一種鱷魚膽素的提取方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種鱷魚膽素的提取方法，包括以下步驟：步驟1：將鱷魚膽去除膽囊壁，得到膽汁混合物100重量份；步驟2:在所述的膽汁混合物中加入無水乙醇200～500重量份，低溫攪拌；步驟3：將步驟2中得到的混合物進行過濾，收集濾液；將濾液置于旋轉蒸發(fā)儀中進行真空濃縮，濃縮時間為2～4小時；步驟4：將步驟3中得到的濃縮后的混合物中加入60～100重量份蒸餾水，用乙醚進行萃取三次，并通過真空濃縮除去乙醚；步驟5：用二氯甲烷進行萃取三次，并通過真空濃縮除去二氯甲烷，得到鱷魚膽素。本發(fā)明旨在提供一種雜質少，溶劑殘留少的鱷魚膽素的提取方法。
【專利說明】一種鱷魚膽素的提取方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及鱷魚制品領域，特別是一種鱷魚膽素的提取方法。
【背景技術】
[0002]鱷魚是一種古老的爬行動物，《本草綱目》等古代醫(yī)學典籍中均有關于鱷魚藥用價值的記載。早在南北朝時期的《本草經集注》就有對鱷魚甲的記載:“味辛，微溫。主心腹癥瘕、伏堅、積聚、寒熱?！薄侗静菔斑z》稱鼉甲“主惡瘡，腹內癥瘕”。明代李時珍的《本草綱目》“鱗部”第四十三卷則詳細記載了:“鼉(即鱷)甲主治心腹癥瘕；伏堅積聚；肉:主治少氣吸吸，足不立地；別錄濕氣邪氣、諸蠱內癥瘕、惡皰。脂:主治摩風及惡瘡?！痹诂F(xiàn)代醫(yī)學中，鱷魚肉、鱷魚膽已廣泛用于保健和醫(yī)療領域。
[0003]根據(jù)中國專利CN101856368B的《鱷膽素及其制備方法與應用》記載，其通過萃取的方法獲取鱷膽素，并用于腫瘤病人的治療，取得了良好的療效。但是，該專利在提取的鱷膽素應用到制品中時，存在保質時間短、溶劑殘留高的問題，高殘留的正丁醇對人體粘膜會產生強烈的刺激性。
【發(fā)明內容】

[0004]本發(fā)明提供一種雜質少，溶劑殘留少的鱷魚膽素的提取方法。
[0005]本發(fā)明提供的技術方案為:一種鱷魚膽素的提取方法，包括以下步驟:
[0006]步驟1:將鱷魚膽去除膽囊壁，得到膽汁混合物100重量份；
[0007]步驟2:在所述的膽汁混合物中加入無水乙醇200~500重量份，低溫攪拌；
[0008]步驟3:將步驟2中得到的混合物進行過濾，收集濾液；將濾液置于旋轉蒸發(fā)儀中進行真空濃縮，濃縮時間為2~4小時；優(yōu)選地，所述的過濾采用微孔濾膜過濾器進行過濾，所述的微孔濾膜的孔徑為3~10微米。上述步驟2和步驟3可以選擇重復進行多次，比如4次，可以輕微的提高收集效果。
[0009]步驟4:將步驟3中得到的濃縮后的混合物中加入60~100重量份蒸餾水，優(yōu)選90重量份，用乙醚進行萃取三次，并通過真空濃縮除去乙醚；
[0010]步驟5:用二氯甲烷進行萃取三次，并通過真空濃縮除去二氯甲烷，得到鱷魚膽素。
[0011]在上述的鱷魚膽素的提取方法中，所述的步驟2中低溫攪拌時，混合物的溫度為5~10°C，優(yōu)選地，所述的混合物的溫度為6~TC。
[0012]在上述的鱷魚膽素的提取方法中，所述的步驟3中，旋轉蒸發(fā)儀的加熱溫度為50~60°C，優(yōu)選地，所述的加熱溫度為51~55°C。
[0013]在上述的鱷魚膽素的提取方法中，所述的步驟4中，所述的每一次萃取所用的乙醚的量為200~500重量份，優(yōu)選250~350重量份。
[0014]在上述的鱷魚膽素的提取方法中，所述的步驟5中，所述的每一次萃取所用的二氯甲烷的量為200~500重量份，優(yōu)選250~350重量份。[0015]在本發(fā)明中，鱷魚可以選擇為人工養(yǎng)殖的泰鱷、尼羅鱷、揚子鱷等。
[0016]在本發(fā)明中，采用無水乙醇對膽汁進行低溫預處理和過濾，使鱷魚膽汁中的蛋白質和脂肪同時析出和除去，可以有效的縮短后續(xù)的萃取工序，并且降低鱷魚膽素制品中的脂肪含量。在本發(fā)明中，萃取工序的溶劑沸點均低于40°C，在真空濃縮的過程中，無需進行加熱，在常溫下即可以快速的除去溶劑，成品中的溶劑殘留微乎其微。更為重要的是，乙醚的極性大于二氯甲烷的極性，溶劑極性先大后小有利于對鱷膽素的進一步純化，有效去除制品中的殘留的蛋白質和其他大分子物質。
【具體實施方式】
[0017]下面結合【具體實施方式】，對本發(fā)明的技術方案作進一步的詳細說明，但不構成對本發(fā)明的任何限制。
[0018]實施例1
[0019]取一定量的泰鱷的鱷魚膽去除膽囊壁，得到膽汁混合物1000g ;在所述的膽汁混合物中加入無水乙醇2500g,在7°C的條件下攪拌；攪拌結束后對混合物進行微孔濾膜過濾，微孔濾膜的孔徑 為10微米，收集濾液；將濾液置于旋轉蒸發(fā)儀中進行真空濃縮，濃縮時間為2~4小時，加熱油溫度為51°C ;在濃縮后的混合物中加入900g蒸餾水，用乙醚進行萃取三次，并通過真空濃縮除去乙醚，壓力為-0.095Mpa，每次萃取所用的乙醚量為3000g ；三次乙醚萃取結束后再用二氯甲烷進行萃取三次，并通過真空濃縮除去二氯甲烷，壓力為-0.095Mpa，每次萃取所用的二氯甲烷的量為3000g，得到鱷魚膽素。
[0020]實施例2
[0021]取一定量的泰鱷的鱷魚膽去除膽囊壁，得到膽汁混合物1000g ;在所述的膽汁混合物中加入無水乙醇4000g，在TC的條件下攪拌；攪拌結束后對混合物進行微孔濾膜過濾，微孔濾膜的孔徑為10微米，收集濾液；將濾液置于旋轉蒸發(fā)儀中進行真空濃縮，濃縮時間為2~4小時，加熱油溫度為53°C ;在濃縮后的混合物中加入900g蒸餾水，用乙醚進行萃取三次，并通過真空濃縮除去乙醚，壓力為-0.095Mpa ;每次萃取所用的乙醚量為2500g ；三次乙醚萃取結束后再用二氯甲烷進行萃取三次，并通過真空濃縮除去二氯甲烷，壓力為-0.095Mpa，每次萃取所用的二氯甲烷的量為2500g，得到鱷魚膽素。
[0022]對比例I
[0023]取一定量的泰鱷的鱷魚膽去除膽囊壁，得到膽汁混合物1000g ;在所述的膽汁混合物中加入70%的乙醇3000g，在常溫下攪拌均勻后置于旋轉蒸發(fā)儀中進行真空濃縮，濃縮時間為2~4小時；在濃縮后的混合物中加入900g蒸餾水，用沸程為50~60°C的石油醚進行萃取三次，并通過真空濃縮除去石油醚，壓力為-0.095Mpa ;每次萃取所用的石油醚量為2500g;三次石油醚萃取結束后再用乙酸乙酯進行萃取三次，并通過真空濃縮除去乙酸乙酯，壓力為-0.095Mpa，每次萃取所用的乙酸乙酯的量為2500g，三次乙酸乙酯萃取結束后再用正丁醇進行萃取三次，并通過真空濃縮除去正丁醇，壓力為-0.095Mpa，每次萃取所用的正丁醇的量為2500g，得到鱷魚膽素。
[0024]測試方法:
[0025]穩(wěn)定性測試
[0026]取鱷魚膽素Ig溶于1000g50%的乙醇溶液中，置于3°C的環(huán)境中，放置90天，觀察混合液表面和混合液中是否含有析出物。
[0027]溶劑殘留測試
[0028]將鱷魚膽素用無水乙醇溶液稀釋1000倍后，用移液器取2ml稀釋液并用0.45微米的微孔膜過濾后轉移至標準樣品瓶中待測；設定好氣相色譜儀的GC-MS參數(shù)后，用10微升進樣針精確吸取I微升樣品注入儀器中進行分析，根據(jù)出峰順序和出峰面積，計算鱷魚膽素中二氯甲烷和正丁醇的含量。
[0029]測試結果:
[0030]穩(wěn)定性測試結果:
[0031]實施例1和實施例2在4°C條件下放置90天后，液體內部和液體表面均無析出物，液體透明清澈。
[0032]對比例I在放置4°C條件下90天后，容器壁上出現(xiàn)少量不溶物。
[0033]溶劑殘留測試結果:
[0034]表1
[0035]
【權利要求】
1.一種鱷魚膽素的提取方法，其特征在于，包括以下步驟: 步驟1:將鱷魚膽去除膽囊壁，得到膽汁混合物100重量份； 步驟2:在所述的膽汁混合物中加入無水乙醇200~500重量份，低溫攪拌； 步驟3:將步驟2中得到的混合物進行過濾，收集濾液；將濾液置于旋轉蒸發(fā)儀中進行真空濃縮，濃縮時間為2~4小時； 步驟4:將步驟3中得到的濃縮后的混合物中加入60~100重量份蒸餾水，用乙醚進行萃取三次，并通過真空濃縮除去乙醚； 步驟5:用二氯甲烷進行萃取三次，并通過真空濃縮除去二氯甲烷，得到鱷魚膽素。
2.根據(jù)權利要求1所述的鱷魚膽素的提取方法，其特征在于，所述的步驟2中低溫攪拌時，混合物的溫度為5~10°C。
3.根據(jù) 權利要求1所述的鱷魚膽素的提取方法，其特征在于，所述的步驟3中，旋轉蒸發(fā)儀的加熱溫度為50~60°C。
4.根據(jù)權利要求1所述的鱷魚膽素的提取方法，其特征在于，所述的步驟4中，所述的每一次萃取所用的乙醚的量為200~500重量份。
5.根據(jù)權利要求1所述的鱷魚膽素的提取方法，其特征在于，所述的步驟5中，所述的每一次萃取所用的二氯甲烷的量為200~500重量份。
【文檔編號】A61K35/56GK103933072SQ201410203494
【公開日】2014年7月23日 申請日期:2014年5月14日 優(yōu)先權日:2014年5月14日
【發(fā)明者】汪華東 申請人:汪華東