抗體制劑的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明描述了VLA-4結合抗體的制劑。
【專利說明】抗體制劑
[0001]本申請是申請日為2008年6月13日，申請?zhí)枮?00880102434.5 (國際申請?zhí)枮镻CT/US2008/066928)，名稱為“抗體制劑”的發(fā)明專利申請的分案申請。
[0002]相關申請的交叉引用
[0003]本申請要求2007年6月14日提交的序號為60/944，076的美國臨時申請的優(yōu)先權,其全部內容通過引用并入本文。
[0004]背景
[0005]多發(fā)性硬化癥(MS)為中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見疾病中的一種?，F(xiàn)今全世界超過2，500，000個人患有MS。
[0006]概述
[0007]本發(fā)明部分是基于對含有高濃度VLA-4結合抗體的制劑的開發(fā)。一些實施方案適于通過皮下(SC)或肌肉內(IM)遞送來遞送至受治療者，諸如人類，例如人類患者。制劑例如當稀釋于可接受的 輸注基質(諸如生理鹽水)中時亦適于靜脈內(IV)施用。舉例而言，VLA-4結合抗體可為那他珠單抗(natalizumab),且抗體濃度介于約120mg/mL至約190mg/mL的范圍內。制劑對炎性、免疫或自體免疫病癥提供治療作用。舉例而言，制劑可對中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)炎性病癥，諸如多發(fā)性硬化癥(MS)提供治療作用。
[0008]一方面，本發(fā)明特征為含水藥物組合物，諸如穩(wěn)定含水藥物組合物，其含有濃度為約 120mg/mL 至約 190mg/mL (例如濃度為約 135mg/mL,約 140mg/mL,約 150mg/mL,約 160mg/mL或約165mg/mL)的VLA-4結合抗體,及具有約pH5.5至約pH6.5的磷酸鹽緩沖液。在一些實施方案中，VLA-4抗體濃度為約130mg/mL至約180mg/mL或約140mg/mL至約160mg/mL。在一實施方案中，VLA-4抗體濃度大于約150mg/mL,例如其在大于約150mg/mL至約190mg/mL的范圍內。在一實施方案中，VLA-4抗體濃度為約150mg/mL。
[0009]在一實施方案中，VLA-4結合抗體為人源化單克隆抗體，諸如那他珠單抗。在另一實施方案中，VLA-4結合抗體為那他珠單抗的變體。舉例而言，在一些實施方案中，抗體的輕鏈可變區(qū)具有與那他珠單抗的輕鏈可變區(qū)擁有一或多個氨基酸殘基但不多于2、3、4、5或6個氨基酸殘基的差異的氨基酸序列，且/或重鏈可變區(qū)具有與那他珠單抗的重鏈可變區(qū)擁有一或多個氨基酸殘基但不多于2、3、4、5或6個氨基酸殘基的差異的氨基酸序列。在一些實施方案中，一些或所有差異均為保守性變化。
[0010]在另一實施方案中，VLA-4結合抗體擁有具有美國專利第5，840，299號(其以引用的方式并入本文中)中SEQ ID N0:7氨基酸序列的輕鏈可變區(qū)及具有美國專利第5，840，299號中SEQ ID NO: 11氨基酸序列的重鏈可變區(qū)之一或兩者。在其它實施方案中，VLA-4抗體為這些抗體之一的變體。舉例而言，在一些實施方案中，輕鏈可變區(qū)具有與美國專利第5，840，299號中SEQ IDNO: 7的序列擁有一或多個氨基酸殘基但不多于2、3、4、5或6個氨基酸殘基的差異的氨基酸序列，且/或重鏈可變區(qū)具有與由美國專利第5，840，299號中的SEQ ID NO: 11所定義的序列擁有一或多個氨基酸殘基但不多于2、3、4、5或6個氨基酸殘基的差異的氨基酸序列。
[0011]在又一實施方案中，VLA-4結合抗體具有表1-1中SEQ ID NO:1的輕鏈氨基酸序列及表1-2中SEQ ID NO: 2的重鏈氨基酸序列之一或兩者。在其它實施方案中，VLA-4抗體為這些抗體之一的變體。舉例而言，在一些實施方案中，抗體的輕鏈具有與SEQ ID NO:1的序列擁有一或多個氨基酸殘基但不多于2、3、4、5或6個氨基酸殘基的差異的氨基酸序列，且/或抗體的重鏈具有與SEQ ID NO:2的序列擁有一或多個氨基酸殘基但不多于2、3、4、5或6個氨基酸殘基的差異的氨基酸序列。
[0012]如用于本上下文中的氨基酸序列的“差異”指氨基酸同一性差異(例如，以不同氨基酸取代上文所提及的SEQ ID N0:7或11中的氨基酸)或缺失或插入。差異可位于例如框架區(qū)、CDR、鉸鏈區(qū)或恒定區(qū)。差異可在蛋白質序列的內部或末端。在一些實施方案中，與所述序列相比，一些或所有差異均為保守性變化。
[0013]在某些實施方案中，組合物的pH值為約6.0±0.5(例如，約5.0±0.5，約
6.0±0.5，約7.0±0.5)，且磷酸鹽緩沖液組合物在約5mM與約30mM之間(例如，約10mM，約15mM,約20mM，約25mM)。在另一實施方案中，組合物還包含濃度在約IOOmM與約200mM(例如，約120mM、140mM、160mM、180mM)之間的鹽，諸如氯化鈉。在另一實施方案中，組合物包含L-精氨酸鹽酸鹽或甘油。在另一實施方案中，組合物含有濃度為約200mM至約300mM(例如，約220mM、240mM、260mM、280mM)的氨基酸，諸如甘氨酸。在另一實施方案中，組合物含有約 0.001%至約 2.0%、約 0.004%至約 0.4%、約 0.008%至約 0.2%、約 0.02%至約 0.08%(w/v)(例如，約 0.01 %、約 0.02%、約 0.03%、約 0.04%、約 0.05%、約 0.06%、約 0.07%,約1%、約1.5% )的 量的藥學上可接受的賦形劑，諸如表面活性劑，諸如聚山梨酯80。
[0014]在某些實施方案中，組合物包括甘油，且基本不含L-精氨酸鹽酸鹽或氯化鈉。在其它實施方案中，組合物包括L-精氨酸鹽酸鹽，但基本無甘油或氯化鈉(除來自磷酸鹽緩沖液及L-精氨酸鹽酸鹽中的以外)。在其它實施方案中，組合物包括氯化鈉，但基本無甘油或L-精氨酸鹽酸鹽。
[0015]在一些實施方案中，抗體制劑包括組氨酸緩沖液，例如代替磷酸鹽緩沖液，且組氨酸緩沖液為約PH5至約pH7(例如，約ρΗ5.5±0.5、ρΗ6±0.5或ρΗ6.5±0.5)。組氨酸緩沖液組合物是在約IOmM與約30mM之間(例如，約15mM、約20mM、約25mM)。組氨酸緩沖液制劑亦包括約200mM至約300mM甘油(例如，約240mM、約250mM、約260mM、約270mM、約280mM甘油)及約 0.001%至約 2.0% (w/v)(例如，約 0.02%、約 0.03%、約 0.04%、約 0.05%、約0.06%、約0.07%、約I %、約1.5% )的聚山梨酯80。組氨酸制劑任選地包括約5mM至約15mM的L-甲硫氨酸(例如，約IOmM的L-甲硫氨酸)。
[0016]在一實施方案中，為本文特征的組合物含有140mg/mL至160mg/mL那他珠單抗、5mM至15mM磷酸鈉緩沖液、130mM至150mM氯化鈉及0.01 %至0.1 % (w/v)聚山梨酯80,pH值為6±0.5。在另一實施方案中，組合物含有140mg/mL至160mg/mL那他珠單抗、5mM至15mM磷酸鈉緩沖液、250mM至300mM甘油及0.01%至0.1% (w/v)聚山梨酯80，pH值為6±0.5。在又一實施方案中，組合物含有140mg/mL至160mg/mL那他珠單抗、5mM至15mM磷酸鈉緩沖液、150mM至170mM L-精氨酸鹽酸鹽及0.01 %至0.1 % (w/v)聚山梨酯80，pH值為 6±0.5。
[0017]在一實施方案中，為本文特征的組合物為液體。
[0018]在另一實施方案中，組合物在約2°C至約8°C (例如約5°C )的溫度下穩(wěn)定至少12個月(例如，至少24、30、36個月)。在另一實施方案中，組合物在環(huán)境溫度(約20-30°C，諸如約25°C )下穩(wěn)定至少2、3、4、5、6或7天(例如，至少一周或12或14天)。
[0019]在又一實施方案中，組合物適于SC或頂施用。在又一實施方案中，組合物適于IV施用。
[0020]在另一方面中，本發(fā)明特征為制備含水組合物，諸如穩(wěn)定含水組合物的方法，該組合物在磷酸鹽緩沖液中包括約120mg/mL至約190mg/mL的VLA-4結合抗體及聚山梨酯。該方法包括使抗體在細胞培養(yǎng)物中表達，使抗體經(jīng)歷至少一個層析純化步驟，使抗體經(jīng)歷磷酸鹽緩沖液中的至少兩個超濾/透析過濾步驟，使抗體經(jīng)歷磷酸鹽緩沖液中的至少一個超濾步驟，且通過添加聚山梨酯和/或磷酸鹽緩沖液來調節(jié)抗體濃度，例如下調至約120mg/mL至約190mg/mL。在一實施方案中，VLA-4結合抗體為那他珠單抗，且在另一實施方案中，聚山梨酯為聚山梨酯80?？贵w濃度可為例如約135mg/mL至約165mg/mL,例如約150mg/mL。在一些實施方案中，磷酸鹽緩沖液包括其它賦形劑，諸如甘油、L-精氨酸鹽酸鹽或氯化鈉。最終制劑具有約5至約7，例如約5.5至約6.5的pH值。
[0021]在另一方面中，本發(fā)明特征為設計用于或適于SC或IM施用的遞送裝置，其中該遞送裝置封裝有或含有單位劑量的本文所述的組合物，例如含有適于SC或IM施用的那他珠單抗的濃縮制劑的組合物。在一實施方案中，單位劑量為約IOOmg至約450mg(例如，約120mg至約350mg ;約150mg、約200mg、約250mg、約300mg)。在一實施方案中，單位劑量介于大于約IOOmg至約450mg的范圍內。在另一實施方案中，單位劑量將向人類遞送每千克體重約1.4mg/kg與約3.0mg/kg之間的VLA-4結合抗體或其片段。在另一實施方案中，單位劑量為約0.25mL至約1.5mL (例如，約0.5mL、約0.75mL、約1.0mL)。
[0022]在一實施方案中，單位劑量為約300mg那他珠單抗，且在另一實施方案中，將單位劑量分成數(shù)份，諸如分成兩個半份，每半份含有約150mgVLA-4結合抗體。在又一實施方案中，按照方案向患者施用那他珠單抗。在一實施方案中，每月一次向患者施用約300mg那他珠單抗，例如通過施用兩個連續(xù)劑量的150mg那他珠單抗。在一替代性實施方案中，通過150mg那他珠單抗的第一劑,接著在約兩周后150mg那他珠單抗的第二劑,每月向患者施用約300mg那他珠單抗。
[0023]本發(fā)明特征為優(yōu)化向患者提供例如那他珠單抗的VLA-4結合抗體的高度濃縮液體制劑的方法。
[0024]在一實施方案中，該方法允許逐漸增大所提供抗體的濃度。這允許斜坡增大(ramp-up)抗體濃度且可允許在濃度增大時就耐受性、反應及類似情況來監(jiān)測患者。舉例而言，該方法可由向患者提供一或多個初始濃度或相對較低濃度的那他珠單抗開始，接著向患者提供最終較高濃度的那他珠單抗。就初始濃度而言，示例性制劑將通常具有小于最終較高濃度的80 %、70 %、50 %、30 %、20 %或10 %的抗體濃度。典型初始濃度可為例如20mg/mL、30m g/mL或40mg/mL。典型最終濃度將為例如約120mg/mL至約190mg/mL (例如，約 135mg/mL、約 140mg/mL、約 150mg/mL、約 160mg/mL 或約 165mg/mL)。在一些實施方案中，患者將接受一次或在一個或多個初始濃度下的多次施用。舉例而言，在一實施方案中，患者將歷經(jīng)多次施用接受漸增的濃度。在一些實施方案中，患者將在達到最終濃度之前接受在一或多個初始濃度下的2、3、4、5、6、7或8次施用。舉例而言，患者將接受第一初始濃度下的一或多次施用，及第二較高濃度下的一或多次施用。在一些實施方案中，在一或多次施用之后評估患者的癥狀(包括不良癥狀)。在一些實施方案中，僅在確定患者對先前施用不具有不可接受的不良反應之后，向患者施用具有增大濃度的那他珠單抗的制劑。
[0025]在一實施方案中，該方法允許逐漸增大所提供的抗體劑量(如本文所用的劑量是指以一次或以所確定的小數(shù)字例如2次施用中每一次提供的抗體的量)。這允許斜坡增大劑量且可允許監(jiān)測當劑量增大時患者的耐受性、不良反應及類似情況。舉例而言，該方法可由向患者提供一或多個初始劑量或相對較低劑量的那他珠單抗開始，接著向患者提供最終較高劑量的那他珠單抗。典型初始劑量可為例如最終較高劑量的80^^70^^50^^30%、20%或10%或10%或以下。典型最終劑量將基于達成穩(wěn)態(tài)施用后的施用頻率而變化。舉例而言，一些實施方案包括在75mg與500mg之間的最終劑量(例如，lOOmg、150mg、200mg、250mg、300mg、350mg、400mg、450mg)(這些劑量通?？纱笾聻槊吭率┯脛┝?。其它實施方案包括在50mg與250mg之間的最終劑量(例如，75mg、lOOmg、150mg、200mg)(這些劑量通常為每兩周施用劑量)。其它實施方案包括在25mg與150mg之間的最終劑量(例如，50mg、75mg、100mg、125mg)(這些劑量通常為每周施用劑量)。在一些實施方案中，患者將接受一次或在一個或多個初始劑量下的多次施用。舉例而言，在一實施方案中，患者將歷經(jīng)多次施用接受漸增的劑量。在一些實施方案中，患者將在達到最終劑量之前接受在一或多個初始劑量下的2、3、4、5、6、7或8次施用。舉例而言，患者將接受第一初始劑量下的一或多次施用，及第二較高初始劑量下的一或多次施用。在一些實施方案中，在一或多次施用之后評估患者的癥狀(包括不良癥狀)。在一些實施方案中，僅在確定患者對先如劑量不具有不可接受的不良反應之后，向患者施用增大劑量的那他珠單抗。
[0026]本發(fā)明亦包括例如起動包(starter pack)的試劑盒以實施濃度或劑量的斜坡增大。在一實施方案中，向患者或護理人員提供那他珠單抗制劑的試劑盒或“起動包”，其包括漸增濃度或劑量的那他珠單抗的包裝。指導被提供起動包的患者或護理人員自我施用或施用第一、例如低或最低劑量或濃度的那他珠單抗，且等待指定的時間段。若患者未經(jīng)歷或經(jīng)歷較小程度的不良癥狀，則指導患者或護理人員自我施用或施用第二制劑，例如較高，例如下一最高濃度或劑量。指導患者或護理人員繼續(xù)逐步增大劑量或濃度直至達到所需劑量或濃度?？芍笇Щ颊呋蜃o理人員保持以定期間隔自我施用或施用最終制劑，持續(xù)規(guī)定的時間段。
[0027]在一實施方案中，向患者提供預封裝于諸如注射器的合適遞送裝置中的VLA-4結合抗體的高度濃縮制劑。
[0028]在另一方面中，本發(fā)明特征為一種方法，例如指導需要VLA-4結合抗體療法的患者如何施用本文所述的制劑的方法。該方法包括(i)向患者提供至少一單位劑量的本文所述的VLA-4結合抗體的高度濃縮制劑；及(ii)指導患者以肌肉內或皮下方式自我施用該至少一單位劑量。另一方法(例如治療方法)包括(i)向患者提供至少兩單位劑量的VLA-4結合抗體的高度濃縮制劑 '及(ii)指導患者以皮下或肌肉內方式自我施用該單位劑量，例如一次一劑量。
[0029]在一實施方案中，患者具有炎性病癥，諸如多發(fā)性硬化癥。在其它實施方案中，患者具有例如哮喘(例如過敏性哮喘)、關節(jié)炎病癥(例如，類風濕性關節(jié)炎、銀屑病關節(jié)炎)、糖尿病(例如I型糖尿病)、纖維化病癥(例如，肺纖維化、骨髓纖維化、肝硬化、系膜增生性腎小球腎炎、新月體性腎小球腎炎、糖尿病性腎病、腎間質性纖維病)或炎性腸病(例如，Crohn病、潰瘍性結腸炎)。[0030]另一方面，本發(fā)明特征為本文所述的VLA-4結合抗體的濃縮制劑的單位劑量，其中單位劑量為約0.25mL至約1.5mL (例如，約0.5mL、約0.75mL或約1.0mL)。在一實施方案中，單位劑量為約IOOmg至約450mg(例如，約150mg、約160mg、約180mg、約200mg、約250mg、約 300mg 或約 350mg)。
[0031]在另一方面中，本發(fā)明特征為VLA-4結合抗體的含水制劑的單位劑量，其中向人類施用單位劑量將向人類遞送每千克體重約1.4mg與約3.0mg之間的VLA-4結合抗體或其片段。
[0032]在另一方面中，本發(fā)明特征為通過向患者施用適于SC或頂施用的制劑形式的含有VLA-4結合抗體的組合物來治療患者的方法。在一實施方案中，患者具有炎性病癥，諸如多發(fā)性硬化癥、哮喘、類風濕性關節(jié)炎、糖尿病或Crohn病。在另一實施方案中，按照方案施用組合物。在另一實施方案中，方法還包括選擇適于以該組合物治療的患者。適于治療的患者例如已顯示指示疾病發(fā)作的體征或癥狀，諸如指示MS的體征或癥狀。在又一實施方案中，方法還包括向患者施用第二治療劑，諸如溶血栓劑、神經(jīng)保護劑、抗炎劑、類固醇、細胞因子或生長因子。
[0033]在另一方面中，本發(fā)明特征為通過確定患者是否符合預先選定的標準，且如果患者符合預先選定的標準，則向患者核準、提供、指定或施用本文所述的VLA-4結合抗體制劑來評估患者的方法。在一實施方案中，預先選定的標準為患者未能對先前替代性治療性治療或方案(例如用于治療MS)作出充分反應。在另一實施方案中，預先選定的標準為不存在進行性多病灶白質腦病(PML)的任何體征或癥狀，或不存在PML的任何診斷。在另一實施方案中，標準如2006年8 月9日提交的USSN60/836，530(以引用的方式并入本文中)中所述，其描述藥物分裝(distribution)的方法及系統(tǒng)。
[0034]在另一方面中，本發(fā)明特征為指導接受者施用那他珠單抗的高度濃縮制劑的方法。該方法包括指導接受者(例如，最終使用者、患者、醫(yī)師、零售或批發(fā)藥房、經(jīng)銷商，或在醫(yī)院、療養(yǎng)院診所或HMO的藥劑部門)應以皮下或肌肉內方式向患者施用藥物。
[0035]在另一方面中，提供分裝本文所述的組合物的方法。組合物含有那他珠單抗的高度濃縮制劑且適于皮下或肌肉內或靜脈內施用。該方法包括向接受者(例如，最終使用者、患者、醫(yī)師、零售或批發(fā)藥房、經(jīng)銷商或在醫(yī)院、療養(yǎng)院診所或HMO的藥劑部門)提供含有治療患者至少6、12、24或36個月的藥物的足夠單位劑量的包裝。
[0036]在另一方面中，本發(fā)明特征為評估本文所述的含有高度濃縮量的VLA-4結合抗體的組合物的包裝或一批包裝的質量的方法(例如，測定其是否已過期)。該方法包括評估包裝是否已過期。過期日期為自諸如制造、檢定或包裝的預先選定的事件起至少6、12、24、36或48個月，例如大于24或36個月。在一些實施方案中，由分析結果作出決定或采取步驟，例如，將包裝中的抗體加以使用或丟棄、分類、選擇、投放或保留、載運、移動至新位置、投放市場、出售或供給銷售、自市場退出或不再供給銷售，取決于產(chǎn)品是否已過期。
[0037]在另一方面中，本發(fā)明特征為含有至少2單位劑量的含水組合物的包裝，該組合物含有高度濃縮量的VLA-4結合抗體。在一實施方案中，所有單位劑量均含有相同量的抗體，且在其它實施方案中，存在兩個或兩個以上強度的單位劑量，或兩種或兩種以上不同制劑，其例如具有不同強度或釋放特性。在一實施方案中，至少一個劑量含有約IOOmg至約450mg 的 VLA-4 結合抗體，例如約 lOOmg、約 200mg、約 250mg、約 300mg、約 350mg 或約 400mg的VLA-4結合抗體。
[0038]在另一方面中，本發(fā)明包括指導接受者施用含有VLA-4結合抗體的含水制劑的方法。該方法包括指導接受者(例如，最終使用者、患者、醫(yī)師、零售或批發(fā)藥房、經(jīng)銷商，或醫(yī)院、療養(yǎng)院診所或HMO的藥劑部門)應在過期日期之前向患者施用抗體。過期日期為自例如制造、檢定或包裝的預先選定的事件起至少6、12、18、24、36或48個月，例如大于18、24或36個月。在一實施方案中，接受者亦接受抗體供應，例如單位劑量供應。
[0039]在另一方面中，本發(fā)明特征為本文所述的制劑在PCT/US2007/07557 (公開為W0/2008/021954)中所述的方法或系統(tǒng)的用途。實施方案包括分裝本文所述的制劑、監(jiān)測或跟蹤本文所述的制劑對藥房、輸注中心或患者的提供、監(jiān)測一或多個患者、選擇患者，或匯編或報導關于本文所述的制劑的用途的數(shù)據(jù)的方法。PCT/US2007/075577(公開為W0/2008/021954)是以引用的方式并入本文中。
[0040]在另一方面中，本發(fā)明特征為選擇以本文所述的制劑治療本文所述的病癥(例如多發(fā)性硬化癥)的患者的方法。該方法包括:
[0041]選擇或提供已通過靜脈內遞送例如那他珠單抗的VLA-4結合抗體來治療的患者；且
[0042]向患者提供或施用本文所述的制劑，
[0043]藉此治療患者。
[0044]在另一方面中，本發(fā)明特征為分析產(chǎn)物或過程(例如制造過程)的方法。該方法包括提供高度濃縮VLA-4結合抗體組合物的含水制劑，例如通過本文所述的過程制造的含水制劑，且通過評估溶液參數(shù)，諸如顏色(例如，無色至微黃，或無色至黃色)、透明度(例如，澄清至微乳光或澄清至乳光)或粘度(例如，當在環(huán)境溫度下(諸如在20°C -30°C下，例如25。。下)測量時在約5cP與30cP之間(例如，10cP、20cP))提供對制劑的評估。評估可包括評估一或多個溶液參數(shù)。任選地,確定溶液參數(shù)是否符合預先選定的標準，例如確定預先選定的標準是否存在，或是否存在于預先選定的范圍內，藉此分析該過程。
[0045]在一實施方案中，對過程的評估包括測量抗VLA-4抗體制劑的穩(wěn)定性?？衫缤ㄟ^聚集體形成來測量抗體制劑的穩(wěn)定性，該聚集體形成例如通過尺寸排阻高壓液相層析(HPLC)，通過如本文中所述的顏色、透明度或粘度來檢定。若歷經(jīng)預設時間段且任選地在給定溫度下檢定參數(shù)變化小于約10%、5%、3%、2%、1%、0.5%、0.05%或0.005%或更小，則可確定制劑為穩(wěn)定的，且因此可接受進一步加工或分裝。在一實施方案中，高度濃縮液體抗VLA-4抗體制劑在室溫下(例如，在約18°C、19°C、20°C、21°C、22 V、23°C、24 V或25 V下)穩(wěn)定1、2、3、4或5天或更久。
[0046]在一實施方案中，該方法還包括比較所測定的值與參考值以藉此分析制造過程。
[0047]在一實施方案中，該方法還包括至少部分基于分析來維持制造過程。在一實施方案中，該方法還包括基于分析來改變制造過程。
[0048] 在另一實施方案中，該方法包括評估通過所選過程制得的高度濃縮VLA-4結合抗體的含水制劑的過程，例如制造過程，其包括基于本文所述的方法或分析作出關于過程的決定。在一實施方案中，該方法還包括至少部分基于方法或分析來維持或改變制造過程。因此，在另一實施方案中，進行評估的一方不實施本文所述的方法或分析而僅依賴于通過本文所述的方法或分析獲得的結果。[0049]在另一實施方案中，該方法包括比較監(jiān)測或控制批間偏差的方法中的兩種或多種制品或將制品與參考標準作比較。
[0050]在又一實施方案中，該方法可還包括作出決定，以至少部分基于該決定來例如分類、選擇、接受或丟棄、發(fā)行或保留、加工為藥品、載運、移動至不同位置、配制、貼標簽、包裝、投放市場、出售或供給銷售制品。
[0051]在另一方面中，本發(fā)明特征為儲存、分裝或使用本文所述的VLA-4結合抗體制劑例如那他珠單抗制劑的方法。該方法包括:
[0052]在第一低溫下將制劑儲存第一時期，該低溫例如低于18°C，例如高于冰點但等于或低于 15。。、10。。或 4。。；
[0053]在第二較高溫度下將制劑儲存第二時期，該較高溫度例如不冷藏或在室溫下，例如在18°C與25°C之間，其中該第二時期不多于24、48、72或96小時，且其中在一些實施方案中，在向患者施用制劑或丟棄制劑后第二時期即結束。
[0054]在另一方面中，本發(fā)明特征為儲存、分裝或使用本文所述的VLA-4結合抗體制劑例如那他珠單抗制劑的方法。該方法包括:
[0055]在第一低溫下 儲存制劑，該低溫例如低于18 °C，例如高于冰點但等于或低于15。。、10。?；?4。。；
[0056]向接受者，例如最終用戶，例如患者或護理人員提供制劑；
[0057]任選地，指導最終用戶可將制劑儲存在第二較高溫度下，該較高溫度例如不冷藏或在室溫下，例如在18°C與25°C之間；且
[0058]在接受者收到之后，在第二溫度下將制劑儲存至多24、48、72或96小時。
[0059]在另一方面中，本發(fā)明特征為指導實體(例如藥房、經(jīng)銷商、或最終用戶，例如患者或護理人員)如何儲存、分裝或使用本文所述的VLA-4結合抗體制劑例如那他珠單抗制劑的方法。該方法包括:
[0060]指導實體應將制劑儲存在第一低溫下，例如低于18°C，例如高于冰點但等于或低于15°C、10°C或4°C第一時期，其中該第一時期延長至將制劑提供給最終用戶或至在施用于患者之前24、48、72或96小時內；且
[0061]指導實體可將制劑儲存在第二較高溫度下，該較高溫度例如不冷藏或在室溫下，例如在18°C與25°C之間第二時期，其中該第二時期不超過24、48、72或96小時，藉此指導實體。
[0062]在另一方面中，本發(fā)明特征為儲存、分裝或使用本文所述的VLA-4結合抗體制劑例如那他珠單抗制劑的方法。該方法包括:
[0063]在第一低溫下儲存制劑，該低溫例如低于18°C，例如高于冰點但等于或低于15°C、10°C或 4°C ;且
[0064]在第二較高溫度下儲存制劑，該較高溫度例如不冷藏或在室溫下，例如在18°C與25°C之間不多于24、48、72或96小時。
[0065]在另一方面中，本發(fā)明特征為評估的方法，諸如，例如在質量控制或發(fā)行規(guī)格分析中評估高度濃縮VLA-4結合抗體的含水制劑的質量。該方法包括提供對抗體制劑的溶液參數(shù)的評估，所述參數(shù)諸如顏色(例如，無色至微黃，或無色至黃色)、透明度(例如，澄清至微乳光或澄清至乳光)或粘度(例如，當在環(huán)境溫度下(諸如在20°C-3(TC下，例如25°C)測量時在約5cP與30cP之間)。評估可包括對以上參數(shù)中一或多個的評估。該方法亦任選地包括確定溶液參數(shù)是否符合預先選定的標準，例如預先選定的標準是否存在，或是否存在于預先選定的范圍內。若所觀察到的溶液參數(shù)在預先選定的值范圍內，或符合預先選定的標準規(guī)范，則制品被選擇用來諸如包裝、使用、出售、投放市場、丟棄等。
[0066]在另一方面中，本發(fā)明特征為遵循管理要求，例如管理機構(例如FDA)的批準后要求的方法。該方法包括提供對抗體制劑的溶液參數(shù)的評估，諸如顏色(例如，無色至微黃，或無色至黃色)、透明度(例如，澄清至微乳光或澄清至乳光)或粘度(例如，當在環(huán)境溫度下(諸如在20°C -30°C下)測量時在約5cP與30cP之間)。批準后要求可包括對以上參數(shù)中一或多個的測量。該方法任選地亦包括確定所觀察到的溶液參數(shù)是否符合預先選定的標準或參數(shù)是否在預先選定的范圍內；任選地記下分析的值或結果，或與該機構溝通，例如通過將值或結果傳送至管理機構。
[0067]在另一方面中，本發(fā)明特征為制造一批VLA-4結合抗體的含水制劑的方法，該批次具有預先選定的特性，例如滿足發(fā)行規(guī)格、標簽要求或藥典(compendial)要求,例如本文所述的特性。該方法包括提供測試抗體制品；根據(jù)本文所述的方法來分析測試抗體制品；確定測試抗體制品是否滿足預先選定的標準，例如與參考值例如本文中所公開的一或多個參考值具有預先選定的關系，且選擇測試抗體制品以制造一批產(chǎn)品。
[0068]在另一方面中，本發(fā)明特征為多批VLA-4結合抗體的含水制劑，其中各批的一或多個溶液參數(shù)(例如，通過本文所述的方法測定的值或溶液參數(shù))偏離預先選定的所需參考值或標準(例如 本文所述的范圍或標準)的變化小于預先選定的范圍。在一些實施方案中，測定一或多批抗體制劑的一或多個參數(shù)且經(jīng)由該測定結果來選擇一批或多批。一些實施方案包括將測定結果與預先選定的值或標準(例如參考標準)作比較。其它實施方案包括例如基于值或參數(shù)的測定結果來調節(jié)待施用的批的劑量。
[0069]在另一方面中，本發(fā)明特征為以下各項中一或多個的方法:向報告-接收實體提供報告，評估VLA-4結合抗體的含水制劑樣本與參考標準(例如FDA要求)的同一性，自另一方尋求VLA-4結合抗體制品符足一些預先確定要求的指示，或對另一方遞交關于VLA-4結合抗體制品的信息。示例性接收實體或其它方包括政府，例如美國聯(lián)邦政府，例如政府機構，例如FDA。該方法包括以下步驟中的一或多個(或全部):在第一國家(例如US)制造和/或測試VLA-4結合抗體的含水制劑；將樣本的至少一個小份送到第一國家之外，例如將其送到美國之外，至第二國家；制備或接收包括關于VLA-4結合抗體的制品結構的數(shù)據(jù)的報告，例如與本文所述的結構和/或鏈相關的數(shù)據(jù)，例如通過本文所述方法中的一或多個產(chǎn)生的數(shù)據(jù)；且向報告接受者實體提供報告。
[0070]在一實施方案中，報告接收實體可確定數(shù)據(jù)是否符合預定要求或參考值，且任選地，例如VLA-4結合抗體的含水制劑的制造商、經(jīng)銷商或賣方是否收到來自報告接收實體的反應。在一實施方案中，收到報告接收者實體的批準后即將VLA-4結合抗體的制品加以選擇、包裝或投入市場中。
[0071]在另一方面中，本發(fā)明特征為評估VLA-4結合抗體的含水制劑的方法。該方法包括接收關于VLA-4結合抗體的存在或含量的數(shù)據(jù)，例如其中通過本文所述方法中的一或多個來準備數(shù)據(jù)；提供包括該數(shù)據(jù)且任選地包括VLA-4結合抗體的批次標識符的記錄；將該記錄遞交給決策者，例如政府機構，例如FDA ;任選地接收來自該決策者的通信；任選地基于來自決策者的通信決定是否發(fā)行或銷售該批VLA-4結合抗體。在一實施方案中，該方法還包括發(fā)行樣本。
[0072]示例性制劑包括以下:
[0073]1.125-175mg/mL,或 140-160mg/mL,例如 150mg/mL 的那他珠單抗；
[0074]1-lOOmM,5-20mM 或 5_50mM，例如 IOmM 的磷酸鈉緩沖液；
[0075]50-200mM、100-180mM 或 120_160mM，例如 140mM 的氯化鈉；
[0076]0.01-0.12%、0.02-0.08%或 0.02-0.06%，例如 0.04% (w/v)的聚山梨酯 80，及
[0077]pH 值為 6.0±1.0，例如 6.0±0.5 ;
[0078]2.125_175mg/mL 或 140-160mg/mL,例如 150mg/mL 的那他珠單抗；
[0079]IOmM磷酸鈉緩沖液；
[0080]140mM 氯化鈉；
[0081]0.04% (w/v)聚山梨酯 80 及
[0082]pH 值為 6.0 ±0.5;
[0083]3.150mg/mL 那他珠單抗；
[0084]1-lOOmM,5-20mM 或 5_50mM，例如 IOmM 的磷酸鈉緩沖液；
[0085]140mM 氯化鈉；
[0086]0.04% (w/v)聚山梨酯 80 ;及
[0087]pH 值為 6.0 ±0.5;
[0088]4.150mg/mL 那他珠單抗；
[0089]IOmM磷酸鈉緩沖液；
[0090]50-200mM、100-180mM 或 120_160mM，例如 140mM 的氯化鈉；
[0091]0.04% (w/v)聚山梨酯 80 及
[0092]pH 值為 6.0 ±0.5;
[0093]5.150mg/mL 那他珠單抗；
[0094]IOmM磷酸鈉緩沖液；
[0095]140mM 氯化鈉；
[0096]0.01-0.12%、0.02-0.08%或 0.02-0.06%，例如 0.04% (w/v)的聚山梨酯 80，及
[0097]pH 值為 6.0 ±0.5;
[0098]6.150mg/mL 那他珠單抗； [0099]IOmM磷酸鈉緩沖液；
[0100]140mM 氯化鈉；
[0101]0.04% (w/v)聚山梨酯 80 及
[0102]pH 值為 6.0 ± 1.0，例如 pH 值為 6.0 ± 0.5 ;
[0103]及
[0104]7.150mg/mL 那他珠單抗；
[0105]IOmM磷酸鈉緩沖液；
[0106]140mM 氯化鈉；
[0107]0.04% (w/v)聚山梨酯 80 ;及
[0108]pH 值為 6.0±0.5。[0109]在一些實施方案中，以上制劑1-7中任一個可基本上不含氨基酸，例如精氨酸或甘氨酸，或甘油。
[0110]本文中公開的方法及組合物可用于混合物中一或多種結構的存在、分布或量可具有或影響生物活性的地方。自結構活性遠景來看該方法亦適用于評估或確保生物等效性。
[0111]如本文中所用的“高度濃縮VLA-4結合抗體制劑”是指穩(wěn)定的含水制劑，其含有在約 120mg/mL 至約 190mg/mL 之間(例如，約 120mg/mL、130mg/mL、140mg/mL、150mg/mL、160mg/mL> 17Omg/mL> 180mg/mL> 190mg/mL)的 VLA-4 結合抗體,諸如那他珠單抗。
[0112]“適于SC或頂施用”指向諸如人類的受治療者施用組合物將具有治療作用，諸如以改善受治療者的一或多種癥狀。
[0113]術語“治療”是指以有效改善與病癥相關的病狀、癥狀或參數(shù)或預防病癥進展至統(tǒng)計上顯著的程度或至本領域技術人員可檢測的程度的量、方式和/或模式來施用療法。有效量、方式或模式可根據(jù)受治療者而變化且可適合于受治療者。
[0114]VLA-4結合抗體的“穩(wěn)定”制劑歷經(jīng)例如12個月、24個月、36個月或更長的延長時間段顯示極少或無聚集、斷裂、脫酰胺、氧化或生物活性變化中任一或多個的證據(jù)。舉例而言，在一實施方案中，少于10%的組合物發(fā)生聚集、斷裂或氧化。可通過已知方法，諸如目視檢驗顏色和/或透明度或通過UV 光散射或尺寸排阻層析法來評估聚集、沉淀和/或變性?？赏ㄟ^檢測且定量抗體的化學改變形式來評估蛋白質保持其生物活性的能力。尺寸修改(例如修剪)，其可例如使用尺寸排阻層析法、SDS-PAGE和/或基質輔助激光解吸電離/飛行時間質譜法(MALDI/TOF MS)，或經(jīng)蛋白質內切酶處理的抗體的肽圖分析來評估。其它類型的化學變化包括電荷變化(例如，由于脫酰胺而發(fā)生)，其可通過例如離子交換層析加以評估。如果在例如抗原結合檢定測定中，抗體在給定時刻的生物活性在制備藥物制劑時所顯示的生物活性的約10%以內，則抗體在藥物制劑中“保持其生物活性”。
[0115]“VLA-4結合抗體”指與VLA-4整聯(lián)蛋白結合，諸如與VLA-4整聯(lián)蛋白的α 4亞基結合，且至少部分抑制VLA-4的活性，尤其VLA-4整聯(lián)蛋白的結合活性或信號傳輸活性，例如轉導VLA-4介導的信號的能力的抗體。舉例而言，VLA-4結合抗體可抑制VLA-4與VLA-4的同源配體(例如細胞表面蛋白質，諸如VCAM-1)的結合，或與諸如纖連蛋白或骨橋蛋白的細胞外基質組分的結合。VLA-4結合抗體可與α 4亞基或β I亞基或兩者結合。在一實施方案中，抗體與α 4的BI表位結合。VLA-4結合抗體可以小于約10_6、10_7、10_8、10_9或10-10Μ的 Kd 與 VLA-4 結合。VLA-4 亦稱為 α 4/ β I 及 CD29/CD49b。
[0116]如本文中所用，術語“抗體”是指包括至少一個免疫球蛋白可變區(qū)，例如，提供免疫球蛋白可變域或免疫球蛋白可變域序列的氨基酸序列的蛋白質。舉例而言，抗體可包括重(H)鏈可變區(qū)(本文中縮寫為VH)及輕(L)鏈可變區(qū)(本文中縮寫為VL)。在另一實例中，抗體包括兩個重(H)鏈可變區(qū)及兩個輕(L)鏈可變區(qū)。術語“抗體”涵蓋抗體的抗原結合片段(例如，單鏈抗體、Fab片段、F (ab’) 2片段、Fd片段、Fv片段及dAb片段)以及完整抗體，例如IgA、IgG、IgE、IgD、IgM型(以及其亞型)完整免疫球蛋白。免疫球蛋白的輕鏈可為K或λ型。在一實施方案中，抗體經(jīng)糖基化?？贵w對于抗體依賴性細胞毒性和/或補體介導的細胞毒性而言可具有功能性，或對于這些活性中一或兩者而言可不具有功能性。
[0117]VH及VL區(qū)可進一步再分成稱為“互補決定區(qū)”(“⑶R”)的高變區(qū)，其間散置有稱為“框架區(qū)”(FR)的更保守區(qū)域。已精確界定FR及⑶R的范圍(參見Kabat，Ε.Α.，等人(1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest (免疫關注的蛋白質的序列)，第五版，U.S.Department of Health and Human Services, NIH 公布第 91-3242 號；及Chothia, C.等人(1987) T.Mol.Biol.196:901-917)。本文中使用 Kabat 定義。每個 VH 及VL通常由三個⑶R及四個FR組成，其自氨基末端至羧基末端按以下順序排列:FR1、⑶R1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。
[0118]“免疫球蛋白域”指免疫球蛋白分子的可變域或恒定域的域。免疫球蛋白域通常含有兩個由約七個β鏈形成的β片層，及保守的二硫鍵(例如參見A.F.Williams及A.N.Barclayl988Ann.Rev Immunol.6:381-405)。
[0119]如本文中所用，“免疫球蛋白可變域序列”指可形成免疫球蛋白可變域的結構的氨基酸序列。舉例而言，該序列可包括天然存在的可變域的所有或部分氨基酸序列。舉例而言，該序列可省略一個、兩個或兩個以上N端或C端氨基酸、內部氨基酸，可包括一或多個插入或額外末端氨基酸，或可包括其它變化。在一實施方案中，包括免疫球蛋白可變域序列的多肽可與另一免疫球蛋白可變域序列締合以形成靶標結合結構(或“抗原結合位點”)，例如與VLA-4相互作用的結構。
[0120]抗體的VH或VL鏈可還包括所有或部分重鏈或輕鏈恒定區(qū)以藉此分別形成重或輕免疫球蛋白鏈。在一實施方案中，抗體為兩個免疫球蛋白重鏈與兩個免疫球蛋白輕鏈的四聚體。免疫球蛋白重鏈與免疫球蛋白輕鏈可由二硫鍵連接。重鏈恒定區(qū)通常包括三個恒定域，CH1、CH2及CH3。輕鏈恒定 區(qū)通常包括CL域。重鏈及輕鏈的可變區(qū)含有與抗原相互作用的結合域。抗體的恒定區(qū)通常介導抗體與包括免疫系統(tǒng)的各種細胞(例如效應細胞)及經(jīng)典補體系統(tǒng)的第一成分(Clq)的宿主組織或因子的結合。
[0121]抗體的一或多個區(qū)可為人類的、有效人類的或人源化的。舉例而言，可變區(qū)中的一或多個可為人類的或有效人類的。舉例而言，CDR中的一或多個，例如HC⑶Rl、HC⑶R2、HC CDR3、LC CDRULC CDR2及LC CDR3，可為人類的(HC，重鏈；LC，輕鏈)。輕鏈CDR中的每一個可為人類的。HCCDR3可為人類的?？蚣軈^(qū)中的一或多個可為人類的，例如HC或LC的FR1、FR2、FR3及FR4。在一個實施方案中，所有框架區(qū)均為人類的，例如來源于人類體細胞，例如產(chǎn)生免疫球蛋白的造血細胞，或非造血細胞。在一個實施方案中，人類序列為例如由種系核酸編碼的種系序列。恒定區(qū)中的一或多個可為人類的、有效人類的或人源化的。在另一個實施方案中，框架區(qū)的至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%或98% (例如FR1、FR2及FR3總體，或FR1、FR2、FR3及FR4總體)或全部抗體可均為人類的、有效人類的或人源化的。舉例而言，F(xiàn)RU FR2及FR3總體可與人類種系區(qū)段所編碼的人類序列至少70%、75%、80%、85%、90%、92%、95%、98%或 99%—致。
[0122]“有效人類的”免疫球蛋白可變區(qū)為包括足夠數(shù)目的人類框架氨基酸位置以使得免疫球蛋白可變區(qū)在正常人類中不引發(fā)免疫原性反應的免疫球蛋白可變區(qū)?！坝行祟惖摹笨贵w為包括足夠數(shù)目的人類氨基酸位置以使得抗體在正常人類中不引發(fā)免疫原性反應的抗體。
[0123]“人源化的”免疫球蛋白可變區(qū)為經(jīng)修飾以使得在人類中該修飾形式比非修飾形式引發(fā)較少免疫反應，例如經(jīng)修飾以包括足夠數(shù)目的人類框架氨基酸位置以使得免疫球蛋白可變區(qū)在正常人類中不引發(fā)免疫原性反應的免疫球蛋白可變區(qū)。“人源化的”免疫球蛋白的描述包括例如美國專利第6，407，213號及美國專利第5，693，762號。在一些情況下，人源化的免疫球蛋白可在一或多個框架氨基酸位置包括非人類氨基酸。
[0124]所有或部分抗體可由免疫球蛋白基因或其區(qū)段編碼。示例性人類免疫球蛋白基因包括 K、λ、a (IgAl 及 IgA2)、Y (IgGl、IgG2、IgG3、IgG4)、δ、ε 及 μ 恒定區(qū)基因，以及無數(shù)免疫球蛋白可變區(qū)基因。全長免疫球蛋白“輕鏈”(約25Kd或214個氨基酸)由順2-末端的可變區(qū)基因(約110個氨基酸)及COOH-末端的K或λ恒定區(qū)基因編碼。全長免疫球蛋白“重鏈”(約50Kd或446個氨基酸)類似地由可變區(qū)基因(約116個氨基酸)及例如Y的其它上述恒定區(qū)基因中的一個(編碼約330個氨基酸)編碼。
[0125]術語全長抗體的“抗原結合片段”指保留與所關注靶標(例如VLA-4)特異性結合的能力的全長抗體的一或多個片段。涵蓋于術語全長抗體的“抗原結合片段”中的結合片段的實例包括⑴Fab片段，其為由VL、VH、CL及CHl域組成的單價片段；(ii)F(ab’)2片段，其為包括兩個由鉸鏈區(qū)的二硫化物橋連接的Fab片段的二價片段；(iii)由VH及CHl域組成的Fd片段；(iv)由抗體的單臂的VL及VH域組成的Fv片段；(V)由VH域組成的dAb片段(Ward等人，(1989) Nature341:544-546);及(vi)保留功能性的孤立互補決定區(qū)(CDR)。另外，盡管Fv片段的兩個域VL及VH是由獨立基因編碼，但其可使用重組法由合成連接體結合，該連接體使其能夠制成為其中VL及VH區(qū)配對以形成稱為單鏈Fv(ScFv)的單價分子的單一蛋白質鏈。例如參見Bird等人(1988) Science242:423-426 ;及Huston等人(1988)Proc.Natl.Acad.Sc1.USA85:5879-5883。
[0126]如本文中所用，“約”指在給定值的0.1%至5%以內(例如在給定值的上下5%、3%,2%U%>0.5%,0.1%之內)。當本文中提供量及其它指定值時，可容許偏差在藥學上可接受的標準以內。
[0127]本發(fā)明的實施方案提供某些優(yōu)勢。在一些情況下，難以制造適用于藥物組合物的高濃度蛋白質(例如抗體)制劑。本文提供制備這些制劑的方法。含有高濃度蛋白質，例如抗VLA-4抗體的藥物組合物可適用于歷經(jīng)較短時段的施用。高濃度制劑，例如抗VLA-4抗體的高濃度制劑亦可通過簡化方法(例如皮下)施用。
[0128]在附圖及以下描述中闡述本發(fā)明的一或多個實施方案的細節(jié)。本發(fā)明的其它特征、目標及優(yōu)勢將通過說明書及附圖和權利要求而明顯。
[0129]具體地，本發(fā)明涉及如下各項:
[0130] 1.一種含水藥物組合物，其包含濃度約120mg/mL至約190mg/mL的VLA-4結合抗體，并且還包含甘油及具有約pH5至約pH7的磷酸鹽緩沖液。
[0131 ] 2.一種含水藥物組合物，其包含濃度約120mg/mL至約190mg/mL的VLA-4結合抗體，并且還包含L-精氨酸鹽酸鹽及具有約pH5至約pH7的磷酸鹽緩沖液。
[0132]3.一種含水藥物組合物，其包含濃度約120mg/mL至約190mg/mL的VLA-4結合抗體，并且還包含氯化鈉、聚山梨酯80及具有約pH5至約pH7的磷酸鹽緩沖液。
[0133]4.如項1、2或3所述的組合物，其中所述VLA-4結合抗體為那他珠單抗。
[0134]5.如項1、2或3所述的組合物，其中所述VLA-4結合抗體的濃度范圍為約130mg/mL 至約 180mg/mL。
[0135]6.如項1、2或3所述的組合物，其中所述VLA-4結合抗體的濃度范圍為約140mg/mL 至約 160mg/mL。
[0136]7.如項1、2或3所述的組合物，其中所述VLA-4結合抗體的濃度為約150mg/mL。[0137]8.如項1、2或3所述的組合物，其中所述組合物的pH為約6±0.5。
[0138]9.如項1、2或3所述的組合物，其中所述磷酸鹽緩沖液為在約5mM與約30mM之間的磷酸鈉緩沖液。
[0139]10.如項1、2或3所述的組合物，其中所述磷酸鹽緩沖液為約IOmM的磷酸鈉緩沖液。
[0140]11.如項I所述的組合物，其中所述組合物基本不含氯化鈉。
[0141]12.如項2所述的組合物，其中所述組合物包含小于60mM的鈉含量。
[0142]13.如項I或2所述的組合物,其還包含表面活性劑。
[0143]14.如項13所述的組合物，其中所述表面活性劑選自由聚山梨酯80、單硬脂酸甘油酯、硬脂酸聚烴氧酯、聚桂醇及脫水山梨糖醇油酸酯組成的組。
[0144]15.如項13所述的組合物，其中所述表面活性劑為聚山梨酯80。
[0145]16.如項13所述的組合物,其中所述表面活性劑以約0.001%至約2.0% (w/v)的量存在。
[0146]17.如項13所述的組合物，其中所述表面活性劑以約0.04% (w/v)的量存在。
[0147]18.如項1、2或3所述的組合物，其中所述組合物適于皮下或肌肉內施用。
[0148]19.如項1、2或3所述的組合物，其中所述組合物在約2°C至約8°C的溫度下穩(wěn)定至少12個月。
[0149]20.如項3所述的組合物，其包含140mM氯化鈉。
[0150]21.如項3所述的組合物，其包含0.04%聚山梨酯80 (w/v)。
[0151]22.一種設計用于或適于皮下或肌肉內施用的遞送裝置，其中所述遞送裝置封裝有或含有單位劑量的項1、2或3所述的組合物。
[0152]23.如項22所述的遞送裝置，其中所述單位劑量向人類的施用將向人類遞送每千克體重約1.4mg/kg至約3.0mg/kg的VLA-4結合抗體或其片段。
[0153]24.如項22所述的遞送裝置，其中所述單位劑量為約0.25mL至1.5mL。
[0154]25.如項22所述的遞送裝置，其中所述單位劑量為約lmL。
[0155]26.如項22所述的遞送裝置，其中所述單位劑量為約120mg至約350mg。
[0156]27.如項22所述的遞送裝置，其中所述單位劑量為約150mg。
[0157]28.如項22所述的遞送裝置，其中所述單位劑量為約300mg。
[0158]29.如項22所述的遞送裝置，其中所述單位劑量被分成多份。
[0159]30.如項22所述的遞送裝置，其中所述單位劑量被分成兩個半份，每個半份含有約150mg VLA-4結合抗體。
[0160]31.一種指導需要VLA-4結合抗體療法的患者治療該患者的方法，所述方法包括(i)向該患者提供至少一單位劑量的項1、2或3所述的組合物；及(ii)指導該患者以皮下方式自我施用所述至少一單位劑量。
[0161]32.一種指導需要VLA-4結合抗體療法的患者治療該患者的方法，所述方法包括
(i)向該患者提供至少兩單位劑量的項1、2或3所述的組合物；及(ii)指導該患者以皮下一次一劑量的方式自我施用所述單位劑量。
[0162]33.如項31所述的方法，其中所述患者具有炎性病癥。
[0163]34.如項31所述的方法，其中所述患者具有選自由多發(fā)性硬化癥、哮喘、關節(jié)炎、糖尿病、纖維化及炎性腸病組成的組的病癥。
[0164]35.一種項1、2或3所述的組合物的單位劑量，其中所述單位劑量為約0.25mL至1.5mL0
[0165]36.如項35所述的單位劑量，其中所述單位劑量為約lmL。
[0166]37.一種項1、2或3所述的組合物的單位劑量，其中所述單位劑量向人類的施用將向人類遞送每千克體重約1.4mg至約3.0mg的VLA-4結合抗體或其片段。
[0167]38.一種治療患者的方法,其包括向所述患者施用項1、2或3所述的組合物。
[0168]39.如項38所述的方法，其中所述患者具有炎性病癥。
[0169]40.如項38所述的方法，其中所述患者具有選自由多發(fā)性硬化癥、哮喘、類風濕性關節(jié)炎、糖尿病或Crohn病組成的組的病癥。
[0170]41.如項38所述的方法，其中所述組合物按照方案施用。
[0171]42.如項38所述的方法，其還包括選擇適合以所述組合物治療的患者。
[0172]43.如項42所述的方法，其中所述患者具有多發(fā)性硬化癥，且適于治療的患者已顯示對多發(fā)性硬化癥的 在先替代治療的不充分反應。
[0173]44.如項38所述的方法,其還包括向所述患者施用第二治療劑,例如溶血栓劑、神經(jīng)保護劑、抗炎劑、類固醇、細胞因子或生長因子。
[0174]45.一種評估患者的方法，其包括(i)確定所述患者是否符合預先選定的標準，及
(ii)如果所述患者符合所述預先選定的標準，則向所述患者批準、提供、指定或施用項1、2或3所述的組合物。
[0175]46.如項45所述的方法，其中所述患者具有多發(fā)性硬化癥，且所述患者已對多發(fā)性硬化癥的在先替代治療具有不充分反應。
[0176]47.一種含水藥物組合物，其包含135mg/mL至165mg/mL那他珠單抗、5mM至15mM磷酸鈉緩沖液、130mM至150mM氯化鈉及0.02 %至0.08 % (w/v)聚山梨酯80，pH為6 ± 0.5。
[0177]48.一種含水藥物組合物，其包含135mg/mL至165mg/mL那他珠單抗、5mM至15mM磷酸鈉緩沖液、250mM至300mM甘油及0.02%至0.08% (w/v)聚山梨酯80，pH為6±0.5。
[0178]49.一種含水藥物組合物，其包含135mg/mL至165mg/mL那他珠單抗、5mM至15mM磷酸鈉緩沖液、150mM至170mM L-精氨酸鹽酸鹽及0.02%至0.08% (w/v)聚山梨酯80，pH為 6±0.5。
[0179]50.一種制備于磷酸鹽緩沖液中包含120mg/mL至190mg/mL VLA-4結合抗體及聚山梨酯的含水組合物的方法，其包括:
[0180](i)使所述抗體在細胞培養(yǎng)物中表達，
[0181](ii)使所述抗體經(jīng)歷至少一個層析純化步驟，
[0182](iii)使所述抗體經(jīng)歷磷酸鹽緩沖液中的至少兩個超濾/透析過濾步驟，
[0183](iv)使所述抗體經(jīng)歷磷酸鹽緩沖液中的至少一個超濾步驟，及
[0184](V)通過添加聚山梨酯及磷酸鹽緩沖液將所述抗體的濃度調節(jié)為120mg/mL至190mg/mLo
[0185]51.如項51所述的方法，其中所述VLA-4結合抗體為那他珠單抗。
[0186]52.如項51所述的方法，其中所述聚山梨酯為聚山梨酯80。
[0187]53.一種評估項1、2或3的組合物的質量的方法，其包括:評估所述組合物的溶液參數(shù)，確定所述溶液參數(shù)是否符合預先選定的標準，并且如果所述溶液參數(shù)符合所述預先選定的標準，則確定所述組合物的質量適于使用。
[0188]54.如項53所述的方法，其中所述溶液參數(shù)為顏色。
[0189]55.如項54所述的方法，其中所述溶液參數(shù)為透明度。
[0190]56.如項55所述的方法，其中所述溶液參數(shù)為粘度。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0191]圖1展示在各種制劑中濃度為150mg/mL的那他珠單抗在攪拌前及攪拌后的可溶性聚集體的水平。HCN= 20mM纟目氡酸、240mM甘氡酸、0.04% (w/v)聚山梨酯80，pH6。HOL=20mM 組氨酸、240mM 甘油、0.04% (w/v)聚山梨酯 80，pH6。PCN = 20mM 磷酸鹽、240mM 甘氨酸、0.02% (w/v)聚山梨酯 80，pH6。PST = 20mM 磷酸鹽、140mM NaCl.0.02% (w/v)聚山梨酯 80，pH6。
[0192]圖2展示如圖1所述在制劑中濃度為150mg/mL的那他珠單抗在攪拌前及攪拌后在溶液中在340nm下的UV吸光度。
[0193]圖3展示對于那他珠單抗(150mg/mL)而言聚集與HOL制劑中各種含量的聚山梨酯80之間的關系(HOL = 20mM組氨酸、240mM甘油，pH6 ;聚山梨酯80為實驗的變量)。
[0194]圖4展示對于儲存在 40°C下在如圖1中所述各種制劑中的那他珠單抗(150mg/mL)而言隨時間的聚集百分比。
[0195]圖5展示對于在2_8°C之間儲存于小瓶中、在如圖1中所述各種制劑中的那他珠單抗(150mg/mL)而言隨時間的聚集百分比。
[0196]圖6展示對于儲存在2_8°C之間及40°C下、在如圖1中所述的各種制劑中的那他珠單抗(150mg/mL)而言隨時間的甲硫氨酸氧化百分比。
[0197]圖7展示對于那他珠單抗(150mg/mL)而言歷經(jīng)6個月作為自由基凈化劑賦形劑函數(shù)的甲硫氨酸氧化百分比。
[0198]圖8展示對于在各種濃度下且在各種制劑中的那他珠單抗而言，相對于時間(8周)的斷裂速率。
[0199]發(fā)明詳述
[0200]高度濃縮VLA-4結合抗體的穩(wěn)定制劑適用于皮下(SC)、肌肉內(IM)或靜脈內(IV)施用。為本發(fā)明特征的制劑含有約120mg/mL至約190mg/mL的VLA-4結合抗體，諸如那他珠單抗。
[0201]藥物組合物
[0202]將本文所述的組合物配制為藥物組合物?？衫缫栽诩s120mg/mL與190mg/mL之間的濃度(例如，在約120mg/mL與約180mg/mL之間，在約140mg/mL與約160mg/mL之間，在約 135mg/mL 與約 165mg/mL 之間；例如，約 120mg/mL、130mg/mL、135mg/mL、140mg/mL、150mg/mL、160mg/mL> 165mg/mL> 170mg/mL> 180mg/mL> 190mg/mL)在緩沖溶液中提供 VLA-4結合抗體(例如那他珠單抗)。在一實施方案中，以大于150mg/mL且小于約190mg/mL的濃度在緩沖溶液中提供VLA-4結合抗體(例如那他珠單抗)。在另一實施方案中，以較高濃度(例如，170mg/mL至190mg/mL)制備制劑,且接著將其稀釋回所需濃度(例如，135mg/mL至165mg/mL)。舉例而言,可以例如175mg/mL、180mg/mL或185mg/mL的抗體濃度制備制劑,且接著將其稀釋回施用所需的濃度，例如140mg/mL、145mg/mL、150mg/mL> 155mg/mL或160mg/mL?？蓪⒔M合物儲存在2-8 °C下(例如，4 °C、5 °C、6 °C、7 °C )。
[0203]在一實施方案中，可將VLA-4結合抗體用諸如160mM L-精氨酸鹽酸鹽(±10% )、磷酸鹽緩沖液(例如，七水合磷酸氫二鈉及磷酸二氫鈉)及聚山梨酯80的賦形劑物質配制，其中總鈉含量不超過60mM。在另一實施方案中，可將VLA-4結合抗體用275mM甘油(±10% )、磷酸鹽緩沖液(例如，七水合磷酸氫二鈉及磷酸二氫鈉或其它磷酸鹽)及聚山梨酯80配制，且基本不含氯化鈉。在另一實施方案中，可將VLA-4結合抗體用140mM氯化鈉(±10% )、磷酸鹽緩沖液及聚山梨酯80配制。下文例如在實施例8、9、10、11及12中提供包括磷酸鹽緩沖液的示例性制劑。
[0204]在一實施方案中，可將VLA-4結合抗體用諸如240mM甘油(±10% )、組氨酸緩沖液、聚山梨酯80及任選地L-甲硫氨酸的賦形劑物質配制。下文例如在實施例13及14中提供包括組氨酸緩沖液的示例性制劑。
[0205]磷酸鹽緩沖液是本領域已知的且包括例如調節(jié)至適當pH值的磷酸氫二鈉(無水)、七水合磷酸氫二鈉、 二水合磷酸氫二鈉、無水磷酸二氫鈉、單水合磷酸二氫鈉、二水合磷酸二氫鈉、無水磷酸三鈉或十二水合磷酸三鈉的水溶液。磷酸鹽緩沖液亦包括例如調節(jié)至適當pH值的磷酸二氫鉀、無水磷酸氫二鉀或磷酸三鉀。
[0206]組氨酸緩沖液是本領域已知的且包括例如以鹽酸或氫氧化鈉或本領域已知的其它酸或堿調節(jié)至適當PH值的D-組氨酸、單水合一氯化D-組氨酸、DL-組氨酸、單水合一氯化DL-組氨酸、L-組氨酸或單水合一氯化L-組氨酸的水溶液。
[0207]藥物組合物通常包括藥學上可接受的載體。如本文中所用，“藥學上可接受的載體”包括任何及所有溶劑、分散介質、涂料、抗菌劑及抗真菌劑、等滲劑及吸收延遲劑，及生理上相容的類似藥劑。
[0208]“藥學上可接受的鹽”指保留抗體的所需生物活性且不賦予任何不希望的毒理作用的鹽(例如參見Berge，S.M.，等人(1977) J.Pharm.Sc1.66:1-19)。這些鹽的實例包括酸加成鹽及堿加成鹽。酸加成鹽包括衍生自諸如鹽酸、硝酸、磷酸、硫酸、氫溴酸、氫碘酸及類似酸的無毒無機酸，以及衍生自諸如脂族單羧酸及二羧酸、苯基取代烷酸、羥基烷酸、芳族酸、脂族及芳族磺酸、游離氨基酸及類似酸的無毒有機酸的鹽。堿加成鹽包括衍生自諸如鈉、鉀、鎂、鈣及類似金屬的堿土金屬，以及衍生自諸如N，N’ - 二芐基乙二胺、N-甲基葡萄胺、氯普魯卡因、膽堿、二乙醇胺、乙二胺、普魯卡因及類似有機胺的無毒有機胺的鹽。
[0209]通常將生理上相容的藥劑，諸如游離氨基酸、游離氨基酸的鹽酸鹽、鈉鹽或鉀鹽用作藥物制劑中的賦形劑以促進抗體穩(wěn)定性。本文中的制劑可包括添加劑，諸如甘油、甘露糖醇、山梨糖醇及其它多元醇，以及糖(例如蔗糖)以促進穩(wěn)定性。
[0210]為本文特征的制劑可包括藥學上可接受的賦形劑，諸如表面活性劑，例如聚山梨酯80、單硬脂酸甘油酯、硬脂酸聚烴氧酯(polyoxyl stearate)、聚桂醇(Iauromacrogol)或脫水山梨糖醇油酸酯(sorbitan oleate)。在一實施方案中，為本文特征的制劑包括約0.01% (w/v)至約0.1% (w/v)聚山梨酯80，例如約0.2%或0.04%聚山梨酯80。
[0211]含有高度濃縮VLA-4結合抗體的藥物組合物呈液體溶液(例如，可注射及可輸注溶液)的形式。這些組合物可通過胃腸外模式(例如，皮下、腹膜內或肌肉內注射)施用。如本文中所用的短語“胃腸外施用”及“胃腸外地施用”指通常通過注射的不同于腸內及局部施用的施用模式，且包括皮下或肌肉內施用以及靜脈內、囊內、眶內、心內、皮內、腹膜內、經(jīng)氣管、表皮下、囊下、蛛網(wǎng)膜下、脊柱內、硬膜外及胸骨內注射及輸注。在一實施方案中，皮下施用本文所述的制劑。
[0212]藥物組合物無菌且在制造及儲存條件下穩(wěn)定。亦可測試藥物組合物以確保其符合施用的管理及行業(yè)標準。
[0213]可將含有高度濃縮量的VLA-4結合抗體的藥物組合物配制為溶液、微乳液、分散液、脂質體或其它適于高抗體濃度的有序結構?？赏ㄟ^將所需量的本文所述的藥劑并入具有上文列舉的成份中的一個或組合的適當溶劑中，視需要接著過濾滅菌來制備無菌可注射溶液。一般通過將本文所述的藥劑并入含有基本分散介質及來自上文列舉的那些所需其它成份的無菌媒介物中來制備分散液。溶液的適當流動性可例如通過使用諸如卵磷脂的涂料、在分散液的情況下通過保持所需粒度及通過使用表面活性劑來保持?？赏ㄟ^使組合物包括延遲吸收的藥劑(例如，單硬脂酸鹽及明膠)來達成可注射組合物的延長吸收。
[0214]在一些實施方案中，表征描述制劑的參數(shù)，例如可出現(xiàn)于產(chǎn)品標簽上的參數(shù)。這些參數(shù)包括例如顏色(通常無色至微黃色，或無色至黃色)、透明度(通常澄清至微乳光，或澄清至乳光)及粘度(當在環(huán)境溫度(諸如在20°C至30°C下)下測量時，通常在約5cP與30cP之間)。這些參數(shù)可通過是本領域已知的方法測量。舉例而言，可使用市售乳光標準(例如可獲自 HunterLab Associates, Inc.(Reston, VA))來測量透明度。
[0215]在一些實施方案中，檢定抗體制劑的穩(wěn)定性。示例性方法包括例如聚集研究、氧化研究、斷裂研究、唾液酸化研究、等電點研究、半抗體研究、重鏈及輕鏈同位(parity)研究及分析二級結構(例如通過圓二色性)、熱變性(例如通過差示掃描熱量測定的圓二色性)、色氨酸環(huán)境(例如通過熒光)、IgG折疊(例如通過遠紫外線圓二色性)及芳族殘基環(huán)境(例如通過UV-Vis分光光度測定法)。
[0216]制造抗體制劑的方法
[0217]可如經(jīng)修改以適應高濃度抗體(例如，約75mg/mL至約190mg/mL、100mg/mL至約 180mg/mL、約 120mg/mL 至約 170mg/mL、135mg/mL 至約 165mg/mL 的濃度)的美國公開申請案2005/0053598中所述來制造含有VLA-4結合抗體制劑的制劑。過程可如本領域技術人員所已知加以改變，但一般將遵照諸如以下的程序。自含有制造所關注的抗體或蛋白質的細胞的工作細胞庫獲得安瓿。制備接種物。必要時以額外飼料培養(yǎng)或發(fā)酵接種物的細胞。通過離心和/或過濾來收集/澄清細胞。舉例而言，這可通過例如螺旋卷式過濾將細胞濃縮10倍來執(zhí)行。諸如經(jīng)由0.2μπι過濾器的中度過濾之后例如諸如通過蛋白A Sepharose Fast Howii進行親和層析,且接著反向洗脫。含抗體的組合物接著在低pH值下，諸如在PH3.6-3.7下接受處理?；旌衔锝又邮懿《具^濾，隨后進行濃縮/透析過濾步驟。通過例如陰離子交換層析法，諸如通過i)FAF.Sepharosc Fast.Fknvx來進一步純化組合物。此步 驟可進行多次。自此點，接著將組合物進一步濃縮且接著純化，例如通過凝膠過濾層析法，諸如經(jīng)由Sephacryl S300HR?系統(tǒng)。如果需要，則可進一步濃縮含抗體的組合物。通過添加緩沖液及聚山梨酯，且經(jīng)由超濾過程再濃縮抗體來制得最終制劑。所得抗體制劑可經(jīng)質量控制測試且發(fā)布質量保證(QA)?？筛鶕?jù)下文表1中所例示的任何方法來制造抗體制劑。舉例而言，含有諸如那他珠單抗的VLA-4結合抗體的制劑可通過以下過程來制造。如本領域已知，將諸如5，000至20，000升(例如，5，000 ；10, 000 ； 15, 000 ；20, 000升)的大批量細胞培養(yǎng)物接種、培養(yǎng)、進料、收集及澄清。例如通過層析、病毒滅活及病毒過濾來純化經(jīng)澄清的材料。超濾/透析過濾(UF/DF)經(jīng)澄清的材料得到磷酸鹽方法中間體?？蓪⒘姿猁}方法中間體儲存在2-8°C下例如用于未來加工，諸如通過進一步濃縮蛋白質的方法加工。為制造最終制劑，將聚山梨酯及緩沖液(如本文中所述)添加至磷酸鹽方法中間體中以達到最終所需抗體濃度。在一替代方案中，通過將磷酸鹽方法中間體反稀釋至緩沖液中達到最終所需濃度(例如，諸如20mg/mL的低濃度)來產(chǎn)生最終制劑。通常在最終稀釋步驟期間添加聚山梨酯。
[0218]在一實施方案中，如上所述在組氨酸制劑中制造VLA-4結合抗體制劑，但使磷酸鹽方法中間體經(jīng)歷至少一個第二 UF/DF過程，及任選地至少一個額外UF過程，至如本文中所述的組氨酸制劑緩沖液中達到最終所需濃度，諸如在約75mg/mL與190mg/mL之間,例如約 75mg/mL 至約 190mg/mL,例如 75mg/mL、100mg/mL、125mg/mL、135mg/mL、150mg/mL、165mg/mL、180mg/mL> 190mg/mL。在一替代方案中，將組氨酸緩沖液中的抗體制劑調節(jié)至大于所需濃度的最終濃度。接著通過反稀釋至組氨酸制劑緩沖液中達到所需蛋白質濃度來產(chǎn)生最終制劑。通常在最終稀釋步驟期間添加聚山梨酯。
[0219]在另一實施方案中，如上所述在磷酸鹽制劑中制造抗體制劑，除了使磷酸鹽方法中間體經(jīng)歷至少一個第二 UF/DF過程，及任選地至少一個額外UF過程，至如本文中所述的磷酸鹽制劑緩沖液中達到最終所需濃度，諸如在約75mg/mL與190mg/mL之間，例如約75mg/mL 至約 190mg/mL,例如 75mg/mL、100mg/mL、125mg/mL、135mg/mL、150mg/mL、165mg/mL、180mg/mL> 190mg/mL。在一替代方案中,將磷酸鹽緩沖液中的抗體制劑調節(jié)至大于所需濃度的最終濃度，且通過反稀釋至磷酸鹽緩沖液中達到所需濃度來產(chǎn)生最終制劑。通常在最終稀釋步驟期間添加聚山梨酯。
[0220]在另一實施方案中，如上所述在磷酸鹽制劑中制造VLA-4結合抗體制劑，但遵照用于磷酸鹽配制的商業(yè)UF/DF方法，且添加聚山梨酯以制造所需最終濃度的VLA-4結合抗體制劑，該所需最終濃度諸如在約75mg/mL與190mg/mL之間,例如約75mg/mL至約190mg/mL,例如 75mg/mL、100mg/mL、125mg/mL、135mg/mL、150mg/mL、165mg/mL、180mg/mL、190mg/mL。在一替代方案中，將磷酸鹽緩沖液中的抗體制劑調節(jié)至大于所需濃度的最終濃度，且接著通過反稀釋至磷酸鹽制劑緩沖液中達到所需蛋白質濃度來產(chǎn)生最終制劑。通常在最終稀釋過程期間添加聚山梨酯。
[0221] 表1.制造抗體制劑的方法
[0222]
【權利要求】
1.一種用于皮下或肌肉內遞送的含水藥物組合物，其包含濃度120mg/mL至190mg/mL的那他珠單抗，50mM至200mM氯化鈉、0.01 % w/v至0.12% w/v聚山梨酯80, ImM至IOOmM磷酸鈉緩沖液，PH為6± 1.0。
2.如權利要求1所述的組合物,其包含約IOmM的磷酸鈉緩沖液。
3.如權利要求1或2所述的組合物，其包含140mM氯化鈉。
4.如權利要求1-3之一所述的組合物，其包含約0.04% (w/v)的聚山梨酯80。
5.如權利要求1-3之一所述的組合物，其包含約0.02% (w/v)的聚山梨酯80。
6.如權利要求1-5之一所述的組合物，其中所述組合物的pH為約6±0.5。
7.穩(wěn)定的用于皮下或肌肉內遞送給患者的含水藥物組合物，包含約150mg/mL那他珠單抗，約IOmM磷酸鈉緩沖液,約140mM氯化鈉，以及約0.04% (w/v)聚山梨酯80, pH值為約 6.0±0.5
8.權利要求1-7之一的組合物，其中所述組合物在約2°C至約8°C的溫度下穩(wěn)定至少12個月。
9.權利要求1-7之一的組合物，其中所述組合物在約2°C至約8°C的溫度下穩(wěn)定至少24個月。
10.如權利要求1-7之一所述的組合物，其中所述組合物按照方案施用。
11.如權利要求1-7之一所述的組合物，其用于治療炎性病癥、免疫病癥、或自體免疫病癥。
12.如權利要求1-7之一所述的組合物，其用于治療多發(fā)性硬化癥、哮喘、類風濕性關節(jié)炎、糖尿病或Crohn病。
13.如權利要求1-7之一所述的組合物，其用于治療多發(fā)性硬化癥。
14.如權利要求1-7所述的組合物，其中所述組合物用于對選出的適合以所述組合物治療的患者給藥。
15.如權利要求14所述的組合物，其中所述適合治療的患者有經(jīng)證實的指示疾病發(fā)作的體征或癥狀。
16.如權利要求14所述的組合物，其中所述患者不存在進行性多病灶白質腦病(PML)的任何體征或癥狀，或不存在PML的任何診斷。
17.如權利要求14所述的組合物，其中所述患者具有多發(fā)性硬化癥，且已顯示對多發(fā)性硬化癥的在先替代治療的不充分反應。
18.如權利要求11所述的組合物，其用于與第二治療劑一起施用。
19.權利要求18的組合物，其中所述第二治療劑是溶血栓劑、神經(jīng)保護劑、抗炎劑、類固醇、細胞因子，或生長因子。
20.單位劑量的權利要求7所述的組合物，其中所述單位劑量為約0.25mL至1.5mL。
21.單位劑量的權利要求8所述的組合物，其中所述單位劑量是0.25-1.5ml。
22.單位劑量的權利要求11所述的組合物，其中所述單位劑量是0.25-1.5ml。
23.預填充注射器，已用包含權利要求7的組合物的溶液填充，填充量使得使用時有Iml溶液被注射給患者。
24.預填充注射器，已用包含權利要求8的組合物的溶液填充，填充量使得使用時有Iml溶液被注射給患者。
25.預填充注射器，已用包含權利要求11的組合物的溶液填充，填充量使得使用時有.1ml溶液被注射給患者。
【文檔編號】A61P29/00GK103977404SQ201410163087
【公開日】2014年8月13日 申請日期:2008年6月13日 優(yōu)先權日:2007年6月14日
【發(fā)明者】凱文.馬洛尼 申請人:比奧根艾迪克Ma公司