一種組合物及其制備和在制備抗抑郁癥藥物中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】一種組合物，由(2Z,8Z,10E)-2,8,10-十五烷三烯-4,6-二炔-1-醇和(2Z,8E,10E)-2,8,10-十五烷三烯-4,6-二炔-1-醇按1:1～4的比例組成，或由(2Z,8Z,10E)-2,8,10-十七烷三烯-4,6-二炔-1-醇和(2Z,8E,10E)-2,8,10-十七烷三烯-4,6-二炔-1-醇按1:1～4的比例組成。所述組合物是從中藥柴胡中提取分離得到。采用體外單胺類神經(jīng)遞質(zhì)再攝取抑制實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示上述組合物對5-羥色胺（5-HT）、去甲腎上腺素（NA）和多巴胺（DA）的再攝取具有三重抑制作用，抑制率均高于逍遙散石油醚有效部位和柴胡石油醚部位，且抑制效果高于陽性對照藥物氟西汀、地昔帕明和6-羥多巴。兩種組合物可在制備預(yù)防和治療抑郁癥藥物中應(yīng)用。
【專利說明】一種組合物及其制備和在制備抗抑郁癥藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及多炔類化合物的組合物，具體屬于一種組合物及其制備方法，以及在制備抗抑郁癥藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】 [0002]抑郁癥是一種常見的精神疾病，具有發(fā)病率高、復(fù)發(fā)率高和高致殘的特點(diǎn)。據(jù)WHO預(yù)測到2020年，單項(xiàng)抑郁癥將成為第二大致殘性疾病，其危害已越來越引起醫(yī)藥衛(wèi)生界的重視。
[0003]現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明，抑郁癥發(fā)病機(jī)理復(fù)雜，誘發(fā)原因較多，臨床癥候多樣。對于發(fā)病機(jī)制經(jīng)近半個世紀(jì)的研究，最為人們所認(rèn)同的是，抑郁癥的單胺假說即抑郁癥是由于人腦單胺類神經(jīng)遞質(zhì)，5-HT.NA和/或DA缺損所致。現(xiàn)在臨床上所用的主要的抗抑郁藥物是通過抑制突觸間隙5-HT和NA的再攝取增加突觸間隙中單胺遞質(zhì)濃度。但合成抗抑郁藥物存在抗抑郁譜窄，起效時(shí)間慢，以及毒副作用大等缺點(diǎn)。因此，國內(nèi)外開始注意從傳統(tǒng)藥物和天然藥物中研制與開發(fā)具有抗抑郁活性的藥物。
[0004]逍遙散為經(jīng)典名方，至今已有近千年的應(yīng)用歷史。現(xiàn)代臨床與藥理研究已證實(shí)其具有明顯的抗抑郁作用，且未發(fā)現(xiàn)毒副作用。本課題組前期對逍遙散各部位進(jìn)行了體外和體內(nèi)藥理活性研究，篩選出了石油醚活性部位，發(fā)現(xiàn)其抗抑郁療效方面明顯優(yōu)于原復(fù)方，甚至超過了西藥的活性，已申請專利(ZL201010110283.7)，但其仍存在物質(zhì)基礎(chǔ)不明確等問題。本研究基于對藥效物質(zhì)基礎(chǔ)的研究，以血清藥物化學(xué)為指導(dǎo)，對君藥柴胡的化學(xué)成分進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)其中多炔類化合物的含量較高，且能夠入血，可能為抗抑郁的有效成分，因此對其進(jìn)行深入的研究。
[0005]目前，從其他屬植物中分離得到的多炔類成分曾被研究者報(bào)道具有顯著的活性作用。例如人參炔三醇具有的抗腫瘤細(xì)胞的作用；從蒼術(shù)中已經(jīng)分離得到20余種聚乙炔類化合物，具有防止胃損傷、抗炎、利膽及黃嘌呤氧化酶阻礙等作用。近年來報(bào)道，已從柴胡屬的植物中提取分離得到17種多炔類的化合物，其中柴胡毒素和乙酰柴胡毒素具有顯著的神經(jīng)毒性和細(xì)胞毒性作用，其它化合物未見活性或毒性的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明的目的是提供一種組合物及其制備方法，以及該組合物在制備抗抑郁癥藥物中的應(yīng)用。
[0007]本發(fā)明發(fā)明人在長期從事逍遙散研究和開發(fā)的基礎(chǔ)上，采用傳統(tǒng)的提取分離方法，同時(shí)采用血清藥物化學(xué)與高效液相色譜跟蹤法，從君藥柴胡藥材中提取分離得到4種多炔類化合物(命名為RB-1、RB-2、RB-3、RB-4)。這四個化合物的在自然條件下濃縮、放置均不穩(wěn)定，12h內(nèi)會發(fā)生互變現(xiàn)象，最終只能得到分別含RB-1和RB-2的組合物1、RB-3和RB-4的組合物2。這兩個組合物具有抗抑郁活性。
[0008]一種組合物，即組合物1，由(2Z，8Z, 10E) -2, 8，10-十五烷三烯_4，6_ 二炔-1-醇和(2Z, 8E, 10E) -2, 8，IO-十五烷三烯_4，6- 二炔-1-醇組成。
[0009]一種組合物，即組合物2，由(2Z，8Z, 10E) -2, 8，10-十七烷三烯_4，6_ 二炔-1-醇和(2Z, 8E, 10E) -2, 8，10-十七烷三烯_4，6- 二炔-1-醇組成。
[0010]組合物的制備方法，步驟包括:
[0011](I)柴胡石油醚部位制備:將柴胡用95%乙醇浸泡，回流提取，提取液濃縮得浸膏，浸膏用石油醚萃取，得到柴胡石油醚部位；
[0012](2)柴胡石油醚部位的粗分離:將柴胡石油醚部位，加入到硅膠層析柱，依次用石油醚-乙酸乙酯洗脫系統(tǒng)洗脫，收集石油醚和乙酸乙酯比例為100:8至100:20的部分，得到含目標(biāo)化合物的粗品；
[0013](3)純化:將粗品再經(jīng)硅膠層析柱和Sephadex LH-20凝膠柱除雜,溶解于9:1的甲醇-氯仿溶劑中，濾膜過濾，備用；
[0014](4)制備:色譜條件:色譜柱 Agela (Venusil MP C18,10X 100mm, 1.d.10 μ m),流動相:甲醇:水=85:15，檢測波長:315nm，柱溫:25°C，流速:4.0ml/min，進(jìn)樣量:200 μ I ；得到4個化合物的色譜峰，保留時(shí)間分別是8.0-12.0、12.1-16.5、17.0-21.0,22.0-30.0分鐘，收集保留時(shí)間為8.0-16.5分鐘的色譜峰濃縮至干得到組合物1，收集保留時(shí)間為17.0-30.0分鐘的色譜峰濃縮至干得到組合物2。
[0015]本發(fā)明所述的化合物及其組合物是從中藥柴胡中提取分離得到。實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn):當(dāng)RBl和RB2、RB3和RB4分別以1:1~4的比例組成組合物的狀態(tài)存在時(shí)較穩(wěn)定。
[0016]采用NMR (1H-NMR, 13C-NMR, 1H-1H COSY)、UV 和 MS 等方法，對組合物 I 和組合物2中化合物的結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定，組 合物I由(2Z，8Z，10E)-2,8, 10-十五烷三烯-4，6-二炔-1-醇和(2Z，8E, 10E) -2，8，10-十五烷三烯-4，6- 二炔-1-醇組成；組合物2由(2Z, 8Z, 10E)-2, 8，10-十七烷三烯 _4，6- 二炔-1-醇和(2Z, 8E, 10E)-2, 8，10-十七烷三烯-4，6-二炔-1-醇組成。
[0017]經(jīng)體外試驗(yàn)證明，組合物I和組合物2能有效抑制5_HT、NA和DA的再攝取行為，其抑制率高于逍遙散和柴胡的石油醚部位，甚至高于陽性對照藥物氟西汀、地昔帕明和6-羥多巴。組合物I和組合物2均可以在制備預(yù)防和治療抑郁癥的藥物中應(yīng)用。
[0018]說明書附圖
[0019]圖1組合物I的1H-1HCOSY譜圖
[0020]圖2組合物2的1H-1HCOSY譜圖
【具體實(shí)施方式】
[0021]實(shí)施例1:組合物的制備
[0022]( I)柴胡石油醚部位制備
[0023]柴胡藥材5kg，用95%乙醇浸泡12h，回流提取三次，提取液濃縮得浸膏，浸膏按照逍遙散復(fù)方石油醚部位的制備方法，使用石油醚萃取，得到柴胡石油醚部位。
[0024](2)柴胡石油醚部位的粗分離
[0025]稱取上述柴胡石油醚部位樣品220g，加入層析柱，用石油醚:乙酸乙酯作為洗脫系統(tǒng)。將上述硅膠柱依次用石油醚:乙酸乙酯比例為100:0~100進(jìn)行梯度洗脫。以硅膠GF254薄層層析板、石油醚-乙酸乙酯為展開系統(tǒng)檢測流份，薄層色譜監(jiān)測組份有明顯變化時(shí)，更換下一濃度洗脫梯度。結(jié)合高效液相色譜跟蹤結(jié)果，收集石油醚和乙酸乙酯比例為100:8至100:20的部分，得到粗品C-H共17.7g。
[0026](3)純化:
[0027]取上述粗品(C-H) 17.7g拌樣，采用干法上樣，置于干燥硅膠粉(200-300目)170g層析柱(層析柱規(guī)格:直徑3cm，高45cm)，依次用石油醚:乙酸乙酯比例為100:0~100進(jìn)行梯度洗脫，結(jié)合高效液相色譜跟蹤結(jié)果，收集石油醚和乙酸乙酯比例為100:4至100:6的部分，得到 C-H-X8.9g。
[0028]取150mg樣品C-H-X分別經(jīng)過氯仿:甲醇(1:1) Sephadex LH-20凝膠柱，氯仿Sephadex LH-20凝膠柱進(jìn)行分離，共得到63.9mg樣品C-H-X-LJ。然后將樣品C-H-X-LJ溶解于甲醇:氯仿(9:1)的Iml溶劑中，0.45 μ m濾膜過濾，備用。
[0029](4)組合物的制備
[0030]色譜條件:色譜柱(VenusilC18IOX 100mm, 1.d.10 μ m)，流動相:甲醇:水=85:15，檢測波長:315nm，柱溫:25°C，流速:4.0ml/min，進(jìn)樣量:200 μ I。
[0031]共得到 4個化合物的色譜峰，保留時(shí)間分別是11.56、12.81、19.34,22.89分鐘，收集保留時(shí)間為11.56和12.81分鐘的色譜峰濃縮至干得到組合物1，收集保留時(shí)間為19.34,22.89分鐘的色譜峰濃縮至干得到組合物2。4個化合物命名標(biāo)號分別為RB_1、RB_2、RB-3 和 RB-4。
[0032](5)穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) [0033]將制備得到的4個化合物的色譜峰分別收集，在自然條件下濃縮、放置，結(jié)果顯示這四個化合物不能單獨(dú)穩(wěn)定存在，濃縮過程中發(fā)生互變現(xiàn)象，RB-1會得到比例為1:1~1.5的組合物I，RB-2會得到比例為1:2~4的組合物I ;RB-3會得到比例為1:1~1.5的組合物2，RB-4會得到比例為1:2~4的組合物2。故將RB-1和RB-2、RB-3和RB-4分別混合收集濃縮得到比例為1:1~4的組合物I和組合物2，并對其穩(wěn)定性進(jìn)行考察。
[0034]經(jīng)實(shí)驗(yàn)室多次試驗(yàn)考察發(fā)現(xiàn)，順反式比例為1:1~4時(shí)，2個月內(nèi)于4°C且避光條件下保存穩(wěn)定。長時(shí)間放置時(shí)會發(fā)生繼續(xù)互變及降解現(xiàn)象。具體結(jié)果如表1所示。
[0035]表1穩(wěn)定性考察結(jié)果表
【權(quán)利要求】
1.一種組合物，特征在于，其由(2Z，8Z，10E)-2,8, 10-十五烷三烯-4，6-二炔-1-醇和(2Z, 8E, 10E) -2, 8，10-十五烷三烯_4，6- 二炔-1-醇按1:1~4的比例組成。
2.一種組合物，特征在于，其由(2Z，8Z，10E)-2,8, 10-十七烷三烯-4，6-二炔-1-醇和(2Z, 8E, 10E) -2, 8，10-十七烷三烯_4，6- 二炔-1-醇按1:1~4的比例組成。
3.一種組合物的制備方法，其特征在于，步驟包括: (1)柴胡石油醚部位制備:將柴胡用95%乙醇浸泡，回流提取，提取液濃縮得浸膏，浸膏用石油醚萃取，得到柴胡石油醚部位； (2)柴胡石油醚部位的粗分離:將柴胡石油醚部位，加入到硅膠層析柱，依次用石油醚-乙酸乙酯洗脫系統(tǒng)洗脫，收集石油醚和乙酸乙酯比例為100:8至100:20的部分，得到含目標(biāo)化合物的粗品； (3)純化:將粗品再經(jīng)硅膠層析柱和S^hadexLH-20凝膠柱除雜，溶解于9:1的甲醇-氯仿溶劑中，濾膜過濾，備用； (4)制備:色譜條件:色譜柱Agela (Venusil MP C18, IOX 100mm, 1.d.10 μ m),流動相:甲醇:水=85:15，檢測波長:315nm，柱溫:25°C，流速:4.0ml/min，進(jìn)樣量:200 μ I ;得到4個化合物的色譜峰，保留時(shí)間分別是8.0-12.0、12.1-16.5、17.0-21.0,22.0-30.0分鐘，收集保留時(shí)間為8.0~16.5分鐘的色譜峰濃縮至干，得到如權(quán)利要求1所述的組合物。
4.如權(quán)利要求3所述的一種組合物的制備方法，其特征在于，收集保留時(shí)間為17.0~30.0分鐘的色譜峰濃縮至干，得到如權(quán)利要求2所述的組合物。
5.如權(quán)利要求1或2所述的組合物在制備抗抑郁藥物中的應(yīng)用。
6.如權(quán)利要求1或2 所述的組合物在制備功能食品中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61K31/045GK103565781SQ201310546136
【公開日】2014年2月12日 申請日期:2013年11月6日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月6日
【發(fā)明者】高曉霞, 周玉枝, 秦雪梅, 劉佳麗, 李震宇, 張麗增, 田俊生 申請人:山西大學(xué)