專利名稱：茅莓總皂苷在制備抗疲勞藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及茅莓總皂苷在制藥領(lǐng)域中的新用途。
背景技術(shù)：
隨著社會(huì)發(fā)展，人們工作、生活節(jié)奏越來越快，疲勞成為非常普遍的都市病癥。許多人都易出現(xiàn)頭昏頭疼、眼花、乏力、記憶力減退、血壓下降、心率過速、情緒低落等與疲勞相關(guān)的癥狀。疲勞作為一種生理現(xiàn)象，是指機(jī)體生理過程不能持續(xù)其機(jī)能在某一特定的水平和/或不能維持預(yù)定的運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度。疲勞發(fā)生后如果得不到及時(shí)消除，將會(huì)逐漸積累，最終導(dǎo)致機(jī)體的神經(jīng)、內(nèi)分泌及免疫系統(tǒng)調(diào)節(jié)失常，甚至出現(xiàn)器質(zhì)性病變，成為破壞人類身心健康的重要因素。因此，了解疲勞的原因和促進(jìn)疲勞的恢復(fù)一直是近來研究的熱點(diǎn)。目前，各種消除疲勞的措施在效果上各有不盡如人意的地方，在尋找安全有效的抗疲勞方法中，傳統(tǒng)中藥由于副作用小，不含對(duì)人體有害的興奮劑成分而成為近年來抗疲勞研究的熱點(diǎn)。中藥茅莓為民間常用中草藥，來源于薔薇科懸鉤子屬植物茅莓Rubusparvifolius L.的干燥全草,性涼味苦,根、莖、葉均可入藥,具有清熱解毒、涼血止血等功效，主治感冒發(fā)熱、跌打損傷、外傷出血等多種疾病?，F(xiàn)代藥理學(xué)研究表明，茅莓提取物具有止血、抗血栓形成、抗心肌缺血、抗菌、抗腦缺血等藥理作用。經(jīng)過對(duì)茅莓進(jìn)行系統(tǒng)研究，并結(jié)合文獻(xiàn)，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，茅莓總皂苷是茅莓生物活性的主要物質(zhì)基礎(chǔ)，但茅莓總皂苷是否具有抗疲勞作用，至今未見文獻(xiàn)報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容
有鑒于此，本發(fā)明的目的在于考察茅莓總皂苷是否具有抗疲勞作用，能否用于制備抗疲勞的藥物。將茅莓總皂苷用于動(dòng)物抗疲勞實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯示，茅莓總皂苷具有良好的抗疲勞作用，能夠顯著延長小鼠負(fù)重游泳時(shí)間，顯著增加乳酸脫氫酶(LDH)的活性，降低小鼠運(yùn)動(dòng)后血清乳酸(BLA)和尿素氮(BUN)的含量，并能夠顯著提高小鼠運(yùn)動(dòng)后肝糖原(LG)和肌糖原(MG)的含量，還具有毒性低、副作用小等優(yōu)點(diǎn)，使用安全，可以用于制備抗疲勞藥物。所述茅莓總皂苷既可以采用文獻(xiàn)報(bào)道的方法制得，也可以采用本發(fā)明所述方法制得將茅莓藥材浸泡在水中，加熱提取2 3次，每次f 2小時(shí)，合并提取液，上大孔吸附樹脂柱；或者將茅莓藥材浸泡在體積分?jǐn)?shù)為509^70%的乙醇溶液中，加熱提取2 3次，每次廣2小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮至無醇味后上大孔吸附樹脂柱；然后，先用氫氧化鈉溶液洗柱 至流出液無色，再用蒸餾水洗柱至流出液呈中性，再用體積分?jǐn)?shù)為309^70%的乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，常壓或減壓濃縮，干燥，即得茅莓總皂苷，純度大于50%。作為一個(gè)具體的例子，可將茅莓藥材浸泡在相當(dāng)于藥材10倍重量的水中，加熱煎煮2次，每次I小時(shí)，濾過，合并濾液，離心，取上清液上大孔吸附樹脂柱D101，先用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 1%的氫氧化鈉溶液洗柱至流出液無色，再用蒸餾水洗柱至流出液呈中性，再用體積分?jǐn)?shù)為40%的乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，即得茅莓總皂苷，純度約65%。
本發(fā)明的有益效果在于本發(fā)明公開了茅莓總皂苷在制備抗疲勞藥物中的應(yīng)用，不僅拓寬了茅莓總皂苷的應(yīng)用范圍，提高了其市場價(jià)值，而且為抗疲勞治療提供了一種安全、高效的備選藥物，利于滿足臨床治療的多方面需求。
具體實(shí)施例方式為了使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面對(duì)茅莓總皂苷的抗疲勞作用及其效果進(jìn)行詳細(xì)的描述。一、茅莓總阜苷的制備
稱取茅莓藥材2kg，加10倍水煎煮2次，每次I小時(shí),濾過,合并濾液,離心,取上清液上已處理好的大孔吸附樹脂DlOl (弱極性，天津市海光化工有限公司)柱，先用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為
0.1%的氫氧化鈉溶液洗至流出液無色，再用蒸餾水洗至流出液呈中性，最后用體積分?jǐn)?shù)為40%的乙醇溶液洗脫，收集體積分?jǐn)?shù)為40%的乙醇洗脫液，減壓蒸干，即得茅莓總皂苷，純度為 65. 72%。二、茅莓總皂苷的抗疲勞作用
1、對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響
取體重25±4g的雄性昆明小鼠40只，隨機(jī)分為四組空白對(duì)照組，茅莓總皂苷低、中、高劑量組，每組10只。各組小鼠每天經(jīng)口灌胃給藥I次，空白對(duì)照組按照0. 01ml/g (體重)的劑量給予小鼠生理鹽水，茅莓總皂苷低、中、高劑量組分別按照20、40、80!1^/1^(體重)的劑量給予小鼠茅莓總皂苷，連續(xù)給藥30天，每周稱重I次。末次給藥30分鐘后，在距小鼠尾尖Icm處用細(xì)繩給小鼠系上相當(dāng)于5%體重的鉛皮,然后將小鼠置水深30cm、水溫30土1°C的游泳箱中游泳，記錄小鼠自游泳開始至沉下水10秒不再浮出水面的時(shí)間，作為小鼠的負(fù)重游泳時(shí)間。結(jié)果如表I所示，可見給予小鼠低劑量的茅莓總皂苷即能顯著延長小鼠的負(fù)重游泳時(shí)間，隨著茅莓總皂苷劑量的提高，作用更加明顯，說明茅莓總皂苷可以增強(qiáng)小鼠的運(yùn)動(dòng)耐力。表I 茅莓總皂苷對(duì)小鼠負(fù)重游泳時(shí)間的影響(JC ±s, n=10)
組別負(fù)重游泳時(shí)間(S)
空白對(duì)照組23SP+47
茅莓總皂苷低剤重組301S ± S 64*
茅莓總皂苷中剤量組3994+788^
茅莓總皂苷高剤量組406.S±S43_
注*表示與空白對(duì)照組比較有晝著性差異， <0.05; %表示與空白對(duì)照組比較有極顯著性 差異，P<0.0L
2、對(duì)小鼠自游泳運(yùn)動(dòng)后血BLA、LDH和BUN含量的影響
取體重25±4g的雄性昆明小鼠40只，隨機(jī)分為四組空白對(duì)照組，茅莓低、中、高劑量組，每組10只。各組小鼠每天經(jīng)口灌胃給藥I次，空白對(duì)照組按照0.01ml/g(體重)的劑量給予小鼠生理鹽水，茅莓總皂苷低、中、高劑量組分別按照20、40、80mg/kg (體重)的劑量給予小鼠茅莓總皂苷，連續(xù)給藥30天，末次給藥前空腹12小時(shí)，每周稱重I次。末次給藥30分鐘后，將小鼠在不負(fù)重的情況下置水溫30 ± I °C的游泳箱中游泳30分鐘，再休息10分鐘后眼球采血，分取血清，利用相應(yīng)的檢測試劑盒檢測BLA、BUN和LDH的含量。結(jié)果如表2所示，可見自游泳運(yùn)動(dòng)后茅莓總皂苷低、中、高劑量組小鼠的BLA、BUN水平均顯著低于空白對(duì)照組，而LDH水平均顯著高于空白對(duì)照組，說明茅莓總皂苷能通過增強(qiáng)LDH活力，清除肌肉中過多的BLA，從而減少運(yùn)動(dòng)中BLA的生成，伴隨著BUN生成的減少，肌體對(duì)負(fù)荷的適應(yīng)性提高，達(dá)到延緩疲勞的效果。表2茅莓總皂苷對(duì)小鼠運(yùn)動(dòng)后血BLA、LDH和BUN含量的影響G 土s，n=10)
權(quán)利要求
1.茅莓總皂苷在制備抗疲勞藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的應(yīng)用，其特征在于，所述抗疲勞的藥物為能夠延長負(fù)重運(yùn)動(dòng)時(shí)間、增加乳酸脫氫酶的活性，降低運(yùn)動(dòng)后血清乳酸和尿素氮的含量，并能夠提高運(yùn)動(dòng)后肝糖原和肌糖原含量的藥物。
3.根據(jù)權(quán)利要求I或2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述茅莓總皂苷采用以下方法制得將茅莓藥材浸泡在水中，加熱提取2 3次，每次廣2小時(shí)，合并提取液，上大孔吸附樹脂柱；或者將茅莓藥材浸泡在體積分?jǐn)?shù)為509^70%的乙醇溶液中，加熱提取2 3次，每次廣2小時(shí)，合并提取液，減壓濃縮至無醇味后上大孔吸附樹脂柱；然后，先用氫氧化鈉溶液洗柱至流出液無色，再用蒸餾水洗柱至流出液呈 中性，再用體積分?jǐn)?shù)為309^70%的乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，常壓或減壓濃縮，干燥，即得茅莓總皂苷。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述茅莓總皂苷采用以下方法制得將茅莓藥材浸泡在相當(dāng)于藥材10倍重量的水中，加熱煎煮2次，每次I小時(shí)，濾過，合并濾液，離心，取上清液上大孔吸附樹脂柱D101，先用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 1%的氫氧化鈉溶液洗柱至流出液無色，再用蒸餾水洗柱至流出液呈中性，再用體積分?jǐn)?shù)為40%的乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，即得茅莓總皂苷。
全文摘要
本發(fā)明公開了茅莓總皂苷在制備抗疲勞藥物中的應(yīng)用，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示茅莓總皂苷具有良好的抗疲勞作用，能夠顯著延長小鼠負(fù)重游泳時(shí)間，顯著增加乳酸脫氫酶的活性，降低小鼠運(yùn)動(dòng)后血清乳酸、尿素氮的含量，并能夠顯著提高小鼠運(yùn)動(dòng)后肝糖原和肌糖原的含量，還具有毒性低、副作用小等優(yōu)點(diǎn)，使用安全。
文檔編號(hào)A61P39/00GK102626451SQ201210139820
公開日2012年8月8日 申請(qǐng)日期2012年5月8日 優(yōu)先權(quán)日2012年5月8日
發(fā)明者夏培元, 張宏偉, 戴青, 王顯鳳, 胡小剛, 陳劍鴻, 黃明春 申請(qǐng)人:中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué)第一附屬醫(yī)院