黑青稞籽皮類黃酮及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明一種黑青稞籽皮類黃酮及其制備方法與應(yīng)用，屬于植物有效成分的提取領(lǐng)域。本發(fā)明將未經(jīng)粉碎的黑青稞籽皮分別經(jīng)乙醇粗提、絮凝劑純化、乙酸乙酯萃取和富集，得到黑青稞籽皮類黃酮。實驗證明，該黑青稞籽皮類黃酮具有預(yù)防和治療缺氧損傷，特別是心、腦缺氧損傷的功效，可替代資源短缺的紅景天用于制備預(yù)防和治療缺氧損傷藥物，有廣闊的工業(yè)應(yīng)用前景。
【專利說明】黑青稞籽皮類黃酮及其制備方法與應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于植物有效成分的提取工藝，特別是涉及一種黑青稞籽皮中主要活性成分類黃酮的提取方法及其在制備預(yù)防和治療缺氧損傷(特別是心、腦缺氧損傷)藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]青稞(Hordeum vulgare ssp.vulgare),又稱裸大麥,是禾本科大麥屬作物,在世界許多國家和地區(qū)作為主要糧食作物已有幾千年歷史。在西藏，青稞品種資源很豐富，不同顏色、不同形狀的品種多達(dá)十幾個，有時在同一地區(qū)能發(fā)現(xiàn)7-8個青稞品種。青稞分為白青稞、黑青稞、墨綠色青稞等種類，其中，黑青稞是西藏特有品種，喜馬拉雅山北麓的山南地區(qū)措美縣因氣候、土壤特殊而盛產(chǎn)黑青稞，將其加工成糌粑后口感好，營養(yǎng)高，而且長期服用對治療糖尿病、胃病等有明顯的療效，這是白青稞不具備的。
[0003]黑青稞富含膳食纖維、多種礦物質(zhì)、維生素，能促進(jìn)人體健康發(fā)育，所含的β -葡萄聚可預(yù)防結(jié)腸癌，有學(xué)者從黑青稞中提取花色素，而有關(guān)其中更豐富的類黃酮物質(zhì)的相關(guān)研究至今未見報道。
[0004]隨著食品科學(xué)的發(fā)展，黑色健康食品越來越受到人們的關(guān)注，黑色食品是指帶天然黑色或紫紅色的各種動植物食品，黑色食品的保健功能在我國古代的醫(yī)學(xué)論著中有過許多論述:《本草綱目》中談及黑米名為“粳谷奴”，具有滋養(yǎng)肝腎、健脾和胃、活血明目等功能，久食可延年益壽；在論述服黑豆時說它可“加氣力、補(bǔ)虛損”、“又益陽道”;在《本經(jīng)》上說到芝麻有“益氣力、長肌肉、填髓腦”作用，對烏骨雞、木耳、海帶、香菇的健身評價也都很高。這些黑色健康食品所含有益于健康的成分黑色素成分就是類黃酮的一種。然而分析表明，更廣泛的類黃酮具有保健功能，如抑制血小板凝固、預(yù)防血栓和心臟病、降血脂、抗癌、抗炎、保護(hù)視力、延緩衰老等。在黑青稞提取中，趙桃等介紹了一種黑青稞花色素的提取工藝(趙桃，馬林，李嘉佳，杜靜君.，楊娟，楊凡，《食品研究與開發(fā)》2010年09期)，以黑青稞為原料，考察提取溶劑、酸化劑、提取溫度、提取時間、料液比、提取次數(shù)和籽粒粉碎度等7個單因素對其花色素提取率的影響，確定了青稞色素的最佳提取工藝條件為:乙醇濃度50%，溫度53°C，時間3h，此時最大提取率為108.33μ g/g。然該研究需將黑青稞籽粒粉碎，工藝復(fù)雜且影響提取率，且僅停留在花色素提取層面，只適于粗提，提取物難以分離，不適于工業(yè)化生產(chǎn)。迄今為止，尚未得到黑青稞籽皮類黃酮物質(zhì)的提取方法及其應(yīng)用的相關(guān)報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明的第一個目的是提供一種可工業(yè)化實施的從黑青稞籽皮中提取類黃酮的方法。
[0006]本發(fā)明一種黑青稞籽皮類黃酮的制備方法，將未經(jīng)粉碎的黑青稞籽皮分別經(jīng)乙醇粗提、絮凝劑純化、乙酸乙酯萃取和富集，得到黑青稞籽皮類黃酮。
[0007]所述粗提，是將黑青稞籽皮加入濃度為20%-60% (體積百分比濃度)的乙醇中浸提，黑青稞籽皮與乙醇的質(zhì)量/體積比為1:6-10(g:ml)，調(diào)pH值為2.0-5.0，40_60°C水浴2_5h，得到類黃酮粗提物的醇提液；優(yōu)選粗提條件為乙醇濃度40%，pH2.0，水浴溫度50°C，水浴時間3h。
[0008]所述絮凝劑為101絮凝劑；所述純化為向乙醇粗提的醇提液中加入101絮凝劑，101絮凝劑的添加量為1% -2% (g/100ml)，在40-60°C水浴下攪拌，然后在3000_5000r/min條件下離心，取上清液，減壓回收，餾出物為類黃酮粗品。
[0009]具體的，該方法包括以下步驟:
[0010]I)粗提:將黑青稞籽皮加入濃度為20%-60%(體積百分比濃度)的乙醇中浸提，黑青稞籽皮與乙醇的質(zhì)量/體積比為1:6-10(g:mL)，調(diào)pH值為2.0-5.0，40_60°C水浴2_5h，得到類黃酮粗提物的醇提液；
[0011]2)純化:向類黃酮粗提物的醇提液中加入101絮凝劑，101絮凝劑的添加量為1% -2% (g/100ml)，在40-60°C水浴下攪拌，然后在3000-5000r/min條件下離心，取上清液，減壓回收，餾出物為類黃酮粗品；
[0012]3)萃取:用乙酸乙酯對類黃酮粗品進(jìn)行萃取:先將類黃酮粗品與水按體積比1:5-1:10混合，得到類黃酮粗品水懸液，再將類黃酮粗品水懸液加入乙酸乙酯中，類黃酮粗品水懸液與乙酸乙酯的體積比為1:5_1:10，振蕩充分，靜置，常溫過夜，減壓回收，餾出物為類黃酮精制物，在_20°C至_70°C下低溫干燥，得到類黃酮精制物粉末；
[0013]4)富集:類黃酮精制物粉末溶于去離子水中配成溶液用于上樣，用S印hadexLH-20柱進(jìn)行梯度洗脫，洗脫液為不同濃度的乙醇水溶液，水與乙醇的體積比依次為100:0、90:10、50:50、0:100，將洗脫物真空干燥，得到黑青稞籽皮類黃酮。
[0014]其中:所述步驟I)中優(yōu)選的提取條件為乙醇濃度40%，pH2.0，水浴溫度50°C，水浴時間3h。
[0015]所述步驟2)和步驟3)中減壓回收條件為水浴50°C，壓力0.09Mpa，冷水冷凝。
[0016]本發(fā)明的另一目的在于提供可替代花青素使用的食物來源的產(chǎn)品。該產(chǎn)品即為用以上方法獲得的黑青稞籽皮類黃酮或中間品。所述中間品包括類黃酮粗提物的醇提液、類黃酮粗品、類黃酮精制物和類黃酮精制物粉末；所述黑青稞籽皮類黃酮純度為95-98%。
[0017]本發(fā)明重要目的在于提供所述的黑青稞籽皮類黃酮或中間品在制備預(yù)防和治療缺氧損傷藥物或中的應(yīng)用，所述缺氧損傷包括心衰、急性肺損傷、失血、腦缺血、心腦血管疾病、重創(chuàng)、淹溺和急性呼吸窘迫綜合征等引起的缺氧癥狀。
[0018]本發(fā)明重要目的還在于提供黑青稞籽皮類黃酮或中間品在制備預(yù)防和治療心、腦缺氧損傷藥物中的應(yīng)用，所述心、腦缺氧損傷包括心悸、胸悶、氣促、頭暈?zāi)垦?、記憶障礙、神志不清、機(jī)體反應(yīng)遲鈍、酸痛乏力、手腳發(fā)麻。
[0019]實驗證明，用本發(fā)明方法得到的黑青稞籽皮類黃酮具有預(yù)防和治療缺氧損傷(特別是心、腦缺氧損傷)的功效，所述缺氧損傷包括心衰、急性肺損傷、失血、腦缺血、心腦血管疾病、重創(chuàng)、淹溺和急性呼吸窘迫綜合征等引起的缺氧癥狀，所述心、腦缺氧損傷包括缺氧的一般表現(xiàn)為頭暈、頭痛、耳鳴、眼花、四肢軟弱無力，繼之有惡心、嘔吐，呼吸淺快而弱，心跳快而無力。隨著缺氧的加重，會漸次出現(xiàn)意識模糊，全身皮膚、嘴唇、指甲青紫、血壓下降、瞳孔散大、昏迷，最后因呼吸困難、心跳停止、缺氧窒息而死亡。因此，黑青稞籽皮類黃酮在制備預(yù)防和治療缺氧損傷藥物，特別是預(yù)防和治療心、腦缺氧損傷藥物中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0020]應(yīng)用中，所述藥物含有黑青稞籽皮類黃酮或中間品，產(chǎn)品本身可成藥，也可加入其它藥用輔料；藥物劑型可為口服制劑、靜脈注射制劑、肌肉注射制劑、皮下注射制劑或腹腔注射制劑；其中，口服制劑的劑型具體可為散劑、溶液劑、顆粒劑、片劑或膠囊等，口服制劑中黑青稞籽皮類黃酮的含量為200mg-500mg/片；注射制劑中黑青稞籽皮類黃酮的含量為50mg-100mg/ 支。
[0021]黑青稞籽皮類黃酮的有效治療劑量為0.5_5g/kg體重，小鼠實驗優(yōu)選為
1.75-3.5g/kg體重，因此，上述口服藥物的人的用量一般為300mg-800mg/kg體重/day，療程一般為5-7天；注射藥物的用量一般為0.83mg-l.66mg/kg體重/day,療程一般為3-5天。用量和療程可根據(jù)實際情況進(jìn)行調(diào)整，本申請僅提供數(shù)據(jù)支持，不對具體使用給出任何限制。
[0022]采用以上方案，本發(fā)明提供了從黑青稞籽皮中提取類黃酮的方法、產(chǎn)品及其新用途。本發(fā)明制備工藝，直接使用原態(tài)黑青稞籽皮，未經(jīng)粉碎，簡化了工藝而能達(dá)到很好的提取效果；通過絮凝劑的純化，有效除去了粗提物醇提液中的雜蛋白，并進(jìn)而結(jié)合萃取和柱富集，能夠得到純度較高黑青稞籽皮類黃酮，使產(chǎn)業(yè)生產(chǎn)和應(yīng)用成為可能。實驗證明，本發(fā)明提供的黑青稞籽皮提取物(類黃酮)顯著延長了小鼠密閉缺氧后的存活時間，說明對腦缺氧或心肌缺血有改善作用，小鼠灌胃3天既能看到顯著延長常壓耐缺氧的存活時間；在斷頭實驗中，腦血液供應(yīng)中斷，但腦中原有的血和宮養(yǎng)物質(zhì)尚能使腦功能維持一段時間，表現(xiàn)在小鼠規(guī)律地喘氣，實驗結(jié)果表明黑青稞籽皮提取物可明顯延長小鼠的喘氣時間，能夠使腦耗能減少，對斷頭腦缺氧有保護(hù)作用；通過三種不同類型的細(xì)胞缺氧損傷實驗，證明黑青稞籽皮提取物能夠有效防治過氧化氫、百草枯、連二亞硫酸鈉對H9C2(大鼠胚胎心肌)細(xì)胞的缺氧損傷，說明黑青稞籽皮提取物對大鼠心肌細(xì)胞各種缺氧損傷均具有保護(hù)作用，即具有心肌細(xì)胞保護(hù)作用；通過小鼠負(fù)重游泳實驗說明黑青稞籽皮提取物還具有較好的抗疲勞功能。上述實驗證明，黑青稞籽皮提取物(類黃酮)具有預(yù)防和治療缺氧損傷(特別是心、腦缺氧損傷)的功效，所述缺氧損.傷包括心衰、急性肺損傷、失血、腦缺血、心腦血管疾病、重創(chuàng)、淹溺和急性呼吸窘迫綜合征等引起的缺氧癥狀，所述心、腦缺氧損傷包括心悸、胸悶、氣促、頭暈?zāi)垦?、記憶障礙、神志不清、機(jī)體反應(yīng)遲鈍、酸痛乏力、手腳發(fā)麻等。因此，可以黑青稞籽皮提取物(類黃酮)為活性成分制備預(yù)防和治療缺氧損傷藥物，特別是預(yù)防和治療心、腦缺氧損傷藥物，應(yīng)用前景廣闊。
[0023]本發(fā)明更實際意義及優(yōu)勢在于:本發(fā)明黑青稞籽皮類黃酮來源于食物，具有服用安全的特點(diǎn)，而在耐缺氧方面與紅景天具備相似功效，由于紅景天屬于珍貴的藏藥資源，資源有限，因此有望以天然、綠色、低成本食品來源的黑青稞替代藏藥來源的紅景天。目前，進(jìn)藏防治高原缺氧主要采用提前服用紅景天系列產(chǎn)品的方法，大多數(shù)以紅景天復(fù)方為主，由于體質(zhì)原因，服用后出現(xiàn)部分人群過敏現(xiàn)象，而本發(fā)明產(chǎn)品為單方成分，可以避免過敏現(xiàn)象發(fā)生，這是本發(fā)明產(chǎn)品黑青稞籽皮類黃酮的優(yōu)勢所在。
[0024]下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說明。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0025]圖1為乙酸乙酯萃取后的醇提物的硅膠薄層層析結(jié)果[0026]圖2為乙酸乙酯萃取后的醇提物的紫外-可見光譜圖
[0027]圖3A為黑青稞籽皮提取物的紫外-可見光譜全波長掃描圖
[0028]圖3B為類黃酮標(biāo)準(zhǔn)品的紫外-可見光譜全波長掃描圖
[0029]圖4A為黑青稞籽皮提取物的外觀形態(tài)
[0030]圖4B為黑青稞籽皮提取物分離單體的外觀形態(tài)
[0031]圖5A為常壓耐缺氧實驗中小鼠體重的變化情況
[0032]圖5B為黑青稞籽皮提取物對小鼠常壓耐缺氧實驗中生存時間的影響
[0033]圖6A為小鼠急性腦缺血實驗中小鼠體重的變化情況
[0034]圖6B為黑青稞籽皮提取物對小鼠急性腦缺血實驗中存活時間的影響
[0035]圖7A為黑青稞籽皮提取物預(yù)防過氧化氫(H2O2)對H9C2細(xì)胞損傷的結(jié)果
[0036]圖7B為黑青稞籽皮提取物治療過氧化氫(H2O2)對H9C2細(xì)胞損傷的結(jié)果
[0037]圖8A為黑青稞籽皮提取物預(yù)防百草枯(PQ)對H9C2細(xì) 胞損傷的結(jié)果
[0038]圖8B為黑青稞籽皮提取物治療百草枯(PQ)對H9C2細(xì)胞損傷的結(jié)果
[0039]圖9A為黑青稞籽皮提取物治療連二亞硫酸鈉(Na2S2O4)對H9C2細(xì)胞損傷2.5h的結(jié)果
[0040]圖9B為黑青稞籽皮提取物治療連二亞硫酸鈉(Na2S2O4)對H9C2細(xì)胞損傷7.0h的
結(jié)果
[0041]圖10為黑青稞籽皮提取物對H9C2細(xì)胞線粒體膜電位的影響
[0042]圖11為黑青稞籽皮提取物對H9C2細(xì)胞凋亡的影響
[0043]圖12A為黑青稞籽皮提取物對線粒體膜電位的影響
[0044]圖12B為黑青稞籽皮提取物對BC1-2蛋白的影響
[0045]圖13為黑青稞籽皮提取物對小鼠負(fù)重游泳抗疲勞的影響
【具體實施方式】
[0046]下述實施例中所用方法如無特別說明均為常規(guī)方法，具體步驟可參見:((Molecular Cloning:A Laboratory Manual))(Sambrook, J.,Russell,David ff.,MolecularCloning:A Laboratory Manual,3rd edition, 2001, NY, Cold Spring Harbor)。
[0047]所述百分比濃度如無特別說明均為質(zhì)量/質(zhì)量(W/W)百分比濃度、質(zhì)量/體積(W/V，單位g/100ml)百分比濃度或體積/體積(V/V)百分比濃度。
[0048]實施例中描述到的各種生物材料的取得途徑僅是提供一種實驗獲取的途徑以達(dá)到具體公開的目的，不應(yīng)成為對本發(fā)明生物材料來源的限制。事實上，所用到的生物材料的來源是廣泛的，任何不違反法律和道德倫理能夠獲取的生物材料都可以按照實施例中的提示替換使用。
[0049]實施例在以本發(fā)明技術(shù)方案為前提下進(jìn)行實施，給出了詳細(xì)的實施方式和具體的操作過程，實施例將有助于理解本發(fā)明，但是本發(fā)明的保護(hù)范圍不限于下述的實施例。
[0050]本發(fā)明提出的黑青稞籽皮類黃酮，是將原態(tài)黑青稞籽皮(無需粉碎)經(jīng)乙醇粗提、絮凝劑純化、乙酸乙酯萃取和富集后得到。
[0051]具體的，從黑青稞籽皮中提取類黃酮可包括以下步驟:
[0052]I)粗提:將黑青稞籽皮加入濃度為20% -60% (體積百分比濃度)的乙醇中浸提，黑青稞籽皮與乙醇的質(zhì)量/體積比為1:6-10，調(diào)pH值為2.0-5.0，40-601:水浴2-511，得到類黃酮粗提物的醇提液；
[0053]2)純化:向類黃酮粗提物的醇提液中加入101絮凝劑，101絮凝劑的添加量為I % -2 % (g/100ml),在40-60 V水浴下攪拌以40_80r/min攪拌2_4min，然后在3000-5000r/min條件下離心5_10min，取上清液，減壓回收(減壓回收條件為水浴50°C，壓力0.09Mpa，冷水冷凝)，餾出物為類黃酮粗品；
[0054]3)萃取:用乙酸乙酯對類黃酮粗品進(jìn)行萃取，萃取法方法為:先將類黃酮粗品與水按體積比1:5_1:10混合，得到類黃酮粗品水懸液，再將類黃酮粗品水懸液加入乙酸乙酯中，類黃酮粗品水懸液與乙酸乙酯的體積比為1:5_1:10，振蕩充分，靜置，常溫過夜(10-12小時)，減壓回收(減壓回收條件為50°C，壓力0.09Mpa，冷水冷凝)餾出物為類黃酮精制物，在-20°C至-70°C下低溫干燥，得到類黃酮精制物粉末；
[0055]4)富集:類黃酮精制物粉末溶于微量去離子水中配成溶液用于上樣，用SephadexLH-20柱進(jìn)行梯度洗脫(分離、濃縮)，洗脫液為不同濃度的乙醇水溶液，水與乙醇的體積比依次為100: 0、90:10、50:50、0:100，將洗脫物真空干燥，得到黑青稞籽皮類黃酮。
[0056]在上述從黑青稞籽皮中提取類黃酮的方法中，本發(fā)明進(jìn)一步優(yōu)化了工藝參數(shù):
[0057]步驟I)中將黑青稞籽皮用乙醇進(jìn)行浸提是因為大部分類黃酮物質(zhì)易溶于一定濃度乙醇，乙醇濃度選擇20% -60% (體積百分比濃度)是因為本發(fā)明原料黑青稞籽皮中大部分水溶性及中等極性的類黃酮物質(zhì)在此濃度下可被溶出；選擇黑青稞籽皮與乙醇的體積比為1:6-10，是以最經(jīng)濟(jì)的溶劑獲得最大提取率；pH值2.0-5.0 (優(yōu)選2.0，用檸檬酸調(diào)pH值)，考慮類黃酮物質(zhì)成分在酸性條件下可獲得較為穩(wěn)定的保護(hù)；40-60°C水浴2-5h條件下浸提，是因為某些類黃酮物質(zhì)成分受到高溫(60°C以上)易發(fā)生變化。進(jìn)一步，步驟I)優(yōu)選的提取條件為乙醇濃度40%，pH2.0，水浴溫度50°C，水浴時間3h。
[0058]步驟2)中用絮凝劑絮凝純化的目的主要是去除蛋白和鞣質(zhì)，可選擇的中藥絮凝劑有鞣酸、明膠、蛋清、101絮凝劑、ZTC澄清劑、殼聚糖等，101絮凝劑可最大限度保留藥液的類黃酮有效成分，去除蛋白和鞣質(zhì)，因此為本發(fā)明的優(yōu)選。101絮凝劑為商購產(chǎn)品，食品級，以天然鋁硅酸鹽粘土為原料，經(jīng)精制、復(fù)配而成。其功效為:有效吸附提取液中的蛋白質(zhì)、鞣質(zhì)等成分。步驟2)中離心的目的是保留類黃酮物質(zhì)，去除蛋白；減壓回收的目的是濃縮提取物。
[0059]所述步驟3)中用乙酸乙酯對類黃酮粗品進(jìn)行萃取的目的是精制類黃酮提取物；低溫干燥的目的是不破壞類黃酮化學(xué)結(jié)構(gòu)。
[0060]所述步驟4)用S印hadexLH-20柱進(jìn)行分離、濃縮的目的是分離類黃酮單體確定功效成分，選擇S印hadexLH-20柱的原因是其對類黃酮物質(zhì)分離效果好；真空干燥的目的是合并濃縮提取物。
[0061]經(jīng)檢測，用上述方法從黑青稞籽皮中提取的類黃酮的純度為95-98%。
[0062]本發(fā)明的粗提工藝以正交試驗確定:
[0063]正交試驗:提取工藝的確定
[0064]本發(fā)明在黑青稞綜合開發(fā)中，首先利用正交試驗，篩選了實驗條件(表I所示)下黑青稞籽皮類黃酮的最佳粗提工藝。
[0065]表I正交試驗因素及水平選取
【權(quán)利要求】
1.一種黑青稞籽皮類黃酮的制備方法，將未經(jīng)粉碎的黑青稞籽皮分別經(jīng)乙醇粗提、絮凝劑純化、乙酸乙酯萃取和富集，得到黑青稞籽皮類黃酮。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述方法，其特征在于，所述粗提，是將黑青稞籽皮加入濃度為20% -60% (體積百分比濃度)的乙醇中浸提，黑青稞籽皮與乙醇的質(zhì)量/體積比為1:6-10 (g:ml)，調(diào)pH值為2.0-5.0，40_60°C水浴2_5h，得到類黃酮粗提物的醇提液；優(yōu)選粗提條件為乙醇濃度40%，pH2.0，水浴溫度50°C，水浴時間3h。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述方法，其特征在于，所述絮凝劑為101絮凝劑；所述純化為向乙醇粗提的醇提液中加入101絮凝劑，101絮凝劑的添加量為1% -2% (g/100ml)，在40-60°C水浴下攪拌，然后在3000-5000r/min條件下離心，取上清液，減壓回收，餾出物為類黃酮粗品。
4.根據(jù)權(quán)利要求1或2或3所述方法，其特征在于，包括以下步驟: 1)粗提:將黑青稞籽皮加入濃度為20%-60% (體積百分比濃度)的乙醇中浸提，黑青稞籽皮與乙醇的質(zhì)量/體積比為1:6-10(g:mL)，調(diào)pH值為2.0-5.0，40_60°C水浴2_5h，得到類黃酮粗提物的醇提液； 2)純化:向類黃酮粗提物的醇提液中加入101絮凝劑，101絮凝劑的添加量為1%-2%(g/100ml),在40-6011C水浴下攪拌,然后在3000-5000r/min條件下離心,取上清液,減壓回收，餾出物為類黃酮粗品； 3)萃取:用乙酸乙酯對類黃酮粗品進(jìn)行萃取:先將類黃酮粗品與水按體積比1:5-1:10混合，得到類黃酮粗品水懸液，再將類黃酮粗品水懸液加入乙酸乙酯中，類黃酮粗品水懸液與乙酸乙酯的體積比為1:5-1:10，振蕩充分，靜置，常溫過夜，減壓回收，餾出物為類黃酮精制物，在-20°C至-70°C下低溫干燥，得到類黃酮精制物粉末； 4)富集:類黃酮精制物粉末 溶于去離子水中配成溶液用于上樣，用S印hadexLH-20柱進(jìn)行梯度洗脫，洗脫液為不同濃度的乙醇水溶液，水與乙醇的體積比依次為100:0、90:10、50:50、0: 100，將洗脫物真空干燥，得到黑青稞籽皮類黃酮。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于:所述步驟I)中優(yōu)選的提取條件為乙醇濃度40%，ρΗ2.0，水浴溫度500C，水浴時間3h。
6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的方法，其特征在于:所述步驟2)和步驟3)中減壓回收條件為水浴50°C，壓力0.09Mpa，冷水冷凝。
7.權(quán)利要求1-6任一所述方法獲得的黑青稞籽皮類黃酮或中間品，所述中間品包括類黃酮粗提物的醇提液、類黃酮粗品、類黃酮精制物和類黃酮精制物粉末；所述黑青稞籽皮類黃酮純度為95-98%。
8.權(quán)利要求7所述的黑青稞籽皮類黃酮或中間品在制備預(yù)防和治療缺氧損傷藥物或中的應(yīng)用，所述缺氧損傷包括心衰、急性肺損傷、失血、腦缺血、心腦血管疾病、重創(chuàng)、淹溺和急性呼吸窘迫綜合征等引起的缺氧癥狀。
9.權(quán)利要求8所述的黑青稞籽皮類黃酮或中間品在制備預(yù)防和治療心、腦缺氧損傷藥物中的應(yīng)用，所述心、腦缺氧損傷包括心悸、胸悶、氣促、頭暈?zāi)垦?、記憶障礙、神志不清、機(jī)體反應(yīng)遲鈍、酸痛乏力、手腳發(fā)麻。
10.根據(jù)權(quán)利要求8或9所述的應(yīng)用，其特征在于:所述藥物含有黑青稞籽皮類黃酮或中間品；劑型為口服制劑、靜脈注射制劑、肌肉注射制劑、皮下注射制劑或腹腔注射制劑；其中，口服制劑的劑型具體可為散劑、溶液劑、顆粒劑、片劑或膠囊等，口服制劑中黑青稞籽皮類黃酮的含量為200mg-500mg/片；注射制劑中黑青稞籽皮類黃酮的含量為50mg-100mg/支。 ·
【文檔編號】A61K131/00GK103432462SQ201310400124
【公開日】2013年12月11日 申請日期:2013年9月5日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月5日
【發(fā)明者】于群, 王璇琳, 賀敏, 李偉靜, 任素萍, 蘇麗華, 丁雪潔, 喬志新 申請人:中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院野戰(zhàn)輸血研究所