大興安嶺野生澤漆總黃酮的新型制備方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于天然有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種從大興安嶺野生澤漆里提取總黃酮的新方法，特別是涉及一種利用超高壓(離子液體作為溶劑)提取，聚酰胺藕聯(lián)大孔樹脂吸附，高速逆流色譜分離純化總黃酮的新方法。本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)：1、離子液體與超高壓結(jié)合，具有提取更快、更高效的優(yōu)勢。并且工藝簡便易行，有效成分提取充分，生物堿含量高。2、聚酰胺藕聯(lián)大孔樹脂吸附純化技術(shù)，能很好的富集總生物堿，進(jìn)一步純化有效成分。樹脂易處理、分離速度快、費(fèi)用低，可以工業(yè)化使用。3、高速逆流色譜技術(shù)具有操作靈活、高效、分離速度快、制備量大、費(fèi)用低等優(yōu)點(diǎn)，并且可以工業(yè)化使用。本發(fā)明利用上述技術(shù)所得總黃酮含量高，純度高達(dá)98.3％。
【專利說明】大興安嶺野生澤漆總黃酮的新型制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】:
[0001]本發(fā)明屬于天然有機(jī)化學(xué)領(lǐng)域，涉及一種從大興安嶺野生澤漆里提取總黃酮的新方法，特別是涉及一種利用超高壓(離子液體作為溶劑)提取，聚酰胺藕聯(lián)大孔樹脂吸附，高速逆流色譜分離純化總黃酮的新方法。
【背景技術(shù)】:
[0002]澤漆，別名五朵云、五風(fēng)草，一年生或二年生草本。高10~30cm，無毛或僅分枝略具疏毛，基部紫紅色，上部淡綠色。葉互生；倒卵形或匙形，長I~3cm，寬0.7~1cm，先端微凹，邊緣中部以上有細(xì)鋸齒，無柄。蒴果球形，直徑約3mm，3裂，光滑。種子褐色，卵形，長約2_，有明顯凸起網(wǎng)紋，具白色半圓形種阜。含有黃酮類化合物槲皮素_3，5- 二半乳糖甙，澤漆皂甙、澤漆醇。澤漆辛、苦、微寒，有毒；有利尿消腫、化痰散結(jié)、解毒殺蟲之功效。中醫(yī)及臨床常用其治療腹水、水腫、肺結(jié)核、痰多喘咳、癬瘡等。
[0003]國內(nèi)一般用有機(jī)溶劑提取法提取總黃酮，常用甲醇、乙醇為溶劑。近年來也有采用微波輔助離子液體法提取總黃酮，用大孔樹脂進(jìn)行純化的報道。傳統(tǒng)方法提取總黃酮需要幾小時至十幾小時，操作溫度高且得率低，能耗大。
[0004]本發(fā)明的不同之處在于主要采用超高壓技術(shù)(離子液體作為溶劑)提取，聚酰胺藕聯(lián)大孔樹脂吸附，再用高速逆流色譜分離純化。通過以上技術(shù)提取、純化的總黃酮具有較強(qiáng)的抗氧化能力， 產(chǎn)品不僅得率高，而且純度高，采用HPLC法進(jìn)行檢測，含量最高可達(dá)98.3%。

【發(fā)明內(nèi)容】
:
[0005]本發(fā)明優(yōu)點(diǎn):提取快捷、產(chǎn)品純度高，大大提高了提取速度，同時極大提高總黃酮有效成分含量，克服了常規(guī)提取純度低、得率低的缺點(diǎn)。
[0006]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是:
[0007]—種采用超高壓提取技術(shù)(離子液體作為溶劑)，聚酰胺藕聯(lián)大孔樹脂吸附，再用高速逆流色譜分離純化，得到高純度總黃酮的新方法，其步驟如下:
[0008](I)超高壓提取:澤漆全草切斷，以不同濃度離子液體溶液為溶劑，在一定料液t匕、適當(dāng)超高壓力下處理幾分鐘；
[0009](2)精濾處理:采用聚四氟乙烯膜，過濾精度0.1y m，在一定溫度和壓力下精濾處理；
[0010](3)聚酰胺樹脂吸附及洗脫:
[0011]采用一定目數(shù)的聚酰胺粉末，控制上樣液濃度，上樣液體積，室溫下以一定流速吸附飽和；解吸時先除雜，再用一定濃度的乙醇溶液解吸，控制流速，收集洗脫液，檢測總黃酮
含量;
[0012](4)大孔樹脂二次吸附及洗脫:
[0013]選用不同型號的大孔樹脂，控制上樣液質(zhì)量濃度，上樣速率；先用2BV去離子水沖洗樹脂，再用不同濃度的乙醇溶液，以一定流速洗脫，收集洗脫液，檢測總黃酮含量；
[0014](5)真空冷凍干燥:收集總黃酮溶液，在適當(dāng)溫度、干燥壓力下冷凍干燥；
[0015](6)分相:稱取總黃酮提取物，選擇HSCCC溶劑系統(tǒng)，按比例將各種溶劑加入分液漏斗中，震蕩使溶液充分混合，放置過夜。分相平衡后分出上相和下相；
[0016](7)HSCCC分離純化:以溶劑系統(tǒng)的上相為固定相，下相為流動相，調(diào)整轉(zhuǎn)速，以一定流速泵入流動相，分離總黃酮提取物；
[0017](8)檢測:采用高效液相色譜法，紫外檢測器在一定波長進(jìn)行檢測，澤漆總黃酮純度為95%以上。
【具體實(shí)施方式】:
[0018]實(shí)施案例1:
[0019]一種采用超高壓提取技術(shù)(離子液體作為溶劑)，聚酰胺藕聯(lián)大孔樹脂吸附，再用高速逆流色譜分離純化，得到高純度總黃酮的新方法，其步驟如下:
[0020](I)超高壓提取:1kg澤漆全草切斷，以50%濃度的1-辛基-3-甲基咪唑四氟硼酸鹽溶液為溶劑，料液比1:8，200MPA壓力下處理4min ；
[0021](2)精濾處理:收集提取液，采用聚四氟乙烯膜，過濾精度0.1 ii m，在60°C，0.2MPa壓力下精濾處理；
[0022](3)聚酰胺樹脂吸附及洗脫:
[0023]采用80目的聚酰胺粉末，上樣液濃度控制在0.5mg / mL,上樣液體積2BV，室溫下以2BV / h流速吸附飽和；解吸時先`用2BV水除雜，再用75%乙醇解吸，洗脫體積為4BV，流速2BV / h，收集洗脫液。經(jīng)測定，總黃酮純度為72.36% ；
[0024](4)大孔樹脂二次吸附及洗脫:
[0025]接著用DM130大孔樹脂二次吸附純化，上樣液質(zhì)量濃度為3mg / ml,上樣速率2BV / h，上樣體積4BV / h;洗脫時先用2BV去離子水沖洗樹脂，再用80%濃度的乙醇溶液，以IBV / h流速洗脫，洗脫體積為5BV ;收集洗脫液，經(jīng)測定，總黃酮純度為81.29% ；
[0026](5)真空冷凍干燥:收集總黃酮溶液，在預(yù)凍溫度_15°C，工作壓力20Pa，升華溫度55°C，解析溫度60°C下冷凍干燥；
[0027](6)分相:稱取總黃酮提取物300mg，采用乙酸乙酯-甲醇-水(4:1:3) HSCCC溶劑系統(tǒng)，按比例將各種溶劑加入分液漏斗中，震蕩使溶液充分混合，放置過夜。分相平衡后分出上相和下相；
[0028](7)HSCCC分離純化:以溶劑系統(tǒng)的上相為固定相，下相為流動相，調(diào)整轉(zhuǎn)速700r / min,以2.0mL / min流速泵入流動相,分離總黃酮提取物；
[0029](8)檢測:采用高效液相色譜法，紫外檢測器進(jìn)行檢測，總黃酮純度為97.7%。
[0030]實(shí)施案例2:
[0031]-種采用超高壓提取技術(shù)(離子液體作為溶劑)，聚酰胺藕聯(lián)大孔樹脂吸附，再用高速逆流色譜分離純化，得到高純度總黃酮的新方法，其步驟如下:
[0032](I)超高壓提取:2kg澤漆全草切斷，以60%濃度的1- 丁基-3-甲基咪唑溴鹽溶液為溶劑，料液比1:10，300MPA壓力下處理3min ；
[0033](2)精濾處理:收集提取液，采用聚四氟乙烯膜，過濾精度0.liim，在65°C，0.3MPa壓力下精濾處理；
[0034](3)聚酰胺樹脂吸附及洗脫:
[0035]采用100目的聚酰胺粉末，上樣液濃度控制在1.5mg / mL,上樣液體積3BV，室溫下以3BV / h流速吸附飽和；解吸時先用3BV水除雜，再用80%乙醇解吸，洗脫體積為5BV，流速3BV / h，收集洗脫液。經(jīng)測定，總黃酮純度為73.65% ；
[0036](4)大孔樹脂二次吸附及洗脫:
[0037]接著用D312大孔樹脂二次吸附純化，上樣液質(zhì)量濃度為4mg / ml，上樣速率3BV / h，上樣體積5BV / h;洗脫時先用3BV去離子水沖洗樹脂，再用90%濃度的乙醇溶液，以2BV / h流速洗脫，洗脫體積為6BV，收集洗脫液，經(jīng)測定，總黃酮純度為80.17%，；
[0038](5)真空冷凍干燥:收集總黃酮溶液，在預(yù)凍溫度_20°C，工作壓力25Pa，升華溫度50°C，解析溫度65°C下冷凍干燥；
[0039](6)分相:稱取總黃酮提取物200mg，采用正己烷-醋酸乙酯-乙醇-水(5:3:2:
4)HSCCC溶劑系統(tǒng)，按比例將各種溶劑加入分液漏斗中，震蕩使溶液充分混合，放置過夜。分相平衡后分出上相和下相；
[0040](7)HSCCC分離純化:以溶劑系統(tǒng)的上相為固定相，下相為流動相，調(diào)整轉(zhuǎn)速800r / min,以3.0mL / min流速泵入流動相,分離總黃酮提取物；
[0041](8)檢測:采用 高效液相色譜法，紫外檢測器進(jìn)行檢測，總黃酮純度為97.1%。
[0042]實(shí)施案例3:
[0043]一種采用超高壓提取技術(shù)(離子液體作為溶劑)，聚酰胺藕聯(lián)大孔樹脂吸附，再用高速逆流色譜分離純化，得到高純度總黃酮的新方法，其步驟如下:
[0044](I)超高壓提取:5kg澤漆全草切斷，以70%濃度的1-羥乙基-3-甲基六氟磷酸鹽溶液為溶劑，料液比1:12，400MPA壓力下處理2min ；
[0045](2)精濾處理:收集提取液，采用聚四氟乙烯膜，過濾精度0.1 ii m，在60°C，0.4MPa壓力下精濾處理；
[0046](3)聚酰胺樹脂吸附及洗脫:
[0047]采用200目的聚酰胺粉末，上樣液濃度控制在1.0mg / mL,上樣液體積2BV，室溫下以4BV / h流速吸附飽和；解吸時先用4BV水除雜，再用85%乙醇解吸，洗脫體積為6BV，流速4BV / h，收集洗脫液。經(jīng)測定，總黃酮純度為74.4% ；
[0048](4)大孔樹脂二次吸附及洗脫:
[0049]接著用DlOl大孔樹脂二次吸附純化，上樣液質(zhì)量濃度為4.5mg / ml，上樣速率4BV / h ;上樣體積6BV / h ;洗脫時先用2BV去離子水沖洗樹脂，再用85%濃度的乙醇溶液，以3BV / h流速洗脫，洗脫體積7BV,收集洗脫液，經(jīng)測定，總黃酮純度為82.93%,；
[0050](5)真空冷凍干燥:收集總黃酮溶液，在預(yù)凍溫度_25°C，工作壓力30Pa，升華溫度50°C，解析溫度60°C下冷凍干燥；
[0051](6)分相:稱取總黃酮提取物200mg，采用氯仿-甲醇-丁醇-水(4:3:2: I) HSCCC溶劑系統(tǒng)，按比例將各種溶劑加入分液漏斗中，震蕩使溶液充分混合，放置過夜。分相平衡后分出上相和下相；
[0052](7)HSCCC分離純化:以溶劑系統(tǒng)的上相為固定相，下相為流動相，調(diào)整轉(zhuǎn)速850r / min,以2.0mL / min流速泵入流動相,分離總黃酮提取物；[0053] (8)檢測:采用高效液相色譜法，紫外檢測器進(jìn)行檢測，總黃酮純度為98.3%。
【權(quán)利要求】
1.一種采用超高壓提取技術(shù)(離子液體作為溶劑)，聚酰胺藕聯(lián)大孔樹脂吸附，再用高速逆流色譜分離純化，得到高純度總黃酮的新方法，其步驟如下: (1)超高壓提取:澤漆全草切斷，以不同濃度離子液體溶液為溶劑，在一定料液比、適當(dāng)超高壓力下處理幾分鐘； (2)精濾處理:采用聚四氟乙烯膜，過濾精度0.1y m，在一定溫度和壓力下精濾處理； (3)聚酰胺樹脂吸附及洗脫: 采用一定目數(shù)的聚酰胺粉末，控制上樣液濃度，上樣液體積，室溫下以一定流速吸附飽和；解吸時先除雜，再用一定濃度的乙醇溶液解吸，控制流速，收集洗脫液，檢測總黃酮含量; (4)大孔樹脂二次吸附及洗脫: 選用不同型號的大孔樹脂，控制上樣液質(zhì)量濃度，上樣速率；先用2BV去離子水沖洗樹月旨，再用不同濃度的乙醇溶液，以一定流速洗脫，收集洗脫液，檢測總黃酮含量； (5)真空冷凍干燥:收集總黃酮溶液，在適當(dāng)溫度、干燥壓力下冷凍干燥；` (6)分相:稱取總黃酮提取物，選擇HSCCC溶劑系統(tǒng)，按比例將各種溶劑加入分液漏斗中，震蕩使溶液充分混合，放置過夜。分相平衡后分出上相和下相； (7)HSCCC分離純化:以溶劑系統(tǒng)的上相為固定相，下相為流動相，調(diào)整轉(zhuǎn)速，以一定流速泵入流動相，分離總黃酮提取物； (8)檢測:采用高效液相色譜法，紫外檢測器在一定波長進(jìn)行檢測，澤漆總黃酮純度為95%以上。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的采用超高壓提取技術(shù)(離子液體作為溶劑)，聚酰胺藕聯(lián)大孔樹脂吸附，再用高速逆流色譜分離純化，得到高純度總黃酮的新方法，其特征是:在所述的步驟(1)中，離子液體為1-辛基-3-甲基咪唑四氟硼酸鹽、1-丁基-3-甲基咪唑溴鹽、1-羥乙基-3-甲基六氟磷酸鹽中的任意一種，體積濃度為50-70%，料液比1:8-12，超高壓力為200-400MPA，處理時間2-4min。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的超高壓提取技術(shù)(離子液體作為溶劑)，聚酰胺藕聯(lián)大孔樹脂吸附，再用高速逆流色譜分離純化，得到高純度總黃酮的新方法，其特征是:在所述的步驟(3)中，聚酰胺樹脂為80-200目，上樣液濃度控制在0.5-1.5mg / mL，上樣液體積2-3BV，室溫下以2-4BV / h流速吸附飽和；解析時除雜水2-4BV，乙醇解析濃度為75-85%，洗脫體積 4-6BV，流速 2-4BV / h。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的超高壓提取技術(shù)(離子液體作為溶劑)，聚酰胺藕聯(lián)大孔樹脂吸附，再用高速逆流色譜分離純化，得到高純度總黃酮的新方法，其特征是:在所述的步驟(4)中，大孔樹脂為D312、DM130、D101中的任意一種;上樣液質(zhì)量濃度為3_4.5mg / ml,上樣速率2-4BV / h，上樣體積4-6BV / h ;洗脫時乙醇溶液濃度為80-90 %，洗脫流速為1-3BV / h，洗脫體積為5-7BV。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的超高壓提取技術(shù)(離子液體作為溶劑)，聚酰胺藕聯(lián)大孔樹脂吸附，再用高速逆流色譜分離純化，得到高純度總黃酮的新方法，其特征是:在所述的步驟(5)中，總黃酮溶液預(yù)凍溫度為_15°C至_25°C，工作壓力20-30Pa，升華溫度50-55°C，解析溫度60-65 °C。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的超高壓提取技術(shù)(離子液體作為溶劑)，聚酰胺藕聯(lián)大孔樹脂吸附，再用高速逆流色譜分離純化，得到高純度總黃酮的新方法，其特征是:在所述的步驟(6)中，離子液體為乙酸乙酯-甲醇-水(4:1:3)、正己烷-醋酸乙酯-乙醇-水(5:3:2:4)、氯仿-甲醇-丁醇-水(4:3:2:1)中的任意一種。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的超高壓提取技術(shù)(離子液體作為溶劑)，聚酰胺藕聯(lián)大孔樹脂吸附，再用高速逆流色譜分離純化，得到高純度總黃酮的新方法，其特征是:在所述的步驟(7)中，轉(zhuǎn)速 700-850r / min，流速為 2.0-3.0mL / min。
【文檔編號】A61K36/47GK103623034SQ201310631036
【公開日】2014年3月12日 申請日期:2013年11月27日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月27日
【發(fā)明者】張亞紅, 曲曉穎, 李為海 申請人:大興安嶺嘉迪歐營養(yǎng)原料有限公司