專利名稱：廣東紫珠低極性成分提取物、含有其的藥物組合物、其制備方法及用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥或天然藥物制藥領(lǐng)域，具體涉及一種廣東紫珠低極性成分提取物、其制備方法、含有該廣東紫珠揮發(fā)油提取物的藥物組合物及其用于抑制宮頸炎致病菌的用途。
背景技術(shù)：
世界衛(wèi)生組織對(duì)中國婦女的調(diào)查表明:我國育齡女性人口數(shù)字約為1.5-2億，其中約41%的女性患有不同程度的婦科炎性疾病，已婚女性發(fā)病率更高達(dá)70%。據(jù)統(tǒng)計(jì)，宮頸炎約占婦產(chǎn)科門診總數(shù)的40-50%，居?jì)D科疾病之首，其中慢性宮頸炎占門診病人的10% -25%。正常情況下，子宮頸腺體可以分泌粘稠的分泌物，形成粘液可抵抗陰道內(nèi)病原體侵入子宮腔。但當(dāng)機(jī)體抵抗力下降時(shí)，或者子宮頸受某種因素影響，使分泌物增加，宮頸外部長期浸在分泌物內(nèi)，就極易受病 原體的襲擊，這種情況導(dǎo)致子宮頸“失守”而感染，從而形成宮頸炎。宮頸炎致病菌主要有金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、大腸桿菌等。馬鞭草科紫珠屬植物廣東紫珠(Callicarpa kwangtungensis Chun.), 2010年新收錄于中國藥典。又名止血柴，紫珠草、金刀菜等，廣泛分布于我國江西、湖南、湖北、廣東等省，具有收斂止血，清熱解毒之功效，是“抗宮炎片”和“抗宮炎膠囊”等中成藥的主要原料藥材，在婦科炎癥制劑中被廣泛應(yīng)用，常用于治療宮頸糜爛出血、陰道炎、宮頸炎等婦科疾病，在江西、湖南等省列入地方藥材標(biāo)準(zhǔn)。國內(nèi)外對(duì)紫珠屬植物的研究主要集中在黃酮類化合物、萜類化合物上，現(xiàn)代研究也證實(shí)多種紫珠屬植物揮發(fā)性成分具有多種生物活性，但對(duì)廣東紫珠中的低極性成分深入研究未見報(bào)道。與本發(fā)明相關(guān)的現(xiàn)有技術(shù)主要有以下3個(gè)文獻(xiàn):1.Kim Y S，Shin D H.Volatile Constituents from the LeavesofCalIicarpajaponica Thunb.and Their Antibacterial Activities.J AgricFoodChem，2004，52(4):781-787.該文做了廣東紫珠同屬植物C.japonica中的揮發(fā)性成分對(duì)于六種食物傳播的微生物的抗菌活性，但沒有關(guān)于廣東紫珠低極性成分的制備及其體外抗菌活性的描述。2.李德英，袁惠德.華紫珠和杜虹花的成分、毒性與抑菌作用比較.現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué).1992,9(1):13-15.該文做了廣東紫珠同屬植物華紫珠、杜虹花化學(xué)成分的抗菌活性測定，但沒有關(guān)于廣東紫珠低極性成分的制備及其體外抗菌活性的描述。3、洪燕龍.婦炎康泡騰片的制劑工藝，質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和廣東紫珠化學(xué)成分的研究.北京:北京中醫(yī)藥大學(xué)，2004.該文利用體內(nèi)試驗(yàn)驗(yàn)證了廣東紫珠總黃酮具有抗炎活性，但沒有針對(duì)廣東紫珠低極性成分的制備及其體外抗菌活性的描述。

發(fā)明內(nèi)容
鑒于現(xiàn)有技術(shù)的不足，本發(fā)明提供一種廣東紫珠低極性成分提取物，其可通過超臨界CO2萃取法得到，并對(duì)其進(jìn)行GC-MS分析分離，采用金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和白色念珠菌等宮頸炎常見致病菌分別評(píng)價(jià)廣東紫珠低極性成分提取物的體外抗菌活性，為廣東紫珠進(jìn)一步的研究應(yīng)用提供依據(jù)。本發(fā)明的第一個(gè)目的是提供一種廣東紫珠低極性成分提取物，其特征在于其含有19.12% -25.86%的脂肪酸類化合物、36.16% -41.93%的烴類化合物和3.40% -7.39%的萜類化合物。根據(jù)本發(fā)明，所述“低極性成分”是指極性較小的脂肪酸類、萜類及烴類化合物。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式，所述的廣東紫珠低極性成分提取物含有
19.12%的脂肪酸類化合物、36.16%的烴類化合物和3.40%的萜類化合物。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式，所述的廣東紫珠低極性成分提取物含有25.86%的脂肪酸類化合物、41.93%的烴類化合物和7.39%的萜類化合物。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式，重要的脂肪酸類化合物包括棕櫚酸、十四烷酸、十七烷酸、η-十六酸 和亞油酸、硬脂酸和二十二烷酸。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式，重要的烴類化合物包括十八烷、二十二烷、二十八烷、(Ε，Ε)-2，4-癸二烯醛、(Z)-9，17-十八碳二烯醛、十氫番茄紅素、二十烷、二十七燒、順式-2,6,10,14,18-五甲基-2,6,10,14,18- 二十戍稀和15-稀-十八碳麗等。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式，所述萜類化合物選自葉綠醇、金合歡醇異構(gòu)體、石竹烯、吉瑪烯D、氧化石竹烯、丁香烯、植物醇等。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式，所述的廣東紫珠低極性成分提取物還含有其他類化合物，選自下組:4_異丙基-7-甲基-3-亞甲基-8H-環(huán)戊烷[1，3]環(huán)丙烷[1，2]苯、8H-異非洲防己苦素酸甲酯、5，7_ 二羥基_3，3'，4'-三甲氧基黃酮、2-硫乙基-3，6-二丁基吡啶、5-(10，12-十三碳二烯基)-5H-苯并咔唑、豆甾烷-3，5- 二烯、2-甲硫基_4，
6-二三氯甲基-1，3，5-三嗪和4，6，22-三烯-3- β -麥角留醇。所述其他類化合物的含量占 6.37% -22.44% ο本發(fā)明的第二個(gè)目的是提供所述廣東紫珠低極性成分提取物的制備方法，所述方法包括用超臨界CO2萃取廣東紫珠并用有機(jī)溶劑提取超臨界CO2萃取物的步驟。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式，所述超臨界CO2萃取的條件如下:萃取溫度為35-45°C，壓力20-30Mpa ;分離釜溫度30_50°C，壓力5_8Mpa ；C02流速40_60L/h，總流量90-110L ;提取時(shí)間 1.5-2.5h。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方式，所述超臨界CO2萃取的條件如下::萃取溫度為40°C，壓力25Mpa ;分離釜溫度40°C，壓力6Mpa ；C02流速50L/h，總流量100L ;提取時(shí)間2h。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式，所述有機(jī)溶劑選自乙醚、正己烷或環(huán)己烷，優(yōu)選乙醚。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式，所述廣東紫珠為馬鞭草科植物廣東紫珠(Callicarpa kwangtungensis Chun.)的干燥莖枝及葉。本發(fā)明的第三個(gè)目的是提供一種藥物組合物，其含有有效量的所述的廣東紫珠低極性成分提取物和藥學(xué)可接受的賦形劑。本發(fā)明的第四個(gè)目的是提供所述廣東紫珠低極性成分提取物在制備抑制宮頸炎致病菌的藥物中的用途。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方式，所述宮頸炎致病菌選自金黃色葡萄球菌、大腸桿菌或白色念珠菌。經(jīng)實(shí)驗(yàn)證實(shí)，本發(fā)明的廣東紫珠低極性成分提取物具有較強(qiáng)的抗金黃色葡萄球菌、大腸桿菌和白色念珠菌等宮頸炎致病菌活性，可用于治療宮頸炎。


圖1為實(shí)施例1所得的廣東紫珠低極性成分提取物的GC-MS總離子流圖，其中橫坐標(biāo)為保留時(shí)間(min)，縱坐標(biāo)為峰面積；圖2為實(shí)施例2所得的廣東紫珠低極性成分提取物的GC-MS總離子流圖，其中橫坐標(biāo)為保留時(shí)間(min)，縱坐標(biāo)為峰面積；圖3為實(shí)施例1-2所得的廣東紫珠低極性成分提取物抑制各細(xì)菌的照片。
具體實(shí)施例方式以下通過具體實(shí)施例 說明本發(fā)明，但這些實(shí)施例不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明的限制。儀器和材料HA221-40-1超臨界萃取裝置(江蘇南通華安超臨界萃取有限公司)，DSQ氣相色譜質(zhì)譜聯(lián)用儀(Thermo Fisher公司)。LRH-150型生化培養(yǎng)箱(上海索普儀器有限公司);YXQ-LA_50S II立式壓力蒸汽滅菌器(上海博迅實(shí)業(yè)有限公司醫(yī)療設(shè)備廠)。無水乙醚、無水硫酸鈉及甲醇等試劑均為分析純(國藥集團(tuán)上海試劑公司)。菌種:金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、大腸桿菌(Escherichiacoli)和白色念珠菌(Candida albicans)購自上海醫(yī)藥工業(yè)研究院生物部。牛肉膏(中國醫(yī)藥集團(tuán)上?；瘜W(xué)試劑有限公司)；培養(yǎng)基1(牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基)/g.Γ1:蛋白胨10，牛肉浸膏3，NaCl 5，瓊脂2;pH 7.0 7.2，121°C滅菌30min。培養(yǎng)基11(￥^)培養(yǎng)基)/^.!^:葡萄糖20，蛋白胨10，酵母膏5，瓊脂20 ；pH自然，121°C滅菌30mino廣東紫珠為江西萍鄉(xiāng)栽培，為馬鞭草科植物廣東紫珠(Callicarpakwangtungensis Chun.)的干燥地上部分。實(shí)施例1:廣東紫珠低極性部位的超臨界CO2制備廣東紫珠藥材粉碎，過24目篩，稱取200g，置超臨界IL萃取釜(萃取釜II)內(nèi)，按以下條件萃取:萃取溫度為45°C，壓力25Mpa ;分離釜溫度50°C，壓力8Mpa ；C02流速50L/h，總流量100L ;提取時(shí)間2h。收取分離釜提取物，提取物為棕黃色油狀物，將分離釜的樣品用無水乙醚萃取，適量無水硫酸鈉脫水得樣品，得率為1.042%。實(shí)施例2:廣東紫珠低極性部位的超臨界CO2制備廣東紫珠藥材粉碎，過24目篩，稱取200g，置超臨界IL萃取釜(萃取釜II)內(nèi)，按以下條件萃取:萃取溫度為35°C，壓力25Mpa ;分離釜溫度30°C，壓力5.7Mpa ;C02流速50L/h，總流量100L ;提取時(shí)間1.5h。收取分離釜提取物，提取物為淡黃色液體樣物，將分離釜的樣品用正己烷萃取，適量無水硫酸鈉脫水得樣品，得率為0.658%。
實(shí)施例3:實(shí)施例1所得廣東紫珠低極性成分提取物的化學(xué)成分的GC-MS分析I) GC-MS 色譜條件色譜柱HP-5毛細(xì)管柱(30mX0.25mmX0.25μπι);高純氮?dú)鉃檩d氣，進(jìn)樣口溫度300°C,進(jìn)樣方式分流進(jìn)樣,分流比30: I,進(jìn)樣量I μ I,載氣流速1.0ml/min ;程序升溫:起始溫度200°C，保持3min后以4°C /min升至250°C，保持5min后以20°C /min升至300°C保持3min。質(zhì)譜接口溫度為310°C，EI源溫度200°C，電子轟擊能量60eV，掃描范圍m/z25-550amu，全離子掃描，采集延時(shí)5.0min，歸一化法計(jì)算相對(duì)含量。實(shí)施例1所得廣東紫珠低極性成分提取物的GC-MS總離子流圖見附圖1。用氣相色譜數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)，以峰面積歸一法測得其中各組分的相對(duì)百分含量，對(duì)總離子流圖中的各峰經(jīng)質(zhì)譜掃描后得到質(zhì)譜圖，經(jīng)過NIST05質(zhì)譜庫計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)系統(tǒng)對(duì)照，以及檢索上海研發(fā)公共服務(wù)平臺(tái)化學(xué)綜合數(shù)據(jù)庫，并查閱相關(guān)文獻(xiàn)與標(biāo)準(zhǔn)圖譜對(duì)照分析，確認(rèn)各化合物。結(jié)果從實(shí)施例1所得廣東紫珠低極性成分提取物中鑒定了 27個(gè)化合物(占揮發(fā)油總質(zhì)量的81.12%),鑒定率為47.27%，其中7個(gè)(十四烷酸、η-十六酸、亞油酸、硬脂酸、棕櫚酸、十七烷酸、二十二烷酸)為脂肪酸類化合物，含量占19.12% ;8個(gè)((Ε，Ε)-2，4-癸二烯醛、(Ζ)-9，17-十八碳二烯醛、十氫番茄紅素、二十烷、二十八烷、二十七烷、順式_2，6，10，14，18-五甲基_2，6，10，14，18-二十戊烯、二十二烷)為烴類化合物，含量占36.16% ;4個(gè)(丁香烯、金合歡醇異構(gòu)體、紅沒藥醇、植物醇)為萜類化合物,含量占3.40% ;8個(gè)(4-異丙基-7-甲基-3-亞甲基-8Η-環(huán)戊烷[1，3]環(huán)丙烷[1，2]苯、8Η-異非洲防己苦素酸甲酯、5,7- _二輕基-3, 3' ,4' _ 二甲氧基黃麗、2_硫乙基_3，6- _二丁基卩比淀、5-(10,12-十二碳二烯基)-5Η-苯并咔唑、豆甾烷-3，5- 二烯、2-甲硫基-4，6- 二三氯甲基-1，3，5-三嗪、4，6，22-三烯-3-β -麥角留醇)為其他類化合物，含量占22.44%,含量最高的化合物為十氫番茄紅素(21.00% )。結(jié)果見表I。表1、實(shí)施例1所得廣東紫珠低極性成分提取物的分析結(jié)果
權(quán)利要求
1.廣東紫珠低極性成分提取物，其特征在于其含有15%-28%的脂肪酸類化合物、30% -45%的烴類化合物和2% -8%的萜類化合物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的廣東紫珠低極性成分提取物，其特征在于其含有19.12% -25.86%的脂肪酸類化合物、36.16% -41.93%的烴類化合物和3.40% -7.39%的萜類化合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的廣東紫珠低極性成分提取物，其特征在于所述脂肪酸類化合物選自棕櫚酸、十四烷酸、十七烷酸、η-十六酸、亞油酸、硬脂酸或二十二烷酸。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的廣東紫珠低極性成分提取物，其特征在于所述烴類化合物選自十八烷、二十二烷、二十八烷、(Ε，Ε)-2，4-癸二烯醛、(Z)-9，17-十八碳二烯醛、十氫番茄紅素、二十烷、二十七烷、順式-2,6,10，14，18-五甲基_2，6，10，14，18- 二十戊烯或15-烯-十八碳酮。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的廣東紫珠低極性成分提取物，其特征在于所述萜類化合物選自葉綠醇、金合歡醇異構(gòu)體、石竹烯、吉瑪烯D、氧化石竹烯、丁香烯、植物醇等。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的廣東紫珠低極性成分提取物，其特征在于其還含有其他類化合物，選自下組:4_異丙基_7_甲基_3_亞甲基-8Η-環(huán)戍燒[I，3]環(huán)丙燒[I，2]苯、8Η-異非洲防己苦素酸甲酯、5，7_ 二羥基_3，3'，4'-三甲氧基黃酮、2-硫乙基-3，6-二丁基吡啶、5-(10，12-十三碳二烯基)-5Η-苯并咔唑、豆留烷_3，5- 二烯、2-甲硫基-4，6- 二三氯甲基_1，3, 5- 二嚷和4,6, 22- 二稀-3- β -麥角留醇。
7.權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的廣東紫珠低極性成分提取物的制備方法，所述方法包括用超臨界CO2萃取廣東紫珠并用有機(jī)溶劑提取超臨界CO2萃取物的步驟。
8.權(quán)利要求7所述的廣東紫珠低極性成分提取物的制備方法，其特征在于所述超臨界CO2萃取的條件如下:萃取溫度為35-45°C，壓力20-30Mpa;分離釜溫度30_50°C，壓力5-8Mpa ；C02 流速 40_60L/h，總流量 90-1IOL ;提取時(shí)間 1.5-2.5h。
9.權(quán)利要求7所述的廣東紫珠低極性成分提取物的制備方法，其特征在于所述有機(jī)溶劑選自乙醚、正己烷或環(huán)己燒，優(yōu)選乙醚。
10.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于所述廣東紫珠為馬鞭草科植物廣東紫珠(Callicarpa kwangtungensis Chun.)的干燥莖枝及葉。
11.藥物組合物，其含有有效量的權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的廣東紫珠低極性成分提取物和藥學(xué)可接受的賦形劑。
12.權(quán)利要求1-6任一項(xiàng)所述的廣東紫珠低極性成分提取物在制備抑制宮頸炎致病菌的藥物中的用途。
13.根據(jù)權(quán)利要求12所述的用途，其特征在于所述宮頸炎致病菌選自金黃色葡萄球菌、大腸桿菌或白色念珠菌。
全文摘要
本發(fā)明提供一種廣東紫珠低極性成分提取物，其特征在于其含有15％-28％的脂肪酸類化合物、30％-45％的烴類化合物和2％-8％的萜類化合物。本發(fā)明也提供該廣東紫珠揮發(fā)油提取物的制備方法、含有該廣東紫珠揮發(fā)油提取物的藥物組合物和用途。
文檔編號(hào)A61K135/00GK103211920SQ20121001998
公開日2013年7月24日 申請(qǐng)日期2012年1月21日 優(yōu)先權(quán)日2012年1月21日
發(fā)明者楊義芳, 賈安 申請(qǐng)人:上海醫(yī)藥工業(yè)研究院, 中國醫(yī)藥工業(yè)研究總院