ ID NO:8所示，重鏈CDR3序列如SEQID NO:9所示，輕鏈CDRl序列如SEQ ID NO:10所示，輕鏈CDR2序列為GIS,輕鏈CDR3序列如SEQ ID NO:11所示。
[0021]本發(fā)明還提供了該單克隆抗體在制備診斷類風濕性關(guān)節(jié)炎試劑盒中的應用；單克隆抗體由保藏號為CCTCC NO:C201448的雜交瘤產(chǎn)生；該單克隆抗體為IgGl型；該單克隆抗體的重鏈序列如SEQ ID NO:5所示,輕鏈序列如SEQ ID NO:6所示；該單克隆抗體的重鏈CDRl序列如SEQ ID NO:7所示，重鏈CDR2序列如SEQ ID NO:8所示，重鏈CDR3序列如SEQ ID NO:9所示，輕鏈CDRl序列如SEQ ID NO: 10所示，輕鏈CDR2序列為GIS，輕鏈CDR3序列如SEQ ID NO:11所示。
[0022]本發(fā)明還提供了一種檢測可溶性乳鐵蛋白產(chǎn)品，包括本發(fā)明提供的單克隆抗體；單克隆抗體由保藏號為CCTCC NO:C201448的雜交瘤產(chǎn)生；該單克隆抗體為IgGl型；該單克隆抗體的重鏈序列如SEQ ID NO: 5所示，輕鏈序列如SEQ ID NO:6所示；該單克隆抗體的重鏈CDRl序列如SEQ ID NO:7所示，重鏈CDR2序列如SEQ ID NO:8所示，重鏈CDR3序列如SEQ ID NO:9所示，輕鏈CDRl序列如SEQ ID NO: 10所示，輕鏈CDR2序列為GIS，輕鏈CDR3序列如SEQ ID NO:11所示。
[0023]本發(fā)明還提供了一種區(qū)分變性可溶性乳鐵蛋白與非變性可溶性乳鐵蛋白的產(chǎn)品，包括本發(fā)明提供的單克隆抗體；單克隆抗體由保藏號為CCTCC NO:C201448的雜交瘤產(chǎn)生；該單克隆抗體為IgGl型；該單克隆抗體的重鏈序列如SEQ ID NO:5所示，輕鏈序列如SEQID NO:6所示；該單克隆抗體的重鏈CDRl序列如SEQ ID NO:7所示，重鏈CDR2序列如SEQID NO:8所示，重鏈CDR3序列如SEQ ID NO:9所示，輕鏈CDRl序列如SEQ ID NO:10所示，輕鏈CDR2序列為GIS，輕鏈CDR3序列如SEQ ID NO:11所示。
[0024]本發(fā)明還提供了一種檢測膜結(jié)合型乳鐵蛋白試劑盒，包括本發(fā)明提供的單克隆抗體；單克隆抗體由保藏號為CCTCC NO:C201448的雜交瘤產(chǎn)生；該單克隆抗體為IgGl型；該單克隆抗體的重鏈序列如SEQ ID NO:5所示，輕鏈序列如SEQ ID NO:6所示；該單克隆抗體的重鏈CDRl序列如SEQ ID NO:7所示，重鏈CDR2序列如SEQ ID NO:8所示，重鏈CDR3序列如SEQ ID NO: 9所示，輕鏈CDRl序列如SEQ ID NO: 10所示，輕鏈CDR2序列為GIS，輕鏈CDR3序列如SEQ ID NO: 11所示。
[0025]本發(fā)明還提供了一種治療敗血癥的藥物，包括本發(fā)明提供的單克隆抗體；；單克隆抗體由保藏號為CCTCC NO:C201448的雜交瘤產(chǎn)生；該單克隆抗體為IgGl型；該單克隆抗體的重鏈序列如SEQ ID NO:5所示,輕鏈序列如SEQ ID NO:6所示；該單克隆抗體的重鏈CDRl序列如SEQ ID NO:7所示，重鏈CDR2序列如SEQ ID NO:8所示，重鏈CDR3序列如SEQ ID NO:9所示，輕鏈CDRl序列如SEQ ID NO: 10所示，輕鏈CDR2序列為GIS，輕鏈CDR3序列如SEQ ID NO:11所示。
[0026]在本發(fā)明提供的一些實施例中，治療敗血癥的藥物還包括抗生素。
[0027]本發(fā)明還提供了一種檢測乳鐵蛋白免疫復合物含量的產(chǎn)品，包括本發(fā)明提供的單克隆抗體；單克隆抗體由保藏號為CCTCC NO:C201448的雜交瘤產(chǎn)生；該單克隆抗體為IgGl型；該單克隆抗體的重鏈序列如SEQ ID NO:5所示，輕鏈序列如SEQ ID NO:6所示；該單克隆抗體的重鏈⑶Rl序列如SEQ ID NO:7所示，重鏈⑶R2序列如SEQ ID NO:8所示，重鏈CDR3序列如SEQ ID NO:9所示，輕鏈CDRl序列如SEQ ID NO: 10所示，輕鏈CDR2序列為GIS，輕鏈CDR3序列如SEQ ID NO:11所示。
[0028]在本發(fā)明提供的一些實施例中，該檢測乳鐵蛋白免疫復合物含量的產(chǎn)品可以為檢測乳鐵蛋白免疫復合物含量的試劑或試劑盒。
[0029]本發(fā)明還提供了一種診斷類風濕性關(guān)節(jié)炎試劑盒，包括本發(fā)明提供的單克隆抗體；單克隆抗體由保藏號為CCTCC NO:C201448的雜交瘤產(chǎn)生；該單克隆抗體為IgGl型；該單克隆抗體的重鏈序列如SEQ ID NO:5所示，輕鏈序列如SEQ ID NO:6所示；該單克隆抗體的重鏈CDRl序列如SEQ ID NO:7所示，重鏈CDR2序列如SEQ ID NO:8所示，重鏈CDR3序列如SEQ ID NO: 9所示，輕鏈CDRl序列如SEQ ID NO: 10所示，輕鏈CDR2序列為GIS，輕鏈CDR3序列如SEQ ID NO:11所示。
[0030]本發(fā)明提供了乳鐵蛋白單克隆抗體及其應用以及乳鐵蛋白單克隆抗體的產(chǎn)品。該乳鐵蛋白的單克隆抗體由保藏號為CCTCC NO:C201448的雜交瘤產(chǎn)生。熒光標記試驗的結(jié)果顯示，單克隆抗體M-860能夠很好地識別人單核細胞及小鼠腹腔巨噬細胞表面的LTF，表明單克隆抗體M-860可作為探針應用于膜結(jié)合型乳鐵蛋白的檢測；LPS競爭抑制試驗的結(jié)果顯示，LPS能夠競爭抑制M-860與LTF的結(jié)合，結(jié)果說明M-860和LTF的結(jié)合位點，與LPS和LTF的結(jié)合位點相同；單克隆抗體M-860抑制LPS活化巨噬細胞試驗的結(jié)果顯示，單克隆抗體M-860能夠在體內(nèi)或內(nèi)外明顯抑制LPS誘導產(chǎn)生的TNF- α含量，并有效延長LPS誘導的敗血癥小鼠的壽命，且這種效應具有劑量依賴性，表明單克隆抗體Μ-860可用于格蘭陰性菌誘導產(chǎn)生的敗血癥的治療；通過檢測RA病人血清中LTF免疫復合物的含量，結(jié)果顯示單克隆抗體Μ-860能夠有效地結(jié)合血清中的LTF免疫復合物，表明該單克隆抗體用于類風濕關(guān)節(jié)炎病人血清中LTF免疫復合物的檢測具有很好地特異性和敏感性，從而可用于輔助診斷類風濕關(guān)節(jié)炎。
[0031]生物保藏說明
[0032]分類命名:雜交瘤細胞株Μ-860，于2014年03月27日保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心(CCTCC)，保藏中心地址為湖北省武漢市武昌區(qū)珞珈山武漢大學校內(nèi)，保藏編號為CCTCC NO:C201448o
【專利附圖】

【附圖說明】
[0033]圖1示實施例1中ELISA鑒定乳鐵蛋白免疫效果；
[0034]圖2示實施例2中SDS-PAGE鑒定乳鐵蛋白單克隆抗體M-860的純度；
[0035]圖3示實施例2中ELISA鑒定乳鐵蛋白單克隆抗體M-860的敏感性；
[0036]圖4示實施例3中ELISA鑒定乳鐵蛋白單克隆抗體M-860亞型；其中，圖4(a)示將IgGl作為二抗的吸光度，圖4(b)示將IgG2a作為二抗的吸光度，圖4(c)示將IgG2b作為二抗的吸光度，圖4(d)示將IgG3作為二抗的吸光度；
[0037]圖5示實施例5中ELISA鑒定單克隆抗體M-860識別乳鐵蛋白的構(gòu)象表位；其中，圖5(a)示將未經(jīng)處理的LTF作為包被抗原的吸光度，圖5(b)示將加熱處理后的LTF作為包被抗原的吸光度，圖5(c)示將β -巰基乙醇處理后的LTF作為包被抗原的吸光度；
[0038]圖6示實施例6中流式細胞術(shù)分析單克隆抗體Μ-860對人及小鼠單核巨噬細胞表面乳鐵蛋白的識別；其中，圖6 (a)示M-860對人外周血單核細胞表面染色結(jié)果，圖6(b)示M-860對小鼠腹腔巨噬細胞表面染色結(jié)果；
[0039]圖7示實施例7中LPS競爭抑制單克隆抗體M-860與乳鐵蛋白的結(jié)合； [0040]圖8示實施例8中單克隆抗體M-860體外抑制LPS活化巨噬細胞釋放細胞因子TNF-α ;其中，圖8(a)示同型對照抗體兔IgG(RbIgG)與多抗L3262對TNF-α的影響；圖8 (b)示同型對照抗體鼠IgGl (mlgGl)與M-860對TNF- α的影響；
[0041]圖9示實施例8中單克隆抗體Μ-860體內(nèi)抑制LPS誘導釋放細胞因子TNF- α ；[0042]圖10示實施例8中小鼠的生存曲線；其中，圖10(a)示空白對照組小鼠的生存曲線，圖10(b)示腹腔注射生理鹽水的小鼠的生存曲線，圖10(c)示腹腔注射mlgG(50 μ g/只)的小鼠的生存曲線，圖10(d)示腹腔注射M-860(50yg/只)的小鼠的生存曲線，圖10 (e)示腹腔注射mIgG(200 μ g/只)的小鼠的生存曲線，圖10 (f)示腹腔注射M-860 (200 μ g/只)的小鼠的生存曲線；
[0043]圖11示實施例9中LTF免疫復合物在健康人血清和類風濕關(guān)節(jié)炎患者血清中的表達；
[0044]圖12示實施例9中單克隆抗體M-860檢測乳鐵蛋白免疫復合物的含量。
【具體實施方式】
[0045]本發(fā)明公開了乳鐵蛋白單克隆抗體及其應用以及相關(guān)產(chǎn)品，本領域技術(shù)人員可以借鑒本文內(nèi)容，適當改進工藝參數(shù)實現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領域技術(shù)人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的方法及應用已經(jīng)通過較佳實施例進行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本
【發(fā)明內(nèi)容】
、精神和范圍內(nèi)對本文所述的方法和應用進行 改動或適當變更與組合，來實現(xiàn)和應用本發(fā)明技術(shù)。
[0046]說明書和權(quán)利要求書中所使用的縮寫具體含義如下:
[0047]
【權(quán)利要求】
1.一種乳鐵蛋白的單克隆抗體，其特征在于，由保藏號為CCTCC NO:C201448的雜交瘤產(chǎn)生。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的單克隆抗體，其特征在于，所述單克隆抗體為IgGl型。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的單克隆抗體，其特征在于，所述單克隆抗體的重鏈序列如SEQID NO:5所示，輕鏈序列如SEQ ID NO:6所示。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的單克隆抗體，其特征在于，所述單克隆抗體的重鏈CDRl序列如SEQ ID NO:7所示，重鏈CDR2序列如SEQ ID NO:8所示，重鏈CDR3序列如SEQ ID NO:9所示，輕鏈CDRl序列如SEQ ID NO: 10所示，輕鏈CDR2序列為GIS,輕鏈CDR3序列如SEQID NO:11 所示。
5.如權(quán)利要求1至4中任一項所述的單克隆抗體在制備檢測可溶性乳鐵蛋白產(chǎn)品中的應用。
6.如權(quán)利要求1至4中任一項所述的單克隆抗體在制備區(qū)分變性可溶性乳鐵蛋白與非變性可溶性乳鐵蛋白的產(chǎn)品中的應用。
7.如權(quán)利要求1至4中任一項所述的單克隆抗體在制備檢測膜結(jié)合型乳鐵蛋白產(chǎn)品中的應用。
8.如權(quán)利要求1至4中任一項所述的單克隆抗體在制備治療敗血癥藥物中的應用。
9.如權(quán)利要求1至4中任一項所述的單克隆抗體在制備檢測乳鐵蛋白免疫復合物含量試劑盒中的應用。
10.如權(quán)利要求1至4中任一項所述的單克隆抗體在制備診斷類風濕性關(guān)節(jié)炎試劑盒中的應用。
11.一種檢測可溶性乳鐵蛋白產(chǎn)品，其特征在于，包括如權(quán)利要求1至4中任一項所述的單克隆抗體。
12.—種區(qū)分變性可溶性乳鐵蛋白與非變性可溶性乳鐵蛋白的產(chǎn)品，其特征在于，包括如權(quán)利要求1至4中任一項所述的單克隆抗體。
13.—種檢測膜結(jié)合型乳鐵蛋白產(chǎn)品，其特征在于，包括如權(quán)利要求1至4中任一項所述的單克隆抗體。
14.一種治療敗血癥的藥物，其特征在于，包括如權(quán)利要求1至4中任一項所述的單克隆抗體。
15.一種檢測乳鐵蛋白免疫復合物含量試劑盒，其特征在于，包括如權(quán)利要求1至4中任一項所述的單克隆抗體。
16.一種診斷類風濕性關(guān)節(jié)炎試劑盒，其特征在于，包括如權(quán)利要求1至4中任一項所述的單克隆抗體。
【文檔編號】A61K39/395GK103965354SQ201410222663
【公開日】2014年8月6日 申請日期:2014年5月23日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月23日
【發(fā)明者】高曉明, 董紅亮, 扈曉敏, 鐘橋 申請人:蘇州大學