專利名稱：物理改性后的中華眼鏡蛇蛇毒在制備治療急、慢性腎病的藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及ー種物理改性后的中華眼鏡蛇蛇毒在制備治療急慢性腎病藥物中的用途。
背景技術(shù)：
蛇毒是由蛇的毒腺分泌的多種組分構(gòu)成的復(fù)雜混合物。蛇毒是由蛇的毒腺分泌的多種組分構(gòu)成的復(fù)雜混合物。新鮮毒液呈蛋清祥粘稠液體，具有特殊的腥味。不同蛇種毒液色澤各異，中華眼鏡蛇蛇毒呈淡黃色。蛇毒的干物質(zhì)中90%以上是蛋白質(zhì)，是其毒性和生物學(xué)活性的主要成分。中華眼鏡蛇蛇毒成分主要有眼鏡蛇蛇毒因子(1%_2%)、心臟毒素 (40%_50%，又名細胞毒素、膜毒素)、神經(jīng)毒素(10%)等其它類蛋白質(zhì)。祖國傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為眼鏡蛇及其毒性成分可通經(jīng)絡(luò)，祛風(fēng)濕，并具有強身健體之功效。早在二十世紀(jì)初，人們就開始應(yīng)用蛇毒來緩解惡性腫瘤疼痛、神經(jīng)痛和關(guān)節(jié)痛，隨后出現(xiàn)一系列關(guān)于蛇毒有類似嗎啡樣鎮(zhèn)痛作用的報道。隨著研究的不斷深入，現(xiàn)在蛇毒及其制品已應(yīng)用于臨床，除了鎮(zhèn)痛作用夕卜，研究發(fā)現(xiàn)在抗風(fēng)濕、抗腫瘤以及在神經(jīng)系統(tǒng)疾病治療方面都有很好的療效。甘油誘導(dǎo)的大鼠急性腎病可使大鼠出現(xiàn)蛋白尿、血尿，腎臟變大、水腫、色澤加深，腎小球及腎小管損傷、功能異常，其與臨床上異型輸血、擠壓綜合癥引起的腎病非常相似，目前尚無有效的治療藥物。阿霉素誘導(dǎo)的大鼠慢性腎病可使大鼠出現(xiàn)典型的腎病綜合征(nephroticsyndrome)的表現(xiàn)，其動物模型的病理改變與人類微小病變腎病和局灶節(jié)段性腎小球硬化腎病相似。腎病綜合征在臨床上是ー種較難治愈的疾病，臨床上以蛋白尿為主要診斷指標(biāo)，目前，針對腎病綜合征的藥物治療仍以強的松等糖皮質(zhì)激素為主，但長期應(yīng)用副作用大，又易復(fù)發(fā)。本發(fā)明因此而來。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的主要目的在于提供ー種物理改性后的中華眼鏡蛇蛇毒在制備治療急、慢性腎病的藥物中的用途。本發(fā)明的技術(shù)方案是—種物理改性后的中華眼鏡蛇蛇毒在制備治療急、慢性腎病的藥物中的用途。優(yōu)選的，所述物理改性后的中華眼鏡蛇蛇毒是將中華眼鏡蛇蛇毒用去離子水溶解后加熱變性并復(fù)性后得到的；加熱溫度控制在50 100°C之間，加熱時間控制在Imin 300mino優(yōu)選的，所述藥物中還包括物理改性后的泰國和其它眼鏡蛇蛇毒。優(yōu)選的，所述藥物中還包括未改性的中華眼鏡蛇蛇毒、泰國和其它眼鏡蛇蛇毒或選自眼鏡蛇蛇毒中存在的神經(jīng)毒素、心臟毒素和眼鏡蛇毒因子的ー種。優(yōu)選的，所述藥物中還包括眼鏡蛇蛇毒或選自眼鏡蛇蛇毒中存在的神經(jīng)毒素、心臟毒素和眼鏡蛇毒因子的ー種與其它藥物組成的復(fù)方制劑。優(yōu)選的，所述藥物的給藥劑型選自口腔速溶藥膜、ロ服液、片劑、膠囊、噴霧劑、注射劑和透皮吸收制劑。所述藥物可以是ロ服液、膠囊、片劑、涂劑、巴布劑、噴霧劑和注射劑等，所述藥物可以是各種單方和復(fù)方制劑。所述藥物是通過物理改性后的眼鏡蛇蛇毒與其他藥物活性成分一起形成復(fù)方制劑或通過物理改性后的眼鏡蛇蛇毒與藥用輔料形成單方制劑。所述藥物中還包括未改性的中華眼鏡蛇蛇毒或選自未改性的中華眼鏡蛇蛇毒中起主要作用的神經(jīng)毒素、心臟毒素(膜毒素)和眼鏡蛇毒因子。所述藥物中還包括物理改性后的其他眼鏡蛇蛇毒。本發(fā)明中眼鏡蛇蛇毒為眼鏡蛇總毒。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)將眼鏡蛇總毒物理改性后可用于制備治療急慢性腎病藥物。本發(fā)明所用的眼鏡蛇蛇毒為中華眼鏡蛇總蛇毒，根據(jù)成份和藥效的相同性，所述蛇毒還包括其他眼鏡蛇蛇毒。所述藥物可以制備成選自以下的劑型口腔速溶藥膜、ロ服液、膠囊、片劑、噴霧劑、注射劑和經(jīng)皮吸收制劑。當(dāng)然，所述藥物還包括各種單方和復(fù)方制劑。盡管中華眼鏡蛇蛇毒在臨床上已用于治療風(fēng)濕和緩解惡性腫瘤疼痛、神經(jīng)痛和關(guān)節(jié)痛等，但目前還沒有文獻報道中華眼鏡蛇蛇毒可通過ロ服、鼻(ロ)粘膜噴霧、透皮給藥和注射給藥能治療急慢性腎病。本發(fā)明研究中首次發(fā)現(xiàn)中華眼鏡蛇蛇毒對甘油誘導(dǎo)的實驗動物急性腎病和阿霉素誘導(dǎo)的實驗動物慢性腎病有很好的治療作用。這ー發(fā)現(xiàn)，將對急慢性腎病的研究和藥物開發(fā)產(chǎn)生重大的影響，并有臨床實用價值，為中華眼鏡蛇蛇毒開辟臨床新的用途。本發(fā)明涉及中華眼鏡蛇蛇毒在制備治療急慢性腎病藥物中的用途。本發(fā)明經(jīng)動物實驗證實物理改性后的中華眼鏡蛇總毒在藥學(xué)上有效劑量(如大鼠1-3000 μ g/kg，人I 1000 μ g/kg)范圍內(nèi)能有效降低急慢性腎病的尿蛋白，降低血肌酐、尿素氮，改善腎臟病理損傷程度，恢復(fù)腎功能，具有用量小、安全、可ロ服、可注射、可透過ロ鼻粘膜和皮膚給藥等優(yōu)點。本發(fā)明通過中華眼鏡蛇總毒經(jīng)物理方法處理達到減毒增效目的，物理處理后的眼鏡蛇毒能有效降低急慢性腎病的尿蛋白，降低血肌酐、尿素氮，改善腎臟病理損傷程度，恢復(fù)腎功能，其療效超過未經(jīng)處理的眼鏡蛇毒。所述藥物包括ロ服液、口腔速溶藥膜、膠囊、片齊U、噴霧劑、注射劑和經(jīng)皮吸收制劑等，所述藥物還包括各種單方和復(fù)方制劑。本發(fā)明中的眼鏡蛇是人工飼養(yǎng)的眼鏡蛇，在無菌條件下采毒，經(jīng)冷凍干燥成淡黃色粉末，低溫保存。本發(fā)明通過中華眼鏡蛇總毒經(jīng)物理方法處理達到減毒增效目的。中華眼鏡蛇蛇毒在臨床上已用于治療風(fēng)濕和緩解惡性腫瘤疼痛、神經(jīng)痛和關(guān)節(jié)痛等，但都用純化的神經(jīng)毒素、多種蛇毒的混合制劑或眼鏡蛇毒和其它中藥的復(fù)方制劑。鑒于中華眼鏡蛇蛇毒毒性比較大，蛇毒中的藥用成分主要是蛋白質(zhì)，其結(jié)構(gòu)和生物活性可以被理化因素改變。蛇毒在用過氧化氫處理后，ニ硫鍵被打開，其毒性大大降低，但是鎮(zhèn)痛作用也幾乎消失，提示生物學(xué)活性被破壞。而蛋白質(zhì)加熱后可發(fā)生可逆性變性，變性后空間結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變，或部分大分子蛋白質(zhì)因加熱部分分解為小分子量蛋白質(zhì)。試驗證明這種加熱變性并復(fù)性之后的蛇毒毒性明顯減少，而藥效增加。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)加熱變性的中華眼鏡蛇蛇毒有效降低急慢性腎病的尿蛋白，降低血肌酐、尿素氮，改善腎臟病理損傷程度，恢復(fù)腎功能。這ー發(fā)現(xiàn)，將對急慢性腎病研究和藥物開發(fā)產(chǎn)生重大的影響，并有臨床實用價值，為中華眼鏡蛇蛇毒開辟臨床新的用途。本發(fā)明的優(yōu)點是I.采用經(jīng)物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒，毒性低而藥效高。2.中華眼鏡蛇蛇毒能降低急慢性腎病引起的大鼠24h尿蛋白含量。3.中華眼鏡蛇蛇毒能降低急慢性腎病引起的大鼠腎功能障礙指標(biāo)ー肌酐、尿素氮的升尚。4.中華眼鏡蛇蛇毒能減輕阿霉素誘導(dǎo)的大鼠慢性腎病高血脂的癥狀。5.中華眼鏡蛇蛇毒能改善阿霉素誘導(dǎo)的大鼠慢性腎病低蛋白血癥。6.中華眼鏡蛇蛇毒能改善阿霉素誘導(dǎo)的大鼠慢性腎病血清電解質(zhì)紊亂。7.中華眼鏡蛇蛇毒能增強阿霉素誘導(dǎo)的大鼠慢性腎病機體抗氧化能力，減輕脂質(zhì)過氧化引起的損傷。8.中華眼鏡蛇蛇毒能減輕急慢性腎病引起的大鼠腎組織病理學(xué)損傷。9.中華眼鏡蛇蛇毒用量少，有效范圍大，從I 3000 μ g/kg都有很好的治療急慢性腎病的作用。人用劑量約為I 1000 μ g/kg。10.中華眼鏡蛇蛇毒多種給藥途徑包括皮膚給藥、ロ服、ロ(鼻)粘膜噴霧和注射等均有效。


下面結(jié)合附圖及實施例對本發(fā)明作進ー步描述圖I為物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒對甘油誘導(dǎo)的大鼠急性腎病臟器系數(shù)的影響對比結(jié)果。圖2為物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒對甘油誘導(dǎo)的大鼠急性腎病24h尿蛋白含量的影響對比結(jié)果。圖3為物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒對甘油誘導(dǎo)的大鼠急性腎病血肌酐、血尿素氮的影響對比結(jié)果。圖4為物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒對甘油誘導(dǎo)的大鼠急性腎病血總膽固醇的影響對比結(jié)果。圖5為物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒對甘油誘導(dǎo)的大鼠急性腎病病理損傷的影響對比結(jié)果。圖6為物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒對阿霉素誘導(dǎo)的大鼠慢性腎病24h尿蛋白的影響對比結(jié)果。圖7為物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒對阿霉素誘導(dǎo)的大鼠慢性腎病血清胱抑素-C的影響對比結(jié)果。圖8為物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒對阿霉素誘導(dǎo)的大鼠慢性腎病血肌酐、尿素氮的影響對比結(jié)果。圖9為物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒對阿霉素誘導(dǎo)的大鼠慢性腎病高血脂癥的影響對比結(jié)果。圖10為物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒對阿霉素誘導(dǎo)的大鼠慢性腎病低白蛋白血癥的影響對比結(jié)果。圖11為物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒對阿霉素誘導(dǎo)的大鼠慢性腎病血清電解質(zhì)水平的影響對比結(jié)果。圖12為物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒對阿霉素誘導(dǎo)的大鼠慢性腎病機體抗氧化能力以及脂質(zhì)過氧化引起的損傷的影響對比結(jié)果。圖13為物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒對阿霉素誘導(dǎo)的大鼠慢性腎病腎臟病理損傷的影響對比結(jié)果。圖14為物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒對阿霉素誘導(dǎo)的大鼠慢性腎病透射電鏡觀察腎臟損傷的影響對比結(jié)果。
具體實施例方式以下結(jié)合具體實施例對上述方案做進ー步說明。應(yīng)理解，這些實施例是用于說明 本發(fā)明而不限于限制本發(fā)明的范圍。實施例中采用的實施條件可以根據(jù)具體實驗的條件做進ー步調(diào)整，未注明的實施條件通常為常規(guī)實驗中的條件。實施例物理處理后的中華眼鏡蛇蛇毒的動物藥效學(xué)實驗( I)甘油誘導(dǎo)的大鼠急性腎病實驗本實驗將大鼠禁水24h后，按照大鼠體重8ml/kg分兩側(cè)臀部肌肉注射50%甘油復(fù)制急性腎病模型，將Wistar大鼠隨機分為5個組別生理鹽水對照組、模型組、中華眼鏡蛇蛇毒加熱小劑量組(20 μ g/kg)、中劑量組(40 μ g/kg)、大劑量組(80 μ g/kg)。物理改性后的中華眼鏡蛇蛇毒在治療甘油誘導(dǎo)大鼠急性腎病試驗中，實施例采用灌胃給藥，給藥劑量在 1-3000 μ g/kg, 一天一次。復(fù)制模型72h后，采用4%水合氯醛麻醉大鼠，腹主動脈取血，離心取血清檢測腎功能指標(biāo)；取出腎臟用4%甲醛固定，切片染色；收集大鼠處死前24h尿液，檢測尿蛋白及尿常規(guī)。實驗結(jié)果如下圖I為物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒對甘油誘導(dǎo)的大鼠急性腎病臟器系數(shù)的影響。其中***表示與生理鹽水對照組比較，p〈0. 001 ；#表示與模型組比較，p〈0. 05，###表示與模型組比較，p〈0.001。從圖I可以看到與生理鹽水對照組相比，4個造模組的大鼠腎臟系數(shù)均有明顯増大；而與模型組比較，給予物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒治療組的腎臟系數(shù)均有不同程度減小。圖2為物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒對甘油誘導(dǎo)的大鼠急性腎病24h尿蛋白的影響。其中#*表示與生理鹽水對照組比較，p〈0. 001 ;#表示與模型組比較，p〈0. 05，###表示與模型組比較，p〈0. 001。從圖2可以看到與生理鹽水對照組相比，4個造模組的大鼠24h尿蛋白均有明顯升高趨勢；而與模型組比較，給予物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒治療組的24h尿蛋白均有不同程度降低。圖3為物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒對甘油誘導(dǎo)的大鼠急性腎病血肌酐、血尿素氮的影響。其中與生理鹽水對照組比較，*表示ρ〈0·05, **表示ρ〈0·01,林*表示ρ〈0·001。從圖3可以看到與生理鹽水對照組相比，4個造模組的大鼠血肌酐、尿素氮均有明顯升高趨勢；而與模型組比較，給予物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒治療組的血肌酐、尿素氮均有不同程度降低。
圖4為物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒對甘油誘導(dǎo)的大鼠急性腎病血總膽固醇的影響。其中與生理鹽水對照組比較，*表示p〈0. 05，**表示p〈0. 01，。從圖4可以看到與生理鹽水對照組相比，4個造模組的大鼠血總膽固醇均有升高趨勢；而與模型組比較，給予物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒治療組的血總膽固醇均有不同程度降低。圖5為物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒對甘油誘導(dǎo)的大鼠急性腎病病理損傷的影響。由圖5可以看到，生理鹽水對照組大鼠的腎小球球囊清晰，小球內(nèi)毛細血管結(jié)構(gòu)正常，腎小管輪廓清楚，管腔明顯，上皮細胞未見病變，未見管型，間質(zhì)血管正常。模型組大鼠的腎小管上皮細胞水腫、發(fā)生脂肪變性、崩解壞死，部分近曲小管及遠曲小管凝固性壞死，多數(shù)腎小管有紅細胞管型及蛋白管型形成，管腔擴張；腎小球受到水腫擴張變形的腎小管的擠壓，略微變形，部分腎小球脫落，整體數(shù)量減少。給予物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒治療組較模型組腎小管壞死程度明顯減輕，壞死范圍減小，腎小管水腫變化減輕，上皮細胞脂肪變性有所恢復(fù)，紅細胞管型和蛋白管型數(shù)量明顯減少；腎小球數(shù)量增多，小球毛細血管結(jié)構(gòu)較正常。 (2)阿霉素誘導(dǎo)的大鼠慢性腎病實驗本實驗采用單劑量尾靜脈注射6mg/kg阿霉素復(fù)制大鼠慢性腎病，此法將引起大鼠腎病綜合征(NS)也叫做原發(fā)性腎小球腎病、腎小球腎病、腎病等。腎病綜合征(NS)的主要臨床特征是大量蛋白尿，也是一系列臨床表現(xiàn)的主要起源如大量蛋白尿可導(dǎo)致低蛋白血癥，進而引起水腫、聞脂血癥，感染及營養(yǎng)不良等。本實驗將Wistar大鼠隨機分為5個組別生理鹽水對照組、模型組、中華眼鏡蛇蛇毒加熱小劑量組(20μ g/kg)、中劑量組(40μ g/kg)、大劑量組(80μ g/kg)。物理改性后的中華眼鏡蛇蛇毒在治療甘油誘導(dǎo)大鼠急性腎病試驗中，實施例采用灌胃給藥，給藥劑量在1-3000 μ g/kg, 一天一次。分別于造模前、造模后I周、2周、3周、4周將大鼠置于清潔的代謝籠中，留取24h尿液，用考馬斯亮藍法測定24h尿蛋白含量。復(fù)制模型4周后，采用4%水合氯醛麻醉大鼠，腹主動脈取血，離心取血清檢測腎功能指標(biāo)、生化指標(biāo)；取出腎臟用4%甲醛固定，切片染色；檢測血清SOD以及腎組織勻漿MDA水平。實驗結(jié)果如下圖6為物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒對阿霉素誘導(dǎo)的大鼠慢性腎病24h尿蛋白的影響。其中，##表示與模型組比較，P〈0. 01，###表示與模型組比較，p〈0. 001。由圖6可以看至IJ，阿霉素誘導(dǎo)的大鼠慢性腎病會導(dǎo)致大鼠尿蛋白明顯升高，且隨著病情的發(fā)展不斷升高，但給予物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒治療組較模型組有不同程度的降低。圖7為物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒對阿霉素誘導(dǎo)的大鼠慢性腎病血清胱抑素C的影響。其中與生理鹽水對照組比較，*表示p〈0. 05。胱抑素C為半胱氨酸蛋白酶抑制劑C，血清胱抑素C較血肌酐、尿素氮更靈敏地反映腎功能早期、輕度的損傷。從圖7可以看到與生理鹽水對照組相比，4個造模組的大鼠血清胱抑素C均有升高趨勢；模型組與生理鹽水對照組比較其差異具有顯著性意義；且相對于模型組，給予物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒治療組的血清胱抑素C均有不同程度降低。圖8為物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒對阿霉素誘導(dǎo)的大鼠慢性腎病血肌酐、尿素氮的影響。其中與生理鹽水對照組比較，*表示ρ〈0·05, **表示ρ〈0·01,林*表示ρ〈0·001;與模型組比較，#表示ρ〈0. 05，##表示ρ〈0. 01，###表示ρ〈0. 001。從圖8可以看到與生理鹽水對照組相比，4個造模組的大鼠血肌酐、尿素氮均有明顯升高趨勢；而與模型組比較，給予物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒治療組的血肌酐、尿素氮均有不同程度降低。圖9為物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒對阿霉素誘導(dǎo)的大鼠慢性腎病高血脂癥的影響。其中與生理鹽水對照組比較，***表示p〈0. 001;與模型組比較，#表示p〈0. 05，##表示p〈o. 01，###表示p〈0. 001。從圖9可以看到與生理鹽水對照組相比，4個造模組的大鼠血清總膽固醇、甘油三酯均有明顯升高趨勢；而與模型組比較，給予物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒治療組的血清總膽固醇、甘油三酯有不同程度降低，其中以中華眼鏡蛇蛇毒40yg/kg治療組效果最佳。圖10為物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒對阿霉素誘導(dǎo)的大鼠慢性腎病低白蛋白血癥的影響。其中與生理鹽水對照組比較，**表示ρ〈0·01 ;***表示ρ〈0· 001;與模型組比較，##表示ρ〈0. 01，###表示p〈0. 001。從圖10可以看到與生理鹽水對照組相比，4個造模組的大鼠血清白蛋白降低，球蛋白升高，白蛋白/球蛋白比例降低；而與模型組比較，給予物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒40 μ g/kg治療組的血清白蛋白明顯升高，球蛋白降低，白蛋白/球 蛋白比例升高，且差異具有顯著性意義。圖11為物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒對阿霉素誘導(dǎo)的大鼠慢性腎病血清電解質(zhì)水平的影響。其中與生理鹽水對照組比較，*表示P〈0. 05，#*表示p〈0. 001;與模型組比較，#表示p〈0. 05，##表示p〈0. 01，###表示p〈0. 001。由圖11可以看到阿霉素誘導(dǎo)的大鼠慢性腎病會引起血清鈉、氯、磷離子含量升高；而與模型組比較，給予物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒治療組的血清鈉、氯、磷離子含量有不同程度降低，圖12為物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒對阿霉素誘導(dǎo)的大鼠慢性腎病機體抗氧化能力以及脂質(zhì)過氧化引起的損傷的影響。其中與生理鹽水對照組比較，*表示p〈0. 05 ;與模型組比較，#表示p〈0. 05。血清SOD已被廣泛用于評價機體抗氧化能力，腎組織MDA用于評價脂質(zhì)過氧化水平。由圖12可以看到，與生理鹽水對照組相比，4個造模組的大鼠血清SOD降低，腎組織MDA升高；而與模型組比較，給予物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒治療組的血清SOD有不同程度升高，腎組織MDA有不同程度降低。圖13為物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒對阿霉素誘導(dǎo)的大鼠慢性腎病腎臟病理損傷的影響。由圖13可以看到，HE (蘇木精-伊紅)染色生理鹽水對照組大鼠腎臟腎小球系膜區(qū)無增生、沉積物，毛細血管叢未見增生，毛細血管壁未見增厚，血管腔未見狹窄，基底膜未見病變，腎小囊無粘連病變，腎小球結(jié)構(gòu)層次明顯；模型組與生理鹽水對照組比較，模型組大鼠腎臟腎小球擠壓變形，腎小球毛細血管叢與囊壁有部分粘連，腎小管膨脹變形，出現(xiàn)大量蛋白管型，管腔內(nèi)有嗜伊紅物的聚集，腎小管上皮細胞出現(xiàn)空泡變性，有的上皮細胞甚至壞死凋落，腎間質(zhì)和腎血管周圍有炎性細胞侵潤；而給予物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒治療組的大鼠腎臟腎小球病變有所改善，腎小管蛋白管型較少見，間質(zhì)炎性細胞侵潤減少，其病理改變較模型組明顯減輕。PAS(過碘酸雪夫)染色模型組與生理鹽水對照組比較，模型組大鼠腎臟腎小球基底膜明顯增厚，毛細血管球破壞萎縮，腎小管見蛋白管型；而給予物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒治療組與模型組比較，大鼠腎臟腎小球基底膜增厚情況有所改善，腎小管蛋白管型減少，其病理改變較模型組明顯減輕。Masson三色染色模型組與生理鹽水對照組比較，模型組大鼠腎臟腎小球毛細血管叢結(jié)構(gòu)有所破壞，腎小球囊壁增厚，腎小球毛細血管叢與囊壁有部分粘連，間質(zhì)有膠原增生的現(xiàn)象，炎性細胞侵潤明顯；而給予物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒治療組與模型組比較，腎小球病變有所改善，囊壁未見增厚，腎小管蛋白管型較少見，間質(zhì)炎性細胞侵潤減少，其病理改變較模型組明顯減輕。圖14為物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒對阿霉素誘導(dǎo)的大鼠慢性腎病透射電鏡觀察腎臟損傷的影響。由圖14可以看到，生理鹽水對照組大鼠腎小球基底膜(GBM)無皺縮，足突清晰；模型組大鼠GBM皺縮明顯，足突廣泛融合；而給予物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒20 μ g/kg治療組大鼠足突廣泛消失，膠原纖維明顯增多，給予物理改性的中華眼鏡蛇蛇毒40 μ g/kg、80 μ g/kg治療組大鼠GBM無皺縮，足突融合情況減輕。從上述的試驗可以看出中華眼鏡蛇蛇毒能降低急慢性腎病引起的大鼠24h尿蛋白含量升高。中華眼鏡蛇 蛇毒能降低急慢性腎病引起的大鼠腎功能障礙指標(biāo)ー肌酐、尿素氮的升高。中華眼鏡蛇蛇毒能減輕阿霉素誘導(dǎo)的大鼠慢性腎病高血脂的癥狀。中華眼鏡蛇蛇毒能改善阿霉素誘導(dǎo)的大鼠慢性腎病低蛋白血癥。中華眼鏡蛇蛇毒能改善阿霉素誘導(dǎo)的大鼠慢性腎病血清電解質(zhì)紊亂。中華眼鏡蛇蛇毒能增強阿霉素誘導(dǎo)的大鼠慢性腎病機體抗氧化能力，減輕脂質(zhì)過氧化引起的損傷。中華眼鏡蛇蛇毒能減輕急慢性腎病引起的大鼠腎組織病理學(xué)損傷。上述實例只為說明本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思及特點，其目的在于讓熟悉此項技術(shù)的人是能夠了解本發(fā)明的內(nèi)容并據(jù)以實施，并不能以此限制本發(fā)明的保護范圍。凡根據(jù)本發(fā)明精神實質(zhì)所做的等效變換或修飾，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種物理改性后的中華眼鏡蛇蛇毒在制備治療急、慢性腎病的藥物中的用途。
2.根據(jù)權(quán)利要求I的用途，其特征在于所述物理改性后的中華眼鏡蛇蛇毒是將中華眼鏡蛇蛇毒用去離子水溶解后加熱變性并復(fù)性后得到的；加熱溫度控制在50 100°C之間，加熱時間控制在Imin 300min。
3.根據(jù)權(quán)利要求I的用途，其特征在于所述藥物中還包括物理改性后的泰國眼鏡蛇和其它眼鏡蛇蛇毒。
4.根據(jù)權(quán)利要求I的用途，其特征在于所述藥物中還包括未改性的中華眼鏡蛇蛇毒或選自中華眼鏡蛇蛇毒中存在的神經(jīng)毒素、心臟毒素和眼鏡蛇毒因子的一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求I的用途，其特征在于所述藥物中還包括改性和未改性的中華眼鏡蛇蛇毒或眼鏡蛇蛇毒中存在的神經(jīng)毒素、心臟毒素和眼鏡蛇毒因子的一種與其它藥物組成的復(fù)方制劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求I的用途，其特征在于所述藥物的給藥劑型選自口腔速溶藥膜、口服液、片劑、膠囊、噴霧劑、注射劑和透皮吸收制劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種物理改性后的中華眼鏡蛇蛇毒在制備治療急、慢性腎病的藥物中的用途。所述物理改性后的中華眼鏡蛇蛇毒是將中華眼鏡蛇蛇毒用去離子水溶解后加熱變性并復(fù)性后得到的；加熱溫度控制在50～100℃之間，加熱時間控制在1min～300min。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)加熱變性的中華眼鏡蛇蛇毒有效降低急慢性腎病的尿蛋白，降低血肌酐、尿素氮，改善腎臟病理損傷程度，恢復(fù)腎功能。
文檔編號A61K35/58GK102846666SQ201210228609
公開日2013年1月2日 申請日期2012年7月4日 優(yōu)先權(quán)日2012年7月4日
發(fā)明者秦正紅, 王姝之, 何鶴 申請人:蘇州人本藥業(yè)有限公司