一種源于桔青霉的青霉烯醇b2的抗腫瘤新用途
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種源于桔青霉的生物堿類化合物青霉烯醇B2的抗腫瘤新用途。該桔青霉（Penicilliumcitrinum）IBPT-5已于2013年12月25日保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心，地址:武漢武漢大學(xué)，保藏編號是：CCTCCNO：M2013713。該化合物對多種腫瘤細(xì)胞具有較好的抗腫瘤活性。可作為制備細(xì)胞增殖抑制藥物或抗腫瘤藥物用于抗腫瘤的研究。腫瘤細(xì)胞包括：人結(jié)腸癌細(xì)胞SW620、人肝癌細(xì)胞Huh7、人胃癌細(xì)胞SGC-7901、人胃癌細(xì)胞BGC-823、人結(jié)腸癌細(xì)胞SW480、人食管鱗癌細(xì)胞KYSE450、人食管癌細(xì)胞EC9706、人高轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞95-D、人肝癌細(xì)胞PLC、人胃癌細(xì)胞HGC-27、人淋巴癌細(xì)胞RAJI。
【專利說明】一種源于桔青霉的青霉烯醇B2的抗腫瘤新用途
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種源于桔青霉的生物堿類化合物青霉烯醇B2的抗腫瘤新用途。
【背景技術(shù)】
[0002]生物堿是一類由生物次級代謝產(chǎn)生的含氮有機(jī)化合物，自然界中的生物堿種類較多，大多來源于植物，因此又有植物堿之稱。生物堿對人和動物有重要的生理作用，包括平喘鎮(zhèn)咳、降血糖、降血脂、抗菌、抗腫瘤、鎮(zhèn)痛等，其中以抗菌、抗腫瘤活性最為突出。天然結(jié)構(gòu)生物堿是創(chuàng)新藥物研究中發(fā)現(xiàn)先導(dǎo)化合物的重要來源，目前應(yīng)用于臨床的生物堿藥物已經(jīng)近百種。研究發(fā)現(xiàn)，一些海洋真菌能夠在次級代謝過程中產(chǎn)生結(jié)構(gòu)新穎、活性好的生物堿，具有很好的藥用和產(chǎn)業(yè)化前景。
[0003]本發(fā)明人研究得知，桔青霉ci trinum^) IBPT-5 (已于2013年12月25日保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心，地址:武漢武漢大學(xué)，保藏編號是=CCTCC NO:M 2013713)的發(fā)酵產(chǎn)物的粗提取物有很好的細(xì)胞增殖抑制活性，遂對其活性成分進(jìn)行研究。研究發(fā)現(xiàn)所示生物堿類化合物具有抗腫瘤活性，目前尚未見該化合物對人結(jié)腸癌細(xì)胞SW620、人肝癌細(xì)胞Huh7、人胃癌細(xì)胞SGC-7901、人胃癌細(xì)胞BGC-823、人結(jié)腸癌細(xì)胞SW480、人食管鱗癌細(xì)胞KYSE450、人食管癌細(xì)胞EC9706、人高轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞95-D、人肝癌細(xì)胞PLC、人胃癌細(xì)胞HGC-27、人淋巴癌細(xì)胞RAJI增殖抑制活性的報道，因此市場上也尚未見有與此相關(guān)的藥物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種源于桔青霉的生物堿類化合物青霉烯醇B2的抗腫瘤新用途。
[0005]本發(fā)明首先涉及到一株桔青霉iPeni ci Ili um ci trinum ) IBPT-5 ,該菌株已于2013年12月25日保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心，地址:武漢武漢大學(xué)，保藏編號是=CCTCCNO:M 2013713。
[0006]所述菌株的用途在于,將桔青霉ci trinum.)IBPT_5進(jìn)行發(fā)酵培養(yǎng)，發(fā)酵液提取物經(jīng)分離得到具有腫瘤細(xì)胞增殖抑制活性的化合物。
[0007]該化合物結(jié)構(gòu)式為:
CH3 O H3C
[0008]該化合物的制備方法，具體步驟如下:
(I)發(fā)酵生產(chǎn)
培養(yǎng)微生物的常規(guī)方法，取桔青霉Cl trinum) IBPT-5,該菌株已于2013年12月25日保藏在中國典型 培養(yǎng)物保藏中心，地址:武漢武漢大學(xué)，保藏編號是=CCTCCNO:M 2013713，按培養(yǎng)微生物的常規(guī)方法，接種到PDA固體斜面培養(yǎng)基上在28°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4天，然后接種到培養(yǎng)液中，28°C靜止培養(yǎng)30天后，獲得菌絲體和發(fā)酵液；所述培養(yǎng)液組成:每升水含甘露醇20.0g、酵母膏3.0 g、麥芽糖20.0 g、味精10.0 g、葡萄糖10.0 g、KH2PO4 0.5 g、MgSO4 0.3 g、NaCl 30.0 g ；
(2)浸膏的獲得
用紗布將菌絲體和發(fā)酵液分離，將發(fā)酵液用2倍體積的乙酸乙酯萃取兩次，萃取液減壓蒸餾至干，得到發(fā)酵液的乙酸乙酯浸膏；
(3)化合物的分離精制
乙酸乙酯浸膏通過100-200目硅膠拌樣后，以石油醚、二氯甲烷、甲醇為洗脫液用減壓硅膠色譜柱梯度洗脫，取二氯甲烷:甲醇v/V=100:1的洗脫物，進(jìn)一步以二氯甲烷、甲醇為洗脫液，通過加壓硅膠柱層析梯度洗脫，得到二氯甲烷:甲醇v/v=50:1的洗脫物，繼續(xù)以甲醇:水v/v=3:2為溶劑進(jìn)行反相硅膠柱層析除去雜質(zhì)，最后通過半制備液相色譜1010型ODS-AUOX 250 mm、5 μ m:分離流速為5 mL/min,流動相為80%甲醇含0.1% TFA,得到?Ε15.1 min的所述化合物。
[0009]本發(fā)明保護(hù)了所述的化合物在制備腫瘤細(xì)胞增殖抑制藥物中的用途，及該化合物在制備抗腫瘤藥物中的用途。腫瘤細(xì)胞包括:人結(jié)腸癌細(xì)胞SW620、人肝癌細(xì)胞Huh7、人胃癌細(xì)胞SGC-7901、人胃癌細(xì)胞BGC-823、人結(jié)腸癌細(xì)胞SW480、人食管鱗癌細(xì)胞KYSE450、人食管癌細(xì)胞EC9706、人高轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞95-D、人肝癌細(xì)胞PLC、人胃癌細(xì)胞HGC-27、人淋巴癌細(xì)胞RAJI。
[0010]本發(fā)明的顯著優(yōu)點:研究所示該生物堿化合物較為罕見，所述生物堿類化合物具有顯著的抗腫瘤活性，目前尚未見該化合物對人結(jié)腸癌細(xì)胞SW620、人肝癌細(xì)胞Huh7、人胃癌細(xì)胞SGC-7901、人胃癌細(xì)胞BGC-823、人結(jié)腸癌細(xì)胞SW480、人食管鱗癌細(xì)胞KYSE450、人食管癌細(xì)胞EC9706、人高轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞95-D、人肝癌細(xì)胞PLC、人胃癌細(xì)胞HGC-27、人淋巴癌細(xì)胞RAJI細(xì)胞增殖抑制活性的報道，``因此市場上也尚未見有與此相關(guān)的藥物。
【具體實施方式】
[0011]在如下的實施例中所指的化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu):
【權(quán)利要求】
1.一株桔青霉citrinum) IBPT-5，該菌株已于2013年12月25日保藏在中國典型培養(yǎng)物保藏中心，地址:武漢武漢大學(xué)，保藏編號是:CCTCC NO:M 2013713。
2.化合物H
3.權(quán)利要求2所述化合物的制備方法，其特征在于:所述制備方法的具體步驟如下: (O發(fā)酵生產(chǎn) 培養(yǎng)微生物的常規(guī)方法，取桔青霉iPenicillium ciiri/w?)IBPT_5接種到PDA固體斜面培養(yǎng)基上在28°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4天，然后接種到培養(yǎng)液中，28°C靜止培養(yǎng)30天后，獲得菌絲體和發(fā)酵液；所述培養(yǎng)液組成:每升水含甘露醇20.0g、酵母膏3.0 g、麥芽糖20.0 g、味精 10.0 g、葡萄糖 10.0 g、KH2PO4 0.5 g、MgSO4 0.3 g、NaCl 30.0 g ； (2)浸膏的獲得 用紗布將菌絲體和發(fā)酵液分離，將發(fā)酵液用2倍體積的乙酸乙酯萃取兩次，萃取液減壓蒸餾至干，得到發(fā)酵液的乙酸乙酯浸膏； (3)化合物的分離精制 乙酸乙酯浸膏通過100-200目硅膠拌樣后，以石油醚、二氯甲烷、甲醇為洗脫液用減壓硅膠色譜柱梯度洗脫，取二氯甲烷:甲醇v/V=100:1的洗脫物，進(jìn)一步以二氯甲烷、甲醇為洗脫液，通過加壓硅膠柱層析梯度洗脫，得到二氯甲烷:甲醇v/v=50:1的洗脫物，繼續(xù)以甲醇:水v/v=3:2為溶劑進(jìn)行反相硅膠柱層析除去雜質(zhì)，最后通過半制備液相色譜1010型ODS-AUOX 250 mm、5 μ m:分離流速為5 mL/min,流動相為80%甲醇含0.1% TFA,得到?Ε15.1 min的所述化合物。
4.權(quán)利要求2所述的化合物在制備腫瘤細(xì)胞增殖抑制藥物中的用途。
5.權(quán)利要求2所述的化合物在制備抗腫瘤藥物中的用途。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用途，其特征在于:所述的腫瘤細(xì)胞包括人結(jié)腸癌細(xì)胞SW620、人肝癌細(xì)胞Huh7、人胃癌細(xì)胞SGC-7901、人胃癌細(xì)胞BGC-823、人結(jié)腸癌細(xì)胞SW480、人食管鱗癌細(xì)胞KYSE450、人食管癌細(xì)胞EC9706、人高轉(zhuǎn)移肺癌細(xì)胞95-D、人肝癌細(xì)胞PLC、人胃癌細(xì)胞HGC-27、人淋巴癌細(xì)胞RAJI。
【文檔編號】A61K31/4015GK103865807SQ201410084653
【公開日】2014年6月18日 申請日期:2014年3月10日 優(yōu)先權(quán)日:2014年3月10日
【發(fā)明者】陳立, 周彤, 宮美維, 張其清 申請人:福州大學(xué)