一種注射型定向緩釋丹皮酚溫敏凝膠及制備方法
【專利摘要】一種注射型定向緩釋丹皮酚溫敏凝膠及制備方法，由丹皮酚溶于水基溶液中固化而成，所述水基溶液由殼聚糖、β-甘油磷酸鈉、鹽酸溶液、氫氧化鈉溶液和去離子水按照一定的比例和步驟制備而成。本發(fā)明通過將丹皮酚在40℃下快速溶于水基溶液，形成可注射的混合溶液，將該混合溶液注射入37℃的環(huán)境下，其會固化成凝膠，藥物在溶解狀態(tài)下被均勻分散于凝膠基體，可實(shí)現(xiàn)緩慢地釋放藥物，不僅有利于實(shí)現(xiàn)微創(chuàng)填充缺損組織，并定向緩釋丹皮酚藥物抗菌消炎鎮(zhèn)痛，使得藥效更加的持久。
【專利說明】一種注射型定向緩釋丹皮酚溫敏凝膠及制備方法【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及到一種丹皮酚類藥物及其制備方法，具體的說是一種注射型定向緩釋丹皮酚溫敏凝膠及制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]丹皮酚為白色或微黃色有光澤的結(jié)晶，熔點(diǎn)49° C-51。C，易溶于乙醇和甲醇中，稍溶于水，在熱水中溶解，不溶于冷水。主要從蘿蘑科植物徐長卿的干草根或全草或者從芍藥科植物牡丹的根皮或莖皮中提取而得。
[0003]丹皮酚具有祛風(fēng)鎮(zhèn)痛，解毒消腫，鎮(zhèn)靜中樞、抗炎抗過敏和調(diào)節(jié)免疫力等作用，可用于各種痛癥，也可用于瘙癢癥。丹皮酚的劑型有口服的丹皮酚片、軟膠囊、滴丸，外用的丹皮酚軟膏、帖膏、貼膜，注射的丹皮酚注射液等。其中丹皮酚注射劑是臨床主要?jiǎng)┬?。如上海第一生化藥業(yè)有限公司、寧波天真制藥有限公司、北京雙鶴藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)的丹皮酚注射液，主要成分為丹皮酚，可用于解熱鎮(zhèn)痛類/創(chuàng)傷性疼痛(手術(shù)-外傷-燒傷)，用于肌肉痛、關(guān)節(jié)痛、風(fēng)濕痛、神經(jīng)痛、腹痛等，也可用于瘙癢癥，肌內(nèi)注射，主要作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)，從而達(dá)到 明顯的鎮(zhèn)痛、鎮(zhèn)靜作用、抗菌消炎，能阻止炎癥細(xì)胞的浸潤，對大腸桿菌、枯草桿菌、金葡菌有明顯的抑制作用。
[0004]由于丹皮酚具有水溶性小的特點(diǎn)，在制備注射劑型時(shí)增加其溶解度是工藝關(guān)鍵。丹皮酚易溶于乙醇，因此丹皮酚注射劑的液相常為乙醇，同時(shí)輔以大量表面活性劑吐溫-80以達(dá)到增溶目的。但乙醇有刺激性，特別對中樞神經(jīng)系統(tǒng)的刺激性很強(qiáng)。而大量吐溫-80的使用可能使制劑在使用過程中出現(xiàn)一些副作用。后以注射用花生油為液相溶解丹皮酚，解決了需要大量吐溫-80以助溶的制劑問題，但需要耗費(fèi)大量的油，使用也不方便。
[0005]目前市場上的丹皮酚注射劑型都主要為液體，注射后隨著體液代謝于人體全身，不能保證患病部位長期而有效的藥物作用濃度。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]為解決現(xiàn)有技術(shù)中的丹皮酚注射劑不能保證病患部位長期有效的藥物作用濃度的問題，本發(fā)明提供了一種注射型定向緩釋丹皮酚溫敏凝膠及制備方法，將丹皮酚在40°C下快速溶于水基溶液，形成可注射的混合溶液，將該混合溶液注射入37°C的環(huán)境下，其會固化成凝膠，藥物在溶解狀態(tài)下被均勻分散于凝膠基體，可實(shí)現(xiàn)緩慢地釋放藥物，不僅有利于實(shí)現(xiàn)微創(chuàng)填充缺損組織，并定向緩釋丹皮酚藥物抗菌消炎鎮(zhèn)痛。
[0007]本發(fā)明為解決上述技術(shù)問題采用的技術(shù)方案為:一種注射型定向緩釋丹皮酚溫敏凝膠，由丹皮酚溶于水基溶液中固化而成，所述水基溶液由殼聚糖、β -甘油磷酸鈉、鹽酸溶液、氫氧化鈉溶液和去離子水制備而成，其中殼聚糖、β -甘油磷酸鈉、鹽酸溶液和去離子水的比例為 85~95mg:0.45~0.55ml:450~550mg:0.45~0.55ml。
[0008]所述丹皮酚和水基溶液的質(zhì)量比例為1:991:98，即丹皮酚在固化后的復(fù)合水凝膠中的質(zhì)量百分含量為1%~2%。[0009]所述鹽酸溶液和氫氧化鈉溶液的濃度為0.lmol/L。
[0010]上述注射型定向緩釋丹皮酚溫敏凝膠的制備方法，包括以下步驟:
1)按上述的比例稱取殼聚糖、β-甘油磷酸鈉、鹽酸溶液、氫氧化鈉溶液和去離子水，備
用；
2)將稱量好的殼聚糖溶解在鹽酸溶液中，攪拌Ih使殼聚糖完全溶解，靜置30min除去氣泡，備用；
3)將稱量好的甘油磷酸鈉和去離子水混合,放入超聲清洗機(jī)中震蕩5min，使β-甘油磷酸二鈉完全溶解，得到均一透明溶液，然后使用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)其PH值至7.2，備用；
4)將步驟3)制備的溶液逐滴滴加到步驟2)制備的溶液中，邊滴加邊攪拌，直至得到澄清溶液，將該澄清溶液放入40°C的水浴中攪拌加熱使其升溫至40°C，備用；
5)將丹皮酚粉末過100-300目篩后加入到步驟4)所配40°C溶液中，攪拌2_3min使丹皮酚充分溶解，然后注入到37°C的模具內(nèi)，冷卻后即固化為凝膠。
[0011]有益效果:本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點(diǎn):
1)本發(fā)明通過利用丹皮酚不溶于冷水，但是溶于熱水的特點(diǎn)，采用加熱到40°C的水基溶液為介質(zhì)，使丹皮酚溶解，而40°C提取丹皮酚的常用溫度，不會對丹皮酚的活性造成影響，改變了目前大部分 丹皮酚注射劑都采用乙醇或油作為溶解介質(zhì)的狀況；
2)加入丹皮酚到殼聚糖/β -甘油磷酸鈉溶液體系后，體系形成凝膠的時(shí)間縮短，由原來的40min左右縮短到20-10min，有利于防止藥物在固化前游走；
3)本發(fā)明中，丹皮酚水基溶液在注射到37°C，也就是人體體溫環(huán)境下會凝固為凝膠，由于丹皮酚溶解到了介質(zhì)中，因而可以均勻地被固化分散于凝膠基體內(nèi)，實(shí)現(xiàn)緩慢而穩(wěn)定地在注射部位釋放藥物，使得藥效更加的持久；而目前的丹皮酚注射劑在注射后不會固化于注射部位，快速地參與血液循環(huán)，而不能實(shí)現(xiàn)持續(xù)作用于注射部位。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0012]圖1為本發(fā)明藥物/水基溶液體積比與成膠時(shí)間關(guān)系圖；
圖2為本發(fā)明產(chǎn)品丹皮酚的緩釋曲線；
圖3為本發(fā)明產(chǎn)品24h對金黃色葡萄球菌的抑菌環(huán)照片。
【具體實(shí)施方式】
[0013]下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步的闡述，本發(fā)明各實(shí)施例中所用材料均為市售，所使用的鹽酸溶液為溶劑，而氫氧化鈉溶液作為調(diào)節(jié)pH值的試劑，因此,選用濃度均為 0.lmol/L。
[0014]實(shí)施例1
一種注射型定向緩釋丹皮酚溫敏凝膠，由丹皮酚溶于水基溶液中固化而成，所述水基溶液由殼聚糖、甘油磷酸鈉、鹽酸溶液、氫氧化鈉溶液和去離子水制備而成，其中殼聚糖、β -甘油磷酸鈉、鹽酸溶液和去離子水的比例為85mg:0.45ml:450mg:0.45ml ；
所述丹皮酚和水基溶液的比例為每99g水基溶液中加入Ig的丹皮酚，即丹皮酚在固化后的復(fù)合水凝膠中的質(zhì)量百分含量為1%。[0015]上述注射型定向緩釋丹皮酚溫敏凝膠的制備方法，包括以下步驟:
1)按上述的比例稱取殼聚糖、β-甘油磷酸鈉、鹽酸溶液、氫氧化鈉溶液和去離子水，備
用；
2)將稱量好的殼聚糖溶解在鹽酸溶液中，攪拌Ih使殼聚糖完全溶解，靜置30min除去氣泡，備用；
3)將稱量好的甘油磷酸鈉和去離子水混合,放入超聲清洗機(jī)中震蕩5min，使β-甘油磷酸二鈉完全溶解，得到均一透明溶液，然后使用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)其PH值至7.2，備用；
4)將步驟3)制備的溶液逐滴滴加到步驟2)制備的溶液中，邊滴加邊攪拌，直至得到澄清溶液，將該澄清溶液放入40°C的水浴中攪拌加熱使其升溫至40°C，備用；
5)將丹皮酚粉末過100-300目篩后加入到步驟4)所配40°C溶液中，攪拌2_3min使丹皮酚充分溶解，然后注入到37°C的模具內(nèi)，冷卻后即固化為凝膠。
[0016]所生產(chǎn)的產(chǎn)品各性能的檢測:
1、采用倒置模具，模具內(nèi)的物質(zhì)不流動的方法確定材料成膠時(shí)間。
[0017]2、成膠后的材料取出，采用轉(zhuǎn)籃法測定材料的藥物96h緩釋曲線: a按體積分?jǐn)?shù)乙醇30%+ 去離子水70%配制緩釋介質(zhì)溶液備用；
b按固液比為lg/50ml的比例，將固化后的載藥水凝膠材料浸泡入緩釋介質(zhì)中。為模擬人體內(nèi)環(huán)境，把樣品放入37°C恒溫水浴鍋中振蕩；
c不同時(shí)間間隔內(nèi)取出5ml浸泡溶出液，同時(shí)加入5ml新鮮介質(zhì)溶液；d將取出的浸泡溶出液按照文獻(xiàn)[中國藥房，2006，17(10):747-749]的方法，采用紫外風(fēng)光光度計(jì)檢測丹皮酚濃度，其中的丹皮酚溶解介質(zhì)均為30%乙醇加70%去離子水。
[0018]3、將材料制成直徑5mm、厚4mm的小圓片,采用貼片法測定材料對金色葡萄球菌的抑菌能力:
a試驗(yàn)菌接種:用無菌棉拭子蘸取濃度為5X105cfu/ml~5 X 106cfu/ml試驗(yàn)菌懸液，在營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基平板表面均勻涂抹3次，每涂抹I次，平板應(yīng)轉(zhuǎn)動60°，最后將棉拭子繞平板邊緣涂抹一周，蓋好平皿，置室溫干燥5min;
b試樣貼放:每個(gè)平板貼放4片試驗(yàn)樣片，各樣片中心之間相距25mm以上，與平板的周緣相距15mm以上，蓋好平皿，置37°C溫箱，培養(yǎng)24h觀察結(jié)果，用游標(biāo)卡尺測量抑菌環(huán)的直徑(包括貼片)并記錄，試驗(yàn)重復(fù)3次。
[0019]4、根據(jù)GBT 16886.5-2003采用浸提液法進(jìn)行細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn):
浸提介質(zhì)為以GM培養(yǎng)液，材料與浸提液比為1:200 (mg / mL)的質(zhì)量體積比，在37°C溫度下浸提24h。將上述懸濁液高速離心，上清液以0.22 um的濾紙過濾消毒，得到的浸提液，加入10% FBS作為初始浸提液。初始浸提液被GM培養(yǎng)液稀釋2倍后用于之后的細(xì)胞實(shí)驗(yàn)。選用細(xì)胞為hella細(xì)胞。取復(fù)蘇后的生長最為旺盛的第三代細(xì)胞hella細(xì)胞接種(密度為5 X 104個(gè)/ml )24孔培養(yǎng)板內(nèi)，24 h細(xì)胞貼壁后吸出原來的培養(yǎng)液。加入對應(yīng)稀釋數(shù)的浸提液200 uL代替。以GM培養(yǎng)液作為對照組。細(xì)胞培養(yǎng)I d、3 d和5 d后，各取一培養(yǎng)板加入MTT溶液(5mg/ml) 40 μ 1，37 °C下繼續(xù)培養(yǎng)4h，終止培養(yǎng)，小心吸去孔內(nèi)培養(yǎng)上清液，然后在每孔中加入420 μ I DMS0，振蕩lOmin，使結(jié)晶物充分溶解。吸取每孔中液體200 μ I到96孔平底板內(nèi)，然后選擇570nm波長，在酶聯(lián)免疫檢測儀上測定各孔吸光度值，記錄結(jié)果。做3個(gè)平行樣(P〈0.05)。
[0020]實(shí)驗(yàn)結(jié)果:不加入丹皮酚的凝膠成膠時(shí)間約為40min，而加入丹皮酚1%時(shí)，體系成膠時(shí)間縮短約20min(如附圖1所示)。在浸泡后5.5h，藥物緩釋濃度達(dá)到60ug/ml，并且能維持較高的藥物濃度(如附圖2所示)，24小時(shí)抑菌環(huán)達(dá)到約IOmm (如附圖3所示)，且細(xì)胞毒性為O級。
[0021]實(shí)施例2
一種注射型定向緩釋丹皮酚溫敏凝膠，由丹皮酚溶于水基溶液中固化而成，所述水基溶液由殼聚糖、甘油磷酸鈉、鹽酸溶液、氫氧化鈉溶液和去離子水制備而成，其中殼聚糖、β -甘油磷酸鈉、鹽酸溶液和去離子水的比例為90mg:0.5ml:500mg:0.5ml ；
所述丹皮酚和水基溶液的比例為每98.5g水基溶液中加入1.5g的丹皮酚，即丹皮酚在固化后的復(fù)合水凝膠中的質(zhì)量百分含量為1.5%。
[0022]上述注射型定向緩釋丹皮酚溫敏凝膠的制備方法，包括以下步驟:
1)按上述的比例稱取殼聚糖、β-甘油磷酸鈉、鹽酸溶液、氫氧化鈉溶液和去離子水，備
用；
2)將稱量好的殼聚糖溶解在鹽酸溶液中，攪拌Ih使殼聚糖完全溶解，靜置30min除去氣泡，備用；
3)將稱量好的甘油磷酸鈉和去離子水混合,放入超聲清洗機(jī)中震蕩5min，使β-甘油磷酸二鈉完全溶解，得到均一透明溶液，然后使用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)其PH值至7.2，備用；
4)將步驟3)制備的溶液逐滴滴加到步驟2)制備的溶液中，邊滴加邊攪拌，直至得到澄清溶液，將該澄清溶液放入40°C的水浴中攪拌加熱使其升溫至40°C，備用；
5)將丹皮酚粉末過100-300目篩后加入到步驟4)所配40°C溶液中，攪拌2_3min使丹皮酚充分溶解，然后注入到37°C的模具內(nèi)，冷卻后即固化為凝膠。
[0023]選取本實(shí)施例制備的產(chǎn)品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和方法與實(shí)施例1中相同，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
成膠時(shí)間約IOmin (如附圖1所示)，在浸泡后7.5h，藥物緩釋濃度達(dá)到102ug/ml，并且能維持較高的藥物濃度(如附圖2所示)，24小時(shí)抑菌環(huán)達(dá)到約13mm (如附圖3所示)，且細(xì)胞毒性為O級。
[0024]實(shí)施例3
一種注射型定向緩釋丹皮酚溫敏凝膠，由丹皮酚溶于水基溶液中固化而成，所述水基溶液由殼聚糖、甘油磷酸鈉、鹽酸溶液、氫氧化鈉溶液和去離子水制備而成，其中殼聚糖、β -甘油磷酸鈉、鹽酸溶液和去離子水的比例為95mg:0.55ml:550mg:0.55ml ；
所述丹皮酚和水基溶液的比例為每98g水基溶液中加入2g的丹皮酚，即丹皮酚在固化后的復(fù)合水凝膠中的質(zhì)量百分含量為2%。
[0025]上述注射型定向緩釋丹皮酚溫敏凝膠的制備方法，包括以下步驟:
1)按上述的比例稱取殼聚糖、β-甘油磷酸鈉、鹽酸溶液、氫氧化鈉溶液和去離子水，備
用；
2)將稱量好的殼聚糖溶解在鹽酸溶液中，攪拌Ih使殼聚糖完全溶解，靜置30min除去氣泡，備用；3)將稱量好的β-甘油磷酸鈉和去離子水混合,放入超聲清洗機(jī)中震蕩5min，使β -甘油磷酸二鈉完全溶解，得到均一透明溶液，然后使用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)其PH值至7.2，備用；
4)將步驟3)制備的溶液逐滴滴加到步驟2)制備的溶液中，邊滴加邊攪拌，直至得到澄清溶液，將該澄清溶液放入40°C的水浴中攪拌加熱使其升溫至40°C，備用；
5)將丹皮酚粉末過100-300目篩后加入到步驟4)所配40°C溶液中，攪拌2_3min使丹皮酚充分溶解，然后注入到37°C的模具內(nèi)，冷卻后即固化為凝膠。
[0026]選取本實(shí)施例制備的產(chǎn)品進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和方法與實(shí)施例1中相同，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
成膠時(shí)間約8min (如附圖1所示)；在浸泡后7.5h,藥物緩釋濃度達(dá)到180ug/ml,并且能維持較高的藥物濃度(如附圖2所示);24小時(shí)抑菌環(huán)達(dá)到約15mm (如附圖3所示)，且細(xì)胞毒性為O級。
【權(quán)利要求】
1.一種注射型定向緩釋丹皮酚溫敏凝膠，其特征在于:由丹皮酚溶于水基溶液中固化而成，所述水基溶液由殼聚糖、β-甘油磷酸鈉、鹽酸溶液、氫氧化鈉溶液和去離子水制備而成，其中殼聚糖、β -甘油磷酸鈉、鹽酸溶液和去離子水的比例為85、5mg:0.45、.55ml:450~550mg:0.45~0.55ml。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種注射型定向緩釋丹皮酚溫敏凝膠，其特征在于:所述丹皮酚和水基溶液的質(zhì)量比例為1:991:98，即丹皮酚在固化后的復(fù)合水凝膠中的質(zhì)量百分含量為1%~2%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種注射型定向緩釋丹皮酚溫敏凝膠，其特征在于:所述鹽酸溶液和氫氧化鈉溶液的濃度為0.lmol/Lo
4.根據(jù)權(quán)利要求1、2或3所述的一種注射型定向緩釋丹皮酚溫敏凝膠的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: 1)按權(quán)利要求1中的比例 稱取殼聚糖、β-甘油磷酸鈉、鹽酸溶液、氫氧化鈉溶液和去尚子水，備用； 2)將稱量好的殼聚糖溶解在鹽酸溶液中，攪拌Ih使殼聚糖完全溶解，靜置30min除去氣泡，備用； 3)將稱量好的甘油磷酸鈉和去離子水混合,放入超聲清洗機(jī)中震蕩5min，使β-甘油磷酸二鈉完全溶解，得到均一透明溶液，然后使用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)其PH值至7.2，備用； 4)將步驟3)制備的溶液逐滴滴加到步驟2)制備的溶液中，邊滴加邊攪拌，直至得到澄清溶液，將該澄清溶液放入40°C的水浴中攪拌加熱使其升溫至40°C，備用； 5)將丹皮酚粉末過100-300目篩后加入到步驟4)所配40°C溶液中，攪拌2_3min使丹皮酚充分溶解，然后注入到37°C的模具內(nèi)，冷卻后即固化為凝膠。
【文檔編號】A61K9/06GK103932976SQ201410071115
【公開日】2014年7月23日 申請日期:2014年2月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年2月28日
【發(fā)明者】李光大, 張建麗, 杜浩, 趙三團(tuán), 宋衛(wèi)東, 安君嶺, 宋宵薇, 張玲, 郭靜玉, 何華偉, 劉信平 申請人:河南科技大學(xué)