一種藥物組合物制劑的檢測方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種藥物組合物制劑的檢測方法，該方法包括指標(biāo)成分的HPLC含量測定和/或?qū)φ账幉幕蛑笜?biāo)成分的TLC鑒別中的一種或幾種。本發(fā)明是以一定配比關(guān)系的黃芩、板藍(lán)根、甘草、山豆根、麻黃和桔梗六味中藥原料藥，按照常規(guī)制法制成臨床可接受的劑型，如顆粒劑、口服液、丸劑、散劑、注射劑等。每制劑單位量中黃芩以黃芩苷（C21H18O11）計，黃芩苷不得少于20mg；甘草以甘草酸（C42H62O16）計，甘草酸不得少于4.0mg。通過本發(fā)明的含量測定方法和/或鑒別方法，提高了產(chǎn)品穩(wěn)定性，有利于提高產(chǎn)品質(zhì)量的可控性。
【專利說明】一種藥物組合物制劑的檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種藥物組合物制劑的檢測方法，特別涉及一種藥物組合物制劑的含量測定方法和/或鑒別方法。
【背景技術(shù)】
[0002]以黃芩、板藍(lán)根、甘草、山豆根、麻黃、桔梗六味中藥組成的處方，其來自洛陽畜牧獸醫(yī)總站1999年開始應(yīng)用的經(jīng)驗處方，最初源自《傷寒論》“麻杏甘石湯”，經(jīng)藥味加減而來，去杏仁止咳平喘的組成部分，處方中各藥以傳統(tǒng)君、臣、佐、使順序排列，黃芩、板藍(lán)根清熱解毒，以祛除外邪為本方之君藥；甘草、麻黃祛痰止咳、宣肺平喘，以解除癥狀為本方之臣藥；組方中佐以清熱解毒藥山豆根，與桔梗同用增強(qiáng)其清熱解毒、利咽喉的作用，載藥上行為本方之使藥。諸味藥材按適當(dāng)比例配制，相互作用，相輔相承，使本處方具有清熱解毒、止咳平喘的功效，臨床制劑有以該六位中藥制成的芩黃口服液和芩黃顆粒劑，用于治療雞傳染性支氣管。臨床試驗結(jié)果表明，雞口腔滴服芩黃口服液lml/kg，一日一次，連用I?2日，對人工發(fā)病的雞傳染性支氣管炎有良好的治療效果，療效優(yōu)于雙黃連口服液。
[0003]以黃芩、板藍(lán)根、甘草、山豆根、麻黃、桔梗六味藥材制成的制劑，例如芩黃口服液和芩黃顆粒劑是基于臨床經(jīng)驗處方開發(fā)的中藥制劑，其處方成分比較多，前處理難度比較大，干擾多。目前，針對該方尚無質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，缺乏對該產(chǎn)品進(jìn)行全面質(zhì)控的檢測方法，以保證產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性、均一性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種由黃芩、板藍(lán)根、甘草、山豆根、麻黃、桔梗六味藥材組成的藥物組合物制劑的檢測方法，通過建立該檢測方法，可以加強(qiáng)該制劑質(zhì)量的可控性和穩(wěn)定性。
[0005]根據(jù)本發(fā)明，提供了一種藥物組合物制劑的檢測方法，其中，該方法中含有如下含量測定和/或鑒別中的一種或幾種:
[0006]含量測定:
[0007](I)黃芩
[0008]以黃芩苷為對照品，采用高效液相色譜法，所述色譜條件為:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇:水:冰乙酸為50:50:1 (v/v/v)為流動相；檢測波長為274nm ;柱溫為25 °C ;理論板數(shù)按黃芩苷峰計算不低于1500 ；
[0009](2)甘草
[0010]以甘草酸單銨鹽為對照品，采用高效液相色譜法，所述色譜條件為:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇:0.2mol/L乙酸銨為65:34 (v/v)，冰乙酸調(diào)節(jié)pH值至4.50為流動相；檢測波長為250nm ;理論板數(shù)按甘草酸峰計算不低于2000 ；
[0011]鑒別:
[0012](3)麻黃[0013]以鹽酸麻黃堿為對照品，采用薄層色譜法鑒別，所述薄層色譜條件為:以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板，以三氯甲烷:甲醇:濃氨試液為20:5:0.5 (v/v/v)為展開劑，以0.5%茚三酮乙醇溶液為顯色劑；
[0014](4)桔梗
[0015]以桔梗對照藥材做對照，采用薄層色譜法鑒別，所述薄層色譜條件為:以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板，以三氯甲烷:乙醚為1:1 (v/v)為展開劑，以10%硫酸乙醇溶液為顯色劑；
[0016](5)山豆根
[0017]以氧化苦參堿和苦參堿做對照，采用薄層色譜法鑒別，所述薄層色譜條件為:以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板，以三氯甲烷:甲醇:濃氨試液為4:1:0.1 (v/v/v)為展開劑，以稀碘化鉍鉀試液為顯色劑；[0018](6)板藍(lán)根
[0019]以板藍(lán)根藥材和靛玉紅做對照，采用薄層色譜法鑒別，所述薄層色譜條件為:以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板，以苯:三氯甲烷:丙酮:冰乙酸為5:4:1:0.Kv/v/v/v)為展開劑；
[0020]該方法中所述藥物組合物制劑的原料藥組成及配比(按重量計)為:
[0021 ] 黃芩400-800份板藍(lán)根400-800份
[0022]甘草200~600份山豆根200~600份
[0023]麻黃50~80份桔梗50~80份。
[0024]優(yōu)選地，所述藥物組合物制劑的檢測方法，其中，該方法中含有如下含量測定和/或鑒別中的一種或幾種:
[0025]含量測定:
[0026](I)黃芩
[0027]照高效液相色譜法測定；
[0028]色譜條件:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇:水:冰乙酸為50:50:1(v/v/v)為流動相；檢測波長為274nm ;柱溫為25°C ;理論板數(shù)按黃芩苷峰計算不低于1500 ；
[0029]對照品溶液的制備:精密稱取黃芩苷對照品IOmg，置100mL量瓶中，加50%甲醇適量，置水浴中振蕩使溶解，放置至室溫，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得每1ml含黃芩苷0.1mg的對照品溶液；
[0030]供試品溶液的制備:取所述藥物組合物制劑中的I個制劑單位，用50%甲醇定容至20(T250ml，搖勻；
[0031]所述藥物組合物制劑中每制劑單位中含黃芩以黃芩苷(C21H18O11)計，黃芩苷不少于 20mg ；
[0032](2)甘草
[0033]照高效液相色譜法測定；
[0034]色譜條件:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇:0.2!1101/1乙酸銨為65:34(v/v)，冰乙酸調(diào)節(jié)pH值至4.50為流動相；檢測波長為250nm ;理論板數(shù)按甘草酸峰計算不低于2000 ；[0035]對照品溶液的制備:取甘草酸單銨鹽對照品10mg，精密稱定，置50ml量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得每1ml含甘草酸單銨鹽對照品0.2mg ；
[0036]供試品溶液的制備:取所述藥物組合物制劑的2個制劑單位，用流動相稀釋并定容至50ml，搖勻；
[0037]所述藥物組合物制劑中每制劑單位中含甘草以甘草酸(C42H62O16)計，甘草酸不少于 4.0mg ；
[0038]鑒別方法:
[0039](3)麻黃
[0040]照薄層色譜法鑒別；
[0041]取所述藥物組合物制劑，加濃氨試液使呈堿性，再用乙醚提取，分取乙醚液，蒸干，殘渣加三氯甲烷溶解，作為供試品溶液，每1ml所述供試品溶液中含有3~10個制劑單位；
[0042]另取鹽酸麻黃堿對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；
[0043]照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5~20μ 1，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷:甲醇:濃氨試液為20:5:0.5 (v/v/v)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以0.5%茚三酮乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；
[0044](4)桔梗
[0045]照薄層色譜法鑒別；
[0046]取所述藥物組合物制劑，加7%硫酸`乙醇溶液:水為1: 3( v/v)的混合溶液，加熱回流，濾過，濾液用三氯甲烷提取，三氯甲烷液加水洗滌，然后用無水硫酸鈉、無水硫酸鎂、無水氯化鈣等無機(jī)脫水試劑中的一種或幾種對三氯甲烷液進(jìn)行脫水，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇使溶解，作為供試品溶液，即每1ml所述供試品溶液中含有20-30個制劑單位；
[0047]另取桔梗對照藥材，加7%硫酸乙醇溶液:水為1: 3 (v/v)的混合溶液，加熱回流，濾過，濾液用三氯甲烷提取，合并三氯甲烷液，加水洗滌，無水硫酸鈉脫水，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇使溶解，制成對照藥材溶液，即每1ml甲醇中含有所述桔梗對照藥材2~3g ；
[0048]照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5~20μ 1，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷:乙醚為1:1 (v/v)為展開劑，展開，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的主斑點；
[0049](5)山豆根
[0050]照薄層色譜法鑒別；
[0051]取所述藥物組合物制劑，加濃氨試液將pH值調(diào)至8.0-12.0，再加三氯甲烷，提取，過濾，收集三氯甲烷液，蒸干，殘渣加三氯甲烷使溶解，作為供試品溶液，即每1ml所述供試品溶液中含有5~10個制劑單位；
[0052]另取氧化苦參堿對照品，加三氯甲烷制成每1ml含Img所述氧化苦參堿對照品的溶液，作為氧化苦參堿對照品溶液；
[0053]另取苦參堿對照品，加三氯甲烷制成每1ml含Img所述苦參堿對照品的溶液，作為苦參堿對照品溶液；
[0054]照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各3~20μ 1，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷:甲醇:濃氨試液為4: I: 0.l(v/v/v)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液，供試品色譜中，在與對照品相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；
[0055](6)板藍(lán)根
[0056]照薄層色譜法鑒別；
[0057]取所述藥物組合物制劑，加硫酸鈉飽和的水溶液，用乙醚提取，乙醚液用氫氧化鈉溶液洗滌，再用水洗滌，分取乙醚液，蒸干，殘渣加三氯甲烷使溶解，作為供試品溶液，即每Iml所述供試品溶液中含有30-60個制劑單位；
[0058]另取板藍(lán)根對照藥材，加入三氯甲烷，超聲處理5~30分鐘，濾過，濾液濃縮至每Iml溶液含有Ig所述板藍(lán)根對照藥材，作為對照藥材溶液；
[0059]再取靛玉紅對照品，加三氯甲烷制成每1ml含Img的溶液，作為對照品溶液；
[0060]照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各5~20μ 1，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以苯:三氯甲烷:丙酮:冰乙酸為5: 4: I: 0.1 (ν/v/v/v)為展開劑，展開，取出，晾干，供試品色譜中，在與對照品和對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；
[0061]該方法中所述藥物組合物制劑的原料藥組成及配比(按重量計)為:
[0062]黃芩400-800份板藍(lán)根400-800份
[0063]甘草200~600份山豆根200~600份
[0064]麻黃50~80份桔梗50~80份。
[0065]優(yōu)選地，所述藥物組合物制劑的原料藥組成及配比為:
[0066]黃岑600g板藍(lán)根600g
[0067]甘草400g山豆根400g
[0068]麻黃66g桔梗 66g。
[0069]上述藥物組合物制劑由如下方法制成:
[0070]板藍(lán)根用乙醇回流提取，過濾，合并濾液，經(jīng)濃縮，收集濃縮液，備用；麻黃用水于70°C以下真空動態(tài)提取，過濾，濃縮，濃縮液用NaOH調(diào)pH值至10-?2，水蒸汽蒸餾，收集餾出液，加稀鹽酸調(diào)節(jié)PH至4-5，備用；黃芩、山豆根、甘草、桔梗4味藥材與板藍(lán)根經(jīng)乙醇提取后的藥渣混合，用8~10體積份的水于70°C以下真空動態(tài)提取，過濾，濾液經(jīng)濃縮，備用；合并以上各備用液，與藥學(xué)上可接受的賦形劑混合制成1000個制劑單位，所述制劑為顆粒劑、口服液、丸劑、注射劑。
[0071]所述該藥物組合物的口服液的鑒別還包括:該口服液pH為4.0-7.0 ;該口服液的相對密度不低于1.02。
[0072]本發(fā)明是以一定配比關(guān)系的黃芩、板藍(lán)根、甘草、山豆根、麻黃和桔梗六味中藥原料藥，按照常規(guī)制法制成臨床可接受的劑型，如顆粒劑、口服液、丸劑、散劑、注射劑等。本發(fā)明提供了黃芩苷和甘草酸的HPLC方法，該方法專屬性強(qiáng)，重現(xiàn)性好。本發(fā)明還提供了麻黃等其他四味藥材的TLC鑒別方法，通過本發(fā)明的含量測定方法和/或鑒別方法，提高了產(chǎn)品穩(wěn)定性，有利于提聞廣品質(zhì)量的可控性。
【專利附圖】

【附圖說明】[0073]圖1芩黃口服液之黃芩苷對照品、供試品、陰性對照品的HPLC圖。
[0074]圖2芩黃口服液之甘草酸對照品、供試品、陰性對照品的HPLC圖。
[0075]圖3芩黃顆粒劑之黃芩苷對照品、供試品、陰性對照品的HPLC圖。
[0076]圖4芩黃顆粒劑之甘草酸對照品、供試品、陰性對照品的HPLC圖。
【具體實施方式】
[0077]為使本發(fā)明更加容易理解，下面將結(jié)合實施例來詳細(xì)說明本發(fā)明，這些實施例僅起說明性作用，并不局限于本發(fā)明的應(yīng)用范圍，下列實施例中未提及的具體實驗方法，通常按照常規(guī)實驗方法進(jìn)行。本發(fā)明所述的I個制劑單位即為Ig或Iml或I片或I丸或I粒等，例如，顆粒劑的I個制劑單位即為顆粒劑Ig ; 口服液的I個制劑單位為口服液1ml。本發(fā)明中采用“％”表達(dá)含量或濃度時，未特別說明之處均為質(zhì)量百分比。本發(fā)明所提供的該藥物組合物制劑的檢測方法中包含的含量測定和/或鑒別中的一種或幾種是指對于黃芩和甘草兩味藥材的HPLC含量測定方法以及麻黃、桔梗、山豆根和板藍(lán)根四味藥材的TLC鑒別方法這六種方法中任選其一或幾種作為該藥物組合物制劑的檢測方法，以下的實施例中均例舉了各制劑中該六種方法的組合作為其檢測方法，這僅僅是示范而已，本發(fā)明對該六種方法是選取一種，還是兩種或多種方法的組合并不做限制。
[0078]實施例
[0079]以下通過實驗例來進(jìn)一步說明本發(fā)明的【具體實施方式】:
[0080]實施例1芩黃口服液及芩黃顆粒劑的制備
[0081](I)芩黃口服液:處方:黃芩600g，板藍(lán)根600g，甘草400g，山豆根400g，麻黃66g，桔梗66g。制法:以上6味，板藍(lán)根用乙醇回流提取3次，每次4800ml，過濾，合并濾液，回收乙醇，收集濃縮液，備用；麻黃置提取罐內(nèi)加8倍量水，50°C下真空動態(tài)提取6小時，過濾，濃縮，濃縮液加0.lmol/L NaOH調(diào)pH值至11，水蒸汽蒸餾，收集餾出液，加稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至4，備用；黃芩、山豆根、甘草、桔梗4味藥材與板藍(lán)根經(jīng)乙醇提取后的藥渣一起置提取罐內(nèi)，50°C下真空動態(tài)提取4小時，過濾，濃縮至相對密度1.3 (70°C)，加乙醇使含醇量達(dá)60%，冷藏24小時，過濾，濾液回收乙醇，收集濃縮液,備用。合并以上各備用液,加純化水制成1000個制劑單位，即口服液1000ml。
[0082](2)芩黃顆粒劑:處方:黃芩600g，板藍(lán)根600g，甘草400g，山豆根400g，麻黃66g，桔梗66g。制法:以上6味，板藍(lán)根用乙醇回流提取3次，每次4800ml，過濾，合并濾液，回收乙醇，收集濃縮液，備用；麻黃置提取罐內(nèi)加8倍量水，70°C下真空動態(tài)提取6小時，濾過，濃縮，濃縮液加0.lmol/L NaOH調(diào)pH值至12，水蒸汽蒸餾，收集餾出液，加稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至5，備用；黃芩、山豆根、甘草、桔梗4味藥材與板藍(lán)根經(jīng)乙醇取提后的藥渣一起置提取罐內(nèi)，加水20.66L70°C下真空動態(tài)提取4小時，濾過，濃縮，備用。合并以上各備用液，加蔗糖、糊精適量制成顆粒劑，干燥，制成1000個制劑單位，即顆粒劑1000g。
[0083]實施例2芩黃口服液鑒別方法的專屬性考察
[0084](I)試劑與樣品
[0085]對照品:鹽酸麻黃堿，靛玉紅，氧化苦參堿，苦參堿，桔梗對照藥材，板藍(lán)根對照藥材均購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。
[0086]樣品:實施例1 ( I)制備。[0087]陰性樣品:按照實施例1 (I)方法制備各鑒別項陰性對照樣品。
[0088](2)麻黃的鑒別
[0089]取實施例1 (I)制備的樣品5ml，濃縮至近干，加0.2%鹽酸溶液20ml，超聲處理使溶解，用濃氨試液調(diào)節(jié)pH值至11~12，用乙醚振搖提取2次，每次30ml，合并乙醚液，蒸干，殘渣加三氯甲烷Iml使溶解，作為供試品溶液；另取鹽酸麻黃堿對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；按處方配比稱取除麻黃外其它藥材并按實施例1 (I)制備工藝制備樣品作為陰性樣品，取陰性樣品同法操作制備陰性對照溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各5 μ 1，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷:甲醇:濃氨試液(20: 5: 0.5，v/v/v)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以
0.5%茚三酮乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰。結(jié)果:在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，供試品顯相同顏色的斑點，陰性對照不顯示斑點，表明方法專屬性良好。
[0090](3)桔梗的鑒別
[0091]取實施例1 (I)制備的樣品20ml，加7%硫酸乙醇溶液:水(I: 3，v/v)混合溶液20ml，加熱回流3小時，放冷，濾過，濾液用三氯甲烷振搖提取3次，每次40ml，合并三氯甲烷液，加水洗滌，無水硫酸鈉脫水，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇Iml使溶解，作為供試品溶液；另取桔梗對照藥材3g，加7%硫酸乙醇溶液-水(I: 3)混合溶液40ml，同法制成對照藥材溶液；按處方配比稱取除桔梗外其它藥材并按實施例1 (I)制備工藝制備樣品作為陰性樣品，取陰性樣品同法操作制備陰性對照溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各5~10 μ 1，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷:乙醚(I: 1，v/v)為展開劑，展開，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105°C加熱至斑點顯色清晰。結(jié)果:在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，供試品顯相同顏色的斑點，陰性對照不顯示斑點，表明方法專屬性良好。`
[0092](4)山豆根的鑒別
[0093]取實施例1 (I)制備的樣品10ml，加濃氨試液數(shù)滴使呈堿性，再加三氯甲烷10ml，振搖提取，靜置，分取三氯甲烷液，蒸干，殘渣加三氯甲烷Iml使溶解，作為供試品溶液?’另取氧化苦參堿及苦參堿對照品，分別加三氯甲烷制成每1ml含Img的溶液，作為對照品溶液；按處方配比稱取除山豆根外其它藥材并按實施例1 (I)制備工藝制備樣品作為陰性樣品，取陰性樣品同法操作制備陰性對照溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述四種溶液各3~6^1，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以三氯甲烷:甲醇:濃氨試液(4: I: 0.1，v/v/v)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以稀碘化鉍鉀試液。結(jié)果:在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，供試品顯相同顏色的斑點，陰性對照不顯示斑點，表明方法專屬性良好。
[0094](5)板藍(lán)根的鑒別
[0095]取實施例1 (I)制備的樣品30ml，加硫酸鈉飽和的水溶液30ml，用乙醚振搖提取2次，每次30ml，合并乙醚液，用1%氫氧化鈉溶液洗滌2次，每次20ml，再用水洗滌3次，每次20ml，分取乙醚液，蒸干，殘渣加三氯甲烷0.5ml使溶解，作為供試品溶液；另取板藍(lán)根對照藥材lg，加入三氯甲烷20ml，超聲處理20分鐘，濾過，濾液濃縮至1ml，作為對照藥材溶液；再取靛玉紅對照品，加三氯甲烷制成每1ml含Img的溶液，作為對照品溶液；按處方配比稱取除板藍(lán)根外其它藥材并按實施例1 (I)制備工藝制備樣品作為陰性樣品，取陰性樣品同法操作制備陰性對照溶液。照薄層色譜法試驗，吸取上述四種溶液各10 μ 1，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以苯:三氯甲烷:丙酮:冰乙酸(5:4:1: 0.1，ν/ν/ν/ν)為展開劑，展開，取出，晾干，立即觀察。結(jié)果:在與對照藥材和對照品色譜相應(yīng)的位置上，供試品顯相同顏色的斑點，陰性對照不顯示斑點，表明方法專屬性良好。
[0096]實施例3岑黃口服液中黃岑苷含量測定的方法學(xué)考察
[0097](I)儀器與試劑、樣品
[0098]儀器:依利特Ρ230型高效液相色譜儀(UV230型紫外檢測器)。
[0099]試劑:甲醇為色譜純；水為二次重蒸水；其他試劑均為分析純。
[0100]對照品:黃芩苷對照品購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。
[0101]樣品:實施例1 (I)制備。
[0102](2)色譜條件
[0103]色譜柱為Agilent TC-C18色譜柱(150X4.6_，5 μ m);流動相為甲醇:水:冰乙酸(50:50:1，v/v/v);檢測波長為 274nm ;柱溫為 25°C ;流速為 1.0ml/min。
[0104](3)溶液的制備
[0105]對照品溶液的制備稱取黃芩苷對照品10.18mg，置IOOml量瓶中，加50%甲醇適量，置水浴中振蕩使溶解，放置至室溫，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
[0106]供試品溶液的制備精密量取實施例1(1)制備的樣品2ml，置IOOml量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻。精密量取10ml，置50ml量瓶中，加50%甲醇至刻度，搖勻，即得。
[0107]陰性對照溶液的制備按照實施例1 (I)的制備方法制備缺黃芩的陰性制劑，取陰性制劑，再按照供試品溶液的制備方法制備陰性對照溶液，即得。
[0108](4)專屬性試驗
[0109]分別精密吸取對照品溶液、供試品溶液、陰性對照溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，按上述色譜條件進(jìn)行試驗，檢測結(jié)果見圖1，其中，I是黃芩苷對照品色譜圖，2是供試品(黃芩苷)色譜圖，3是缺黃芩陰性對照色譜圖。由圖1可知，I和2中在約10分鐘時出現(xiàn)典型的黃芩苷峰(即I中標(biāo)號為A的峰，2中編號為A的峰)，且與3比較，表明陰性對照溶液在與對照品、供試品色譜峰相應(yīng)的位置上無干擾，方法專屬性良好。
[0110](5)線性范圍考察
[0111]精密量取黃芩苷對照品溶液(509.2 μ g/ml )2、4、8、12、20ml置50ml量瓶中，加50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，得濃度分別為20.4,40.7,81.5、122.2,203.7,509.2 μ g/ml的對照品溶液。分別進(jìn)樣10μ 1，記錄色譜圖，測定其峰面積，并以峰面積值(A)對進(jìn)樣量(X)進(jìn)行回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，結(jié)果表明，在0.204?5.092 Ug范圍內(nèi)，黃芩苷峰面積值與進(jìn)樣量有良好的線性關(guān)系。數(shù)據(jù)見表I。
[0112]表I黃芩苷線性關(guān)系試驗結(jié)果
【權(quán)利要求】
1.一種藥物組合物制劑的檢測方法，其特征在于，該方法中含有如下含量測定和/或鑒別中的一種或幾種: 含量測定: (1)黃芩 以黃芩苷為對照品，采用高效液相色譜法，所述色譜條件為:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇:水:冰乙酸為50:50:1 (v/v/v)為流動相；檢測波長為274nm ;柱溫為25 0C ;理論板數(shù)按黃芩苷峰計算不低于1500 ； (2)甘草 以甘草酸單銨鹽為對照品，采用高效液相色譜法，所述色譜條件為:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇:0.2mol/L乙酸銨為65:34 (v/v)，冰乙酸調(diào)節(jié)pH值至4.50為流動相；檢測波長為250nm ;理論板數(shù)按甘草酸峰計算不低于2000 ； 鑒別: (3)麻黃 以鹽酸麻黃堿為對照品，采用薄層色譜法鑒別，所述薄層色譜條件為:以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板，以三氯甲烷:甲醇:濃氨試液為20:5:0.5(v/v/v)為展開劑，以0.5%茚三酮乙醇溶液為顯色劑； (4)桔梗` 以桔梗對照藥材做對照，采用薄層色譜法鑒別，所述薄層色譜條件為:以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板，以三氯甲烷:乙醚為1:1 (v/v)為展開劑，以10%硫酸乙醇溶液為顯色劑； (5)山豆根 以氧化苦參堿和苦參堿做對照，采用薄層色譜法鑒別，所述薄層色譜條件為:以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板，以三氯甲烷:甲醇:濃氨試液為4:1:0.1 (v/v/v)為展開劑，以稀碘化鉍鉀試液為顯色劑； (6)板藍(lán)根 以板藍(lán)根藥材和靛玉紅做對照，采用薄層色譜法鑒別，所述薄層色譜條件為:以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板，以苯:三氯甲烷:丙酮:冰乙酸為5:4:1:0.1 (v/v/v/V)為展開劑； 該方法中所述藥物組合物制劑的原料藥組成及配比(按重量計)為: 黃芩400-800份板藍(lán)根400-800份 甘草200~600份山豆根200~600份 麻黃50~80份桔梗50~80份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于， (I)所述黃芩的含量測定方法還包括: 對照品溶液的制備:稱取黃芩苷對照品10mg，置100mL量瓶中，加50%甲醇適量，置水浴中振蕩使溶解，放置至室溫，用50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得每1ml含黃芩苷0.1mg的對照品溶液； 供試品溶液的制備:取所述藥物組合物制劑中的I個制劑單位，用50%甲醇定容至20(T250ml，搖勻；所述藥物組合物制劑中每制劑單位中含黃芩以黃芩苷(C21H18O11)計，黃芩苷不少于20mg ； (2)所述甘草的含量測定方法還包括: 對照品溶液的制備:取甘草酸單銨鹽對照品10mg，精密稱定，置50ml量瓶中，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得每1ml含甘草酸單銨鹽對照品0.2mg ； 供試品溶液的制備:取所述藥物組合物制劑的2個制劑單位，用流動相稀釋并定容至50ml,搖勻； 所述藥物組合物制劑中每制劑單位中含甘草以甘草酸(C42H62O16)計，甘草酸不少于4.0mg ； (3)所述麻黃的鑒別方法還包括: 供試品溶液的制備:取所述藥物組合物制劑，加濃氨試液使呈堿性，再用乙醚提取，分取乙醚液，蒸干，殘渣加三氯甲烷溶解，作為供試品溶液，每1ml所述供試品溶液中含有3^10個制劑單位； 對照品溶液的制備 :另取鹽酸麻黃堿對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液； (4)所述桔梗的鑒別方法還包括: 供試品溶液的制備:取所述藥物組合物制劑，加7%硫酸乙醇溶液:水為1: 3 (v/v)的混合溶液，加熱回流，濾過，濾液用三氯甲烷提取，三氯甲烷液加水洗滌，然后用無水硫酸鈉、無水硫酸鎂、無水氯化鈣等無機(jī)脫水試劑中的一種或幾種對三氯甲烷液進(jìn)行脫水，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇使溶解，作為供試品溶液，即每1ml所述供試品溶液中含有20^30個制劑單位； 對照品溶液的制備:另取桔梗對照藥材，加7%硫酸乙醇溶液:水為1: 3 (v/v)的混合溶液，加熱回流，濾過，濾液用三氯甲烷提取，合并三氯甲烷液，加水洗滌，無水硫酸鈉脫水，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇使溶解，制成對照藥材溶液，即每1ml甲醇中含有所述桔梗對照藥材2~3g ； (5)所述山豆根的鑒別方法還包括: 供試品溶液的制備:取所述藥物組合物制劑，加濃氨試液將PH值調(diào)至8.0-12.0，再加三氯甲烷，提取，過濾，收集三氯甲烷液，蒸干，殘渣加三氯甲烷使溶解，作為供試品溶液，即每1ml所述供試品溶液中含有5~10個制劑單位； 氧化苦參堿對照品溶液的制備:另取氧化苦參堿對照品，加三氯甲烷制成每1ml含Img所述氧化苦參堿對照品的溶液； 苦參堿對照品溶液的制備:另取苦參堿對照品，加三氯甲燒制成每1ml含Img所述苦參喊對照品的溶液； (6)所述板藍(lán)根的鑒別方法還包括: 供試品溶液的制備:取所述藥物組合物制劑，加硫酸鈉飽和的水溶液，用乙醚提取，乙醚液用氫氧化鈉溶液洗滌，再用水洗滌，分取乙醚液，蒸干，殘渣加三氯甲烷使溶解，作為供試品溶液，即每1ml所述供試品溶液中含有30-60個制劑單位； 對照藥材溶液的制備:另取板藍(lán)根對照藥材，加入三氯甲烷，超聲處理5~30分鐘，濾過，濾液濃縮至每1ml溶液含有Ig所述板藍(lán)根對照藥材；對照品溶液的制備:取靛玉紅對照品，加三氯甲烷制成每1ml含Img的溶液。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的檢測方法，其特征在于，所述藥物組合物制劑的原料藥組成及配比為: 黃岑600g 板藍(lán)根600g 甘草400g 山豆根400g 麻黃66g 桔梗66g。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測方法，其特征在于，所述藥物組合物制劑由如下方法制成: 板藍(lán)根用乙醇提取，過濾，合并濾液，經(jīng)濃縮，收集濃縮液，備用；麻黃用水于70°C以下真空動態(tài)提取，過濾，濃縮，濃縮液用NaOH調(diào)pH值至10-12，水蒸汽蒸餾，收集餾出液，加稀鹽酸調(diào)節(jié)PH至 5，備用；黃芩、山豆根、甘草、桔梗4味藥材與板藍(lán)根經(jīng)乙醇提取后的藥渣混合，用純化水于70°C以下真空動態(tài)提取，過濾，濾液經(jīng)濃縮，備用；合并以上各備用液，與藥學(xué)上可接受的賦形劑混合制成1000個制劑單位，所述制劑為顆粒劑、口服液、丸劑或注射劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測方法，其特征在于，所述藥物組合物制劑由如下方法制成: 板藍(lán)根用6~10體積份的乙醇回流提取3次，過濾，合并濾液，經(jīng)濃縮，收集濃縮液，備用；麻黃用8體積份的水于5(T70°C真空動態(tài)提取6小時，過濾，濃縮，濃縮液用0.1mol/LNaOH調(diào)pH值至If 12，水蒸汽蒸餾，收集餾出液，加稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至 5，備用；黃芩、山豆根、甘草、桔梗4味藥材與板藍(lán)根經(jīng)乙醇提取后的藥渣混合，用8~10體積份的水于5(T70°C真空動態(tài)提取4小時，過濾，濾液經(jīng)濃縮，備用；合并以上各備用液，濃縮至相對密度為1. 1.3，加乙醇使含醇量為60-90%，冷藏，過濾，濾液經(jīng)濃縮，備用，合并以上各備用液，加水制成1000個制劑單位，即口服液1000ml。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的檢測方法，其特征在于，所述藥物組合物制劑由如下方法制成: 板藍(lán)根用6~10體積份的乙醇回流提取3次，過濾，合并濾液，經(jīng)濃縮，收集濃縮液，備用；麻黃用8體積份的水于5(T70°C真空動態(tài)提取6小時，過濾，濃縮，濃縮液用0.1mol/LNaOH調(diào)pH值至If 12，水蒸汽蒸餾，收集餾出液，加稀鹽酸調(diào)節(jié)pH至 5，備用；黃芩、山豆根、甘草、桔梗4味藥材與板藍(lán)根經(jīng)乙醇提取后的藥渣混合，用8~10體積份的水于5(T70°C真空動態(tài)提取4小時，過濾，濾液經(jīng)濃縮，備用；合并以上各備用液，加藥學(xué)上可接受的賦形劑制成1000個制劑單位，即顆粒劑1000g。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的檢測方法，其特征在于， (1)所述黃芩的含量測定方法中， 供試品溶液的制備:取所述口服液2ml，用50%甲醇定容至100ml，混勻后量取其中的IOml,用50%甲醇定容至50ml,搖勻； 所述口服液每1ml含黃芩以黃芩苷(C21H18O11)計，黃芩苷不少于20mg ； (2)所述甘草的含量測定方法中， 供試品溶液的制備:取所述口服液2ml，用流動相稀釋并定容至50ml，搖勻； 所述口服液每1ml含甘草以甘草酸(C42H62O16)計，甘草酸不少于4.0mg ；(3)所述麻黃的鑒別方法中， 供試品溶液的制備:取所述口服液5ml，濃縮至干，用0.2%鹽酸溶液20ml，超聲處理使溶解，用濃氨試液調(diào)PH至1廣12，加乙醚，所述乙醚與所述口服液的體積比為5~20倍，過濾，濾液蒸干，殘渣加三氯甲烷使溶解，作為供試品溶液，即每1ml所述供試品溶液中含有3~IOml所述口服液； (4)所述桔梗的鑒別方法: 供試品溶液的制備:取所述口服液20ml，加7%硫酸乙醇溶液:水為1: 3 (v/v)的混合溶液20ml，加熱回流，濾過，濾液用三氯甲烷提取，合并三氯甲烷液，加水洗滌，無水硫酸鈉脫水，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇使溶解，作為供試品溶液，即每1ml所述供試品溶液中含有所述口服液l(T30ml ； (5)所述山豆根的鑒別方法中， 供試品溶液的制備:取所述口服液10ml，加濃氨試液將pH值調(diào)至8.0-12.0，再加三氯甲烷提取，過濾，收集三氯甲烷液，蒸干，殘渣加三氯甲烷使溶解，作為供試品溶液，即每1ml所述供試品溶液中含有所述口服液5~20ml ； (6)所述板藍(lán)根的鑒別方法中， 供試品溶液的制備:取所述口服液，加硫酸鈉飽和水溶液，該硫酸鈉飽和水溶液與所述口服液的體積比為1: l(v/v)，用乙醚提取，合并乙醚液，乙醚液先用1%氫氧化鈉溶液洗滌，再用水洗滌，分取乙醚液，蒸干，殘渣加三氯甲烷使溶解，作為供試品溶液，即每1ml所述供試品溶液中含有所述口服液4(T80ml。
8.根據(jù)權(quán)利要求5或7所述的檢測方法，其特征在于，所述鑒別還包括:該口服液pH為`4.0~7.0。
9.根據(jù)權(quán)利要求5或7或8所述的檢測方法，其特征在于，所述鑒別還包括:該口服液的相對密度不低于1.02。
10.根據(jù)權(quán)利要求6所述的檢測方法，其特征在于， (1)所述黃芩的含量測定中， 供試品溶液的制備:取所述顆粒劑0.5g，用50%甲醇定容至100ml，搖勻； 所述顆粒劑中每Ig中含黃芩以黃芩苷(C21H18O11)計，黃芩苷不少于20mg ； (2)所述甘草的含量測定中， 供試品溶液的制備:取所述顆粒劑2g,用流動相稀釋并定容至50ml,搖勻； 所述顆粒劑中每Ig含甘草以甘草酸(C42H62O16)計，甘草酸不少于4.0mg ； (3)所述麻黃的鑒別方法中， 供試品溶液的制備:取所述顆粒劑，加乙醚，所述乙醚與所述顆粒劑的體積質(zhì)量比為20^40 (ml/g),用濃氨試液調(diào)pH至11~12,超聲處理5~30min,過濾,濾液蒸干,殘洛加三氯甲烷使溶解，作為供試品溶液，即每1ml三氯甲烷中含有3~10g所述顆粒劑； (4)所述桔梗的鑒別方法中， 供試品溶液的制備:取所述顆粒劑，加7%硫酸乙醇溶液:水為1: 3 (v/v)的混合溶液，該混合溶液與所述顆粒劑的體積質(zhì)量比為2~5(ml/g)，加熱回流，濾過，濾液用三氯甲烷提取，合并三氯甲烷液，加水洗滌，無水硫酸鈉脫水，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇使溶解，作為供試品溶液，即每1ml甲醇中含有所述顆粒劑2(T40g ；(5)所述山豆根的鑒別方法中， 供試品溶液的制備:取所述顆粒劑，加濃氨試液將PH值調(diào)至8.0-12.0，再加三氯甲烷，所加三氯甲烷與所述顆粒劑的體積質(zhì)量比為5~20 (ml/g)，提取，過濾，收集三氯甲烷液，蒸干，殘渣加三氯甲烷使溶解，作為供試品溶液，即每1ml三氯甲烷中含有所述顆粒劑3~10g; (6)所述板藍(lán)根的鑒別方法中， 供試品溶液的制備:取所述顆粒劑，加硫酸鈉飽和水溶液，該硫酸鈉飽和水溶液與所述顆粒劑的體積質(zhì)量比為2飛(ml/g)，用乙醚提取，合并乙醚液，先用1%氫氧化鈉溶液洗滌，再用水洗滌，分取乙醚液，蒸干，殘渣加三氯甲烷使溶解，作為供試品溶液，即每1ml三氯甲烷中含有所述顆粒劑2(T40g。`
【文檔編號】A61K36/539GK103869000SQ201210525754
【公開日】2014年6月18日 申請日期:2012年12月7日 優(yōu)先權(quán)日:2012年12月7日
【發(fā)明者】張許科, 劉興金, 張曉會 申請人:洛陽惠中獸藥有限公司