一種重組人血管內(nèi)皮抑素顯像劑及其制備方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及重組人血管內(nèi)皮抑素制備分子靶向顯像劑【技術(shù)領(lǐng)域】。具體為提供一種新型的正電子放射性核素或釓標(biāo)記重組人血管內(nèi)皮抑素顯像劑及其在對(duì)多種腫瘤新生血管狀況進(jìn)行的無(wú)創(chuàng)性、動(dòng)態(tài)觀測(cè)，進(jìn)行抗血管生成治療的療效評(píng)價(jià)及療效預(yù)測(cè)中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供了該顯像劑的制備方法，通過(guò)雙功能螯合劑將正電子放射性核素或釓與重組人血管內(nèi)皮抑素結(jié)合。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種重組人血管內(nèi)皮抑素顯像劑及其制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種重組人血管內(nèi)皮抑素制備新型血管生成顯像劑及其在腫瘤血管生成顯像診斷中的用途。
【背景技術(shù)】
[0002]腫瘤血管生成在腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移過(guò)程中起著重要的作用。早在上個(gè)世紀(jì)70年代，F(xiàn)olkman教授就提出“腫瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移有賴(lài)于新生血管形成”的理論。根據(jù)這一理論所建立
的抗腫瘤血管生成治療-休眠療法(dormancy therapy)已成為當(dāng)今腫瘤治療的熱門(mén)研究領(lǐng)域之一。一些抗血管生成靶向藥物已應(yīng)用于臨床，例如貝伐單抗、恩度等。大量的臨床研究證實(shí)這些藥物聯(lián)合化療或放療給患者帶來(lái)了更高的治療有效率。根據(jù)藥物作用機(jī)理，抗血管生成治療并非直接殺死腫瘤細(xì)胞，其治療并不能使腫瘤迅速縮小，而是抑制其生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移。目前用于評(píng)價(jià)化療療效的RECIST標(biāo)準(zhǔn)及WHO標(biāo)準(zhǔn)均是根據(jù)傳統(tǒng)影像學(xué)觀測(cè)治療前后腫瘤大小變化來(lái)判定療效。這樣的療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)顯然不能及時(shí)、準(zhǔn)確地評(píng)價(jià)抗血管生成的治療。隨著越來(lái)越多的腫瘤抗血管生成治療在臨床的推廣應(yīng)用，臨床上迫切需要一種新的方法來(lái)預(yù)測(cè)及評(píng)價(jià)抗血管生成治療。
[0003]正電子發(fā)射體層顯像(Positron Emission Tomography, PET)以正電子放射性核素標(biāo)記的藥物為顯像劑，可以顯示和測(cè)定所標(biāo)記的顯像劑在活體的分布。其可通過(guò)標(biāo)記不同的生物分子顯示不同的生理和病理代謝變化，例如葡萄糖、蛋白質(zhì)、脂肪及核酸在活體的代謝，在疾病的早期診斷、療效監(jiān)測(cè)、病因?qū)W探討及藥物研發(fā)等方面起到了重要作用。PET/CT的發(fā)明，更是將PET高靈敏度的代謝圖像與CT高分辨率的解剖圖像相融合，使其在疾病的診斷中具有更高的準(zhǔn)確性。利用正電子放射性核素進(jìn)行腫瘤血管生成通路相關(guān)分子的標(biāo)記，就可以通過(guò)PET或PET/CT在活體直接反映腫瘤新生血管狀況，使得腫瘤血管生成分子顯像成為可能。
[0004]磁共振成像(magnetic resonance imaging, MRI)是基于核磁共振原理的成像技術(shù)，已廣泛應(yīng)用于多種疾病的診斷。MR顯像具有無(wú)創(chuàng)、無(wú)害性，特別是其對(duì)軟組織具有極高的分辨率。釓(Gd)絡(luò)合物作為MR造影劑在上世紀(jì)80年代就已應(yīng)用于臨床。目前臨床常用的 Gd 造影劑有:gadopentetate dimeglu-mine (gadoliniumdiethylenetriaminopenta-acetic acid-Gd-DTPA), gadoteridol(Gd-HP-D03A), gadoterate meglumine(gadolinium tetra-azacy-clododecanetetre-aceticacid-Gd-DOTA)和 gadodiamide(Gd-DTPA-bismethylamide)。應(yīng)用這些Gd造影劑，可以增加腫瘤病灶的檢出率。但目前應(yīng)用于臨床的Gd造影劑無(wú)腫瘤和器官特異性，利用Gd標(biāo)記某種抗體或生物分子進(jìn)行特異性的靶向MR分子顯像已成為一個(gè)新的研究方向。最近，Tan等報(bào)道了利用一種特異性靶向腫瘤基質(zhì)中的纖維蛋白-纖維鏈接蛋白復(fù)合物的MR分子顯像劑，CLT1-G2-(Gd-DOTA)，進(jìn)行人前列腺癌荷瘤裸鼠MR顯像的研究(Pharm Res.2012; 29 (4):953-60.)。這證明利用Gd絡(luò)合物標(biāo)記生物分子進(jìn)行靶向MR分子顯像是科學(xué)可行的。
[0005]1997年，O’ Reilly等從小鼠的血管內(nèi)皮瘤細(xì)胞(EOMA)的培養(yǎng)血清中分離出的不同于血管抑素的血管生成抑制劑，命名為Endostatin (血管內(nèi)皮抑素)。對(duì)Endostatin的氨基酸序列分析顯示它是膠原XVDI的C末端非膠原區(qū)的氨基酸片段，分子量為20kD，包含有184個(gè)氨基酸。Endostatin作用的直接靶點(diǎn)為新生血管的內(nèi)皮細(xì)胞，對(duì)其它細(xì)胞及正常靜止的內(nèi)皮細(xì)胞沒(méi)有抑制作用。2005年,重組人血管內(nèi)皮抑制素(Endostar,恩度)在我國(guó)上市，聯(lián)合化療藥物用于治療II1、IV期非小細(xì)胞肺癌，具有靶向明確、無(wú)耐藥性、毒副作用小、潛在抗腫瘤轉(zhuǎn)移的優(yōu)勢(shì)。恩度在原始Endostatin序列N端基礎(chǔ)上添加了 9個(gè)氨基酸，使其性狀更穩(wěn)定，保持了其在體內(nèi)的活性。張金赫等應(yīng)用mI對(duì)Endostatin進(jìn)行標(biāo)記，結(jié)果顯示對(duì)Endostatin可以成功進(jìn)行131I標(biāo)記，并且產(chǎn)物對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的抑制率還高于單純Endostatin,在體外也具有一定的穩(wěn)定性。但mI僅能用于SPECT顯像,其顯像分辨率較低，限制了其臨床應(yīng)用。
[0006]因此，鑒于傳統(tǒng)影像學(xué)觀測(cè)治療腫瘤療效評(píng)價(jià)和目前131I標(biāo)記Endostatin作為顯像劑存在的缺陷以及臨床上對(duì)于預(yù)測(cè)及評(píng)價(jià)抗血管生成治療效果的迫切需要，研制新型重組人血管內(nèi)皮抑素分子靶向顯像劑進(jìn)行PET、PET/CT顯像或MR顯像是非常有必要的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007]本發(fā)明的目的在于，為進(jìn)行活體無(wú)創(chuàng)性、動(dòng)態(tài)觀測(cè)腫瘤新生血管狀況提供一種新型的分子靶向顯像劑，可用于PET、PET/CT和MR顯像。本發(fā)明的另一目的是提供該顯像劑的制備方法及用途，應(yīng)用正電子放射性核素或釓?fù)ㄟ^(guò)雙功能螯合劑與重組人血管內(nèi)皮抑素結(jié)合，制成可以供PET、PET/CT顯像或者M(jìn)R顯像的分子靶向顯像劑，用于人類(lèi)或其他哺乳動(dòng)物進(jìn)行活體無(wú)創(chuàng)性、動(dòng)態(tài)觀測(cè)腫瘤新生血管狀況。
[0008]本發(fā)明提供了一種重組人血管內(nèi)皮抑制素顯像劑，其特征在于，所述顯像劑具有下式的通式結(jié)構(gòu):
[0009]R-雙功能螯合劑-X，
`[0010]其中R為正電子放射性核素或禮，X為重組人血管內(nèi)皮抑制素。
[0011]本發(fā)明所述重組人血管內(nèi)皮抑制素顯像劑中，所述R選自正電子放射性核素或釓(Gd)，其中正電子放射性核素選自:18F、55Co、6°Cu、61Cu、62Cu、64Cu、66Ga、68Ga、82Rb 和 86Y ;所述R-雙功能螯合劑選自:[18F]SFB、[18F] SFBS, [18F] SFMB, [18F] FPA、[18F]FPPD, [18F]FBEM、[18F]FBBO, [18F]NPFP、R-DOTA-NHS、R-NOTA-NHS ;所述重組人血管內(nèi)皮抑制素優(yōu)選為 Endostar。
[0012]上述R-DOTA-NHS 選自:[55Co]D0TA_NHS、[60Cu] DOTA-NHS, [61Cu] DOTA-NHS,[62Cu] DOTA-NHS、[64Cu] DOTA-NHS、[66Ga] DOTA-NHS, [68GajDOTA-NHS, [86Y] DOTA-NHS, [Gd]DOTA-NHS ;所述 R-NOTA-NHS 選自:[Al18F] NOTA-NHS、[66GajNOTA-NHS, [68GajNOTA-NHS, [Gd]NOTA-NHS。
[0013]本發(fā)明還提供了一種制備重組人血管內(nèi)皮抑制素顯像劑的制備方法，包括如下步驟:將R-雙功能螯合劑用乙腈洗脫，用氮?dú)獯蹈?，再與重組人血管內(nèi)皮抑制素緩沖溶液反應(yīng)，反應(yīng)完畢后對(duì)反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行洗脫分離，獲得目標(biāo)產(chǎn)物。其中R-雙功能螯合劑選自:[18F]SFB、[18F]SFBS, [18F]SFMB, [18F]FPA、[18F]FPPD, [18F]FBEM, [18F]FBB0、[18F]NPFP。
[0014]本發(fā)明還提供了另一種制備重組人血管內(nèi)皮抑制素顯像劑的制備方法，包括如下步驟:先將雙功能螯合劑與重組人血管內(nèi)皮抑制素緩沖溶液反應(yīng)，制備雙功能螯合劑-重組人血管內(nèi)皮抑制素，再應(yīng)用R與雙功能螯合劑-重組人血管內(nèi)皮抑制素結(jié)合，反應(yīng)完畢后對(duì)反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行洗脫分離，獲得目標(biāo)產(chǎn)物。此處R-雙功能螯合劑選自:R-DOTA-NHS、R-NOTA-NHS，其中所述 R-DOTA-NHS 選自:[55Co]D0TA_NHS、[60Cu] DOTA-NHS, [61Cu] DOTA-NHS,[62Cu] DOTA-NHS、[64Cu] DOTA-NHS、[66Ga] DOTA-NHS, [68GajDOTA-NHS, [86Y] DOTA-NHS, [Gd]DOTA-NHS ；所述 R-NOTA-NHS 選自:[Al18F] NOTA-NHS、[66GajNOTA-NHS, [68GajNOTA-NHS,[Gd]NOTA-NHS。
[0015]上述兩種標(biāo)記制備方法中雙功能螯合劑與重組人血管內(nèi)皮抑制素的摩爾比為10~40: 1，優(yōu)選20: 1，反應(yīng)溫度為30~45°C，反應(yīng)時(shí)間為10mirT60min，優(yōu)選反應(yīng)溫度為37°C，優(yōu)選反應(yīng)時(shí)間為30min。反應(yīng)完畢后用脫鹽柱對(duì)反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行洗脫分離。其中所述重組人血管內(nèi)皮抑制素優(yōu)選為Endostar。
[0016]本發(fā)明還提供了重組人血管內(nèi)皮抑制素顯像劑應(yīng)用于觀測(cè)腫瘤新生血管狀況的活體顯像中，其中正電子放射性核素標(biāo)記的顯像劑應(yīng)用于PET或PET/CT顯像，釓標(biāo)記的顯像劑應(yīng)用于MR顯像。所述腫瘤包括:肺癌、腦膠質(zhì)瘤、子宮內(nèi)膜異位癥、血管生成性眼底病變、神經(jīng)內(nèi)分泌瘤、結(jié)腸癌、骨癌、肝癌、胃癌、胰腺癌、口腔癌、乳腺癌、前列腺癌、淋巴癌、食道癌、鼻咽癌、肉瘤、腎癌、膽癌、惡性黑色素腫瘤。 [0017]本發(fā)明所述靶向顯像劑經(jīng)靜脈進(jìn)入正常小鼠體內(nèi)后，很快從血液向各臟器分布，主要分布于腎臟，并通過(guò)腎臟進(jìn)行代謝。
[0018]本發(fā)明所述靶向顯像劑經(jīng)靜脈進(jìn)入荷瘤裸鼠體內(nèi)后，除上述正常小鼠生理分布外，腫瘤對(duì)靶向顯像劑也有明顯攝取。
[0019]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和積極效果在于，首次提出并證明，可以應(yīng)用18F等正電子放射性核素標(biāo)記重組人血管內(nèi)皮抑素作為靶向分子顯像劑，用于PET或PET/CT進(jìn)行分子成像；可以應(yīng)用Gd標(biāo)記重組人血管內(nèi)皮抑素作為靶向分子顯像劑，用于MR分子成像，在活體無(wú)創(chuàng)性、動(dòng)態(tài)觀測(cè)腫瘤新生血管狀況，有望用于腫瘤抗血管生成治療的療效評(píng)價(jià)及療效預(yù)測(cè)。
[0020]此外，將重組人血管內(nèi)皮抑素通過(guò)雙功能螯合劑用正電子放射性核素或釓進(jìn)行標(biāo)記，形成靶向顯像劑，在不同PH值標(biāo)記條件下所獲得的靶向顯像劑，生物學(xué)活性與重組人血管內(nèi)皮抑素原液無(wú)明顯差異。
【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0021]圖1 18F-SFB 標(biāo)記 Endostar 路線圖。
[0022]圖2R-TLC分析圖譜。
[0023]圖3不同pH條件下祀向顯像劑與Endostar原藥活性比較。(Pl峰為19F-FB-Endostar) ο
[0024]圖4 18F-FB-Endostar正常小鼠體內(nèi)時(shí)間一生物分布曲線。
[0025]圖5 常小鼠 18F-FB-Endostar 小動(dòng)物 PET/CT 顯像。
[0026]圖6荷人肺腺癌A549細(xì)胞裸鼠18F-FB-Endostar顯像典型圖片(圖中“十”所示為腫瘤部位)。
[0027]圖7荷人腦惡性膠質(zhì)瘤U87-MG細(xì)胞裸鼠18F-FB-Endostar顯像典型圖片(圖中“十”所示為腫瘤部位)。
[0028]圖8荷人肺腺癌A549細(xì)胞裸鼠抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
[0029]圖9荷人腦惡性膠質(zhì)瘤U87-MG細(xì)胞裸鼠抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果?！揪唧w實(shí)施方式】
[0030]具體實(shí)施案例是進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明但是不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明保護(hù)范圍的限制。
[0031]材料:重組人血管內(nèi)皮抑制素注射液一恩度(Endostar)由山東先聲麥得津生物制藥有限公司提供，15mg/支。18F離子為RDSlll加速器(美國(guó)CTI公司)生產(chǎn)。其他所有材料均為市售可得。
[0032]實(shí)施例1: 18F-FB-Endostar標(biāo)記合成實(shí)驗(yàn)
[0033]合成步驟如下:[0034]1.加速器合成的800mCi18F離子和20mg K2.2.2、5mg K2CO3與5mg 4-三甲基胺苯甲酸乙酯三氟甲基磺酸鹽在120°C加熱下反應(yīng)20min，然后先加入1ml0.5mmol/LNa0H溶液水解，再加入15ml 0.1mmoI/LHCL溶液，生成4-[18F]氟苯甲酸(18F-FBA)；
[0035]2.前述18F-FBA與17mg TSTU (2_琥珀酰亞胺基_1，I, 3，3-四甲基脲四氟硼酸酯)加熱15min,再加入由3ml 5%的乙酸和IOmlH2O混合而得的乙酸溶液酸化,經(jīng)過(guò)C-18柱純化后得到18F-SFB (18F-N-琥珀酰亞胺-4-氟苯甲酸酯)。
[0036]3.將上述反應(yīng)得到的18F-SFB用乙腈洗脫,用氮?dú)獯蹈?再將Img Endostar溶于
0.5ml磷酸鹽緩沖液(PH8.2)加入反應(yīng)管，37°C反應(yīng)30min。將最終反應(yīng)產(chǎn)物用中性磷酸鹽緩沖液(PH7.0)做流動(dòng)相，經(jīng)過(guò)P-1O凝膠柱(GE公司)分離，獲得產(chǎn)物18F-FB-Endostar。
[0037]實(shí)施例2.標(biāo)記物在人血清中的穩(wěn)定性
[0038]將獲得的500 μ Ci18F-FB-Endostar與Iml正常人血清混合后置于37°C，分別于lh、2h取樣進(jìn)行R-TLC分析(放射性層析分析)，觀測(cè)標(biāo)記物在人血清中的穩(wěn)定性。
[0039]結(jié)果見(jiàn)圖2分析，在與正常人血清混合I小時(shí)和2小時(shí)時(shí)，標(biāo)記物放射峰位置未發(fā)生變化，也未出現(xiàn)其他放射性雜峰出現(xiàn)。說(shuō)明標(biāo)記物在血清中具有良好的穩(wěn)定性，在37°C血清中2小時(shí)仍未出現(xiàn)明顯的降解。
[0040]實(shí)施例3.不同PH值進(jìn)行19F-SFB標(biāo)記Endostar實(shí)驗(yàn)及標(biāo)記后Endostar活性檢測(cè)
[0041]為了驗(yàn)證Endostar標(biāo)記后是否仍具有活性，我們進(jìn)行了不同PH值條件下進(jìn)行19F-SFB標(biāo)記Endostar實(shí)驗(yàn)及標(biāo)記后Endostar活性檢測(cè)。為了避免在檢測(cè)活性時(shí)發(fā)生放射性污染，應(yīng)用無(wú)放射性的19F代替18F進(jìn)行標(biāo)記，而19F與18F具有完全相同的化學(xué)性質(zhì)。19F-SFB由常熟華益化工有限公司合成。
[0042]分別在PH值6.5，7.0和8.0條件下，進(jìn)行19F-SFB與Endostar的標(biāo)記，19F-SFB與Endostar的摩爾比為20:1，反應(yīng)溫度為37°C，反應(yīng)時(shí)間為30min。反應(yīng)完畢后應(yīng)用脫鹽柱對(duì)反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行洗脫分離，洗脫分離時(shí)獲得2個(gè)峰。第I個(gè)峰(pi)為目標(biāo)產(chǎn)物19F-FB-Endostar，第2個(gè)峰(p2)為排除項(xiàng)蛋白，因?yàn)榉?蛋白中標(biāo)記強(qiáng)度較高，導(dǎo)致表位損失，故舍棄。將分離后的目標(biāo)產(chǎn)物19F-FB-Endostar應(yīng)用ELISA法檢測(cè)與Endostar抗體的結(jié)合能力，同時(shí)與Endostar原藥進(jìn)行對(duì)比。結(jié)果見(jiàn)圖3。從圖3中結(jié)果可以看出，19F-FB-Endostar與Endostar原藥的具有相同的Endostar抗體結(jié)合能力，而峰2不能與Endostar抗體結(jié)合。結(jié)果說(shuō)明目標(biāo)產(chǎn)物19F-FB-Endostar與Endostar原藥具有相同的活性。
[0043]實(shí)施例4 =18F-FB-Endostar正常小鼠體內(nèi)分布實(shí)驗(yàn)[0044]取正常昆明小白鼠20只，隨機(jī)分為5組，每組4只，自尾靜脈注射純化的80Ci18F-FB-Endostar,于注射后15分鐘、30分鐘、60分鐘、90分鐘、120分鐘分別斷頭處死解剖，測(cè)量心、肝、脾、腎、肺、腦、血液、肌肉等組織器官每克組織的百分注射劑量，并繪制時(shí)間-生物分布曲線。觀測(cè)18F-FB-Endostar在小鼠的正常生物分布數(shù)據(jù)。
[0045]18F-FB-Endostar在小鼠的正常生物分布如圖4所示。18F-FB-Endostar經(jīng)靜脈注射進(jìn)入小鼠體內(nèi)后，迅速向各器官分布，主要分布于腎臟，在腦中攝取最低，考慮與血腦屏障有關(guān)，在肺中攝取也較低?；谶@些數(shù)據(jù)，考慮該顯像劑將來(lái)應(yīng)用于腦及肺部腫瘤可能會(huì)獲得更清晰的圖像。
[0046]取同批次正常昆明小白鼠I只，經(jīng)尾靜脈注射ImCi18F-FB-End0Starl小時(shí)后，腹腔注射100mg/kg氯胺酮麻醉，小鼠俯臥位，四肢伸展，保溫固定，進(jìn)行小動(dòng)物PET/CT顯像(美國(guó)GE Explore VISTA Micro PET / CT)，共兩個(gè)床位，每個(gè)床位采集約lOmin。正常小鼠18F-FB-Endostar 顯像圖見(jiàn)圖 5.[0047]實(shí)施例5:荷瘤裸鼠顯像實(shí)驗(yàn)
[0048]按常規(guī)培養(yǎng)腫瘤細(xì)胞(肺腺癌A-549細(xì)胞，人腦惡性膠質(zhì)瘤U87-MG細(xì)胞)，細(xì)胞購(gòu)自美國(guó)細(xì)胞收藏中心(American Type Culture Collection, ATCC),由山東省腫瘤醫(yī)院中心實(shí)驗(yàn)室培養(yǎng)和保藏。BALB/c裸小鼠10只，雌性，鼠齡5~6周，體重15~20g，購(gòu)自北京華阜康生物科技股份有限公司。取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期上述腫瘤細(xì)胞，分別調(diào)整細(xì)胞濃度為IXlO6個(gè)/mL。每只裸鼠用Iml的注射器抽取細(xì)胞懸液100 μ 1，接種于裸鼠右前肢背部皮下。每種細(xì)胞各接種5只裸鼠。裸鼠腫瘤接種后，連續(xù)置恒溫(25° C±2° C)、恒濕(45%~50%)、無(wú)菌凈化屏障系統(tǒng)內(nèi)飼養(yǎng)，定期觀察裸鼠精神、飲食和排便，以及腫瘤的生長(zhǎng)。待腫瘤直徑長(zhǎng)至Icm以上時(shí)開(kāi)始顯像實(shí)驗(yàn)。每只荷瘤裸鼠經(jīng)尾靜脈注射顯像劑lmCi，注射后I小時(shí)進(jìn)行小動(dòng)物PET/CT顯像(顯像條件同正常小鼠顯像條件)。
[0049]典型的荷瘤裸鼠18F-FB-Endostar顯像圖像見(jiàn)圖6和圖7。圖6為荷人肺腺癌A549細(xì)胞裸鼠18F-FB-Endostar顯像典型圖片。圖7為荷人腦惡性膠質(zhì)瘤U87-MG細(xì)胞裸鼠18F-FB-Endostar顯像典型圖片。從圖中可以看出，腫瘤對(duì)18F-FB-Endostar有明顯的攝取。同時(shí)，富血管生成的人腦惡性膠質(zhì)瘤U87-MG細(xì)胞移植瘤攝取明顯高于肺腺癌A-549細(xì)胞移植瘤。肺腺癌A-549細(xì)胞移植瘤`中央有較明顯壞死，顯像劑主要分布于腫瘤周邊。以上結(jié)果說(shuō)明，18F-FB-Endostar顯像劑可以進(jìn)行腫瘤血管顯像。
[0050]實(shí)施例6:荷瘤裸鼠“競(jìng)爭(zhēng)抑制”顯像實(shí)驗(yàn)
[0051]取前述荷瘤裸鼠2只，肺腺癌A-549細(xì)胞和人腦惡性膠質(zhì)瘤U87-MG細(xì)胞移植瘤各I只。每只裸鼠進(jìn)行兩次顯像，第I天顯像條件同實(shí)施例4。第2天，在注射18F-FB-Endostar顯像劑之前I小時(shí)，每只裸鼠通過(guò)尾靜脈注射Img Endostar原藥,注射顯像劑后顯像時(shí)間及條件與第I天顯像完全相同。
[0052]圖8為荷人肺腺癌A549細(xì)胞裸鼠抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果。圖9為荷人腦惡性膠質(zhì)瘤U87-MG細(xì)胞裸鼠抑制實(shí)驗(yàn)結(jié)果。從圖8和圖9結(jié)果可以看出，注射Endostar原藥后，18F-FB-Endostar顯像劑在荷瘤裸鼠腫瘤的攝取明顯受到了抑制。說(shuō)明18F-FB-Endostar顯像劑與Endostar原藥在體內(nèi)具有相同的祀點(diǎn)，可以如實(shí)的反映Endostar原藥在荷瘤裸鼠體內(nèi)的分布。
【權(quán)利要求】
1.一種重組人血管內(nèi)皮抑制素顯像劑，其特征在于，所述顯像劑具有下式的通式結(jié)構(gòu): R-雙功能螯合劑-X， 其中R為正電子放射性核素或禮，X為重組人血管內(nèi)皮抑制素。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述顯像劑，其特征在于，所述R選自:18F、55C0、6°Cu、61Cu、62Cu、64Cu、66Ga、68Ga、82Rb 和 86Y。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述顯像劑，其特征在于，所述R也可為:釓(Gd)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述顯像劑，其特征在于，所述R-雙功能螯合劑選自:[18F]SFB、[18F] SFBS, [18F] SFMB, [18F] FPA、[18F] FPPD, [18F] FBEM, [18F]FBB0、[18F] NPFP0
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述顯像劑，其特征在于，所述R-雙功能螯合劑也可選自R-DOTA-NHS、R-NOTA-NHS，其中所述 R-D0TA-NHS 選自:[55Co]D0TA_NHS、[60Cu] DOTA-NHS,[61Cu] DOTA-NHS、[62Cu] DOTA-NHS、[64Cu] DOTA-NHS, [66GajDOTA-NHS, [68GajDOTA-NHS, [86Y]DOTA-NHS, [Gd] DOTA-NHS ;所述 R-N0TA-NHS 選自:[Al18F] NOTA-NHS、[66GajNOTA-NHS, [68Ga]NOTA-NHS、 [Gd]NOTA-NHS。
6.一種如權(quán)利要求4所述顯像劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟: 將R-雙功能螯合劑用乙腈洗脫，用氮?dú)獯蹈桑倥c重組人血管內(nèi)皮抑制素緩沖溶液反應(yīng)，反應(yīng)完畢后對(duì)反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行洗脫分離，獲得目標(biāo)產(chǎn)物。
7.—種如權(quán)利要求5所述`顯像劑的制備方法，其特征在于，包括如下步驟: 先將雙功能螯合劑與重組人血管內(nèi)皮抑制素緩沖溶液反應(yīng)，制備雙功能螯合劑-重組人血管內(nèi)皮抑制素，再應(yīng)用R與雙功能螯合劑-重組人血管內(nèi)皮抑制素結(jié)合，反應(yīng)完畢后對(duì)反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行洗脫分離，獲得目標(biāo)產(chǎn)物。
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的制備方法，其特征在于，所述雙功能螯合劑與重組人血管內(nèi)皮抑制素的摩爾比為10-40:1。
9.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的制備方法，其特征在于，所述雙功能螯合劑與重組人血管內(nèi)皮抑制素的摩爾比為20:1。
10.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述的制備方法，其特征在于，雙功能螯合劑與重組人血管內(nèi)皮抑制素結(jié)合的反應(yīng)溫度為3(T45°C，反應(yīng)時(shí)間為10mirT60min。
11.根據(jù)權(quán)利要求11所述的制備方法，其特征在于，雙功能螯合劑與重組人血管內(nèi)皮抑制素結(jié)合的反應(yīng)溫度為37°C，反應(yīng)時(shí)間為30min。
12.權(quán)利要求1所述的重組人血管內(nèi)皮抑制素顯像劑應(yīng)用于觀測(cè)腫瘤新生血管狀況的活體顯像中，其中正電子放射性核素標(biāo)記的顯像劑應(yīng)用于PET或PET/CT顯像，釓標(biāo)記的顯像劑應(yīng)用于MR顯像；所述腫瘤包括:肺癌、腦膠質(zhì)瘤、子宮內(nèi)膜異位癥、血管生成性眼底病變、神經(jīng)內(nèi)分泌瘤、結(jié)腸癌、骨癌、肝癌、胃癌、胰腺癌、口腔癌、乳腺癌、前列腺癌、淋巴癌、食道癌、鼻咽癌、肉瘤、腎癌、膽癌、惡性黑色素腫瘤。
13.根據(jù)權(quán)利要求1所述顯像劑、權(quán)利要求6或7所述的制備方法，其特征在于，所述重組人血管內(nèi)皮抑制素為Endostar。
【文檔編號(hào)】A61K49/14GK103861129SQ201210532923
【公開(kāi)日】2014年6月18日 申請(qǐng)日期:2012年12月11日 優(yōu)先權(quán)日:2012年12月11日
【發(fā)明者】于金明, 胡旭東, 邢力剛, 岳德勝, 張弢, 林歡 申請(qǐng)人:山東省腫瘤防治研究院, 江蘇先聲藥物研究有限公司, 江蘇先聲藥業(yè)有限公司