專利名稱：治療多發(fā)性硬化的制作方法
治療多發(fā)性硬化本申請(qǐng)是中國(guó)申請(qǐng)200580046885.8的分案申請(qǐng)，該母案于2005年11月18日以國(guó)際申請(qǐng)?zhí)朠CT/US2005/042052提交，于2007年7月19日進(jìn)入中國(guó)國(guó)家階段，本分案采用了與該母案一致的發(fā)明名稱。相關(guān)申請(qǐng)本申請(qǐng)要求2004年11月19日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)60/629，700的權(quán)利，該申請(qǐng)全文引入本文作為參考。
背景技術(shù)：
多發(fā)性硬化(multiple sclerosis, MS)是最常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病之一。目前全世界范圍內(nèi)有超過2，500，000人患有MS。干擾素β和考帕松(copaxone)是目前在售的MS治療法中主要的適應(yīng)性改良療法。干擾素β治療可以使MS患者的復(fù)發(fā)率降低 32-33%(Jacobs et al., Ann Neurol.39:285-94, 1996;也參見Neurology43:641-643, 1993)。 發(fā)明概述本發(fā)明是基于，至少是部分基于，以下發(fā)現(xiàn):VLA_4阻斷療法，如VLA-4結(jié)合抗體如那他珠單抗(natalizumab)療法可以安全有效地治療此前已治療過多發(fā)性硬化等炎性疾病的患者。具體地，施用那他珠單抗使一些MS患者的癥狀大大改善，而這些患者都是此前被證實(shí)對(duì)在先的治療、例如在先的生物學(xué)療法、尤其是在先的干擾素β療法反應(yīng)不足(inadequate response)。相應(yīng)地,本發(fā)明一個(gè)方面涉及治療受試者如人類受試者的方法，所述受試者患有炎性疾病(inflammatory disorder),并且對(duì)第一種治療,例如第一種試劑(agent)，例如本文所述試劑，例如干擾素β表現(xiàn)為反應(yīng)不足。所述炎性疾病可以是，MS、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、炎性腸疾病(inflammatory bowel disease)、或系統(tǒng)性紅斑狼瘡。所述方法包括，對(duì)該受試者施用VLA-4結(jié)合蛋白(VLA-4binding protein),例如VLA-4結(jié)合抗體(VLA-4binding antibody),例如那他珠單抗,其施用量和施用時(shí)間足以導(dǎo)致治療所述疾病。當(dāng)?shù)谝环N試劑(例如干擾素β)在該受試者體內(nèi)未處在治療水平時(shí)，所述VLA-4結(jié)合蛋白，例如VLA-4結(jié)合抗體(例如那他珠單抗)，可以施用至少一次,例如至少2，3，4，5次或更多次。(除非另外指明，VLA-4結(jié)合抗體，優(yōu)選那他珠單抗，是本文所述所有實(shí)施方式中優(yōu)選的LA-4結(jié)合蛋白。同樣，除非另外指明，優(yōu)選的疾病多發(fā)性硬化)。在一個(gè)實(shí)施方案中，在不施用第一種試劑(例如干擾素β)的情況下，將VLA-4結(jié)合蛋白，例如VLA-4結(jié)合抗體(例如那他珠單抗)持續(xù)施用至少2個(gè)月，例如至少4,8, 12，24，或 48 個(gè)月。在一個(gè)實(shí)施方案中，在對(duì)該受試者第一次施用VLA-4結(jié)合蛋白，例如VLA-4結(jié)合抗體(例如那他珠單抗)之后，不施用所述第一種療法，例如第一種試劑(例如干擾素β )。在另一實(shí)施方案中，施用VLA-4結(jié)合蛋白，例如VLA-4結(jié)合抗體(例如那他珠單抗)，來代替施用第一種試劑(例如干擾素β)。反應(yīng)不足可以是，例如反應(yīng)低于本文所述預(yù)定水平。反應(yīng)不足也可以是由第一種療法，例如第一種試劑(例如干擾素β)引起的副反應(yīng)(adverse reaction)或不耐受反應(yīng)或不可接受的反應(yīng)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述受試者事先已用第一種療法,例如第一種試劑(例如干擾素β )治療了至少3個(gè)月，例如至少6，12，18，或24個(gè)月。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述受試者因被診斷為患有諸如MS等疾病，而未施用VLA-4結(jié)合蛋白，例如VLA-4結(jié)合抗體(例如那他珠單抗)。在一些實(shí)施方案中，所述受試者在第一次施用VLA-4結(jié)合蛋白，例如VLA-4結(jié)合抗體(例如那他珠單抗)之前，有至少I個(gè)月，例如至少2，3，4，5，6，12，或24個(gè)月未施用所述第一種試劑(例如干擾素β)。在其它實(shí)施方案中，所述受試者在第一次施用VLA-4結(jié)合蛋白，例如VLA-4結(jié)合抗體(例如那他珠單抗)之前的6周內(nèi)，例如4，2或I周內(nèi)，或6，5，4，3，2或I天內(nèi)，施用所述第一種試劑(例如干擾素β)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述受試者在第一次施用VLA-4結(jié)合蛋白，例如VLA-4結(jié)合抗體(例如那他珠單抗)的3個(gè)月內(nèi)，例如6，12，18，24，30或36個(gè)月內(nèi)，未施用米托蒽醌(mitoxantrone)、環(huán)磷酰胺、環(huán)孢菌素、硫唑嘌呤或氨甲蝶呤。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述受試者是成年受試者，例如年齡在16，18，19，20，24，或30歲或更大的受試者。通常，所述受試者年齡為19-55歲。所述受試者可以是女性或男性。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述受試者患有復(fù)發(fā)(relapsing)弛張型(remitting)多發(fā)性硬化。在另一實(shí)施方案中，所述受試者患有慢性漸進(jìn)型多發(fā)性硬化(chronicprogressive multiple sclerosis),例如原發(fā)-漸進(jìn)型(primary-progressive, PP),繼發(fā)-漸進(jìn)型(secondar y progressive),或漸進(jìn)復(fù)發(fā)型(progressive relapsing)多發(fā)性硬化。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述受試者患有炎性疾病，例如MS,該疾病是用第一種療法，例如第一種試劑(例如干擾素β)治療時(shí)難治的(refractory)疾病。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述VLA-4結(jié)合蛋白是VLA-4結(jié)合抗體，例如IgGl, IgG2, IgG3,或IgG4等全長(zhǎng)抗體。所述抗體通常是有效人化(effectively human),人化(human)或人源化(humanized)的抗體。所述VLA-4結(jié)合抗體可抑制VLA-4與其關(guān)聯(lián)(cognate)配體，例如VCAM-1的相互作用。所述VLA-4結(jié)合抗體至少結(jié)合VLA-4的α鏈，例如結(jié)合α 4亞基的胞外區(qū)。例如，所述VLA-4結(jié)合抗體識(shí)別VLA-4a鏈上的表位B (如BI或B2)。所述VLA-4結(jié)合抗體可以與那他珠單抗、HP1/2、或本文所述另一種VLA-4結(jié)合抗體來競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合VLA-4，或具有與上述抗體重疊的VLA-4結(jié)合表位。在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述VLA-4結(jié)合抗體是那他珠單抗，或包括那他珠單抗的重鏈可變區(qū)和輕鏈可變區(qū)。所述第一種療法，例如第一種試劑可以是生物學(xué)療法(試劑)，例如具有指定序列的蛋白，如干擾素。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述第一種試劑包括干擾素β，例如干擾素β-la，例如AVONEX (干擾素β-la)或Rebif (干擾素β-1a)，或BETASERON (干擾素β-1b)。所述第一種試劑也可以是未限定序列(undefined sequence)的蛋白，例如指定氨基酸的隨機(jī)共聚物，例如乙酸格拉太咪爾(glatiramer acetate)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述VLA-4結(jié)合蛋白，例如VLA-4結(jié)合抗體(例如那他珠單抗)的施用劑量是，足以實(shí)現(xiàn)每月一次(如每四周一次)施用約50-600mg(如約200-400mg，例如約300mg，通過靜脈(IV)途徑施用)所獲得的生物利用度的至少80%(優(yōu)選90%，95%, 100%, 110%或更高)水平。例如，所述VLA-4結(jié)合抗體每月一次IV輸注約50-600mg (如約200-400mg，例如約300mg)。在另一實(shí)例中，VLA-4結(jié)合抗體皮下(SC)注射25-300mg(如50-150mg，例如約75mg)，例如一周一次，一周兩次或兩周一次。在一些實(shí)施方案中，所述VLA-4結(jié)合蛋白，例如VLA-4結(jié)合抗體(例如那他珠單抗)，可以按照有效導(dǎo)致以下一或多種后果的量施用:a)降低復(fù)發(fā)嚴(yán)重度；b)阻止EDSS (殘疾狀況拓展量化表)分?jǐn)?shù)升高；c)降低EDSS分?jǐn)?shù)(例如在至少6個(gè)月、一年或更長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)降低例如1、1.5、2、2.5、或3個(gè)點(diǎn)以上)；d)減少新的Gd+損傷的數(shù)量；e)減少新的Gd+損傷的出現(xiàn)率；和0減少Gd+損傷面積的擴(kuò)大。VLA-4結(jié)合蛋白(例如那他珠單抗)，可以施用多個(gè)劑量(multiple doses)、并且是能在至少3、6、或9個(gè)月，或在1、2、3年內(nèi)維持不加重或不復(fù)發(fā)階段的有效量。在一些實(shí) 施方案中，對(duì)例如受試者接受VLA-4結(jié)合蛋白(例如那他珠單抗)之后的反應(yīng)指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià)。專業(yè)人員可以采用一或多種不同的關(guān)于治療有效性的臨床指標(biāo)或其它指標(biāo)，例如EDSS分?jǐn)?shù);MRI掃描；復(fù)發(fā)次數(shù)、復(fù)發(fā)率或復(fù)發(fā)嚴(yán)重度；多發(fā)性硬化綜合功能(multiple sclerosis functional composite, MSFC);多發(fā)性硬化生活質(zhì)量記錄(multiple sclerosis quality of life inventory,MSQLI)。所述受試者可以在實(shí)施治療方案期間(during a regimen)的不同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行監(jiān)控。在一個(gè)實(shí)施方案中，未檢查所述受試者的干擾素生物利用度(例如，在施用之前或之后)。另一方面，本文涉及一種治療患有炎性疾病(例如多發(fā)性硬化)的受試者(例如人類受試者)的方法。所述方法包括，選擇對(duì)第一種試劑治療多發(fā)性硬化反應(yīng)不足(例如是第一種試劑難治的MS)的受試者，對(duì)所述受試者施用VLA-4結(jié)合蛋白，例如VLA-4結(jié)合抗體(例如那他珠單抗)，施用量和施用時(shí)間導(dǎo)致足以治療該疾病。當(dāng)?shù)谝环N試劑(例如干擾素β)在該受試者體內(nèi)未處于治療水平時(shí)，所述VLA-4結(jié)合蛋白，例如VLA-4結(jié)合抗體(例如那他珠單抗)，可以施用至少I次,例如至少2，3，4，5或更多次。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法還包括確定所述受試者是否患有第一種試劑(例如干擾素β)難治的疾病(例如多發(fā)性硬化)。在一個(gè)實(shí)施方案中，確定疾病是否難治包括評(píng)價(jià)對(duì)第一種試劑(例如干擾素β)治療的反應(yīng)水平，例如評(píng)價(jià)本文所述反應(yīng)，且當(dāng)所述受試者對(duì)所述治療未達(dá)到預(yù)定的反應(yīng)水平時(shí)，再確定所述受試者是否患有第一種試劑(例如干擾素β )難治的疾病(例如MS)。所述方法還可包括本文描述的任何其它實(shí)施方案。另一方面，本文涉及治療患有炎性疾病(例如多發(fā)性硬化)的受試者(例如人類受試者)的方法。所述方法包括，確定所述受試者對(duì)第一種試劑，例如本文所述試劑(但不是VLA-4結(jié)合蛋白(例如那他珠單抗))的治療是否未達(dá)到預(yù)定的反應(yīng)(例如本文所述反應(yīng))的水平，或是否表現(xiàn)出副反應(yīng)或不能耐受的或無法接受的毒性。所述方法包括，在所述受試者對(duì)所述治療未達(dá)到預(yù)定的反應(yīng)水平、或表現(xiàn)出副反應(yīng)或不能耐受的或無法接受的毒性時(shí)，對(duì)所述受試者施用VLA-4結(jié)合蛋白(例如那他珠單抗)，其施用量和施用時(shí)間足以導(dǎo)致治療該疾病。當(dāng)?shù)谝环N試劑(例如干擾素β)在該受試者體內(nèi)未處于治療水平時(shí)，所述VLA-4結(jié)合蛋白(例如那他珠單抗)，可以施用至少I次，例如至少2，3，4，5或更多次。所述方法還可包括本文描述的任何其它實(shí)施方案。
另一方面，本文涉及治療患有炎性疾病(例如多發(fā)性硬化)的受試者(例如人類受試者)的方法。所述方法包括，選擇對(duì)第一種試劑，例如本文所述試劑(但不是VLA-4結(jié)合蛋白(例如那他珠單抗))的治療未達(dá)到預(yù)定的反應(yīng)(例如本文所述反應(yīng))的水平，或表現(xiàn)出副反應(yīng)或不能耐受的或無法接受的毒性的受試者。所述方法包括，在所述受試者對(duì)所述治療未達(dá)到預(yù)定的反應(yīng)水平、或表現(xiàn)出副反應(yīng)或不能耐受的或無法接受的毒性時(shí)，對(duì)所述受試者施用VLA-4結(jié)合蛋白(例如那他珠單抗)，其施用量和施用時(shí)間足以導(dǎo)致治療該疾病。當(dāng)?shù)谝环N試劑(例如干擾素β)在該受試者體內(nèi)未處于治療水平時(shí)，所述VLA-4結(jié)合蛋白(例如那他珠單抗)，可以施用至少I次，例如至少2，3，4，5或更多次。所述方法還可包括本文描述的任何其它實(shí)施方案。另一方面，本文涉及治療患有炎性疾病(例如多發(fā)性硬化)的受試者(例如人類受試者)的方法。所述方法包括，對(duì)所述受試者施用VLA-4結(jié)合蛋白(例如那他珠單抗)，其施用量和施用時(shí)間足以導(dǎo)致治療該疾病。所述受試者可以是，對(duì)第一種試劑，例如本文所述試劑(但不是VLA-4結(jié)合蛋白(例如那他珠單抗))的治療未達(dá)到預(yù)定的反應(yīng)(例如本文所述反應(yīng))的水平，或表現(xiàn)出副反應(yīng)或不能耐受的或無法接受的毒性的受試者。當(dāng)?shù)谝环N試劑(例如干擾素β)在該受試者體內(nèi)未處于治療水平時(shí)，所述VLA-4結(jié)合蛋白(例如那他珠單抗)，可以施用至少I次，例如至少2，3，4，5或更多次。所述方法還可包括本文描述的任何其它實(shí)施方案。另一方面，本文涉及治療患有炎性疾病(例如多發(fā)性硬化)的受試者(例如人類受試者)的方法。所述方法包括，對(duì)所述受試者施用第一種試劑(例如干擾素β)，并評(píng)價(jià)所述受試者對(duì)第一種試劑(例如干擾素β)治療的反應(yīng)(例如本文所述反應(yīng))。所述方法還包括，在所述受試者對(duì)所述治療未達(dá)到預(yù)定的反應(yīng)水平、或表現(xiàn)出副反應(yīng)或不能耐受的或無法接受的毒性 時(shí)，對(duì)所述受試者施用VLA-4結(jié)合蛋白(例如那他珠單抗)，其施用量和施用時(shí)間足以導(dǎo)致治療該疾病。當(dāng)?shù)谝环N試劑(例如干擾素β)在該受試者體內(nèi)未處于治療水平時(shí),所述VLA-4結(jié)合蛋白(例如那他珠單抗)，可以施用至少I次,例如至少2，3，4，5或更多次。所述方法還可包括本文描述的任何其它實(shí)施方案。另一方面，本文涉及對(duì)治療受試者(例如人類受試者)炎性疾病(例如多發(fā)性硬化)的治療有效性進(jìn)行評(píng)價(jià)的方法。所述方法包括，選擇對(duì)第一種試劑，例如本文所述試劑(但不是VLA-4結(jié)合蛋白(例如那他珠單抗))的治療未達(dá)到預(yù)定的反應(yīng)(例如本文所述反應(yīng))的水平，或表現(xiàn)出副反應(yīng)或不能耐受的或無法接受的毒性的受試者。所述受試者是，當(dāng)?shù)谝环N試劑(例如干擾素β)在該受試者體內(nèi)未處于治療水平時(shí)，隨后接受所述VLA-4結(jié)合蛋白(例如那他珠單抗)至少I次，例如至少2，3，4，5或更多次的受試者。所述方法還包括，確定對(duì)VLA-4結(jié)合蛋白(例如那他珠單抗)治療的反應(yīng)(例如本文所述反應(yīng)，例如與該疾病或副反應(yīng)有關(guān)的參數(shù))的水平。所述方法還可包括本文描述的任何其它實(shí)施方案。另一方面，本文涉及對(duì)患有多發(fā)性硬化的受試者進(jìn)行治療的方法，所述受試者已用干擾素β治療了一段時(shí)間，例如至少3個(gè)月、6個(gè)月、9個(gè)月、或至少一年，并有以下一或多種表現(xiàn):(a)至少一次復(fù)發(fā)，(b)出現(xiàn)新的MRI增強(qiáng)型損傷，和(c)進(jìn)行性殘疾(progression of disability) (EDSS)。所述方法包括,對(duì)所述受試者施用VLA-4結(jié)合蛋白，例如VLA-4結(jié)合抗體(例如那他珠單抗)，其施用量和施用時(shí)間足以導(dǎo)致治療該疾病。當(dāng)?shù)谝环N試劑(例如干擾素β)在該受試者體內(nèi)未處于治療水平時(shí)，所述VLA-4結(jié)合蛋白，例如VLA-4結(jié)合抗體(例如那他珠單抗)，可以施用至少I次,例如至少2，3，4，5或更多次。所述方法還可包括本文描述的任何其它實(shí)施方案。另一方面，本發(fā)明的特征在于作出決定(例如醫(yī)療決定或財(cái)政決定(financialdecision))的方法。所述方法包括:生成或接受關(guān)于第一種試劑(例如干擾素β )治療受試者炎性疾病(例如多發(fā)性硬化)的反應(yīng)(例如本文所述反應(yīng))的信息，(例如接受由本文所述方法生成的反應(yīng)信息)；和利用所述信息作出決定，例如在第一行為進(jìn)程(first course of action)和第二行為進(jìn)程(second course of action)之間作出選擇。在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述決定包括，將所述信息與標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較，并根據(jù)所述信息與所述標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)系作出決定。例如，所述信息可以是表示反應(yīng)可能性(likelihood ofresponse)的值或其它術(shù)語(other term),當(dāng)所述值或其它術(shù)語具有事先選定的與所述標(biāo)準(zhǔn)的關(guān)聯(lián)時(shí)，例如當(dāng)所述值或術(shù)語在數(shù)字上大于參考標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，選擇第一行為進(jìn)程，當(dāng)所述數(shù)字小于參考標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，選擇第二行為進(jìn)程。行為進(jìn)程(course of action)可以是,例如提供或不提供服務(wù)或治療，例如VLA-4結(jié)合蛋白(例如那他珠單抗)，或支付(paying for)或不支付服務(wù)或治療(例如那他珠單抗)的全部或一部分。

在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述第一行為進(jìn)程是，建議或提供第一個(gè)醫(yī)學(xué)治療療程，例如用VLA-4結(jié)合蛋白(例如那他珠單抗)進(jìn)行治療，所述第二行為進(jìn)程是建議或決定不接受所述治療或不提供所述治療。在優(yōu)選實(shí)施方案中，第一行為進(jìn)程包括或?qū)е率跈?quán)或轉(zhuǎn)移資金來支付提供給受試者的服務(wù)或治療，例如用VLA-4結(jié)合蛋白(例如那他珠單抗)進(jìn)行的治療，第二行為進(jìn)程包括或?qū)е戮芙^支付提供給受試者的服務(wù)或治療。例如，支付或償還醫(yī)療費(fèi)用的實(shí)體(如醫(yī)院、提供護(hù)理者(caregiver)、政府實(shí)體、或保險(xiǎn)公司、或其它實(shí)體)，可以利用本文所述方法的結(jié)果，來決定當(dāng)事人(party)，例如除了所述受試患者以外的其他當(dāng)事人，是否為提供給所述患者的服務(wù)或治療支付費(fèi)用。例如，第一種實(shí)體(如保險(xiǎn)公司)，可以利用本文所述方法的結(jié)果，來決定是否要為患者付錢或代表患者，例如是否要向第三方(如出售食物或服務(wù)者、醫(yī)院、醫(yī)師、或其它提供護(hù)理者)償還提供給患者的服務(wù)或治療。定義本文中，“反應(yīng)不足(inadequate response) ”是指，根據(jù)患者或有經(jīng)驗(yàn)的臨床人員的評(píng)估，表現(xiàn)為效力不足或有不能耐受的或無法接受的毒性的反應(yīng)。效力不足可以是，不能達(dá)到用第一種試劑治療所預(yù)定的反應(yīng)水平。在MS的情況中，例如，效力不足可以是，在以下一或多個(gè)方面，不能表現(xiàn)出至少10%、20%、30%、40%、50%或更大程度的降低:一段時(shí)間內(nèi)的復(fù)發(fā)率(如，相對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)而言，例如治療前的一段時(shí)間的復(fù)發(fā)率)；復(fù)發(fā)的嚴(yán)重程度；EDDS分?jǐn)?shù)；和MR1-增強(qiáng)型損傷量、體積或新?lián)p傷；或本文所述其它參數(shù)。不能耐受的毒性可以是，針對(duì)第一種試劑的、導(dǎo)致從醫(yī)療角度必需或建議停止使用該第一種試劑的副反應(yīng)。不能耐受的或無法接受的毒性的實(shí)例可以包括，肝損傷或肝功異常(hepaticinjury or dysfunction)、嚴(yán)重變態(tài)反應(yīng)(severe allergic reaction)、嚴(yán)重抑郁(severedepression)或有自殺想法(suicidal ideation)、過敏反應(yīng)(anaphylaxis)、或注射部位壞死。本文所述方法可以減少這類毒性效應(yīng)的發(fā)生和/或嚴(yán)重程度。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述受試者患有用第一種療法難治的MS，例如，基于臨床上對(duì)該疾病特有的標(biāo)準(zhǔn)測(cè)量來評(píng)價(jià)，所述受試者接受第一種療法后未表現(xiàn)出臨床可接受的或顯著的改善，或接受第一種療法后最初表現(xiàn)改善但隨后不再有改善。例如對(duì)MS而言，針對(duì)第一種試劑治療的預(yù)定反應(yīng)水平可以是以下一或多種:a) 一段時(shí)間內(nèi)(如3個(gè)月、6個(gè)月、9個(gè)月、I年、2年、3年、4年或更長(zhǎng)時(shí)間)，復(fù)發(fā)率降低至少10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%,例如與參考值相比；b)復(fù)發(fā)的嚴(yán)重程度降低至少10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60% ；c)防止EDSS分?jǐn)?shù)增加；d)降低EDSS分?jǐn)?shù)(在例如至少6個(gè)月、I年或更長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)，降低例如0.5、1、1.5、2、2.5或3個(gè)點(diǎn)以上)；e)減少新?lián)p傷(如Gd+損傷)數(shù)，例如比新?lián)p傷參考數(shù)減少至少10%，20%, 30%, 40%, 50%, 60%。新?lián)p傷參考數(shù)可以是，例如所述受試者接受在先治療后在相似時(shí)間段以內(nèi)表現(xiàn)出的新?lián)p傷數(shù)，或者在不接受治療或接受在先治療的情況下，處于相似階段或患病嚴(yán)重程度相似的受試者預(yù)計(jì)有的平均數(shù)；f)新?lián)p傷(如Gd+損傷)出現(xiàn)率降低，例如比新?lián)p傷出現(xiàn)率參考值降低至少10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%。新?lián)p傷出現(xiàn)率參考值可以是，例如接受在先治療的所述受試者中的出現(xiàn)率，或者在不接受治療或接受在先治療的情況下，處于相似階段或患病嚴(yán)重程度相似的受試者預(yù)計(jì)有的平均出現(xiàn)率；和g)減少損傷面積(如Gd+損傷面積)的擴(kuò)大，例如與損傷面積擴(kuò)大的參考值相比。損傷面積擴(kuò)大的參考值可以是，例如接受在先治療的所述受試者中的Gd+損傷面積的擴(kuò)大，或者在不接受治療或接受在先治療的情況下，處于相似階段或患病嚴(yán)重程度相似的受試者預(yù)計(jì)有的平均擴(kuò)大。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述受試者是突破型患者(breakthrough patient),即，在用第一種療法治療具體的一段時(shí)間(如至少3個(gè)月、6個(gè)月、9個(gè)月、或至少一年)期間，有以下一或多個(gè)表現(xiàn)的患者:(a)至少一 次復(fù)發(fā)；(b)出現(xiàn)新的MRI增強(qiáng)型損傷；和(C)進(jìn)行性殘疾(EDSS)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述受試者在用第一種療法治療的一段時(shí)間內(nèi)(例如在6個(gè)月、9個(gè)月、I年、2年、3年、4年或更長(zhǎng)時(shí)間內(nèi))，復(fù)發(fā)率降低的水平不到40%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5%。在一些實(shí)施方案中，所述受試者在VLA-4結(jié)合試劑療法(如施用VLA-4結(jié)合抗體(例如那他珠單抗))開始后，在一段時(shí)間內(nèi)(例如在6個(gè)月、9個(gè)月、I年、2年、3年、4年或更長(zhǎng)時(shí)間內(nèi))，復(fù)發(fā)率降低至少40%, 45%, 50%, 60%, 65%, 70%或更多。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述受試者用第一種療法治療的一段時(shí)間內(nèi)(例如在6個(gè)月、9個(gè)月、I年、2年、3年、4年或更長(zhǎng)時(shí)間內(nèi))，新?lián)p傷(如Gd+或T2張力過強(qiáng)型(hypertense)損傷)或損傷體積減小的水平不到50%，40%, 30%, 25%, 20%, 15%, 10%, 5%。在一些實(shí)施方案中，所述受試者在VLA-4結(jié)合試劑療法(如施用VLA-4結(jié)合抗體(例如那他珠單抗))開始后，在一段時(shí)間內(nèi)(例如在6個(gè)月、9個(gè)月、I年、2年、3年、4年或更長(zhǎng)時(shí)間內(nèi))，新?lián)p傷(如Gd+或T2張力過強(qiáng)型損傷)或損傷體積可以減小至少50%，60%, 65%, 70%, 80%或更多。術(shù)語“治療”在本文中指進(jìn)行治療，且治療量、治療方式(例如用藥時(shí)間表)、和/或治療模式(如用藥途徑)導(dǎo)致可以有效改善疾病或其癥狀、或者防止或減緩疾病或其癥狀的進(jìn)展。這可以表現(xiàn)為，例如與疾病或其癥狀有關(guān)的參數(shù)的改進(jìn)，例如改進(jìn)到具有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性的程度或改進(jìn)到本領(lǐng)域技術(shù)人員可以檢測(cè)到的程度。有效量、有效方式或有效模式可以依受試者的不同而有多種情況，而且可以適應(yīng)于受試者進(jìn)行調(diào)整。防止或減緩疾病或其癥狀的進(jìn)展是指，治療可以在患病受試者或經(jīng)確診的受試者中防止或減緩疾病或其癥狀導(dǎo)致的變壞情況(deterioration)。術(shù)語“生物的”是指基于蛋白的治療試劑。在優(yōu)選實(shí)施方案中，生物試劑是至少10，20，30，40，50或100個(gè)氨基酸殘基長(zhǎng)?！癡LA-4結(jié)合試劑”是指與VLA-4整聯(lián)蛋白以小于10_6M的Kd結(jié)合的任何化合物。一例VLA-4結(jié)合試劑是VLA-4結(jié)合蛋白，例如VLA-4結(jié)合抗體，如那他珠單抗。“VLA-4拮抗劑”是指，至少部分地抑制VLA-4整聯(lián)蛋白的活性、尤其是VLA-4整聯(lián)蛋白的結(jié)合活性或信號(hào)傳遞活性(例如傳遞VLA-4介導(dǎo)的信號(hào)的能力)的任何化合物。例如，VLA-4拮抗劑可抑制VLA-4與其關(guān)聯(lián)配體(例如VCAM-1等細(xì)胞表面蛋白)、或與細(xì)胞外基質(zhì)成分(纖連蛋白(fibronectin)或骨橋蛋白(osteopontin))的結(jié)合。典型的VLA-4拮抗劑可結(jié)合VLA-4或VLA-4配體(例如VCAM-1)或纖連蛋白或骨橋蛋白等胞外基質(zhì)成分。與VLA-4結(jié)合的VLA-4拮抗劑可以與α 4亞基和/或β I亞基結(jié)合。VLA-4拮抗劑也可以與含有其它α 4亞基的整聯(lián)蛋白(如α4β7)或含有其它β 的整聯(lián)蛋白結(jié)合。VLA-4拮抗劑可以與VLA-4或與VLA-4配體以小于10_6、10_7、10_8、10_9或ΙΟ,Μ的Kd結(jié)合。本文中術(shù)語“抗體”是指，包括至少一個(gè)免疫球蛋白可變區(qū)(例如提供免疫球蛋白可變區(qū)或免疫球蛋白可變區(qū)序列的氨基酸序列)的蛋白。例如，抗體可包括重鏈(H)可變區(qū)(本文中縮寫為VH)和輕鏈(L)可變區(qū)(本文中縮寫為VL)。在另一例中，抗體包括兩個(gè)重鏈(H)可變區(qū)和兩個(gè)輕鏈(L)可變區(qū)。術(shù)語“抗體”涵蓋抗體的抗原結(jié)合片段(如單鏈抗體、Fab片段、F(ab' )2片段、Fd片段、Fv片段、和dAb片段)以及完整抗體，例如完整且未接觸過抗原的(intact)免疫球蛋白，為IgA, IgG, IgE, IgD, IgM類(及其亞類)。免疫球蛋白輕鏈可以是kappa( K )或IambdaO )型。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體為糖基化抗體?？贵w可以在抗體-依賴性細(xì)胞毒活性和/或補(bǔ)體介導(dǎo)型細(xì)胞毒活性中發(fā)揮功能，或者可以在上述一種或全部?jī)煞N活性中無功能。VH和VL區(qū)還可以進(jìn)一步細(xì)分為，具有高度變異性的區(qū)(稱“互補(bǔ)決定區(qū)”，“⑶R”)，其間間隔了相對(duì)較保守的區(qū)(稱“框架區(qū)”，F(xiàn)R)。各個(gè)FR和各個(gè)⑶R的邊界已經(jīng)清楚界定(見 Kabat, E.A.，et al.(1991) Sqeuences of Proteins of ImmunologicalInterest, Fifth Edition, US Department of Health and Human Services, NIHPublication N0.91-3242; and Chothia, C.et al.(1987) J.Mol.Biol.196:901-917)。本文采用Kabat的指定。每一個(gè)VH和VL通常由三個(gè)⑶R和四個(gè)FR組成，它們從氨基端到羧基端按照以下順序排列:FR1，CDR1，F(xiàn)R2, CDR2，F(xiàn)R3, CDR3，F(xiàn)R4?！懊庖咔虻鞍讌^(qū)”是指，免疫球蛋白分子可變區(qū)或恒定區(qū)的區(qū)。免疫球蛋白區(qū)通常包含兩個(gè)β-折疊(它們各由約7個(gè)β鏈形成)和一個(gè)保守二硫鍵(見例如A.F.Williamsand A.N.Barclayl988Ann.Rev Immunol.6:381-405).
本文中，“免疫球蛋白可變區(qū)序列”是指，可形成免疫球蛋白可變區(qū)結(jié)構(gòu)的氨基酸序列。例如，所述序列可包括天然可變區(qū)的全部或部分氨基酸序列。例如，所述序列可省略I個(gè)、2個(gè)或更多個(gè)N -端或C-端氨基酸、內(nèi)部氨基酸，可包括一或多個(gè)插入或額外的末端氨基酸，或者可包括其它改變。在一個(gè)實(shí)施方案中，含有免疫球蛋白可變區(qū)序列的多肽可以另一免疫球蛋白可變區(qū)序列結(jié)合，形成靶結(jié)合結(jié)構(gòu)(或“抗原結(jié)合位點(diǎn)”)，例如與VLA-4相互作用的結(jié)構(gòu)。
抗體的VH或VL鏈還可以包括重鏈恒定區(qū)或輕鏈恒定區(qū)的全部或部分，以分別形成免疫球蛋白重鏈或輕鏈。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體是具有兩條免疫球蛋白重鏈和兩條免疫球蛋白輕鏈的四聚體。免疫球蛋白重鏈和輕鏈可以經(jīng)二硫鍵相連。重鏈恒定區(qū)一般包括三個(gè)恒定區(qū):CH1、CH2和CH3。輕鏈恒定區(qū)一般包括CL區(qū)。重鏈和輕鏈的可變區(qū)包含與抗原相互作用的結(jié)合區(qū)?？贵w恒定區(qū)一般介導(dǎo)抗體與宿主組織或因子(包括免疫系統(tǒng)的多種細(xì)胞(如效應(yīng)細(xì)胞)和經(jīng)典補(bǔ)體系統(tǒng)的第一種成分(Clq))的結(jié)合?？贵w的一或多個(gè)區(qū)可以人化、有效人化或人源化。例如，一或多個(gè)可變區(qū)可以人化或有效人化。例如，一或多個(gè) CDR，例如 HC CDRl1HC CDR2, HC CDR3, LC CDRl，LC CDR2,和 LC⑶R3可以人化。每一輕鏈⑶R可以人化。HC⑶R3可以人化。一或多個(gè)框架區(qū)可以人化，例如此或^:的？1 1，？1 2，？1 3，和FR4。在一個(gè)實(shí)施方案中，所有框架區(qū)都已經(jīng)人化，例如源自人的體細(xì)胞，例如生成免疫球蛋白的造血細(xì)胞或非造血細(xì)胞。在一個(gè)實(shí)施方案中，人化序列都是種系(germline)序列，例如由種系核酸編碼的序列。一或多個(gè)恒定區(qū)可以人化、有效人化或人源化。在另一實(shí)施方案中，框架區(qū)(如FR1，F(xiàn)R2，和FR3—起，或FR1，F(xiàn)R2，F(xiàn)R3，和FR4 —起)的至少70，75，80, 85，90, 92，95，或98%或整個(gè)抗體可以人化、有效人化或人源化。例如，F(xiàn)Rl, FR2,和FR3 一起可以至少70，75，80，85，90，92，95，98，或99%與由人的種系節(jié)段編碼的人的序列相同?！坝行嘶泵庖咔虻鞍卓勺儏^(qū)是，含有足夠數(shù)量的人化框架氨基酸位置、因而在正常人體內(nèi)不激發(fā)免疫應(yīng)答的免疫球蛋白可變區(qū)?！坝行嘶笨贵w是，含有足夠數(shù)量的人化框架氨基酸位置、因而不在正常人體內(nèi)激發(fā)免疫應(yīng)答的抗體?！叭嘶泵庖咔虻鞍卓勺儏^(qū)是，經(jīng)過修飾導(dǎo)致修飾形式比非修飾形式在人體種激發(fā)較弱免疫應(yīng)答的免疫球蛋白可變區(qū)，例如其經(jīng)過修飾含有足夠數(shù)量的人化框架氨基酸位置、因而該免疫球蛋白可變區(qū)在正常人體內(nèi)不激發(fā)免疫應(yīng)答。對(duì)“人源化”免疫球蛋白的描述包括例如美國(guó)專利6，407，213和5，693，762。在一些情況中，人源化免疫球蛋白可以在一或多個(gè)框架氨基酸位置包含非人氨基酸?？贵w的全部或部分可以由免疫球蛋白基因或其節(jié)段編碼。人免疫球蛋白基因例如有 kappa, lambda, alpha (IgAl 和 IgA2), gamma(IgGl, IgG2, IgG3, IgG4), delta, epsilon 和mu恒定區(qū)基因，以及眾多的免疫球蛋白可變區(qū)基因。全長(zhǎng)免疫球蛋白“輕鏈”(約25Kd或214個(gè)氨基酸)在NH2-末端(約110個(gè)氨基酸)由可變區(qū)基因編碼，在COOH-末端由kappa或lambda恒定區(qū)基因編碼。同樣，全長(zhǎng)免疫球蛋白“重鏈”(約50Kd或446個(gè)氨基酸)由可變區(qū)基因(約116個(gè)氨基酸)和上述其它恒定區(qū)基因之一，例如gamma(編碼約330個(gè)氨基酸)編碼。術(shù)語全長(zhǎng)抗體的“抗原結(jié)合片段”是指，全長(zhǎng)抗體的一或多個(gè)保留與目標(biāo)靶(例如VLA-4)特異性結(jié)合的能力的片段。由術(shù)語全長(zhǎng)抗體的“抗原結(jié)合片段”所涵蓋的結(jié)合片段的實(shí)例包括:(i)Fab片段，是單價(jià)片段，由VL，VH，CL和CHl區(qū)組成；(ii)F(ab, )2片段，是二價(jià)片段，包括兩個(gè)經(jīng)二硫橋在鉸鏈區(qū)相連的Fab片段；(iii)Fd片段，由VH和CHl區(qū)組成；(iv) Fv片段，由抗體單臂的VL和VH區(qū)組成；(V) dAb片段(Ward et al.，(1989)Nature341:544-546)，由VH區(qū)組成；和(vi)分離的保留功能的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)。此外，盡管Fv片段的VL和VH區(qū)分別由不同基因編碼，但可以利用重組方法將它們用合成的連接子連接，使它們能夠形成單鏈蛋白，從而其中的VL和VH區(qū)配對(duì)形成已知為單鏈Fv (scFv)的單價(jià)分子。參見，例如 Bird et al.(1988) Science242:423-426;Huston et al.(1988)Proc.Natl.Acad.Sc1.USA85:5879-5883。發(fā)明詳述多發(fā)性硬化(MS)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，特征是炎癥以及損失髓磷脂鞘。此前的研究顯示，用干擾素β治療多發(fā)性硬化后，外周血淋巴細(xì)胞表面的VLA-4表達(dá)被下調(diào)，提示抗-VLA-4抗體和干擾素β作用于同一途徑(Calabresietal.,Neurology49:1111-1116, 1997)?，F(xiàn)在發(fā)現(xiàn)，對(duì)于曾接受MS療法(優(yōu)選干擾素療法)、并證實(shí)對(duì)該療法反應(yīng)不足的患者,或者是最初證實(shí)對(duì)該療法有足夠的反應(yīng)但后來反應(yīng)不足的患者，VLA-4結(jié)合蛋白(如封閉抗體)可以非常有效地改進(jìn)他們的狀況。在先的治療本文所述方法 涉及事先曾接受炎性疾病(例如MS)治療(例如試劑)的受試者。優(yōu)選在先治療試劑是生物試劑，例如重組干擾素β。這類在先治療的非限制性實(shí)例包括:.干擾素，例如人干擾素β -la(如AVONEX 或Rebif ’(g))以及干擾素β -lb(BETASER0N ;在位置 17 有取代的人干擾素 β ;Berlex/Chiron);.乙酸格拉太咪爾(也稱共聚物(Copolymer) I, Cop-1; COPAXONE ; TevaPharmaceutical Industries, Inc.);.延胡索酸,例如二甲基延胡索酸(如Fumaderm );.Rituxan(J)(利妥昔單抗(rituximab))或另一種抗-⑶20抗體,例如競(jìng)爭(zhēng)或結(jié)合利妥昔單抗的重疊表位的抗體；.米托蒽醌(mixtoxantrone) (N0VANTR0NE Lederle);.化療劑，例如克拉利平(clabribine，LEUSTATIN )，硫唑嘌呤(MURAN )，環(huán)磷酰胺(CYT0XAN )，環(huán)孢菌素-A,氨甲蝶呤，4-氨基卩比唳，以及替扎尼定(tizanidine);.皮質(zhì)類固醇，例如甲基強(qiáng)的松龍(MEDR0NE , Pfizer)，強(qiáng)的松； 免疫球蛋白，例如Rituxan (利妥昔單抗)；CTLA4Ig; alemtuzumab (阿侖單抗)(MabCAMPATH )或daclizumab (達(dá)利珠單抗)(結(jié)合0)25的抗體);.抑制素；.免疫球蛋白G靜脈注射劑(IgGIV)；.硫唑嘌呤；.TNF 拮抗劑。乙酸格拉太咪爾是由氨基酸隨機(jī)鏈構(gòu)成的蛋白-谷氨酸、賴氨酸、丙氨酸和酪氨酸(因此稱GLATiramer)。它可以利用N-羧基氨基酸酐，按照大約5份丙氨酸、3份賴氨酸、
1.5份谷氨酸和I份酪氨酸的比例，在溶液中合成。其它在先試劑包括其它人細(xì)胞因子或生長(zhǎng)因子的抗體或拮抗劑，所述人細(xì)胞因子或生長(zhǎng)因子例如 TNF, LT, IL-1, IL-2, IL-6, IL-7, IL-8, IL-12IL-15，IL-16, IL-18, EMAP-1I,GM-CSF, FGF,和 PDGF。第二種試劑的其它實(shí)例包括，抗 CD2, CD3, CD4, CD8, CD25, CD28, CD30，⑶40，⑶45，⑶69，⑶80，⑶86，⑶90等細(xì)胞表面分子或其配體的抗體。例如，達(dá)利珠單抗是可以改進(jìn)多發(fā)性硬化狀況的抗-CD25抗體。其它抗體實(shí)例包括，提供本文所述試劑的活性的抗體，例如抗(engage)干擾素受體，例如干擾素β受體的抗體。其它在先試劑實(shí)例包括:FK506，雷帕霉素(rapamycin)，霉酚酸酯(mycophenolate mofetil),來氟洛米(Ieflunomide),非類固醇抗炎藥(NSAID),如磷酸二酯酶抑制劑，腺苷激動(dòng)劑，抗血栓形成試劑，補(bǔ)體抑制劑，腎上腺素能(adrenergic)試齊U，干擾本文所述促炎細(xì)胞因子的信號(hào)傳遞的試劑，IL-1 β轉(zhuǎn)化酶抑制劑(如Vx740)，抗-P7，PSGL，TACE抑制劑，T-細(xì)胞信號(hào)傳遞抑制劑如激酶抑制劑，金屬蛋白酶(metalloproteinase)抑制劑,柳氮磺胺卩比唳(sulfasalazine), azathloprine (硫唑嘌呤)，6_ 巰基嘌呤，血管緊張素(angiotensin)轉(zhuǎn)化酶抑制劑，可溶性細(xì)胞因子受體及其衍生物，如本文所述，抗炎細(xì)胞因子(如IL-4，IL-10, IL-13和TGF)。在一些實(shí)施方案中，在先試劑已用于治療MS的一或多種癥狀或副作用。這類試劑包括，例如金剛燒胺(amantadine)、巴氯芬(baclofen)、帕帕非林(papaverine)、敏可靜(meclizine)、輕嗪(hydroxyzine)、橫胺甲卩惡唑(sulfamethoxazole)、環(huán)丙沙星(ciprofloxacin)、多庫(kù)酯(docusate)、匹莫林(pemoline)、達(dá)者侖(dantrolene)、去氨加壓素(desmopressin)、地塞米松(dexamethasone)、托特羅定(tolterodine)、苯妥英(phenytoin)、奧昔布寧(oxybutynin)、比沙可定(bisacodyl)、萬拉法新(venlafaxine)、阿米替林(amitriptyline)、烏洛托品(methenamine)、氯硝西泮(clonazepam)、帕司煙肼(isoniazid)、伐地那非(vardenafil)、呋喃妥因(nitrofurantoin)、歐車前親水粘膠(psyllium hydrophilic mucilloid)、前列地爾(alprostadil)、加巴噴丁 (gabapentin)、去甲普林(nortriptyline)、帕羅西汀(paroxetine)、溴丙胺太林(propanthelinebromide)、莫達(dá) 非尼(modafinil)、氟西汀(fluoxetine)、非那卩比 P定(phenazopyridine)、甲基強(qiáng)的松龍、卡馬西平(carbamazepine)、丙咪嗪(imipramine)、地西泮(diazepam)、西地那非(sildenafil)、丁氨苯丙酮(bupropion)、和舍曲林(sertraline)。多種小分子在先試劑具有150-5000道爾頓的分子量。TNF拮抗劑的例子包括，嵌合的、人源化的、人化的或體外生成的抗TNF (如人TNF α )抗體(或其抗原結(jié)合片段)，諸如D2E7 (人TNF α抗體，美國(guó)專利 6，258，562;BASF), CDP-571/CDP-870/BAY-10-3356(人源化抗-TNFα 抗體；Celltech/Pharmacia)，cA2(嵌合抗-TNFa 抗體；REMICADE , Centocor);抗-TNF抗體片段(如CPD870) ; TNF受體可溶性片段，例如p55或p75人TNF受體或其衍生物，例如 75kdTNFR-1gG(75kD TNF 受體-1gG 融合蛋白，ENBREL ; Immunex;參見，例如 Arthritis&Rheumatism(1994)Vol.37, S295;J.1nvest.Med.(1996)Vol.44, 235A), p55kdTNFR-1gG (55kD TNF 受體-1gG 融合蛋白(LENERCEPT ));酶拮抗劑，例如TNFa轉(zhuǎn)化酶(TACE)抑制劑(如α-磺酰異輕|虧酸(alpha-sulfonyl hydroxamicacid)衍生物，W001/55112，以及N-羥基甲酰胺TACE抑制劑GW3333, -005，或-022);以及TNF-bp/s-TNFR(可溶性 TNF 結(jié)合蛋白；參見，例如 Arthritis&Rheumatism(1996) Vol.39,N0.9 (supplement), S284;Amer.J.Physiol.-Heart and Circulatory Physiology (1995)Vol.268, pp.37-42)。在對(duì)干擾素β療法反應(yīng)不足的患者中進(jìn)行VLA-4阻斷療法(如施用VLA-4結(jié)合抗體如那他珠單抗)的安全性和有效性表現(xiàn)表明，VLA-4阻斷療法在對(duì)其它療法(如其它生物療法)反應(yīng)不足的患者中進(jìn)行治療也是有效的。那他珠單抗及其它VLA-4結(jié)合抗體那他珠單抗是α 4整聯(lián)蛋白結(jié)合抗體，它抑制白細(xì)胞從血液遷移到中樞神經(jīng)系統(tǒng)。那他珠單抗與活化T細(xì)胞和其它單核白細(xì)胞表面的VLA-4結(jié)合。它可以破壞T細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞之間的粘附，從而組織單核白細(xì)胞跨過內(nèi)皮、進(jìn)入實(shí)質(zhì)(parenchyma)。結(jié)果使促炎細(xì)胞因子水平也下降。那他珠單抗可以減少?gòu)?fù)發(fā)弛張型多發(fā)性硬化和復(fù)發(fā)性繼發(fā)-漸進(jìn)型多發(fā)性硬化患者的腦損傷數(shù)和臨床復(fù)發(fā)次數(shù)。本文所述結(jié)果表明，那他珠單抗可以安全地施用于已接受在先的干擾素(例如干擾素β，如IFN-beta-la)治療的多發(fā)性硬化患者。那他珠單抗在對(duì)干擾素β療法反應(yīng)不足的患者中表現(xiàn)出意想不到的效力。那他珠單抗及相關(guān)VLA-4結(jié)合抗體在例如美國(guó)專利5，840, 299中描述。單克隆抗體21.6和ΗΡ1/2是結(jié)合VLA-4的鼠單克隆抗體的例子。那他珠單抗是鼠單克隆抗體
21.6的人源化形式(參見，例如美國(guó)專利5，840，299)。另有文獻(xiàn)描述了 ΗΡ1/2的人源化形式(參見，例如美國(guó)專利6，602，503)。其它數(shù)種結(jié)合VLA-4的單克隆抗體，如ΗΡ2/1、ΗΡ2/4、L25 和 P4C2，可參見例如美國(guó)專利 6，602，503; Sanchez-Madrid et al.，1986Eur.J.1mmunol., 16:1343-1349;Hemler et al., 1987J.Biol.Chem.2:11478-11485;Issekutzand ffykretowicz, 1991, J.Tmmunol., 147:109(TA~2mab);Pulido et al., 1991J.Biol.Chem.，266(16):10241-10245;美國(guó)專利 5，888，507。一些VLA-4結(jié)合抗體識(shí)別α 4亞基上參與結(jié)合關(guān)聯(lián)配體(如VCAM-1或纖連蛋白)的表位。多個(gè)這種抗體抑制VLA-4與關(guān)聯(lián)配體(如VCAM-1和纖連蛋白)的結(jié)合。一些有用的VLA-4結(jié)合抗體可以與細(xì)胞(例如淋巴細(xì)胞)表面VLA-4發(fā)生相互作用，但不引起細(xì)胞聚集。而另一些VLA-4結(jié)合抗體被發(fā)現(xiàn)引起這類聚集。ΗΡ1/2不引起細(xì)胞聚集。ΗΡ1/2單克隆抗體(Sanchez-Madrid et al.，1986)具有很高的活性，它阻斷VLA-4與VCAMl和纖連蛋白兩者的相互作用，并對(duì)VLA-4表面的表位B具有特異性。該抗體及其它B表位特異性抗體(如BI或B2表位結(jié)合抗體；Pulido et al.，1991，出處同上)代表了一類可用于本文所述方法中的VLA-4結(jié)合抗體。競(jìng)爭(zhēng)與VLA-4結(jié)合抗體(例如那他珠單抗)的結(jié)合的抗體也可以用于本文所述方法中。一例VLA-4結(jié)合抗體具有本文所述具體抗體的一或多個(gè)⑶R，例如全部三個(gè)HC⑶R和/或全部三個(gè)LC⑶R，或具有與這種抗體(例如那他珠單抗)總體上至少80，85，90，92，94，95，96，97，98，99%相同的CDR0在一個(gè)實(shí)施方案中，Hl和H2超變環(huán)具有與本文所述抗體的超變環(huán)相同的典型結(jié)構(gòu)(canonical structure)。在一個(gè)實(shí)施方案中，LI和L2超變環(huán)具有與本文所述抗體的超變環(huán)相同的典型結(jié)構(gòu)。在一個(gè)實(shí)施方案中，HC和/或LC可變區(qū)的氨基酸序列至少70，80，85，90，92，95，97，98，99，或100%與本文所述抗體(例如那他珠單抗)的HC和/或LC可變區(qū)的氨基酸序列相同。HC和/或LC可變區(qū)的氨基酸序列可以有至少一個(gè)氨基酸、但最多不超過10、8、6、5、4、3、或2個(gè)氨基酸不同于本文所述抗體(例如那他珠單抗)的相應(yīng)序列。例如，這種差別可以主要或全部位于框架區(qū)。HC和LC可變區(qū)的氨基酸序列，可以由在嚴(yán)格條件下與本文所述核酸序列雜交的核酸序列編碼，或者由編碼本文所述可變區(qū)或氨基酸序列的核酸序列編碼。在一個(gè)實(shí)施方案中，HC和/或LC可變區(qū)的一或多個(gè)框架區(qū)(如FR1，F(xiàn)R2, FR3和/或FR4)的氨基酸序列有至少70，80，85，90，92，95，97，98，99，或100%與本文所述抗體的HC和LC可變區(qū)的相應(yīng)框架區(qū)相同。在一個(gè)實(shí)施方案中，一或多個(gè)重鏈或輕鏈框架區(qū)(如HC FR1，F(xiàn)R2和FR3)有至少70，80，85，90，95，96，97，98，或100%與人種系抗體的相應(yīng)框架區(qū)序列相同。兩個(gè)序列之間的“同源性”或“序列同一性”(這兩個(gè)術(shù)語在本文中可互換使用)如下計(jì)算。對(duì)序列按照最佳比較的目的進(jìn)行比對(duì)(如，為了進(jìn)行最佳比對(duì)，可以在兩個(gè)氨基酸序列或核酸序列之一或兩者中引入空隙；為了進(jìn)行比較，可以忽略非同源序列)。最佳比對(duì)用GCG軟件包中的GAP程序評(píng)出的最佳分值來確定，在該GAP程序中，使用Blossum62評(píng)分矩陣，空隙罰分為12,空隙延伸罰分為4,移碼空隙罰分(frameshift gap penalty)為5。然后比較相應(yīng)氨基酸位置或核苷酸位置的氨基酸殘基或核苷酸。當(dāng)?shù)谝粋€(gè)序列中的一個(gè)位置與第二個(gè)序列中的相應(yīng)位置被相同的氨基酸殘基或核苷酸占據(jù)時(shí)，這兩個(gè)分子在該位置是相同的(本文中，氨基酸或核酸“同一性”等同于氨基酸或核酸“同源性”)。兩個(gè)序列之間的同一性百分比是這兩 個(gè)序列所共有的相同位置的數(shù)量的函數(shù)。本文中術(shù)語“在嚴(yán)格條件下雜交”是指雜交和洗滌條件。雜交反應(yīng)可參照CurrentProtocols in Molecular Biology, John ffiley&Sons, N.Y.(1989)，6.3.1-6.3.6進(jìn)行，其全文引入本文作參考。該文獻(xiàn)中描述了水性(aqueous)和非水性(nonaqueous)的方法,它們都可以被采用。高度嚴(yán)格雜交條件包括，在6X SSC、約45°C雜交，然后在0.2X SSC、0.1%SDS、65°C洗一或多次，或者采用基本相似的條件?？?體牛.成(Antibody Generation)與VLA-4結(jié)合的抗體可以通過對(duì)例如動(dòng)物免疫而生成，或通過噬菌體展示等體外方法生成。VLA-4的全部或一部分可以用作免疫原。例如，可以用α 4亞基的胞外區(qū)作免疫原。在一個(gè)實(shí)施方案中，經(jīng)免疫的動(dòng)物含有產(chǎn)生免疫球蛋白的細(xì)胞，這些細(xì)胞具有天然的、人化的或部分人化的免疫球蛋白基因座。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述非人動(dòng)物具有人免疫球蛋白基因的至少一部分。例如，可以用人Ig基因座的大片段對(duì)抗體生成有缺陷的小鼠品系進(jìn)行改造?？梢杂秒s交瘤技術(shù)從具有所需特異性的基因生成并篩選出抗原特異性單克隆抗體。參見，例如 XenoMouse ，Green et al., Nature Genetics7:13-21 (1994)，US2003-0070185,美國(guó)專利 5，789，650，以及 W096/34096。還可以產(chǎn)生抗VLA-4的非人抗體，例如嚙齒類抗體?？梢詫⑦@種非人抗體人源化，例如參見美國(guó)專利6，602，503，EP239400,美國(guó)專利5，693，761，和美國(guó)專利6，407，213。EP239400 (Winter et al.)描述了通過將一個(gè)物種的抗體的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)用另一物種的CDR取代，從而改變(在指定的可變區(qū)改變)抗體的方法。CDR-取代型抗體比真正的嵌合抗體較少激發(fā)人的免疫應(yīng)答，因?yàn)镃DR-取代型抗體中的非人成分很少(Riechmann et al., 1988, Nature332, 323-327;Verhoeyen etal.，1988，Science239, 1534-1536)。通常利用重組核酸技術(shù)，將鼠抗體的⑶R取代為人抗體的相應(yīng)區(qū)，產(chǎn)生編碼所需取代型抗體的序列?？梢蕴砑泳哂兴瑾?dú)特型的人恒定區(qū)基因節(jié)段(通常是CH的gamma I和CL的kappa)，并使人源化的重鏈基因和輕鏈基因在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中一起表達(dá)，從而產(chǎn)生可溶性人源化抗體。Queen et al.(Proc.Natl.Acad.Sc1.U.S.A.86:10029-33, 1989)和 W090/07861描述了一種方法，其包括，通過利用計(jì)算機(jī)分析與原始鼠抗體的V區(qū)框架的最佳蛋白序列同源性，來選擇人V區(qū)框架區(qū)，并建立鼠V區(qū)的三級(jí)結(jié)構(gòu)，從而顯示出很可能與鼠CDR相互作用的框架氨基酸殘基。然后將這些鼠氨基酸殘基置于同源人框架之上。也參美國(guó)專利 5, 693, 762; 5, 693, 761; 5, 585, 089;和 5,530,101。Tempest etal.，1991，Biotechnology9:266-271利用分別源自NEWM和REI重鏈和輕鏈的V區(qū)框架作為標(biāo)準(zhǔn)，在不引進(jìn)鼠殘基的情況下，進(jìn)行⑶R-移植。用Tempest et al.方法構(gòu)建基于NEWM和REI的人源化抗體的一個(gè)好處在于，NEWM和REI的可變區(qū)的三維結(jié)構(gòu)已通過X-線晶體成像技術(shù)弄清楚了，因而可以針對(duì)CDR和V區(qū)框架殘基之間的特異性相互作用建立模型。非人抗體可以經(jīng)過修飾而包括插入人免疫球蛋白序列的取代，例如在具體位置的共有的人氨基酸殘基，例如以下一或多個(gè)(優(yōu)選至少5，10，12，或全部)位置:(在輕鏈可變區(qū)的 FR 中)4L, 35L, 36L, 38L, 43L, 44L, 58L, 46L, 62L, 63L, 64L, 65L, 66L, 67L, 68L, 69L, 70L, 71L, 73L, 85L, 87L, 98L,和 / 或(在重鏈可變區(qū)的 FR 中)2H, 4H, 24H, 36H, 37H, 39H, 43H, 45H, 49H, 58H, 60H, 67H, 68H, 69H, 70H, 73H, 74H, 75H, 78H, 91H, 92H, 93H,和 / 或 103H(遵循 Kabat編號(hào))。參見，例如美國(guó)專利6，407，213。與VLA-4結(jié)合的完全的人單克隆抗體可以利用例如體外刺激(invitro-primed)的人脾細(xì)胞來制備，參見Boerner et al.，1991，J.1mmunol.，147，86-95。它們可以通過所有組分克隆(repertoire cloning)來制備，參見 Persson et al., 1991, Proc.Nat.Acad.Sc1.USA, 88:2432-2436 或 Huang and Stollar, 1991, J.1mmunol.Methodsl41, 227-236;以及美國(guó)專利5，798，230。大型非致敏人噬菌體展示文庫(kù)也可以用于分離高親和力抗體，將它們研發(fā)為人類治療劑，這可以利用標(biāo)準(zhǔn)噬菌體技術(shù)(參見，例如Vaughan etal, 1996;Hoogenboom et al.(1998)Immunotechnology4:1-20;Hoogenboom et al.(2000)Immunol Today 2:371-8;US2003-0232333)?？?體制備(Antibody Production)
抗體可以在原核細(xì)胞和真核細(xì)胞中產(chǎn)生。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體(如scFv)在畢赤酵母(Pichia)(參見，例如Powers et al.(2001) J Tmmunol Methods.251:123-35)、漢遜酵母(Hanseula)或糖酵母(Saccharomyces)等酵母細(xì)胞中表達(dá)。在一個(gè)實(shí)施方案中，抗體，尤其是全長(zhǎng)抗體，例如IgG，在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中表達(dá)。用于重組表達(dá)的哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞例如有，中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CH0細(xì)胞)(包括dhfr-CHO細(xì)胞，見Urlaub and Chasin (1980) Proc.Natl.Acad.Sc1.USA77:4216-4220，使用 DHFR選擇標(biāo)記，例如見 Kaufman and Sharp (1982) Mol.Biol.159:601-621)、淋巴細(xì)胞系例如 NSO 骨髓瘤細(xì)胞和SP2細(xì)胞、COS細(xì)胞、K562、以及轉(zhuǎn)基因動(dòng)物(例如轉(zhuǎn)基因哺乳動(dòng)物)的細(xì)胞。例如，所述細(xì)胞是哺乳動(dòng)物上皮細(xì)胞。重組表達(dá)載體除了攜帶編碼免疫球蛋白區(qū)的核酸序列，還可以攜帶其它核酸序列，如調(diào)節(jié)該載體在宿主細(xì)胞中的復(fù)制的序列(如復(fù)制起點(diǎn))和選擇標(biāo)記基因。選擇標(biāo)記基因有利于選出引入了所述載體的宿主細(xì)胞(參見，例如美國(guó)專利4，399，216，4，634，665和5，179，017)。選擇標(biāo)記基因例如有，二氫葉酸還原酶(DHFR)基因(其利用氨甲蝶呤選擇/擴(kuò)增dhfr-宿主細(xì)胞)和neo基因(其用于G418篩選)。在一例抗體(如全長(zhǎng)抗體或其抗原結(jié)合部分)重組表達(dá)系統(tǒng)中，將編碼抗體重鏈和抗體輕鏈兩者的重組表達(dá)載體，通過磷酸鈣介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染，引入dhfr-CHO細(xì)胞。在該重組表達(dá)載體中，抗體的重鏈和輕鏈基因各自與增強(qiáng)子/啟動(dòng)子調(diào)節(jié)元件(如源自SV40、CMV、腺病毒等，諸如CMV增強(qiáng)子/AdMLP啟動(dòng)子調(diào)節(jié)元件或SV40增強(qiáng)子/AdMLP啟動(dòng)子調(diào)節(jié)元件)可操作相連，以便驅(qū)動(dòng)所述基因的高水平轉(zhuǎn)錄。所述重組表達(dá)載體還可以攜帶DHFR基因，其允許用氨甲蝶呤選擇/擴(kuò)增轉(zhuǎn)染了所述載體的dhfr-宿主細(xì)胞。對(duì)選出的轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，使之表達(dá)抗體重鏈和輕鏈，并從培養(yǎng)基中回收完整抗體。用標(biāo)準(zhǔn)分子生物學(xué)技術(shù)制備所述重組表達(dá)載體，來轉(zhuǎn)染宿主細(xì)胞，選出轉(zhuǎn)化體，培養(yǎng)宿主細(xì)胞，并從培養(yǎng)基中回收抗體。例如，一些抗體可以利用蛋白A或蛋白G通過親和層析進(jìn)行分離?？贵w還可以包含修飾，例如改變Fe功能的修飾，從而例如減弱或消除與Fe受體和/或與Clq的相互作用。例如，人IgGl恒定區(qū)可以突變一或多個(gè)殘基，例如殘基234和237的一或多個(gè)，編號(hào)例如見美國(guó)專利5，648，260。其它修飾例子可參見美國(guó)專利5，648，260。對(duì)于一些含F(xiàn)e區(qū)的抗體，可以設(shè)計(jì)抗體制備系統(tǒng)，來合成含糖基化Fe區(qū)的抗體。例如，IgG分子的Fe區(qū)在CH2區(qū)的天冬酰氨297處糖基化。該天冬酰氨是用雙觸角型寡糖(biantennary-type oligosaccharide)進(jìn)行修飾的位置。這種糖基化參與Fe受體和補(bǔ)體 Clq 所介導(dǎo)的效應(yīng)器功能(Burton and Woof (1992) Adv.1mmunol.51:1-84; Jefferis etal.(1998) Immunol.Rev.163:59-76)。Fe區(qū)可以在哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)中產(chǎn)生，從而使對(duì)應(yīng)于天冬酰氨297的殘基適當(dāng)糖基化。Fe區(qū)也可以包含其它的真核細(xì)胞翻譯后修飾。抗體也可以由轉(zhuǎn)基因動(dòng)物產(chǎn)生。例如，美國(guó)專利5，849，992描述了在哺乳動(dòng)物乳腺中表達(dá)抗體的方法 。構(gòu)建轉(zhuǎn)基因，使其含有乳特異性啟動(dòng)子和編碼目標(biāo)抗體(如本文所述抗體)的核酸序列，以及分泌所需的信號(hào)序列。由這類轉(zhuǎn)基因哺乳動(dòng)物中的雌性動(dòng)物產(chǎn)出的乳汁含有分泌至其中的目標(biāo)抗體，例如本文所述抗體。所述抗體可以從乳汁中純化出來，或在一些應(yīng)用中，不經(jīng)純化而直接使用?？贵w還可以用例如改進(jìn)其在循環(huán)(如血液、血清、淋巴)、支氣管肺泡灌洗液或其它組織中的穩(wěn)定性和/或滯留時(shí)間的組分(moiety)進(jìn)行修飾，所述改進(jìn)例如是改進(jìn)至少1.5、2，5、10、或 50 倍。例如，VLA-4結(jié)合抗體可以與聚合物結(jié)合，所述聚合物例如基本上無抗原性的聚合物，如聚環(huán)氧燒烴(polyalkylene oxide)或聚環(huán)氧乙燒(polyethylene oxide)。合適的聚合物分子量可以差別很大?？梢圆捎梅肿恿科骄s200-約35，000道爾頓(或約1，000_約15，000、以及2，000-約12，500)的聚合物。例如，VLA-4結(jié)合抗體可以與水溶性聚合物偶聯(lián)，所述聚合物例如親水聚乙烯聚合物，如聚乙烯醇或聚乙烯吡咯烷酮。這類聚合物的非限制性例子有，聚環(huán)氧烷烴均聚物如聚乙二醇(PEG)或聚丙二醇、聚氧乙烯化多元醇(polyoxyethylenated polyols)、它們的共聚物和嵌段共聚物，只要所述嵌段共聚物維持水溶性即可。其它可用的聚合物包括，聚氧化烯(polyoxyalkylenes)如聚氧化乙烯(polyoxyethylene)、聚氧化丙烯(polyoxypropylene)、以及聚氧化乙烯和聚氧化丙烯的嵌段共聚物(Pluronics);聚甲基丙烯酸酯(polymethacrylates);丙烯酸共聚物(carbomer);含有以下單糖的分支或非分支多糖:D_甘露糖、D-及L-半乳糖、巖藻糖(fucose)、果糖、D-木糖(xylose)、L-阿拉伯糖、D-葡糖醒酸(glucuronic acid)、唾液酸(sialic acid)、D_半乳糖醒酸(galacturonicacid)、D-甘露糖醒酸(mannuronic acid)(如聚甘露糖醒酸或藻酸(alginic acid))、D_葡糖胺(glucosamine)、D-半乳糖胺(galactosamine)、D-葡萄糖和神經(jīng)氨酸(neuraminicacid)包括同多糖(homopolysaccharide)和雜多糖(heteropolysaccharide)如乳糖、支鏈淀粉(amylopectin)、淀粉(starch)、輕乙基淀粉、直鏈淀粉(amylose)、硫酸葡聚糖(dextrane sulfate)、葡聚糖(dextran)、糊精(dextrin S)、糖原(glycogen)、或酸性粘多糖(acid mucopolysaccharide)的多糖亞基，如透明質(zhì)酸(hyaluronic acid);糖醇聚合物如聚山梨糖醇(polysorbitol)和聚甘露糖醇(po lymanni to I);肝素(heparin)或heparon。藥物纟目合物VLA-4結(jié)合試劑，如VLA-4結(jié)合抗體(如那他珠單抗)可以配制成藥物組合物。藥物組合物通常含有可藥用載體。本文中“可藥用載體”包括所有任何溶劑、分散介質(zhì)(dispersion media)、包衣(coating)、抗細(xì)菌劑和抗真菌劑、等滲劑和吸收延遲劑、以及其它生理相容性試劑?！翱伤幱名}”是指，保留本發(fā)明化合物的所需活性且不引起任何不良毒性的鹽(參見，例如 Berge，S.M.，et al.(1977) J.Pharm.Sc1.66:1-19)。這樣的鹽例如有，酸加成鹽和堿加成鹽。酸加成鹽包括，由無毒性無機(jī)酸和無毒性有機(jī)酸衍生的鹽，所述無機(jī)酸如鹽酸、硝酸、磷酸、硫酸(sulfuric acid)、氫溴酸、氫碘酸等，所述有機(jī)酸如脂肪族一羧酸和二羧酸(aliphatic mono-and dicarboxylic acid)、苯基取代的鏈燒酸(phenyl-substituted alkanoic acid)、輕基鏈燒酸、芳香酸(aromatic acid)、脂肪族和芳香族磺酸(aliphatic and aromatic sulfonic acid)等。堿加成鹽包括，由堿土金屬和無毒性有機(jī)胺衍生的鹽，所述堿土金屬如鈉、鉀、鎂、鈣等，所述有機(jī)胺如N，N' -二節(jié)基乙二胺(dibenzylethylenediamine)、N_ 甲基還原葡糖胺(methylglucamine)、氯普魯卡因(chloroprocaine)、膽喊(choline)、二乙醇胺(diethanolamine)、乙二胺(ethylenediamine),普魯卡因(procaine)等。

那他珠單抗及本文所述其它試劑可按標(biāo)準(zhǔn)方法配制。藥物配制使本領(lǐng)域很成熟的技術(shù)，可參見 Gennaro (ed.)，Remington:The Science and Practice ofPharmacy, 20th ed.,Lippincott, ffilliams&ffilkins(2000)(ISBN:0683306472) ; Ansel etal., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7th Ed.., Lippincottffilliams&ffilkins Publishers (1999)(ISBN:0683305727);and Kibbe(ed.), Handbook ofPharmaceutical Excipients American Pharmaceutical Association, 3rd ed.(2000)(ISBN:091733096X)。在一個(gè)實(shí)施方案中，那他珠單抗或另一種試劑(如另一種抗體)可以與賦形劑物質(zhì)一起配制，所述賦形劑物質(zhì)如氯化鈉、七水磷酸氫二鈉(sodium dibasic phosphateheptahydrate)、憐酸二氫鈉(sodium monobasic phosphate)、以及 polysorbate80。它可以是例如緩沖溶液中約20mg/ml的濃度，并可以貯存在2_8°C。那他珠單抗可以按產(chǎn)品標(biāo)簽所注進(jìn)行配制。藥物組合物還可以是多種其它形式。例如,液體、半固體及固體劑型,如溶液(如注射液和灌注液)、分散體(dispersion)或懸浮液(suspension)、片劑、丸劑、粉劑、脂質(zhì)體和栓劑。優(yōu)選形式可以取決于用藥模式和治療目的。通常，本文所述試劑的組合物采用注射液或灌注液的形式。所述組合物可以經(jīng)非胃腸道途徑施用(如靜脈、皮下、腹腔、或肌肉注射)。術(shù)語“非胃腸道施用”在本文中是指，除了腸道使用和局部表面使用以外的施用模式，通常經(jīng)注射而施用，包括但不限于經(jīng)以下模式注射和輸注:靜脈內(nèi)(intravenous)、肌肉內(nèi)(intramuscular)、動(dòng)脈內(nèi)(intraarterial)、鞘內(nèi)(intrathecal)、囊內(nèi)(intracapsular)、眼眶內(nèi)(intraorbital)、心內(nèi)(intracardiac)、皮內(nèi)(intradermal)、腹腔(intraperitoneal)、經(jīng)氣管(transtracheal)、皮下(subcutaneous)、表皮下(subcuticular)、關(guān)節(jié)內(nèi)(intraarticular)、被膜下(subcapsular)、蛛網(wǎng)膜下(subarachnoid)、脊柱內(nèi)(intraspinal)、硬膜外(epidural)以及胸骨內(nèi)(intrasternal)。藥物組合物通常必須是無菌的，且在制備和貯存條件下保持穩(wěn)定。也可以對(duì)藥物組合物進(jìn)行測(cè)試，以確保它符合用藥規(guī)定和行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)?？梢詫⒔M合物配制成溶液、微乳液、分散體、脂質(zhì)體或其它適于藥物高濃度的有序結(jié)構(gòu)。將需要量的本文所述試劑，與所需的一或多種上文所列的成分一起，摻入合適的溶劑中，再過濾除菌，可以 制得無菌注射液。通常，將本文所述試劑和上文所列的所需其它成分一起，摻入含有基本分散介質(zhì)的無菌媒介物(vehicle)中，可制得分散體。在制備無菌注射液所用的無菌粉末的情況下，優(yōu)選的制備方法是真空干燥和凍干，產(chǎn)生本文所述試劑的粉末外加任何來自事先經(jīng)過過濾除菌的本文所述試劑的溶液的所需成分。溶液的適當(dāng)流動(dòng)性(proper fluidity)可以通過以下方法維持,例如，利用卵磷脂之類的包衣、在分散體的情況下維持所需的粒徑(particle size)、以及利用表明活性劑。注射液通過在組合物中包含硬脂酸鹽和明膠之類的延遲吸收劑，可延長(zhǎng)吸收時(shí)間。

MMVLA-4結(jié)合抗體可以經(jīng)多種方法對(duì)受試者(例如人類受試者)用藥。在多種應(yīng)用中，用藥途徑是以下之一:靜脈注射或輸注、皮下注射、或肌肉注射。VLA-4結(jié)合抗體(如那他珠單抗)可以按固定劑量施用，或者按mg/kg劑量施用，但優(yōu)選按固定劑量施用。所述抗體可以靜脈(IV)或皮下(SC)施用。所述抗體(例如那他珠單抗)通常按50_1000mg IV，例如100_600mg IV，例如約300mg IV的固定單位劑量(fixed unit dose)施用?？梢悦?周施用一個(gè)單位劑量,或采用更高或更低的頻率，例如每2周一次或每周一次。當(dāng)皮下施用時(shí)，所述抗體通常按50-100mgSC(如75mg)的劑量施用例如至少一周一次(如一周兩次)。也可以按l_10mg/kg(例如約
6.0, 4.0, 3.0, 2.0, 1.0mg/kg)的劑量以快速輸注(bolus)的形式施用。在以下情況下,可以進(jìn)行連續(xù)用藥，例如經(jīng)皮下泵進(jìn)行連續(xù)用藥。也可以選用減少或避免抗VLA-4結(jié)合抗體的抗體生成的劑量，以實(shí)現(xiàn)α 4亞基的40，50, 70, 75，或80%以上飽和度，或?qū)崿F(xiàn)α 4亞基的80，70, 60, 50,或40%以下飽和度，或
阻止循環(huán)白細(xì)胞量增加。在一些實(shí)施方案中，活性試劑可以與保護(hù)該化合物免于快速釋放的載體(carrier) 一起配制，如成為控釋配制劑(包括植入體(implant))和微囊遞送體系(microencapsulated delivery system)?？梢允褂蒙锟山到獾纳锵嗳菪跃酆衔?，如乙烯乙酸乙酯(ethylene vinyl acetate)、聚酸酐(polyanhydride)、聚乙醇酸(polyglycolic acid)、膠原(collagen)、聚原酸酯(polyorthoester)和聚乳酸(polylactic acid)。制備這類配制劑的多種方法有專利或者是眾所周知的。參見,例如Sustained and Controlled Release Drug Delivery Systems, J.R.Robinson, ed., MarcelDekkerj Inc.，New York, 1978。藥物組合物可以利用醫(yī)療設(shè)備進(jìn)行施用。例如，藥物組合物可以用無針式皮下注射設(shè)備(needleless hypodermic injection device)進(jìn)行施用，所述設(shè)備參見例如美國(guó)專利 5，399，163，5，383，851，5，312，335，5，064，413，4，941，880，4，790，824 或 4，596，556。眾所周知的植入體和模塊(module)有:美國(guó)專利4，487，603公開了一種可植入的顯微-輸注泵，用于以控制速率分配(dispensing)藥物；美國(guó)專利4，486，194公開了一種治療設(shè)備,用于穿過皮膚施用藥物；美國(guó)專利4，447，233公開了一種藥物輸注泵，用于以精確的輸注速率遞送藥物；美國(guó)專利4，447，224公開了一種可變流植入型輸注裝置，用于連續(xù)遞送藥物；美國(guó)專利4,439，196公開了一種滲透型藥物遞送體系，其具有多室隔間(mult1-chambercompartment);美國(guó)專利4，475，196公開了一種滲透型藥物遞送體系。當(dāng)然，另有多種這類植入體、遞送體系和模塊也是本領(lǐng)域已知的。本文中，單位劑型(Dosage unit form)或“固定劑量(fixed dose)”是指物理離散單位，是適合對(duì)受治受試者施用的單次藥劑(unitary dosage);每一單位含有預(yù)定量的活性化合物和所需的藥用載體，還可以任選含有其它試劑，所述活性化合物的預(yù)定量是經(jīng)過計(jì)算可以產(chǎn)生所需治療效應(yīng)的量。藥物組合物可以包含“治療有效量”的本文所述試劑。試劑的治療有效量也可以因個(gè)體的疾病狀態(tài)、年齡、性別、體重，以及該化合物在該個(gè)體體內(nèi)激發(fā)所需反應(yīng)的能力而有不同，所述能力例如改進(jìn)至少一個(gè)疾病參數(shù)，例如多發(fā)性硬化參數(shù)，或改進(jìn)該疾病(例如多發(fā)性硬化)的至少一種癥狀。治療有效量也可以是治療有益效果超過該組合物的任何毒副作用或有害作用的量。多發(fā)性硬化多發(fā)性硬化(MS)是中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，其特征是炎癥以及髓磷脂鞘的損失。MS患者可以 通過MS臨床確診的已有標(biāo)準(zhǔn)來鑒別，該標(biāo)準(zhǔn)由MS診斷的專題研究小組(the workshop on the diagnosis of MS)制定(Poser et al., Ann.Neurol.13:227, 1983)。簡(jiǎn)言之，臨床確診的MS患者有兩處發(fā)作(attack)，還有任兩處損傷的臨床癥狀或一處損傷的臨床癥狀以及除這兩處以外的另一損傷的亞臨床癥狀。MS還可以通過兩處發(fā)作的證據(jù)以及腦脊液中IgG的單一克隆帶(clonal band)來確診,或者通過將發(fā)作、兩處損傷的臨床證據(jù)、以及腦脊液IgG單一克隆帶這三者綜合來確診。也可以用McDonald 標(biāo)準(zhǔn)診斷 MS (McDonald et al., 2001, Recommended diagnostic criteria formultiple sclerosis:guidelines from the International Panel on the Diagnosis ofmultiple sclerosis, Ann Neurol50:121-127)。McDonald 標(biāo)準(zhǔn)包括,在無多處臨床發(fā)作的情況下，使用用于診斷MS的一段時(shí)間內(nèi)CNS損傷的MRI證據(jù)。多發(fā)性硬化的有效治療可以用多種不同方法評(píng)估?？梢杂靡韵聟?shù)量化療效。兩個(gè)示例性標(biāo)準(zhǔn)包括=EDSS(殘疾狀況拓展量化表(extended disability status scale)),以及MRI (磁共振成像)所示加重表現(xiàn)。EDSS是對(duì)MS所致臨床損傷分級(jí)的一種工具(Kurtzke, Neurology33:1444，1983)。對(duì)8個(gè)功能系統(tǒng)進(jìn)行評(píng)估，以考查神經(jīng)損傷的類型和嚴(yán)重程度。簡(jiǎn)言之，在治療之前，對(duì)患者以下系統(tǒng)的損傷進(jìn)行評(píng)估:錐體(pyramidal)、小腦(cerebella)、腦干(brainstem)、感覺(sensory)、腸和膀胱(bowel and bladder)、視覺(visual)、大腦(cerebral)及其它。定期隨訪。評(píng)分從O (正常)至10 (因MS致死)。降一整級(jí)(A decrease of one full step)表示有效治療(Kurtzke, Ann.Neurol.36:573-79，1994)。加重是指，出現(xiàn)MS引起的新癥狀，并伴有相應(yīng)的新的神經(jīng)異常(IFNBMS StudyGroup,出處同上)。此外，加重必需持續(xù)至少24小時(shí)且之前穩(wěn)定或改進(jìn)至少30天。簡(jiǎn)言之，由臨床醫(yī)師對(duì)患者進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)神經(jīng)學(xué)檢查。加重依據(jù)神經(jīng)學(xué)等級(jí)評(píng)分(NeurologicalRating Scale)的變化可以分為輕度(mild)、中度(moderate)、或重度(severe) (Sipe etal.，Neurology34:1368, 1984)。另外還測(cè)定年度加重率和無加重患者比例。當(dāng)治療組和安慰劑組經(jīng)過上述任一測(cè)量發(fā)現(xiàn)，無加重或無復(fù)發(fā)患者比例有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異，可認(rèn)為治療有效。另外還可以測(cè)量第一次加重的時(shí)刻、加重總時(shí)間(duration)以及嚴(yán)重程度。在這一方面，治療有效是指，治療組第一次加重的時(shí)刻、或總時(shí)間以及嚴(yán)重程度比對(duì)照組有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性差異。無加重或無復(fù)發(fā)的階段超過I年、18個(gè)月、或20個(gè)月尤其值得注意。臨床測(cè)量包括:間隔I年或2年的復(fù)發(fā)率、以及EDSS的改變,后者包括從持續(xù)6個(gè)月的EDSS基線水平1.0個(gè)單位進(jìn)展的時(shí)間。在Kaplan-Meier曲線中，持續(xù)進(jìn)行性殘疾延遲表示有效。其它標(biāo)準(zhǔn)包括，MRI T2成像的面積和體積的變化，以及由釓增強(qiáng)型成像(gadolinium enhanced image)所測(cè)定的損傷數(shù)和損傷體積的變化。MRI可以用于，利用禮-DTPA-增強(qiáng)型成像測(cè)量活動(dòng)性損傷(active lesion)(McDonald et al.，Ann.Neurol.36:14，1994),或利用 T2_weighted 技術(shù)測(cè)量損傷的位置和范圍(extent)。簡(jiǎn)言之，獲得基線MRI。每一輪后續(xù)研究采用同一成像平面(imagingplane)和患者部位(patient position)?？梢赃x擇定位和成像順序(positioning andimaging sequence),從而最大程度檢測(cè)損傷(maximize lesion detection)并促進(jìn)對(duì)損傷的顯跡(lesion tracing)。后續(xù)研究可以采用同一定位和成像順序。MS的存在、位置和范圍可以由放射學(xué)專業(yè)人員確定?？梢詣澨帗p傷面積的輪廓，將各部分總計(jì)，獲得損傷總面積?？梢赃M(jìn)行三項(xiàng)分析:新?lián)p傷證據(jù)、活動(dòng)性損傷出現(xiàn)率、損傷面積的百分比變化(Paty etal.，Neurology43:665, 1993)?；颊邆€(gè)體相對(duì)于基線水平或治療組相對(duì)于安慰劑組有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性改進(jìn)，可以確定治療導(dǎo)致改進(jìn)。與多發(fā)性硬化有關(guān)、可以用本文所述方法治療的正組例如有:視神經(jīng)炎(opticneuritis)、復(fù)視(diplopia)、眼球震顫(nystagmus)、視辨距不良(ocular dysmetria)、核間性眼肌癱瘓(internuclear ophthalmoplegia)、移動(dòng)和聲音幻覺(movement and soundphosphenes)、相對(duì)傳入性瞳孔障礙(afferent pupillary defect)、輕癱(paresis)、單肢輕癱(monoparesis)、下肢輕癱(paraparesis)、輕偏癱(hemiparesis)、quadraparesis、麻痹(plegia)、下身麻痹(paraplegia)、半身不遂(hemiplegia)、四肢麻痹(tetraplegia)、quadraplegia、強(qiáng)直(spasticity)、構(gòu)音困難(dysarthria)、肌肉萎縮(muscle atrophy) >0.攣(spasms)、痛性疫攣(cramps)、張力過低(hypotonia)、陣攣(clonus)、肌陣攣(myoclonus)、肌纖維顫搐(myokymia)、腿多動(dòng)綜合癥(restless leg syndrome)、足下垂(footdrop)、功能不良性反射(dysfunctional reflexes)、下身感覺缺失(paraesthesia)、麻木(anaesthesia)、神經(jīng)痛(neuralgia)、神經(jīng)病性痛和神經(jīng)原性痛(neuropathic andneurogenic pain) > I' hermitte' s、本體感受障石尋(proprioceptive dysfunction)、三叉神經(jīng)痛(trigemina l neuralgia)、共濟(jì)失調(diào)(ataxia)、意向震顫(intention tremor) >辨距困難(dysmetria)、前庭性共濟(jì)失調(diào)(vestibular ataxia)、眩暈(vertigo)、speechataxia、張力失常(dystonia)、輪替運(yùn)動(dòng)障礙(dysdiadochokinesia)、尿頻(frequentmicturation)、膀胱疫攣(bladder spasticity)、膀胱弛緩(flaccid bladder)、逼肌括約肌協(xié)同動(dòng)作障礙(detrusor-sphincter dyssynergia)、勃起障礙(erectiledysfunction)、性感缺失(anorgasmy)、性冷淡(frigidity)、便秘(constipation)、便急(fecal urgency)、大便失禁(fecal incontinence)、抑郁(depression)、認(rèn)知障礙(cognitive dysfunction)、癡呆(dementia)、情緒波動(dòng)(mood swings)、情緒不穩(wěn)定(emotional lability)、欣快(euphoria)、兩極綜合癥(bipolar syndrome)、焦慮(anxiety)、失語(aphasia)、言語困難(dysphasia)、疲勞(fatigue)、uhthoff 綜合癥、胃食管反流(gastroesophageal ref lux)、以及睡眠障礙。每一例MS顯不出表現(xiàn)及后續(xù)過程(presentation and subsequent course)的多種模式中的一種。最常見，MS首先表現(xiàn)為一系列發(fā)作，隨后完全或部分消失，因?yàn)榘Y狀神秘減少，僅在一段穩(wěn)定期后再出現(xiàn)。這稱為復(fù)發(fā)-弛張型(RR)MS。原發(fā)-漸進(jìn)型(PP)MS的特征是，逐漸的臨床衰退，無明顯消除跡象，但癥狀有短暫的平臺(tái)期或略有緩解。繼發(fā)-漸進(jìn)型(SP)MS是以復(fù)發(fā)-弛張過程開始、隨后是原發(fā)-漸進(jìn)過程。在較少病例中，患者可能有漸進(jìn)-復(fù)發(fā)(PR)過程，其疾病持續(xù)發(fā)展并不斷被急性發(fā)作打斷。PP、SP、和PR在有些病例中集中表現(xiàn),稱慢性漸進(jìn)型MS。少數(shù)患者出現(xiàn)惡性MS,特征是持續(xù)快速衰退(swift and relentless decline),導(dǎo)致明顯殘疾或甚至在生病不久就死亡。施用本文所述聯(lián)合療法，可以阻止或減慢這種衰退。除了對(duì)人的研究，或者在對(duì)人進(jìn)行研究之前，可以用動(dòng)物模型評(píng)價(jià)治療效力。多發(fā)性硬化動(dòng)物模型例如有，實(shí)驗(yàn)型自身免疫性腦炎(EAE)小鼠模型，例如參見 Tuohy et al.(J.1mmunol.(1988) 141:1126-1130)，Sobel et al.(J.1mmunol.(1984) 132:2393-2401)，and Traugott (Cell Immunol.(1989) 119:114-129?？梢栽谡T導(dǎo)EAE之前，對(duì)小鼠施用本文所述試劑。 然后，評(píng)價(jià)小鼠的特征性標(biāo)準(zhǔn)，以確定在該模型中施用所述試劑的效力。其它疾病本文所述方法也可以用于治療已表現(xiàn)出對(duì)干擾素療法反應(yīng)不足的患者中的其它炎性疾病、免疫疾病、或自身免疫病。這類疾病包括，例如中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥(如除了多發(fā)性硬化以外，腦炎(meningitis)、視神經(jīng)脊髓炎(neuromyelitis optica)、神經(jīng)肉樣瘤病(neurosarcoidosis) > CNS 脈管炎(vasculitis)、腦炎(encephalitis)、和橫貫性脊髓炎(transverse myelitis));組織或器官移植物排斥或移植物抗宿主疾??；急性CNS損傷,例如中風(fēng)(stroke)或脊髓損傷(spinal cord injury);慢性腎病(chronic renal disease)；變態(tài)反應(yīng)(allergy),例如變態(tài)反應(yīng)性哮喘(allergic asthma) ;1型糖尿?。谎仔阅c疾病，例如 Crohn 病、潰瘍性腸炎(ulcerative colitis);重癥肌無力(myasthenia gravis)；肌纖維痛(fibromyalgia);關(guān)節(jié)炎性疾病(arthritic disorder),例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎(psoriatic arthritis);炎性/免疫性皮膚病，例如銀屑病(psoriasis)、白癜風(fēng)(vitiligo)、皮炎(dermatitis)、扁平苔癬(lichen planus);系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus);干燥綜合癥(Sjogren，sSyndrome);血液學(xué)癌癥(hematological cancers),例如多發(fā)性骨髓瘤(multiple myeloma)、白血病(leukemia)、淋巴瘤(lymphoma);實(shí)體癌，例如肉瘤(sarcomas)或腺癌(carcinoma),如肺、乳腺、前列腺以及腦部的癌；纖維化(fibrotic)疾病，例如肺纖維化(pulmonary fibrosis)、肌纖維化(myelofibrosis)、肝硬化(liver cirrhosis)、腎小球膜增生性腎小球腎炎(mesangial proliferative glomerulonephritis)、新月體性腎小球腎炎(crescenticglomerulonephritis)、糖尿病性腎病(diabetic nephropathy)、以及腎間質(zhì)纖維化(renalinterstitial fibrosis)。例如，可以施用VLA-4結(jié)合試劑(如VLA-4結(jié)合抗體(例如那他珠單抗))，來治療這些或其它炎性疾病、免疫病、或自身免疫病，例如對(duì)另一種或多種試劑，如本文所述一或多種試劑反應(yīng)不足的疾病。試齊Il倉(cāng)(kit)可以用試劑盒形式提供VLA-4結(jié)合試劑(如那他珠單抗)。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述試劑盒包括(a)裝有組合物的容器，所述組合物含有VLA-4結(jié)合試劑(如那他珠單抗)，還可以含有(b)信息物質(zhì)(informational material)。所述信息物質(zhì)可以是描述性質(zhì)(descriptive)、建議性質(zhì)(instructional)、商品廣告性質(zhì)(marketing)或其它性質(zhì)的物質(zhì)，它們與本文所述方法和/或使用所述試劑的治療益處有關(guān)。試劑盒中的信息物質(zhì)其形式不限。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述信息物質(zhì)包含關(guān)于該化合物的制備、該化合物的分子量、濃度、有效期、批號(hào)或生產(chǎn)地信息等等的信息。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述信息物質(zhì)涉及施用VLA-4結(jié)合試劑的方法，例如合適的用量、施用方式(manner)、或模式(mode)(如本文所述劑量(dose)、劑型(dosage form)、或施用模式)。所述方法可以是治療多發(fā)性硬化的方法，例如在已接受干擾素β治療的患者中治療多發(fā)性硬化的方法。

試劑盒中的信息物質(zhì)其形式不限。在多種情況中，所述信息物質(zhì)，如說明書(instructions),為印刷體(printed matter),如印刷的文字(text)、圖(drawing)和 /或照片(photograph),例如標(biāo)簽(label)或印刷的傳單(printed sheet)。但所述信息物質(zhì)也可以是其它形式，如盲文(Braille)、計(jì)算機(jī)可讀形式、視頻、或聲頻形式。在另一實(shí)施方案中，試劑盒中的信息物質(zhì)是聯(lián)絡(luò)信息，例如物理地址(physical address)、電子郵件地址、網(wǎng)址、或電話號(hào)碼，使試劑盒的用戶可以從中獲得關(guān)于本文所述試劑和/或本文所述該試劑的用途的實(shí)質(zhì)信息。當(dāng)然，所述信息物質(zhì)也可以是多種形式的任意組合。試劑盒的組合物中，除了含有VLA-4結(jié)合試劑，還可以含有其它成分，如溶劑或緩沖液、穩(wěn)定劑、或保存劑(preservative)。所述試劑盒還可以包含其它試劑,例如第二種或第三種試劑，例如其它治療試劑。這些試劑可以為任何形式，例如液體、干燥形式或凍干形式。優(yōu)選所述試劑是基本純(但它們可以混合在一起或彼此分開遞送)和/或無菌的。當(dāng)所述試劑為溶液時(shí)，該溶液優(yōu)選是含水溶液，優(yōu)選無菌含水溶液。當(dāng)所述試劑為干燥形式時(shí)，一般加入合適的溶劑來重建。所述溶劑，例如無菌水或緩沖液，可以選擇包含在試劑盒中。所述試劑盒可以包括一或多個(gè)容器，其中裝有一或多種含所述試劑的組合物。在一些實(shí)施方案中，所述試劑盒包括相互分隔的容器、分隔體(divider)或分隔室(compartment),用于裝載組合物和信息物質(zhì)。例如，可以將組合物裝在大瓶(bottle)、小瓶(vial)或注射器(syringe)中，將信息物質(zhì)裝在塑料套或袋中。在其它實(shí)施方案中，將試劑盒的不同組件裝在一個(gè)不分隔的容器中。例如，將組合物裝在大瓶、小瓶或注射器中，而所述大瓶、小瓶或注射器上貼有標(biāo)簽形式的信息物質(zhì)。在一些實(shí)施方案中，試劑盒包括一組(如一整包)容器，其中每一容器裝有一或多個(gè)單位劑型(如本文所述劑型)的所述試齊U。所述容器可以包括一個(gè)單位劑(unit dosage),例如一個(gè)含有VLA-4結(jié)合試劑的單位。例如，所述試劑盒包括一組注射器、安瓿(ampules)、箔袋(foil packet)、帶氣泡的包裝袋(blister pack)、或醫(yī)療裝置(medical devices),例如每一個(gè)都容納一個(gè)單位劑。試劑盒中的這些容器可以是隔絕空氣的(air tight)、防水的(waterproof)(如濕度或蒸發(fā)引起的變化都無法透過)、和/或避光的(light-tight)。所述試劑盒還可以選擇含有適于施用所述組合物的裝置，例如注射器或其它合適的遞送裝置。所述裝置可以預(yù)裝VLA-4結(jié)合試劑，例如一個(gè)單位劑，或者也可以是空的但適于裝載試劑。本文中出現(xiàn)的所有文獻(xiàn)和出版物都引入本文作參考。以下實(shí)施例無意進(jìn)行任何限制。
實(shí)施例實(shí)施例1 - AFFIRM 和 SENTINEL 研究AFFIRM 和 SENTINEL 研究(Rudick et al.，2003，Neurology60Supp.1:A479)在第13個(gè)月的臨床終點(diǎn)分別見表I和2。表I
權(quán)利要求
1.治療患有炎性疾病并對(duì)第一種試劑反應(yīng)不足的受試者的方法，所述方法包括對(duì)該受試者施用VLA-4結(jié)合蛋白，其施用量和施用時(shí)間致使足以治療所述疾病，其中當(dāng)所述第一種試劑在該受試者體內(nèi)未達(dá)到治療性水平時(shí)，所述VLA-4結(jié)合蛋白施用至少一次。
2.權(quán)利要求1的方法，其中所述反應(yīng)不足包括低于預(yù)定反應(yīng)水平。
3.權(quán)利要求1的方法，其中所述反應(yīng)不足包括第一種試劑引起的副反應(yīng)或?qū)Φ谝环N試劑發(fā)生不能耐受的毒性反應(yīng)。
4.權(quán)利要求1的方法，其中所述炎性疾病對(duì)所述第一種試劑在該受試者中的治療無反應(yīng)。
5.權(quán)利要求1的方法，其中所述第一種試劑選自:干擾素、乙酸格拉太咪爾、延胡索酸、米托蒽醌、化療劑、皮質(zhì)類固醇、免疫球蛋白、抑制素、硫唑嘌呤、以及TNF拮抗劑。
6.權(quán)利要求1的方法，其中所述受試者被施用所述第一種試劑至少6個(gè)月。
7.權(quán)利要求1的方法，其中所述施用VLA-4結(jié)合蛋白在不施用所述第一種試劑的情況下持續(xù)至少2個(gè)月。
8.權(quán)利要求1的方法，其中所述受試者在第一次施用VLA-4結(jié)合蛋白之前至少3個(gè)月未施用所述第一種試劑。
9.權(quán)利要求1的方法，其中所述受試者在第一次施用VLA-4結(jié)合蛋白之前的2周內(nèi)施用了所述第一種試劑。
10.權(quán)利要求1的方法，還 包括監(jiān)控受試者的EDSS評(píng)分進(jìn)展。
11.權(quán)利要求1的方法，其中所述受試者之前因被診斷患有多發(fā)性硬化而未施用VLA-4結(jié)合蛋白。
12.權(quán)利要求1的方法，其中所述VLA-4結(jié)合蛋白是VLA-4結(jié)合抗體。
13.權(quán)利要求12的方法，其中所述VLA-4結(jié)合抗體抑制VLA-4與VCAM-1相互作用。
14.權(quán)利要求13的方法，其中所述VLA-4結(jié)合抗體至少結(jié)合VLA-4的α鏈。
15.權(quán)利要求12的方法，其中所述VLA-4結(jié)合抗體是那他珠單抗。
16.權(quán)利要求12的方法，其中所述VLA-4結(jié)合抗體與ΗΡ1/2或那他珠單抗競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合VLA-4。
17.權(quán)利要求12的方法，其中所述VLA-4結(jié)合抗體是人抗體或人源化抗體。
18.權(quán)利要求1的方法，其中所述受試者患有慢性漸進(jìn)型多發(fā)性硬化、原發(fā)-漸進(jìn)型(PP)多發(fā)性硬化、繼發(fā)-漸進(jìn)型多發(fā)性硬化或漸進(jìn)復(fù)發(fā)型多發(fā)性硬化。
19.權(quán)利要求1的方法，其中所述受試者被靜脈施用多劑VLA-4結(jié)合蛋白，每劑為200-400mgo
20.治療受試者的方法，所述受試者患有MS且經(jīng)干擾素β治療至少3個(gè)月仍有以下一或多種癥狀:(a)至少一次復(fù)發(fā)、(b)出現(xiàn)新的MRI增強(qiáng)型損傷、和(c)進(jìn)行性殘疾(EDSS)，所述方法包括對(duì)該受試者施用VLA-4封閉抗體或其VLA-4結(jié)合片段，其施用量和施用時(shí)間致使足以治療MS，其中當(dāng)干擾素β在該受試者體內(nèi)未達(dá)到治療性水平時(shí)，將VLA-4封閉抗體施用至少一次。
全文摘要
本發(fā)明公開了治療多發(fā)性硬化和其它疾病的方法。
文檔編號(hào)A61K39/395GK103169965SQ20131005420
公開日2013年6月26日 申請(qǐng)日期2005年11月18日 優(yōu)先權(quán)日2004年11月19日
發(fā)明者邁克爾.潘扎拉, 艾爾弗雷德.桑德羅克 申請(qǐng)人:比奧根艾迪克Ma公司