專(zhuān)利名稱(chēng)：抗體制劑的制作方法
抗體制劑相關(guān)申請(qǐng)本申請(qǐng)要求2010年7月2日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)61/361，209的優(yōu)先權(quán)。上述申請(qǐng)的公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)引用全文納入本文。序列表本申請(qǐng)包含通過(guò)EFS-Web以ASCII格式同時(shí)提交的序列表，并通過(guò)引用全文納入本文。2011年6月22日創(chuàng)建的所述ASCII拷貝命名為102728W01.txt，大小為3，275字節(jié)。
背景技術(shù)：
抗體制劑中不需要物質(zhì)的不穩(wěn)定性和/或存在可以引起問(wèn)題，包含簡(jiǎn)單的不便性如需要以特定方式存儲(chǔ)或處理所述制劑，以及安全性和功效問(wèn)題如由增加的毒性或免疫原性引起的那些。一些抗體觀察到的一個(gè)特性是所述抗體分子可逆性自體締合的趨勢(shì)，也稱(chēng)為可逆自體締合(RSA)。在給定制劑中抗體的RSA可以受抗體濃度、溫度和/或pH的影響。所述制劑中抗體的RSA趨勢(shì)能對(duì)抗體制劑的物理屬性有顯著影響，潛在地影響長(zhǎng)期穩(wěn)定性、可制造性、使用者順應(yīng)性和潛在的產(chǎn)物安全性和功效。例如，當(dāng)維持在或低于約2° C-8° C的存儲(chǔ)溫度時(shí)，一些抗體制劑中抗體RSA趨勢(shì)明顯。盡管室溫延長(zhǎng)孵育(如長(zhǎng)于I小時(shí))可以完全或基本解決這種RSA趨勢(shì)，對(duì)這種延長(zhǎng)孵育的需求可能會(huì)負(fù)面影響制劑的有效性和持續(xù)使用。需要有助于鑒定合適制劑條件以使穩(wěn)定性最大化和RSA趨勢(shì)最小化的方法。例如，當(dāng)存儲(chǔ)在廣泛條件(如溫度、抗體濃度和pH)下時(shí)，需要使治療抗體穩(wěn)定而RSA最小的方法和制劑
發(fā)明內(nèi)容
`本公開(kāi)提供了降低制劑中抗體或抗體片段的可逆自體締合的制劑方法。同樣，本公開(kāi)提供了能用于鑒定制備抗體或抗體片段的改善制劑的方法。例如這種制劑能在臨床或?qū)嶒?yàn)室設(shè)置中治療或診斷性應(yīng)用。本公開(kāi)還提供了特定制劑，所述特定制劑包含特異結(jié)合H)GFR-a和抑制表達(dá)PDGFR-a的細(xì)胞生長(zhǎng)的抗體或抗體片段。示例性制劑有使所述制劑特別適于藥學(xué)應(yīng)用的優(yōu)勢(shì)RSA和穩(wěn)定特性。在某些實(shí)施方式中，所述制劑是液體制劑，包含特異結(jié)合TOGFR-a和抑制表達(dá)I3DGFR-a的細(xì)胞生長(zhǎng)的抗體或抗體片段。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述液體制劑不適合凍干。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述制劑適合凍干。在某些實(shí)施方式中，所述制劑包含緩沖液。在其他實(shí)施方式中，所述制劑包含乙酸鹽緩沖液。在其他實(shí)施方式中，所述制劑包含乙酸鈉緩沖液。在另一些實(shí)施方式中，替代或除了乙酸鈉緩沖液外，所述制劑包含乙酸鹽緩沖液。在某些實(shí)施方式中，所述制劑中所用緩沖液的這些變化可應(yīng)用于本文所述公開(kāi)的任何方面和實(shí)施方式。在另一方面，本公開(kāi)提供了某種制劑，所述制劑包含:a)水性運(yùn)載體；b)lmg/ml-100mg/ml特異結(jié)合I3DGFR- α和抑制表達(dá)TOGFR- α的細(xì)胞生長(zhǎng)的抗體或抗體片段;c) 4%-20%(重量/體積)蔗糖；d) 0.01%-0.1%(重量/體積)聚山梨酯80 (PS80);和e)乙酸鈉緩沖液，其中所述制劑的PH是pH4.0-pH6.0。在一些方面，本發(fā)明提供了某種制劑，所述制劑由下列組成:a)水性運(yùn)載體；b) lmg/ml-100mg/ml特異結(jié)合I3DGFR- α和抑制表達(dá)TOGFR- α的細(xì)胞生長(zhǎng)的抗體或抗體片段；c) 4%-20%(重量/體積)蔗糖；d) 0.01%-0.1%(重量/體積)聚山梨酯80 (PS80);和e)乙酸鈉緩沖液，其中所述制劑的pH是pH4.0-pH6.0。在任一上述某些實(shí)施方式中，所述抗體或抗體片段包含全長(zhǎng)IgG單克隆抗體。在一些實(shí)施方式中，所述抗體或抗體片段的存在濃度是20mg/ml-50mg/ml。在某些實(shí)施方式中，所述抗體或抗體片段的存在濃度是20mg/ml。在其他實(shí)施方式中，所述抗體或抗體片段的存在濃度是50mg/ml。在任一上述方面和實(shí)施方式的某些實(shí)施方式中，所述抗體或抗體片段包含含氨基酸序列SEQ ID NO:1的重鏈多肽。在一些實(shí)施方式中，所述抗體或抗體片段包含含氨基酸序列SEQ ID NO: 2的輕鏈多肽。在某些實(shí)施方式中，所述抗體或抗體片段與重鏈多肽含SEQID NO:1氨基酸序列且輕鏈多肽含SEQ ID NO: 2氨基酸序列的抗體結(jié)合相同的表位。在任一 上述方面和實(shí)施方式的某些實(shí)施方式中，所述抗體或抗體片段包含:有氨基酸序列SEQ ID NO: 3的VH CDRl;有氨基酸序列SEQ ID NO:4的VH CDR2;有氨基酸序列SEQ ID NO: 5的VH CDR3 ;有氨基酸序列SEQ ID NO:6的VL CDRl;有氨基酸序列SEQ IDNO:7的VL CDR2;和有氨基酸序列SEQ ID NO:8的VL CDR3。在任一上述方面和實(shí)施方式的某些實(shí)施方式中，所述抗體或抗體片段與包含下列結(jié)構(gòu)域的抗體結(jié)合相同的表位:有氨基酸序列SEQ ID NO: 3的VH CDRl;有氨基酸序列SEQID NO:4的VH CDR2;有氨基酸序列SEQ ID NO:5的VH CDR3 ;有氨基酸序列SEQ ID NO:6的VL CDRl;有氨基酸序列SEQ ID NO: 7的VL CDR2;和有氨基酸序列SEQ ID NO:8的VLCDR3。在任一上述方面和實(shí)施方式的某些實(shí)施方式中，所述制劑包含6%(w/v)蔗糖或10%(w/V)蔗糖。在某些實(shí)施方式中，所述制劑包含0.05%(w/v)PS80。在一些實(shí)施方式中，所述制劑包含50mM乙酸鈉緩沖液。在其他實(shí)施方式中，所述制劑的pH是5.5。在任一上述方面和實(shí)施方式的某些實(shí)施方式中，據(jù)分析超速離心(AUC)測(cè)定，所述制劑中的所述抗體或抗體片段在2-8° C和23-27° C有基本相似的可逆自體締合(RSA)特性。在某些實(shí)施方式中，高效大小排阻色譜(HPSEC)和動(dòng)態(tài)光散射(DLS)不能檢出所述制劑中所述抗體或抗體片段的RSA。在任一上述方面和實(shí)施方式的某些實(shí)施方式中，所述制劑中大于95%的所述抗體或抗體片段是單體形式，并且當(dāng)在10mg/ml、2-8° C時(shí)HPSEC不能檢出所述抗體或抗體片段的RSA。在一些實(shí)施方式中，據(jù)動(dòng)態(tài)光散射(DLS)測(cè)定，所述制劑中所述抗體或抗體片段在5° C的流體力學(xué)半徑與25° C的沒(méi)有顯著區(qū)別。在任一上述方面和實(shí)施方式的某些實(shí)施方式中，所述制劑適合靜脈內(nèi)給予。在某些實(shí)施方式中，所述水性運(yùn)載體是水。在一些實(shí)施方式中，所述制劑是無(wú)熱原的。在其他實(shí)施方式中，所述制劑還包含防腐劑以延長(zhǎng)保存期限。在一些實(shí)施方式中，據(jù)高效大小排阻色譜(HPSEC)測(cè)定，所述制劑在2-8° C穩(wěn)定至少2年。在一些實(shí)施方式中，據(jù)高效大小排阻色譜(HPSEC)測(cè)定，所述制劑的純度在至少兩年內(nèi)每年下降小于0.5%。
在任一上述方面和實(shí)施方式的某些實(shí)施方式中，所述制劑基本沒(méi)有組氨酸、任何其它表面活性劑、任何其它糖或多元醇和/或任何其它鹽。在任一上述方面和實(shí)施方式的某些實(shí)施方式中，所述制劑適合凍干。在其他實(shí)施方式中，所述制劑不適合凍干。在一些方面，本公開(kāi)提供了基本由以下組成的制劑:a)無(wú)菌水；b)20mg/ml特異結(jié)合TOGFR- α和抑制表達(dá)TOGFR- α的細(xì)胞生長(zhǎng)的抗體或抗體片段；c) 10% (重量/體積)蔗糖；d)0.05%(重量/體積)聚山梨酯80(PS80);和e)50mM乙酸鈉緩沖液，其中所述制劑的pH 是 pH5.5。在另一方面，本發(fā)明提供了基本由以下組成的制劑:a)無(wú)菌水；b)50mg/ml特異結(jié)合TOGFR- α和抑制表達(dá)TOGFR- α的細(xì)胞生長(zhǎng)的抗體或抗體片段；c) 10% (重量/體積)蔗糖；d)0.05%(重量/體積)聚山梨酯80(PS80);和e)50mM乙酸鈉緩沖液，其中所述制劑的pH 是 pH5.5。在任一上述方面和實(shí)施方式的某些實(shí)施方式中，所述抗體或抗體片段包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:1的重鏈多肽。在一些實(shí)施方式中，所述抗體或抗體片段包含含有氨基酸序列SEQ ID N0:2的輕鏈多肽。在某些實(shí)施方式中，所述抗體或抗體片段與重鏈多肽含SEQ ID NO:1氨基酸序列且輕鏈多肽含SEQ ID NO: 2氨基酸序列的抗體結(jié)合相同的表位。在任一上述方面和實(shí)施方式的某些實(shí)施方式中，所述抗體或抗體片段包含:有氨基酸序列SEQ ID NO: 3的VH CDRl;有氨基酸序列SEQ ID NO:4的VH CDR2;有氨基酸序列SEQ ID NO: 5的VH CDR3 ;有氨基酸序列SEQ ID NO:6的VL CDRl;有氨基酸序列SEQ IDNO:7的VL CDR2;和有氨基酸序列SEQ ID NO:8的VL CDR3。

在任一上述方面和實(shí)施方式的某些實(shí)施方式中，所述抗體或抗體片段與包含下列結(jié)構(gòu)域的抗體結(jié)合相同的表位:有氨基酸序列SEQ ID NO: 3的VH CDRl;有氨基酸序列SEQID N0:4的VH CDR2;有氨基酸序列SEQ ID N0:5的VH CDR3 ;有氨基酸序列SEQ ID N0:6的VL CDRl;有氨基酸序列的SEQ ID N0:7VL CDR2;和有氨基酸序列SEQ ID NO: 8的VL CDR3。在任一上述方面和實(shí)施方式的某些實(shí)施方式中，據(jù)AUC測(cè)定，所述制劑中所述抗體或抗體片段在2-8° C的不可逆自體締合(非RSA)特性和23-27° C的基本相似。在一些實(shí)施方式中，當(dāng)在10mg/ml、2-8° C時(shí)HPSEC不能檢出所述制劑中所述抗體或抗體片段的RSA。在其他實(shí)施方式中，所述制劑中大于95%的所述抗體或抗體片段在2-8° C是單體形式。在某些實(shí)施方式中，據(jù)動(dòng)態(tài)光散射(DLS)測(cè)定，所述制劑中所述抗體或抗體片段在5° C的流體力學(xué)半徑和25° C的沒(méi)有顯著區(qū)別。在任一上述方面和實(shí)施方式的某些實(shí)施方式中，所述制劑適合靜脈內(nèi)給予。在一些實(shí)施方式中，所述水是無(wú)菌水。在某些實(shí)施方式中，所述制劑是無(wú)熱原的。在任一上述方面和實(shí)施方式的某些實(shí)施方式中，據(jù)根據(jù)ICHQlA指南的長(zhǎng)期穩(wěn)定性研究測(cè)定，所述制劑在約2-8° C穩(wěn)定至少2年。所述ICHQlA指南是工業(yè)標(biāo)準(zhǔn)(FederalRegister(聯(lián)邦公報(bào))，68卷，第225號(hào)，2003年11月21日星期五;第65717-18頁(yè))。在某些實(shí)施方式中，據(jù)高效大小排阻色譜(HPSEC)測(cè)定，所述制劑的純度在至少兩年內(nèi)每年下降小于0.5%。在任一上述方面和實(shí)施方式的某些實(shí)施方式中，所述制劑不適合凍干。在一些實(shí)施方式中，所述制劑適合凍干。
在另一方面，本公開(kāi)提供了一種制劑，所述制劑包含:a)水性運(yùn)載體；b)lmg/ml-100mg/ml抗體或抗體片段；c) 4%-20% (重量/體積)蔗糖；d) 0.01%-0.1% (重量/體積)聚山梨酯80(PS80);和e)乙酸鈉緩沖液，其中所述制劑的pH是pH4.0-pH6.0，并且其中制劑中所述抗體或抗體片段在約2-8° C測(cè)定的非RSA趨勢(shì)與約23-27° C測(cè)定的基本相同。在其他方面，本公開(kāi)提供了一種制劑，所述制劑包含:a)水性運(yùn)載體；b)lmg/ml-100mg/ml抗體或抗體片段；c) 4%-20% (重量/體積)蔗糖；d) 0.01%-0.1% (重量/體積)聚山梨酯80(PS80);和e)乙酸鈉緩沖液，其中所述制劑的pH是pH4.0-pH6.0，并且其中在2-8° C時(shí)所述制劑中大于95%的所述抗體或抗體片段是非自體締合、單體形式。在某些方面，本公開(kāi)提供了一種制劑，所述制劑由下列組成:a)水性運(yùn)載體;b) lmg/ml-100mg/ml抗體或抗體片段;c) 4%-20% (重量/體積)鹿糖;d) 0.01%-0.1% (重量/體積)聚山梨酯80(PS80);和e)乙酸鈉緩沖液，其中所述制劑的pH是pH4.0-pH6.0，并且其中所述制劑中所述抗體或抗體片段在約2-8° C測(cè)定的非RSA趨勢(shì)與約23-27° C測(cè)定的基本相同。在一些方面，本發(fā)明提供了一種制劑，所述制劑由下列組成:a)水性運(yùn)載體;b) lmg/ml-100mg/ml抗體或抗體片段;c) 4%-20% (重量/體積)鹿糖;d) 0.01%-0.1% (重量/體積)聚山梨酯80(PS80);和e)乙酸鈉緩沖液，其中所述制劑的pH是pH4.0-pH6.0，并且其中在2-8° C時(shí)所述制劑中大于95%的所述抗體或抗體片段是非自體締合、單體形式。在任一上述方面和實(shí)施方式的某些實(shí)施方式中，本公開(kāi)提供了乙酸鈉緩沖液被不同的乙酸鹽緩沖液代替或取代的制劑。例如，在某些實(shí)施方式中，本公開(kāi)提供了包含不同乙酸鹽緩沖液替代乙酸鈉的制劑。當(dāng)使用不同的乙酸鹽緩沖液時(shí)，所述緩沖液可以與乙酸鈉緩沖液所用類(lèi)似的方式使用(如在或跨相同濃度范圍)。在其他實(shí)施方式中，所述制劑包含多于一種乙酸鹽緩沖液。在其他方面，本公開(kāi)提供了消`除和降低制劑中抗體的可逆自體締合(RSA)的方法，所述方法包含:提供包含抗體或抗體片段的起始制劑，其中，所述起始制劑中所述抗體或抗體片段的RSA可用HPSEC測(cè)量，i)在約2-8° C和/或ii)在大于4mg/ml濃度，和所述起始制劑中抗體或抗體片段包含高分子量形式；向所述起始制劑中加入蔗糖以提供有約4%-約20%(重量/體積)蔗糖的改變制劑，其中當(dāng)在約2-8° C以給定抗體濃度比較時(shí)，所改變制劑中抗體或抗體片段的RSA相對(duì)于所述起始制劑抗體或抗體片段的RSA消除或降低。在某些實(shí)施方式中，所述方法還包含:測(cè)定所述改變的制劑中所述抗體或抗體片段的流體力學(xué)半徑，并將其與所述起始制劑中所述抗體或抗體片段的流體力學(xué)半徑進(jìn)行比較，其中當(dāng)在約2-8° C以給定抗體濃度比較時(shí)，所述改變的制劑中所述抗體或抗體片段的流體力學(xué)半徑相對(duì)于所述起始制劑的流體力學(xué)半徑消除或降低。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述改變的制劑的流體力學(xué)半徑用DLS測(cè)定。在任一上述方面和實(shí)施方式的某些實(shí)施方式中，所述方法還包含:使用HPSEC測(cè)定所述改變的制劑中所述抗體或抗體片段的RSA趨勢(shì)，并將其與所述起始制劑中所述抗體或抗體片段的RSA趨勢(shì)進(jìn)行比較，其中當(dāng)在約2-8° C以給定抗體濃度比較時(shí)，所述改變的制劑中所述抗體或抗體片段的RSA趨勢(shì)相對(duì)于所述起始制劑的RSA趨勢(shì)消除或降低。在某些實(shí)施方式中，所述方法還包含在約2-8° C和約23-27° C測(cè)定所述改變的制劑中所述抗體或抗體片段的RSA趨勢(shì)，和確證所述改變的制劑中所述抗體或抗體片段在2-8° C測(cè)定的非RSA趨勢(shì)和23-27° C測(cè)定的基本相似。在一個(gè)實(shí)施方式中，通過(guò)AUC分析在約2_8° C和約23-27° C的RSA趨勢(shì)。在一些實(shí)施方式中，HPSEC不能檢出所述改變的制劑中所述抗體或抗體片段的RSA。在任一上述方面和實(shí)施方式的某些實(shí)施方式中，所述抗體或抗體片段在所述起始制劑和改變制劑中的存在濃度是約lmg/ml -約100mg/ml。在一些實(shí)施方式中，所述抗體或抗體片段在所述起始制劑和改變制劑中的存在濃度是約20mg/ml或約50mg/ml。在其他實(shí)施方式中，所述抗體或抗體片段在所改變制劑中的存在濃度是約20mg/ml或約50mg/ml。在任一上述方面和實(shí)施方式的某些實(shí)施方式中，向所述起始制劑中加入蔗糖包含加入蔗糖以使蔗糖終濃度達(dá)到所改變制劑中約10%(w/v)。在其他方面，本公開(kāi)提供了消除或降低制劑中抗體可逆自體締合(RSA)的方法，所述方法包含:a)提供包含抗體或抗體片段的起始制劑，其中以濃度10mg/ml、在約2-8° C時(shí)用HPSEC可檢出所述起始制劑中所述抗體或抗體片段的RSA;b)使用一種或多種試驗(yàn)測(cè)定所述起始制劑中所述抗體或抗體片段的生物物理屬性；c)將所述起始制劑的蔗糖含量調(diào)節(jié)至約4%-約20%(w/v)的終濃度以生成改變的制劑；和d)使用一種或多種試驗(yàn)測(cè)定所述改變的制劑中所述抗體或抗體片段的生物物理屬性；其中當(dāng)在約2-8° C以給定抗體濃度比較時(shí)，所述改變的制劑中所述抗體或抗體片段的RSA相對(duì)于所述起始制劑的RSA消除。在一些實(shí)施方式中，步驟(C)進(jìn)行多于一次。在某些實(shí)施方式中，步驟(C)和(d)進(jìn)行多于一次。在其他實(shí)施方式中，步驟(b)和(d)包含評(píng)價(jià)相同的生物物理屬性。在示例性實(shí)施方式中，據(jù)高效大小排阻色譜(HPSEC)測(cè)定，所述生物物理屬性是指示RSA趨勢(shì)的特征色譜峰。在一些實(shí)施方式中，所述特征色譜峰是所述峰有峰肩。在一些實(shí)施方式中，所述生物物理屬性在2個(gè)不同溫度評(píng)價(jià)。在任一上述方面和實(shí)施方式的某些實(shí)施方式中，據(jù)動(dòng)態(tài)光散射測(cè)定,所述生物物理屬性是所述起始制劑和/或所述改變的制劑中抗體或抗體片段的流體力學(xué)半徑。在任一上述方面和實(shí)施方式中某些實(shí)施方式中，所述生物物理屬性是流體力學(xué)半徑，并且所述方法包含測(cè)定所述改變的制劑中所述抗體或抗體片段的流體力學(xué)半徑，并將其與所述起始制劑中所述抗體或抗體片段的流體力學(xué)半徑進(jìn)行比較，其中當(dāng)在約2-8° C以給定抗體濃度比較時(shí)，所述改變的制劑中所述抗體或抗體片段的流體力學(xué)半徑相對(duì)于所述起始制劑的流體力學(xué)半徑降低。在示例性實(shí)施方式中，所述改變的制劑的流體力學(xué)半徑用DLS測(cè)定。 在上述方面或?qū)嵤┓绞街腥我豁?xiàng)的某些實(shí)施方式中，所述抗體或抗體片段以約lmg/ml -約100mg/ml濃度存在于所述起始制劑和所改變制劑。在某些實(shí)施方式中,所述抗體或抗體片段以約20mg/ml或約50mg/ml濃度存在于所述起始制劑和改變的制劑。在一些實(shí)施方式中，所述抗體或抗體片段以約20mg/ml或約50mg/ml濃度存在于所改變的制劑。在上述方面和實(shí)施方式中任一項(xiàng)的某些實(shí)施方式中，調(diào)整蔗糖含量包含加入蔗糖以達(dá)到所改變制劑中蔗糖終濃度約10%(w/v)。在其他方面，本公開(kāi)提供了根據(jù)任一上述方面或?qū)嵤┓绞降姆椒ㄉ傻暮锌贵w或抗體片段的制劑。
在其他方面，本公開(kāi)提供了治療需要治療的患者腫瘤病癥的方法，所述方法包含給予所述患者有效量的任一上述方面或?qū)嵤┓绞降闹苿?。在某些?shí)施方式中，所述制劑作為治療方案的一部分與一種或多種其他藥劑或治療方式聯(lián)合施用。在示例性實(shí)施方式中，所述腫瘤病癥是癌癥。在另一方面，本公開(kāi)提供了生成有降低RSA的抗體或抗體片段的制劑的方法，所述方法包含:生成抗體或抗體片段；和將所述抗體或抗體片段配制為包含以下組分的制劑:水性運(yùn)載體；lmg/ml-100mg/ml所述抗體或抗體片段；4%_20%(重量/體積)蔗糖；0.01%-0.1%(重量/體積)表面活性劑；和乙酸鹽緩沖液，其中所述制劑的pH是PH4.0-pH6.0;其中所述制劑中使用的蔗糖量通過(guò)以下選擇:提供包含抗體或抗體片段的起始制劑，其中在約2-8° C用HPSEC可檢出所述起始制劑中所述抗體或抗體片段的RSA，并且所述起始制劑中的抗體或抗體片段由高分子量形式組成；加入蔗糖到所述起始制劑中以提供有4%-20%(重量/體積)蔗糖的改變制劑，其中在約2-8° C以給定抗體濃度比較時(shí)，所述改變的制劑中抗體或抗體片段的RSA相對(duì)于所述起始制劑下降。在其他方面，本公開(kāi)提供了生成有降低RSA的抗體或抗體片段的制劑的方法，所述方法包含:生成抗體或抗體片段；和將所述抗體或抗體片段配制為包含以下組分的制劑:水性運(yùn)載體；lmg/ml-100mg/ml所述抗體或抗體片段；4%_20%(重量/體積)蔗糖；0.01%-0.1%(重量/體積)表面活性劑；和乙酸鹽緩沖液，其中所述制劑的pH是PH4.0-pH6.0;其中所述制劑中使用的蔗糖量通過(guò)以下選擇:a)提供包含抗體或抗體片段的起始制劑，其中以10mg/ml、在約2-8° C下時(shí)用HPSEC可檢出所述起始制劑中所述抗體或抗體片段的RSA;b)使用一種或多種試驗(yàn)測(cè)定所述起始制劑中所述抗體或抗體片段的生物物理屬性；c)調(diào)整所述起始制劑的蔗糖含量實(shí)現(xiàn)約4%-約40%(w/v)終濃度以生成改變的制劑；和d)使用一種或多種試驗(yàn)測(cè)定所述改變的制劑中所述抗體或抗體片段的生物物理屬性，其中當(dāng)在約2-8° C以給定抗體濃度下比較時(shí)，所改變制劑中所述抗體或抗體片段的RSA相對(duì)于所述起始制劑的RSA下降。在任一上述某些實(shí)施方式中，本公開(kāi)提供了制劑中有緩沖液的制劑和方法。在某些實(shí)施方式中，所述緩沖液是乙酸鹽緩沖液。在某些實(shí)施方式中，所述乙酸鹽緩沖液是乙酸鈉緩沖液。在其他實(shí)施方式中，所述乙酸鹽緩沖液不是乙酸鈉緩沖液。在其他實(shí)施方式中，乙酸鈉緩沖液用不同的乙酸鹽緩沖液代替或取代。例如，在某些實(shí)施方式中，本公開(kāi)提供了包含不同乙酸鹽緩沖液替代乙酸鈉的制劑。當(dāng)使用不同的乙酸鹽緩沖液時(shí)，所述緩沖液可以與乙酸鈉緩沖液所用類(lèi)似的方式使用(如在或跨相同濃度范圍)。在其他實(shí)施方式中，所述制劑包含多于一種乙酸鹽緩沖液。本公開(kāi)考慮了任一上述方面和實(shí)施方式的所有組合以及詳細(xì)描述和實(shí)施例中所示任一實(shí)施方式的組合。另外，當(dāng)涉及〃任一上述方面或?qū)嵤┓绞健〞r(shí)，也應(yīng)該理解包含〃任一上述或下列方面或?qū)嵤┓绞健?。附表和圖的簡(jiǎn)要說(shuō)明

圖1。MabA顯示了不含蔗糖的乙酸鹽/鹽制劑中的RSA趨勢(shì)。此起始、包含乙酸鹽/鹽制劑中所述抗體的RSA趨勢(shì)由HPSEC和沉降速率分析超速離心(AUC)測(cè)定。圖1A，下圖(2-8°C)，表明在存儲(chǔ)溫度條件下出現(xiàn)指示RSA的峰的前沿峰肩。在2-8° C下單體峰中的豎直線顯示自體締合。圖1B顯示了這種不含蔗糖制劑中的MabA于23-27° C沉淀超過(guò)離散范圍，在2-8° C觀察到顯著變寬和更高的沉降系數(shù)，指示RSA。圖1顯示了起始不含蔗糖制劑中的MabA在2-8° C有用HPSEC和AUC可測(cè)量的RSA趨勢(shì)。所述RSA主要作為二聚化和更高級(jí)寡聚化發(fā)生。另外，圖1顯示了此起始制劑中所述抗體的RSA趨勢(shì)是溫度依賴(lài)性的(如由上述峰肩證明的RSA趨勢(shì)在室溫相對(duì)于約2-8 ° C存儲(chǔ)溫度分解成單體)。圖2。含有蔗糖制劑中MabA的RSA預(yù)防，據(jù)HPSEC和AUC測(cè)定。在含有蔗糖制劑中，據(jù)HPSEC (圖2A)在2-8 ° C以20mg/ml和50mg/ml抗體濃度測(cè)定，沒(méi)有檢出RSA。另外，如AUC所顯示，抗體沉淀中沒(méi)有觀察到溫度依賴(lài)性(疊加2-8° C和23-27° C的AUC沉淀概況；見(jiàn)圖2B)。因此，與不含蔗糖的制劑相比，MabA的RSA在以含蔗糖的制劑提供時(shí)被防止。例如，在約2-8° C通過(guò)HPSEC不再檢出和測(cè)量到RSA。圖3。MabA上α -氨基萘三磺酸(ANS)和疏水性表面之間的相互作用隨著蔗糖含量增加而減少。0%和12%蔗糖含量的比較顯示了含有蔗糖制劑中ANS結(jié)合的顯著下降，提示蔗糖含量降低抗體的表面疏水性，造成RSA降低。圖4。含蔗糖和不含蔗糖制劑中多個(gè)溫度下MabA流體力學(xué)半徑的測(cè)量。圖4Α顯示了 5° C、25° C和37° C下含乙酸鹽/鹽制劑中MabA的流體力學(xué)半徑。沒(méi)有蔗糖時(shí)，所述抗體流體力學(xué)半徑是溫度依賴(lài)性，指示了低溫下RSA趨勢(shì)。然而，出現(xiàn)蔗糖(圖4B)時(shí)，沒(méi)有觀察到溫度依賴(lài)性，指示RSA趨勢(shì)的消除。圖5。含蔗糖制劑中MabA的增加熱穩(wěn)定性。使用差示掃描量熱法(DSC)，在含蔗糖和不含蔗糖的制劑中評(píng)價(jià)MabA的熱穩(wěn)定性。所述抗體顯示了含蔗糖制劑中顯著更大的熱穩(wěn)定性。這顯示了含蔗糖制劑誘導(dǎo)有利構(gòu)象變化，產(chǎn)生相對(duì)于所述起始制劑降低的RSA和增加的熱穩(wěn)定性。圖6。第二維里系數(shù)的測(cè)量。加入蔗糖使所述第二維里系數(shù)從吸引向排斥凈交互作用移動(dòng)。這個(gè)結(jié)果指示了蔗糖對(duì)分子間相互作用的顯著下降/防止和自體締合傾向起作用。`
具體實(shí)施例方式⑴綜述抗體的可逆自體締合可以在某些制劑條件下發(fā)生。然而，通常，僅作為蛋白聚集更大問(wèn)題的一部分，制劑中發(fā)生抗體可逆自體締合。例如，可逆自體締合可以在顯著非可逆二聚化、三聚化和其他更高級(jí)寡聚化發(fā)生的情況和/或條件下觀察到。顯著非可逆聚集的出現(xiàn)通常使制劑不適合治療應(yīng)用。此外或替代地，僅在基本低于制劑存儲(chǔ)或使用溫度的極低溫度下發(fā)生可檢測(cè)的可逆自體締合。在這個(gè)情況下，盡管可逆自體締合在極低溫度的條件下可檢測(cè)，存儲(chǔ)溫度和室溫下可檢測(cè)自體締合的消失意味者RSA可能基本不影響制劑的診斷、研究或治療效用。在上面任一條件下，可以沒(méi)有調(diào)節(jié)所述制劑以降低RSA的特定需求。然而，在一些情況下，在存儲(chǔ)溫度(約2-8° C，如5° C)發(fā)生制劑中可檢測(cè)的可逆自體締合。替代地或此夕卜，甚至在相對(duì)低抗體濃度(如約4-8mg/ml)下仍發(fā)生制劑中可檢測(cè)的抗體可逆自體締合。這是顯著的，因?yàn)槠谕赡孀泽w締合隨著抗體濃度的降低而降低，并且在低于通常存儲(chǔ)或使用條件的劑量下，出現(xiàn)可檢出RSA提示了 RSA對(duì)標(biāo)準(zhǔn)治療或使用條件下所述制劑中的抗體是重要事件。本公開(kāi)提供了這些情況下防止或降低RSA的方法和與RSA有關(guān)的挑戰(zhàn)。
本公開(kāi)部分是基于以下發(fā)現(xiàn):如本文所述蔗糖降低或防止制劑中抗TOGFR-CI抗體的RSA。因此，在某些方面，本公開(kāi)提供了減少制劑中抗體或抗體片段的RSA趨勢(shì)的方法。本文所述制劑方法的可觀察優(yōu)勢(shì)是制備制劑的能力，當(dāng)以給定濃度如至少約10mg/ml評(píng)價(jià)和與存儲(chǔ)溫度及室溫基本相同時(shí)，HPSEC不能檢出制劑中抗體的RSA趨勢(shì)。在某些實(shí)施方式中，所述方法產(chǎn)生制劑的制備，其中在約2-8° C的存儲(chǔ)溫度下，HPSEC不能檢測(cè)制劑中抗體的RSA趨勢(shì)。注意到RSA趨勢(shì)可以在任意一些濃度和溫度下評(píng)價(jià)。然而，在過(guò)低抗體條件下評(píng)價(jià)RSA趨勢(shì)可能錯(cuò)誤低估RSA的出現(xiàn)。因此，在得出制劑中抗體RSA趨勢(shì)消除或RSA趨勢(shì)顯著提高的結(jié)論前，在靶標(biāo)制劑濃度或至少約10mg/ml濃度和2-8° C下進(jìn)行HPSEC和/或AUC評(píng)估。在這種濃度和溫度范圍下不能由HPSEC和/或AUC檢出的RSA與就制劑中抗體而言RSA消除的結(jié)論一致。本公開(kāi)方法和組合物的顯著優(yōu)勢(shì)之一是特別在相關(guān)濃度如至少10mg/ml評(píng)價(jià)時(shí)HPSEC不能檢出RSA和在存儲(chǔ)溫度(2-8° C)與室溫之間沒(méi)有顯著區(qū)別的制劑，和/或在相關(guān)濃度如至少10mg/ml時(shí)HPSEC于2_8° C不能檢測(cè)RSA趨勢(shì)的制劑能使用而不需要室溫延長(zhǎng)孵育。換言之，如果不能檢出RSA，不需要室溫孵育60-90分鐘或更長(zhǎng)的延長(zhǎng)期。因此，在某些實(shí)施方式中，本公開(kāi)提供了防止或降低制劑中抗體RSA的方法。本文提供這些方法的細(xì)節(jié)。在某些實(shí)施方式中，所述方法涉及防止或降低制劑中抗I3DGFR-α抗體的RSA。另外，本公開(kāi)提供了包含抗roGFR-α抗體或抗體片段的制劑。本文提供了特定制劑的細(xì)節(jié)。在某些實(shí)施方式中，所述制劑提高了優(yōu)選的非RSA屬性，例如I)給定濃度下在2-8° C對(duì)比室溫沒(méi)有顯著區(qū)別的RSA和/或2)在相關(guān)濃度如至少10mg/ml不能由HPSEC于2-8° C檢測(cè)的RSA和/或3)至少4mg/ml的抗體濃度下不能檢測(cè)的RSA和/或隨著濃度沒(méi)有顯著變化的RSA。不考慮RSA特性，應(yīng)該理解所述制劑中抗體保留其功能屬性如特異結(jié)合TOGFR-α的能力，和抑制表達(dá)TOGFR-α的細(xì)胞生長(zhǎng)。另外，本公開(kāi)提供了降低或消除起始制劑中抗體的RSA趨勢(shì)以實(shí)現(xiàn)一種或多種上述RSA特性。同樣地，所述抗體制劑在`存儲(chǔ)修復(fù)后不需要延長(zhǎng)培育期就可以給予對(duì)象，因此簡(jiǎn)化了健康護(hù)理專(zhuān)業(yè)人員向?qū)ο蠼o予制劑的過(guò)程。另外，本文所述制劑能包含濃度范圍約lmg/ml -約100mg/ml的抗體(包含其抗體片段)，而不造成由于延長(zhǎng)存儲(chǔ)期間蛋白聚集和/或片段化對(duì)抗體生物活性的不良作用。這種穩(wěn)定性不僅保證了抗體的功效，而且降低了對(duì)象中可能發(fā)生不良作用的風(fēng)險(xiǎn)。因此，在某些實(shí)施方式中，本公開(kāi)提供了防止或降低抗體特別是抗I3DGFR-α抗體RSA趨勢(shì)的包含蔗糖的抗體制劑。另外，本文提供了防止或降低抗體制劑中抗體RSA的方法。在某些實(shí)施方式中，所述制劑是液體制劑。在某些實(shí)施方式中，所述制劑不適合凍干。在某些實(shí)施方式中，所述制劑適合凍干。在某些實(shí)施方式中，這種制劑中的抗體具有利的RSA特性。在某些實(shí)施方式中，這種有利的RSA特性相對(duì)于起始制劑中抗體的RSA特性作評(píng)價(jià)。本公開(kāi)制劑提供了抗體(包含其抗體片段)的穩(wěn)定即用型制品。在特定實(shí)施方式中，本公開(kāi)制劑提供了包含抗H)GFR-a抗體的制品。不希望受理論的限制，本公開(kāi)部分基于下面的觀察:起始制劑中抗roGFR-a抗體有影響所述制劑能使用方法的RSA趨勢(shì)(參見(jiàn)例如本文實(shí)施例1)。這種起始制劑中的單體抗roGFR-α分子有短暫和可逆的自體締合趨勢(shì)，并且這種RSA是溫度的函數(shù)。特定地，所述起始制劑中該抗體的RSA在約2° C -約8° C的存儲(chǔ)條件下顯著,并且甚至在10mg/ml下可由HPSEC測(cè)量,如單體峰前沿峰肩所指示。在這個(gè)起始制劑中，甚至當(dāng)所示抗體顯著稀釋時(shí)HPSEC仍然可測(cè)量指示RSA的峰肩(如直到所述抗體稀釋到小于或等于4mg/ml時(shí)，所示峰肩可以檢出)。然而，RSA趨勢(shì)隨時(shí)間降低并且室溫平衡60 - 90分鐘后不能檢出。類(lèi)似地，所述抗體應(yīng)用于此起始制劑前需要室溫或更高溫度的延長(zhǎng)培育。需要延長(zhǎng)培育是通常不方便的原因并且可潛在引入不順應(yīng)性的風(fēng)險(xiǎn)。在某些實(shí)施方式中，這種短暫RSA趨勢(shì)是濃度依賴(lài)性的，并且隨著更低抗體濃度而下降。例如，上述HPSEC峰肩在2-8° C和蛋白濃度10mg/ml下可檢出。2-8° C下稀釋抗體濃度到小于或等于4mg/ml后，不能觀察到所述HPSEC峰肩。4° C時(shí)AUC的尺寸分布分析也顯示了低抗體濃度下產(chǎn)物峰加寬變小。類(lèi)似的，為了避免這種制劑中的RSA，一些抗體需要在極低濃度(如小于4mg/ml)下。對(duì)很多治療應(yīng)用而言，在這種低濃度下配制抗體不實(shí)用。本發(fā)明部分基于下面驚人的發(fā)現(xiàn):蔗糖防止或降低起始制劑中觀察到的抗PDGFR- α抗體的RSA，并且本公開(kāi)也適用于顯示本文所述RSA的其他抗體。在某些實(shí)施方式中，本描述提供了防止或降低抗體RSA的方法(相對(duì)于起始制劑的RSA)，其中起始制劑中抗體的RSA有一種或多種下列特性:i)在2-8° C于給定抗體濃度如10mg/ml或至少I(mǎi)Omg/ml可測(cè)量/檢出RSA，并且所述RSA在室溫平衡后降低或消除，ii)在2_8° C大于4mg/ml抗體濃度下可測(cè)量/檢出RSA，并且所述RSA在稀釋到4mg/ml或更小濃度后降低或消除，和/或iii)從可逆自體締合的高分子量形式(如二聚體、三聚體、四聚體、五聚體或更高級(jí)寡聚體)生成RSA。防止或降低RSA的方法特別適于防止或降低抗體中的RSA，其中起始制劑中的RSA有1、2或全部3項(xiàng)上述特性。類(lèi)似地，所述抗體制劑在存儲(chǔ)修復(fù)后不需要延長(zhǎng)培育期就可以給予對(duì)象，從而簡(jiǎn)化了健康護(hù)理專(zhuān)業(yè)人員向?qū)ο蠼o予制劑的過(guò)程。另外，本公開(kāi)制劑能包含濃度范圍約Img/ml -約100mg/ml的抗體(包含其抗體片段)，而不造成由于延長(zhǎng)存儲(chǔ)期間RSA、蛋白聚集和/或片段化對(duì)抗體生物活性的不良`作用。盡管抗體穩(wěn)定性是與RSA趨勢(shì)不同的屬性，制劑穩(wěn)定性對(duì)安全性、功效和商業(yè)應(yīng)用重要。這種穩(wěn)定性不僅保證了抗體的功效，而且降低了對(duì)象中可能發(fā)生不良作用的風(fēng)險(xiǎn)。因此，本公開(kāi)提供了防止或降低抗體特別是抗roGFR-α抗體的RSA趨勢(shì)的含蔗糖抗體制劑。另外，本文提供了防止或降低抗體制劑中抗體RSA的制劑方法。(ii)定義繼續(xù)進(jìn)一步詳細(xì)描述本發(fā)明之前，應(yīng)理解本發(fā)明不限于特定組合物或工藝步驟，所述組合物或工藝步驟可變化。必須注意，除非上下文另外明確說(shuō)明，否則在本說(shuō)明書(shū)和所附權(quán)利要求中使用的單數(shù)形式“一個(gè)”、“一種”和“所述”包括復(fù)數(shù)指代物。除非另有定義，本文使用的所有科技術(shù)語(yǔ)與本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員所理解的通常含義相同。例如，Concise Dictionary of Biomedicine and Molecular Biology(《生物醫(yī)藥和分子生物學(xué)簡(jiǎn)明詞典》)，Juo，Pe1-Show，第2版，2002，CRC出版社(CRCPress) ; The Dictionary of Cell and Molecular Biology (《細(xì)胞和分子生物學(xué)詞典》)，第 3 版，1999，學(xué)術(shù)出版社(Academic Press);和 Oxford Dictionary Of BiochemistryAnd Molecular Biology (《牛津生物化學(xué)和分子生物學(xué)辭典》)，修訂，2000，牛津大學(xué)出版社(Oxford University Press),向技術(shù)人員提供了本發(fā)明使用的很多術(shù)語(yǔ)的常用詞典。本文中氨基酸可指由IUPAC-1UB生物化學(xué)命名委員會(huì)推薦的俗稱(chēng)三字母符號(hào)或單字母符號(hào)。同樣，核苷酸可指其普遍接受的單字母代碼。除非另有說(shuō)明，抗體可變結(jié)構(gòu)域、互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)和框架區(qū)(FR)的氨基酸編號(hào)遵循 Kabat 等 Sequences of Proteins of Immunological Interest(《免疫學(xué)感興趣蛋白的序列》)，第5版,公共衛(wèi)生服務(wù)部(Public Health Service),馬里蘭州貝塞斯達(dá)的國(guó)立衛(wèi)生研究院(1991)所示的Kabat定義。使用這個(gè)編號(hào)系統(tǒng)，所述實(shí)際線形氨基酸序列可以包含對(duì)應(yīng)于可變結(jié)構(gòu)域FR或CDR縮短、或插入的更少或其他氨基酸。例如，重鏈可變結(jié)構(gòu)域可以包含H2的殘基52后的單氨基酸插入(根據(jù)Kabat的殘基52a)和重鏈FR殘基82后的插入殘基(如根據(jù)Kabat的殘基82a、82b和82c等)?？梢酝ㄟ^(guò)用〃標(biāo)準(zhǔn)"Kabat編號(hào)序列比對(duì)抗體序列同源性區(qū)域就給定抗體測(cè)定殘基的Kabat編號(hào)。構(gòu)架殘基的最大比對(duì)常需要在編號(hào)系統(tǒng)中插入“間隔”殘基，用于Fv區(qū)。另外，由于種間或等位基因差異，任何給定Kabat位點(diǎn)上的某些單獨(dú)殘基特性在抗體鏈間可能不同。本文所用術(shù)語(yǔ)“一種或多種抗體”也稱(chēng)為免疫球蛋白，包括單克隆抗體(包括全長(zhǎng)單克隆抗體)、多克隆抗體、由至少兩種不同表位結(jié)合片段(如雙特異性抗體)形成的多特異性抗體、人抗體、人源化抗體、駱騎(camelised)抗體、嵌合抗體、單鏈Fv(scFv)、Fab片段、F(ab’)2片段、顯示所需生物學(xué)活性(如抗原結(jié)合部分)的抗體片段、二硫鍵連接的Fv(dsFv)和抗獨(dú)特型(抗-1d)抗體(包括例如，本公開(kāi)抗體的抗-1d抗體)、細(xì)胞內(nèi)抗體和任一上述物質(zhì)的表位結(jié)合片段。具體說(shuō)，抗體包括免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫學(xué)活性片段，即含有 至少一個(gè)抗原結(jié)合位點(diǎn)的分子。免疫球蛋白分子能是任何同種型(如 IgG、IgE、IgM、IgD、IgA 和 IgY)、亞同種型(如 IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl 和 IgA2)或同種異型(如 Gm,如 Glm(f、z、a 或 x)、G2m(n)、G3m(g、b 或 c)、Am、Em 和 Km(l、2 或 3))?？贵w可衍生自任何哺乳動(dòng)物，包括但不限于人、猴、豬、馬、兔、犬、貓、小鼠等，或其他哺乳動(dòng)物如鳥(niǎo)(如雞)。在給出值或范圍時(shí)，本文所用術(shù)語(yǔ)“約”指在給定數(shù)值或范圍的20%以?xún)?nèi)、優(yōu)選10%以?xún)?nèi)和更優(yōu)選5%以?xún)?nèi)的數(shù)值或范圍。術(shù)語(yǔ)〃H)GFR- α 〃指血小板衍生生長(zhǎng)因子酪氨酸激酶受體-α。TOGFR- α也稱(chēng)作CD 140a 和 PDGFR-α。“MabA"指包含表I所示氨基酸序列的特定、人IgG2抗TOGFR- α抗體。特定地，所述抗體包含表I所示VH和VL (其可變區(qū)包含表I所示6個(gè)CDR)。這個(gè)抗體也可以涉及其示于表I的6個(gè)⑶R或作為包含VH和VL結(jié)構(gòu)域的抗體和包含表I所示6個(gè)⑶R的抗體。這種特定人抗體是特異結(jié)合I3DGFR-α和抑制表達(dá)TOGFR-α的細(xì)胞生長(zhǎng)的TOGFR-α抗體示例。當(dāng)涉及靶標(biāo)結(jié)合藥劑如抗體時(shí)，術(shù)語(yǔ)〃中和〃指所述藥劑消除或顯著降低靶標(biāo)抗原活性的能力。因此，〃中和〃抗TOGFR-α抗體能消除或顯著降低roGFR-α的活性。例如中和H)GFR-a抗體可以通過(guò)阻斷配體和roGFR-a結(jié)合起作用。如Kabat 等，1991 (Kabat, E.A.等.(1991) Sequences of Proteins ofImmunological Interest (《免疫學(xué)感興趣蛋白的序列》)，第5版,美國(guó)衛(wèi)生和人類(lèi)服務(wù)部公共衛(wèi)生署的NIH，華盛頓)和隨后版本所定義，術(shù)語(yǔ)“CDR區(qū)”或“CDR”用于指示免疫球蛋白重鏈和輕鏈的超變區(qū)?？贵w通常含有3個(gè)重鏈⑶R和3個(gè)輕鏈⑶R。本文利用術(shù)語(yǔ)⑶R表示(視情形而定)這些區(qū)域中的一個(gè)或幾個(gè)或甚至全部，這些區(qū)域含有負(fù)責(zé)通過(guò)抗體與其識(shí)別抗原或表位的親和性來(lái)結(jié)合的大多數(shù)氨基酸殘基。如本文所討論，考慮了抗體或免疫球蛋白分子的氨基酸序列的小變化由所述抗體或免疫球蛋白分子所涵蓋，前提是氨基酸序列的變化維持與本文所述抗體或免疫球蛋白分子至少75%，至少80%、90%、95%或至少99%序列相同性。變體應(yīng)該保持參照抗體的所需生物屬性。例如，在roGFR-α抗體情況下，變體應(yīng)該保持(i)特異結(jié)合TOGFR-α的能力和/或(ii)抑制表達(dá)roGFR-a的細(xì)胞生長(zhǎng)的能力。在某些實(shí)施方式中，變體還定性為:作為參照抗體結(jié)合相同表位和/或與所述參照抗體就結(jié)合抗原競(jìng)爭(zhēng)。在某些實(shí)施方式中，變體包含相對(duì)于參照抗體的1、2、3、4、5、6、7、8、9或10個(gè)取代(包含刪除或插入)。特別地，考慮了保守性氨基酸取代。保守性取代是在有相關(guān)側(cè)鏈的氨基酸家族內(nèi)發(fā)生的取代。遺傳編碼的氨基酸通常分為幾個(gè)家族:(I)酸性=天冬氨酸、谷氨酸；(2)堿性=賴(lài)氨酸、精氨酸、組氨酸；(3)非極性=丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸；和(4)不帶電極性=甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸、色氨酸、蘇氨酸、酪氨酸。更優(yōu)選家族為:絲氨酸和蘇氨酸是脂族羥基家族；天冬酰胺和谷氨酰胺是含酰胺家族；丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸和異亮氨酸是脂族家族；以及苯丙氨酸、色氨酸和酪氨酸是芳族家族。例如，能合理預(yù)期分別用異亮氨酸或纈氨酸取代亮氨酸，用谷氨酸取代天冬氨酸，用絲氨酸取代蘇氨酸，或用結(jié)構(gòu)上相關(guān)氨基酸類(lèi)似地取代某氨基酸對(duì)結(jié)合功能或所得分子的屬性不會(huì)產(chǎn)生大影響。氨基酸改變是否產(chǎn)生功能肽能易于通過(guò)測(cè)定所述多肽衍生物的特異活性來(lái)測(cè)定。本文詳細(xì)描述試驗(yàn)?？贵w或免疫球蛋白分子的片段或類(lèi)似物能易于通過(guò)本領(lǐng)域普通技術(shù)制備。優(yōu)選片段或類(lèi)似物的氨基和羧基末端出現(xiàn)在功能結(jié)構(gòu)域的邊界附近。通過(guò)比較核苷酸和/或氨基酸序列數(shù)據(jù)與公共或?qū)Ｓ械男蛄袛?shù)據(jù)庫(kù)能鑒定結(jié)構(gòu)和功能結(jié)構(gòu)域。優(yōu)選計(jì)算機(jī)比較方法用于鑒定在已知結(jié)構(gòu)和/或功能的其他蛋白上出現(xiàn)的序列基序或預(yù)測(cè)蛋白構(gòu)型結(jié)構(gòu)域。已知鑒定折疊成已知三維結(jié)構(gòu)的蛋白序列的方法。Bowie等，Science253:164(1991)。因此，上述實(shí)施例顯示了本領(lǐng)域技術(shù)人員能識(shí)別可用于定義與本文所述抗體一致的結(jié)構(gòu)和功能結(jié)構(gòu)域的序列基序和結(jié)構(gòu)構(gòu)型。當(dāng)過(guò)量抗體使配體結(jié)合受體量減少至少50%、60%或80%或大于`約85% (如體外競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合試驗(yàn)所測(cè)量)時(shí)，抗體通常抑制配體和受體的結(jié)合。本文使用的術(shù)語(yǔ)"單克隆抗體"指特異結(jié)合相同表位的基本均勻抗體群中的抗體。在此易指出本文使用“和/或”時(shí)應(yīng)視作具體公開(kāi)了兩種特征或組分的每一種，有或沒(méi)有另一種。例如，“A和/或B”應(yīng)視作具體公開(kāi)了(i)A、(ii)B及(iii)A和B中每一種，就如同各自在本文中單獨(dú)列出一樣。本文使用的術(shù)語(yǔ)"特異結(jié)合"指特異結(jié)合到抗原的抗體(包括抗體片段)。優(yōu)選特異結(jié)合抗原的抗體(包括抗體片段)不與其他無(wú)關(guān)抗原發(fā)生明顯的交叉反應(yīng)。然而，應(yīng)理解特異結(jié)合來(lái)自給定物種特定蛋白的抗體也可以特異結(jié)合來(lái)自一種或多種其他物種蛋白的直向同源物。由于特異結(jié)合抗原，這種交叉物種結(jié)合不改變抗體特性。在某些實(shí)施方式中，利用實(shí)驗(yàn)技術(shù)如放射免疫試驗(yàn)(RIA)和酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)測(cè)定，抗體與某抗原結(jié)合的親和性大幅高于任何交叉反應(yīng)抗原例如親和性高100-1000倍時(shí)，所述抗體特異性結(jié)合于該抗原。參見(jiàn)例如，Paul編，1989,基礎(chǔ)免疫學(xué)(《Fundamental Immunology))),第2版,紐約拉文出版社(Raven Press,New York),第332-336頁(yè)有關(guān)抗體特異性的討論。本文所用的術(shù)語(yǔ)“聯(lián)合”指使用一種以上治療(如一種以上藥劑；一種或多種藥劑以及一種或多種其他治療/治療方式)。使用術(shù)語(yǔ)“聯(lián)合”不限制向?qū)ο蠼o予治療(如藥劑和/或其他治療方式)的順序。在給予對(duì)象第二治療(如第二種藥劑和/或其他治療方式)之前(如5分鐘、15分鐘、30分鐘、45分鐘、I小時(shí)、2小時(shí)、4小時(shí)、6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)、96小時(shí)、I周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周前)、同時(shí)或之后(如5分鐘、15分鐘、30分鐘、45分鐘、I小時(shí)、2小時(shí)、4小時(shí)、6小時(shí)、12小時(shí)、24小時(shí)、48小時(shí)、72小時(shí)、96小時(shí)、I周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周后)給予第一治療(如第一種藥劑和/或其他治療方式)。例如〃其他治療方式(modality)"包括但不限于手術(shù)、放射治療、透析、干細(xì)胞移植、輔助呼吸(ventilatory support)、飲食、物理治療等。本文所用的術(shù)語(yǔ)“賦形劑”指在制劑中用作稀釋劑、載劑、防腐劑、粘合劑或穩(wěn)定劑的惰性物質(zhì)，所述的惰性物質(zhì)賦予制劑有益物理特性，如增加蛋白質(zhì)穩(wěn)定性、提高蛋白質(zhì)溶解度和降低粘度。賦形劑的例子包括但不限于:蛋白質(zhì)(如血清白蛋白)、氨基酸(如天冬氨酸、谷氨酸、賴(lài)氨酸、精氨酸、甘氨酸和組氨酸)、表面活性劑(如SDS、聚山梨酯和非離子型表面活性劑)、糖(如葡萄糖、蔗糖、麥芽糖和海藻糖)、多元醇(如甘露糖醇和山梨醇)、脂肪酸和磷脂(如燒基磺酸鹽(alkyl sulfonate)和辛酸酯(caprylate))。其它有關(guān)賦形劑的信息參見(jiàn)Remington’ s Pharmaceutical Sciences (《雷明頓藥物科學(xué)》)(JosephP.Remington,第18版(增刊)，賓夕法尼亞州伊斯頓的馬克出版公司(Mack PublishingC0.，Easton, PA))，其通過(guò)引用全文納入本文。本文所用的術(shù)語(yǔ)“多元醇”指與正常糖相比含有許多一OH基團(tuán)的糖?！赡孀泽w締合趨勢(shì)〃、〃可逆自體締合特性〃、〃RSA〃或〃可逆自體締合〃可互換使用，并且涉及蛋白或抗體分子與另一分子或蛋白或抗體分子組短暫自體締合(即分子間相互作用)的特性。RSA通常是濃度依賴(lài)性并且隨著蛋白濃度而增加。本文所述RSA也能是溫度依賴(lài)性，并且可以在低溫觀察到，而溫度升高時(shí)利于分解?！蓽y(cè)量的RSA"或〃可測(cè)量的RSA趨勢(shì)〃互換使用，指能使用例如HPSEC或AUC檢出RSA。通過(guò)HPSEC可測(cè)量的RSA還能通過(guò)其他正交方法測(cè)量。〃防止〃或〃消除〃指用本文所述方法(如HPSEC)檢測(cè)時(shí)，不能檢出或不能測(cè)量RSA。另外，當(dāng)與沒(méi)有RSA的制劑(如沒(méi)有顯示RSA的對(duì)照樣品)比較，RSA基本相同時(shí)，也可以應(yīng)用該術(shù)語(yǔ)。〃高分子量形式〃或〃更高級(jí)形式〃指單體以外的(如二聚體、三聚體、四聚體、五聚體等)的給定制劑中處于短暫或永久狀態(tài)(如可逆或非可逆更高級(jí)形式)的任一蛋白種
類(lèi)。 〃非RSA〃指沒(méi)有RSA，或者用本文所述方法(如HPSEC)檢測(cè)時(shí)，不能檢出或不能測(cè)量RSA?！ǚ亲泽w締合單體〃指制劑中作為單體(Y形抗體分子)，而不是例如作為二聚體(兩個(gè)Y形抗體分子)、三聚體(三個(gè)Y形分子)、片段等出現(xiàn)的抗體或功能片段。〃穩(wěn)定的〃和〃穩(wěn)定性〃指在一段時(shí)間內(nèi)維持起始水平的制劑純度。換言之，如果在時(shí)間O的給定抗體種類(lèi)方面，制劑是99%純度，穩(wěn)定性是所述制劑基本保留此純度水平的良好程度和時(shí)間長(zhǎng)度(如沒(méi)有形成其他種類(lèi)，如純物質(zhì)的片段化部分或聚集物)。在約2-8° C存儲(chǔ)給定時(shí)間段時(shí)，如果純度水平?jīng)]有大幅下降，制劑是穩(wěn)定的。優(yōu)選穩(wěn)定制劑是在存儲(chǔ)條件超過(guò)至少2年時(shí)間段，穩(wěn)定性沒(méi)有大幅下降的制劑。類(lèi)似地，在約2-8° C存儲(chǔ)給定時(shí)間段時(shí)，通過(guò)如HPSEC測(cè)定的制劑純度水平來(lái)測(cè)量穩(wěn)定性?！ɑ?substantially)沒(méi)有下降"指制劑純度水平在給定時(shí)間段內(nèi)改變每年小于1%、每年小于0.75%、每年小于0.5%或每年小于0.4%。類(lèi)似地，穩(wěn)定性能在其他溫度評(píng)價(jià)。(iii)抗體本公開(kāi)提供了降低制劑中抗體和抗體片段的RSA趨勢(shì)的方法。此外，本公開(kāi)提供的具體制劑包含特異結(jié)合roGFR-α和抑制表達(dá)roGFR-a的細(xì)胞生長(zhǎng)的抗TOGFR-a抗體和抗體片段。例如，可在治療和診斷上應(yīng)用這種制劑。在某些實(shí)施方式中，本公開(kāi)制劑降低了 RSA趨勢(shì)。在討論降低RSA的特定制劑和/或更常用方法前，提供了抗體的簡(jiǎn)單描述。除非另有說(shuō)明，抗體或抗體片段的一般討論應(yīng)用于任何抗體或抗體片段，例如可以通過(guò)增加制劑中蔗糖來(lái)降低抗體或抗體片段的RSA?？赏ㄟ^(guò)本領(lǐng)域已知的任何合成抗體方法，具體是通過(guò)化學(xué)合成或通過(guò)重組表達(dá)技術(shù)生產(chǎn)特異性結(jié)合抗原如TOGFR-a的抗體(包括抗體片段)?？贵w結(jié) 構(gòu)基本天然抗體的結(jié)構(gòu)單位已知包含四聚體。各四聚體由兩對(duì)相同的多肽鏈構(gòu)成，各對(duì)有一條“輕鏈”(約25kDa)和一條“重鏈”(約50-70kDa)。各鏈的氨基末端部分包含約100-110或更多氨基酸的可變區(qū)，主要負(fù)責(zé)抗原識(shí)別。各鏈的羧基末端部分定義主要負(fù)責(zé)效應(yīng)物功能的恒定區(qū)。人輕鏈分類(lèi)為K和λ輕鏈。重鏈分類(lèi)為μ、δ、Y、α、或ε，分別定義抗體同種型IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。通常參見(jiàn)Fundamental Immunology (《基礎(chǔ)免疫學(xué)》)第7章(Paul, W.編，第2版，紐約拉文出版社(Raven Press, New York) (1989))(通過(guò)引用全文納入本文以用于所有目的)。每個(gè)輕/重鏈對(duì)的可變區(qū)形成抗體結(jié)合位點(diǎn)。全長(zhǎng)抗體情況下，單體IgG抗體分子的基本單位經(jīng)常描述為Y。因此，完整天然抗體有兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)。兩個(gè)結(jié)合位點(diǎn)不相同的抗體示例包含雙功能或雙特異性抗體。天然抗體鏈都顯示了由三個(gè)高變區(qū)連接的相對(duì)保守框架區(qū)(FR)的相同通用結(jié)構(gòu)，也稱(chēng)為互補(bǔ)決定區(qū)或CDR。來(lái)自各對(duì)的兩條鏈的CDR通過(guò)框架區(qū)比對(duì)，能結(jié)合特定表位。從N末端到C末端，輕和重鏈都包含所述結(jié)構(gòu)域FRl、⑶Rl、FR2、⑶R2、FR3、⑶R3和FR4。每個(gè)結(jié)構(gòu)域氨基酸的比對(duì)與 Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest(《免疫學(xué)感興趣蛋白的序列》)(馬里蘭州貝塞斯達(dá)的國(guó)立衛(wèi)生研究院(National Institutesof Health) (1987和 1991))或Chothia和 Lesk J.Mol.Biol.196:901-917(1987);Chothia等，Nature342:878-883 (1989)的定義一致。在某些情況下，使用抗體片段有優(yōu)勢(shì)。例如，不希望受理論限制，抗體片段的使用可以引起實(shí)體瘤可及性改善和/或可允許快速清除。已開(kāi)發(fā)了產(chǎn)生抗體片段的各種技術(shù)。傳統(tǒng)上，這些片段通過(guò)蛋白酶水解消化完整抗體來(lái)獲得(參見(jiàn)例如，Morimoto 等，J Biochem Biophys.Method.24:107-117 (1992)和Brennan等，Science, 229:81 (1985))。然而,現(xiàn)在這些片段可以通過(guò)重組宿主細(xì)胞直接產(chǎn)生。Fab、Fv和scFv抗體片段能在細(xì)胞如大腸桿菌(E.coli)內(nèi)表達(dá)或從其分泌，因此能容易生成大量的這些片段?？贵w片段能從例如抗體噬菌體文庫(kù)分離。或者，F(xiàn)ab’-SH片段可由大腸桿菌直接回收，并經(jīng)化學(xué)偶聯(lián)形成F(ab’ )2片段(Carter等，Bio/Technology,10:163-167 (1992))。按照另一種方法，F(xiàn) (ab’) 2片段可由重組宿主細(xì)胞培養(yǎng)物直接分離。體內(nèi)半衰期增加的Fab和F (ab’)2描述于美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5，869，046。在其它實(shí)施方式中，所選抗體是單鏈Fv片段(scFv)。見(jiàn)W093/16185;美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5，571，894和美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5，587,458。抗體片段還可以是如美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5，641，870所述的“線形抗體”。這種線形抗體片段可以是單特異性或雙特異性。盡管VH或VL結(jié)構(gòu)域可單獨(dú)用于結(jié)合抗原，VH結(jié)構(gòu)域與VL結(jié)構(gòu)域配對(duì)以提供抗體抗原-結(jié)合位點(diǎn)。VH結(jié)構(gòu)域可與VL結(jié)構(gòu)域配對(duì)，從而形成同時(shí)包含VH和VL結(jié)構(gòu)域的抗體抗原-結(jié)合位點(diǎn)。人抗體和抗體人源化在某些實(shí)施方式中，所述要求權(quán)利的方法和制劑中使用的抗體和抗體片段是人或人源化的。在其他實(shí)施方式中，抗體或抗體片段是鼠的。人抗體避免了與具鼠或大鼠可變和/或恒定區(qū)的抗體有關(guān)的一些問(wèn)題。這種鼠或大鼠衍生蛋白的出現(xiàn)能造成所述抗體的快速清除或能引起患者產(chǎn)生針對(duì)抗體的免疫反應(yīng)。為了避免使用鼠或大鼠衍生抗體，全人抗體能通過(guò)將功能性人抗體基因座引入到嚙齒動(dòng)物、其他哺乳動(dòng)物或動(dòng)物來(lái)產(chǎn)生，從而所述嚙齒動(dòng)物、其他哺乳動(dòng)物或動(dòng)物生成全人抗體。生成全人抗體的一種方法是通過(guò)使用X en() M () us e W小鼠系，所述小鼠系已經(jīng)工程改造成包含多至但是少于IOOOkb大小生殖系配置的人重鏈基因座和K輕鏈基因座片段。見(jiàn) Mendez 等，Nature Genetics 15:146-156 (1997)以及 Green 和 Jakobovits J.Exp.Med.188:483-495 (1998)。所述XenoMouse 品系可得自安進(jìn)公司(Amgen, Inc.)(美國(guó)加利福尼亞州弗里蒙特)。然后這種小鼠能生成人免疫`球蛋白分子和抗體，并且在生成鼠免疫球蛋白分子和抗體上有缺陷。用于實(shí)現(xiàn)相同目標(biāo)的技術(shù)公開(kāi)于1996年12月3日提交的美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)序列號(hào)08/759，620，和1998年6月11日發(fā)表的國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)朩098/24893，和2000年12月21日發(fā)表的W000/76310，其公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)引用納入本文。也參見(jiàn)Mendez等，NatureGeneticsl5:146-156(1997)，其公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)引用納入本文。所述XenoMouse 小鼠系的生成還討論和描繪在1990年I月12日提交的美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)序列號(hào)07/466，008，1990年11月8日提交的07/610，515，1992年7月24日提交的07/919，297，1992 年 7 月 30 日提交的 07/922，649，1993 年 3 月 15 日提交的 08/031，801，1993年8月27日提交的08/112,848,1994年4月28日提交的08/234，145，1995年I月20日提交的08/376，279，1995年4月27日提交的08/430，938，1995年6月5日提交的08/464，584，1995 年 6 月 5 日提交的 08/464，582，1995 年 6 月 5 日提交的 08/463，191，1995年6月5日提交的08/462，837，1995年6月5日提交的08/486，853，1995年6月5日提交的 08/486，857，1995 年 6 月 5 日提交的 08/486，859，1995 年 6 月 5 日提交的 08/462，513，1996 年 10 月 2 日提交的 08/724,752,1996 年 12 月 3 日提交的 08/759，620，2001 年 11月30日提交的美國(guó)公開(kāi)2003/0093820和美國(guó)專(zhuān)利號(hào)6，162,963,6, 150, 584,6, 114,598、6，075，181 和 5，939，598 以及日本專(zhuān)利號(hào) 3 068 180 B2、3 068 506 B2 和 3 068 507 B2。也參見(jiàn)1996年6月12日授予發(fā)表的歐洲專(zhuān)利號(hào)EP O 463 151 BI，1994年2月3日發(fā)表的國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)朩094/02602，1996年10月31日發(fā)表的國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)朩096/34096，1998年6月11日發(fā)表的W098/24893，2000年12月21日發(fā)表的W000/76310。上述專(zhuān)利、申請(qǐng)和參考文獻(xiàn)的公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)引用整體納入本文。在替代方法中，包含杰法姆國(guó)際公司(GenPharm International, Inc.)在內(nèi)的其他方法使用〃微基因座(minilocus) 〃方案。在所述微基因座方案中，外源Ig基因座通過(guò)包含來(lái)自Ig基因座的片段(個(gè)體基因)來(lái)模擬。因此一種或多種VH基因，一種或多種DH基因，一種或多種JH基因，μ恒定區(qū)和通常第二恒定區(qū)(優(yōu)選Y恒定區(qū))形成構(gòu)建體以插入到動(dòng)物中。這個(gè)方案描述于Surani等的美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5，545，807，和各為L(zhǎng)onberg 和 Kay 的美國(guó)專(zhuān)利號(hào) 5，545，806、5，625，825、5，625，126、5，633，425、5，661，016、5，770，429、5，789，650、5，814，318、5，877，397、5，874，299 和 6,255,458, Krimpenfort 和Berns 的美國(guó)專(zhuān)利號(hào) 591，669 和 6，023.010，Berns 等的美國(guó)專(zhuān)利號(hào) 5，612，205,5, 721，367和5，789，215，和Choi和Dunn的美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5，643，763，和杰琺姆國(guó)際公司(GenPharmInternational) 1990年8月29日提交的美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)序列號(hào)07/574，748，1990年8月31日提交的07/575，962，1991年12月17日提交的07/810，279，1992年3月18日提交的07/853，408，1992 年 6 月 23 日提交的 07/904，068，1992 年 12 月 16 日提交的 07/990，860，1993年4月26日提交的08/053，131，1993年7月22日提交的08/096，762，1993年11月18日提交的08/155，301，1993年12月3日提交的08/161，739，1993年12月10日提交的08/165，699，1994年3月9日提交的08/209，741，其公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)引用納入本文。也參見(jiàn)歐洲專(zhuān)利號(hào)O 546 073 BI，國(guó)際專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?2/03918、W092/22645、W092/22647、W092/22670、W093/12227、W094/00569、W094/25585、W096/14436、W097/13852 和 W098/24884 以及美國(guó)專(zhuān)利號(hào)5，981，175，其公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)引用全文納入本文。還參見(jiàn)Taylor等，1992，Chen等，1993, Tuaillon 等，1993, Cho 等，1993, Lonberg 等，(1994), Taylor 等，(1994)，和 Tuaillon等，(1995)，F(xiàn)ishwild等，(1996),其公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)引用全文納入本文。Kirin也顯示了從小鼠生成人抗體,其中通過(guò)微細(xì)胞(microcell)融合引入大片段染色體或整個(gè)染色體。參見(jiàn)歐洲專(zhuān)利申請(qǐng)?zhí)?73 288和843 961，其公開(kāi)內(nèi)容通過(guò)引用納入本文。此外，生成了 Kirin Tc小鼠與Medarex微基因座(Humab)小鼠雜交結(jié)果的KMTM小鼠。這些小鼠有Kirin小鼠的人IgH轉(zhuǎn)染色體(transchromosome)和Genpharm小鼠的K 鏈轉(zhuǎn)基因(Ishida 等，Cloning Stem Cells, (2002)4:91-102)。人抗體也能由體外方法獲得。合適的示例包括但不限于曬菌體展示(CAT、Morphosys> Dyax> Biosite/Medarex、Xoma> Symphogen> Alexion(以前的 Proliferon)、Affimed)核糖體展示(CAT)、酵母展示等。注意到上述技術(shù)僅僅是生成人抗體的方法示例。另外，鼠抗體能使用例如標(biāo)準(zhǔn)雜交瘤技術(shù)生成。不考慮特定抗體如何初始制成，一旦鑒定了所述抗體的氨基酸序列，該抗體能易于重組生成。例如，鼠、人源化、人等抗體和抗體片段能在細(xì)胞內(nèi)表達(dá)和從所述培養(yǎng)細(xì)胞中純化。能用于重組表達(dá)的抗體和抗體片段的示例性細(xì)胞包括但不限于CHO細(xì)胞、COS細(xì)胞、酵母細(xì)胞和細(xì)菌細(xì)胞。這在下面更詳細(xì)描述。表1提供了在要求權(quán)利的組合物和方法情況下使用的示例性I3DGFRa抗體的序列。然而，在其他實(shí)施方式中，本公開(kāi)制劑和/或方法使用其他I3DGFRa抗體，例如結(jié)合的表位與有表I所不任一序列的抗體相同的抗體，或者與有表I所不任一序列的抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合抗原的抗體。易在體外測(cè)定抗體之間的競(jìng)爭(zhēng)，例如采用ELISA和/或用特定的報(bào)道分子對(duì)一種結(jié)合成員作標(biāo)記(可在一種或多種其它未標(biāo)記的抗體存在下檢出)，從而能鑒定結(jié)合相同表位或重疊表位的抗體。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員不難知曉這些方法，本文更詳細(xì)描述了這些方法。因此，本公開(kāi)其他方面提供了包含人抗體抗原結(jié)合位點(diǎn)的抗原結(jié)合位點(diǎn)，所述人抗體抗原結(jié)合位點(diǎn)與抗體分子競(jìng)爭(zhēng)，例如特別是包含VH和/或VL結(jié)構(gòu)域的抗體分子，母體抗體或任何結(jié)合I3DGFR- a的本文所公開(kāi)抗體的⑶R如HCDR3或⑶R組。在某些實(shí)施方式中，抗體或抗體片段可以用另一部分作標(biāo)簽、標(biāo)記或融合。例如抗體或抗體片段可以用熒光、金屬或放射性部分標(biāo)記以幫助例如診斷或成像情況下的檢出。通過(guò)其他示例，抗體或抗體片段可以PEG化以提高體內(nèi)藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)。通過(guò)其他示例，抗體或抗體片段可以添加全部或部分HAS以提高血清半衰期。通過(guò)其他示例，抗體或抗體片段可以包含myc或HA標(biāo)簽以輔助純化和/或檢出。上述僅僅是示例。抗體的制備通常，抗體通過(guò)本領(lǐng)域已知方法生成，例如雜交瘤技術(shù)(小鼠或人)、噬菌體展示等。一旦鑒定了所需抗體(例如有所需功能特性的抗體)，能使用雜交瘤和/或通過(guò)在培養(yǎng)細(xì)胞中重組表達(dá)編碼抗體的核苷酸序列來(lái)完成持續(xù)制備。應(yīng)該理解本公開(kāi)情況下制成的抗體或抗體片段如抗TOGFR- a抗體能在雜交瘤細(xì)胞系以外的細(xì)胞系中表達(dá)。編碼特定抗體的序列能用于轉(zhuǎn)化合適的哺乳動(dòng)物細(xì)宿主胞或非哺乳動(dòng)物宿主細(xì)胞。轉(zhuǎn)化可以是將多核苷酸引入宿主細(xì)胞的任何已知方法，包含例如把多核苷酸封裝入病毒(或病毒載體)和用所述病毒(或載體)轉(zhuǎn)導(dǎo)宿主細(xì)胞或通過(guò)本領(lǐng)域已知的轉(zhuǎn)染技術(shù)，如美國(guó)專(zhuān)利號(hào)4，399，216,4, 912，040,4, 740，461和4，959，455 (所述專(zhuān)利通過(guò)引用納入本文)所示例的。所使用的`轉(zhuǎn)化方法依賴(lài)于要轉(zhuǎn)化的宿主。引入異源多核苷酸進(jìn)入哺乳動(dòng)物細(xì)胞的方法為本領(lǐng)域熟知，并且包含右旋糖苷介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、磷酸鈣沉淀、聚凝胺(polybrene)介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、原生質(zhì)體融合、電穿孔、多核苷酸封裝入脂質(zhì)體,和直接微注射DNA到細(xì)胞核?？捎米鞅磉_(dá)宿主的哺乳動(dòng)物細(xì)胞系為本領(lǐng)域已知，并且包含很多獲自美國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心(American Type Culture Collection) (ATCC)的永生化細(xì)胞系，包括但不限于中華倉(cāng)鼠卵巢(CHO)細(xì)胞、HeLa細(xì)胞、幼倉(cāng)鼠腎(BHK)細(xì)胞、猴腎細(xì)胞(COS)、人肝細(xì)胞癌細(xì)胞(如H印G2)、人上皮腎293細(xì)胞和很多其他細(xì)胞系。一旦生成抗體或抗體片段，其能如本文所述配制和/或其能用于本文所述方法。例如，抗roGFR-α抗體用于檢出患者樣品中的TOGFR-α并且因此用作疾病狀態(tài)例如本文所述腫瘤病癥的診斷。在某些實(shí)施方式中，以幫助最小化RSA趨勢(shì)的方式制備所述抗體，并且這種抗體用于診斷方法。在某些實(shí)施方式中，當(dāng)通過(guò)HPSEC在約2-8° C和給定相關(guān)濃度如約10mg/ml評(píng)價(jià)時(shí)，用于診斷方法的制劑沒(méi)有可檢測(cè)的RSA趨勢(shì)。通過(guò)其他示例，基于其抑制腫瘤生長(zhǎng)的能力，抗roGFR-a抗體在治療由于PDGFR- a表達(dá)造成的癥狀和病癥中有治療效果。一旦生成抗體或抗體片段，其能如本文所述配制和/或其能用于本文所述方法。在特定實(shí)施方式中，本文所述抗體和方法涉及腫瘤病癥的治療,如由于roGFR-α誘導(dǎo)腫瘤生長(zhǎng)造成的腫瘤病癥。其他實(shí)施方式涉及使用本文所述抗體和方法以治療腫瘤疾病，如癌癥，包含肺癌、卵巢癌、前列腺癌、結(jié)腸癌、多形性成膠質(zhì)細(xì)胞瘤、黑素瘤和胃腸道間質(zhì)瘤(GIST)、腎細(xì)胞癌、肝細(xì)胞癌等。在某些實(shí)施方式中，以幫助最小化RSA趨勢(shì)的方式制備所述抗體。例如這種制劑可以用于治療或診斷方法。在某些實(shí)施方式中，當(dāng)用HPSEC在約2-8° C和大于4mg/ml濃度(如至少10mg/ml、至少20mg/ml、或至少50mg/ml或至少100mg/ml)評(píng)價(jià)時(shí)，用于治療方法的制劑沒(méi)有可測(cè)量的RSA趨勢(shì)。PDGFR-α 抗體在某些實(shí)施方式中，抗roGFR-α抗體特異性結(jié)合TOGFR-a并且抑制表達(dá)PDGFR- a的細(xì)胞的生長(zhǎng)。在某些實(shí)施方式中，所述抗體是例如結(jié)合roGFR-a并且防止配體與roGFR-a結(jié)合的中和抗體。在某些實(shí)施方式中，所述抗體是全長(zhǎng)抗體，例如全長(zhǎng)IgG抗體。在某些實(shí)施方式中，所述抗體是IgG2或IgG4抗體。在其他實(shí)施方式中，所述抗體是IgGl抗體。在其他實(shí)施方式中，所述抗體是特異結(jié)合I3DGFR-a和抑制表達(dá)TOGFR-a的細(xì)胞生長(zhǎng)的抗體片段。在某些實(shí)施方式中，任何這些抗體和抗體片段是人抗體。示例性抗體特異結(jié)合roGFR-a并且抑制表達(dá)TOGFR-a的細(xì)胞生長(zhǎng)。這種抗體能根據(jù)所述功能和/或序列鑒定。這種抗體還能基于一種或多種其他功能特性鑒定，例如KD(如抗原親和性)。通過(guò)其他示例，這種抗體能根據(jù)與來(lái)自非人物種的roGFR-a交叉反應(yīng)來(lái)鑒定。因此，在某些實(shí)施方式中，示例性抗體或抗體片段特異結(jié)合人TOGFR-a并且還特異結(jié)合來(lái)自一種或多種其他物種如小鼠、大鼠或獼猴的TOGFR- a。在某些實(shí)施方式中，特異結(jié)合TOGFR-a并且抑制表達(dá)TOGFR-α的細(xì)胞生長(zhǎng)的抗體或抗體片段是高親和性抗體，例如KD為約10_6 -約10_12M或更好(如更低KD指示更高親和性抗體)的抗體。在其他實(shí)施方式中，這種抗體的KD小于約500、400、300、200或100皮摩(pM)并且抑制表達(dá)I3DGFR-a的細(xì)胞生長(zhǎng)。在某些實(shí)施方式中，這種抗體抑制腫瘤生長(zhǎng)。在一些實(shí)施方式中，所述抗體結(jié)合PDGFR-a的KD小于約75、60、50、40、30、25、20、10或5pM并且抑制表達(dá)PDGFR-a的細(xì)胞生長(zhǎng)。在某些實(shí)施方式中，這種抗體抑制腫瘤生長(zhǎng)。測(cè)量親和性能通過(guò)固相或溶液相技術(shù)如針對(duì)細(xì)胞使用基于FACS親和性測(cè)量技術(shù)。親和性也能通過(guò)使用表面等離子體共振試驗(yàn)通過(guò)BIAC0RE -2000或BIAC0RE -3000(新澤西州皮斯卡特維的BIAcore公司)測(cè)量。例如，使用25° C下在 10反應(yīng)單位(RU)有固定抗原CM5芯片的表面等離子體共振試驗(yàn)。簡(jiǎn)單說(shuō)，羧甲基化葡聚糖生物傳感器芯片(CM5，BIAcore公司)用N-乙基-N' _(3-二甲基氨基丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)根據(jù)供應(yīng)商說(shuō)明書(shū)激活。在以5ul/分鐘流速注射前，抗原用IlOmM乙酸鈉，ρΗ4.8稀釋到5ug/ml ( 0.2uM)以實(shí)現(xiàn)約10反應(yīng)單位(RU)的偶聯(lián)蛋白。抗原注射后，注射IM乙醇胺以阻隔未反應(yīng)組。對(duì)動(dòng)態(tài)測(cè)量而言，把兩倍系列稀釋的Fab (0.78nM-500nM)以約25ul/分鐘流速于25。C注射到有0.05%吐溫20的PBS (PBST)中。不考慮特定實(shí)驗(yàn)參數(shù)，表面等離子體共振試驗(yàn)?zāi)苡糜跍y(cè)量KD、Ka、以及kgg和kWiS。結(jié)合速率(k結(jié)合)和解離速率(k解離)使用簡(jiǎn)單一對(duì)一(one-to-one)朗格繆爾結(jié)合模型(BIAC0RE 評(píng)價(jià)軟件3.2版)通過(guò)同時(shí)擬合所述結(jié)合和解離傳感圖(sensorgram)計(jì)算。美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)11/833，473 (本文也稱(chēng)作〃’ 473應(yīng)用〃)提供了特異結(jié)合I3DGFR-α并且抑制表達(dá)roGFR-α的細(xì)胞生長(zhǎng)的示例性抗體和抗體片段，所述申請(qǐng)通過(guò)引用全文納入本文。簡(jiǎn)單說(shuō)，所述’473申請(qǐng)?zhí)峁┝硕喾N抗體，如該申請(qǐng)所述的特異結(jié)合roGFR-α的特異性人抗體。在某些實(shí)施方式中，本公開(kāi)考慮了特異結(jié)合I3DGFR-a并且抑制表達(dá)H)GFR-a的細(xì)胞生長(zhǎng)的任何這種抗TOGFR- a抗體或抗體片段能如此申請(qǐng)所述配制和/或能用于此申請(qǐng)所述的方法和試劑盒。本公開(kāi)的實(shí)施方式包含表I提供序列信息的特異抗roGFR-a抗體或抗體片段。表I提供了特定人TOGFR-a抗體的重和輕鏈可變區(qū)的序列信息以及各個(gè)CDR (可變區(qū)序列亞組)的序列信息。簡(jiǎn)單說(shuō)，描述于美國(guó)申請(qǐng)序列號(hào)11/833,473的抗TOGFR-a抗體通過(guò)使用所述申請(qǐng)描述的XenoMouse 技術(shù)制備，所述申請(qǐng)通過(guò)引用全文納入本文。簡(jiǎn)單說(shuō)，XenoMouse 小鼠系用感興趣抗原(如I3DGFR-a)免疫，從高免疫小鼠中回收淋巴細(xì)胞(如B細(xì)胞)，和所回收的淋巴細(xì)胞融合骨髓型細(xì)胞系以制備永生雜交瘤細(xì)胞系。這些雜交瘤細(xì)胞系經(jīng)篩選和選擇以鑒定生成感興趣抗原特異抗體的雜交瘤細(xì)胞系。用于實(shí)施例所述制劑的特定抗體是最初用這種方法生成的人、IgG2抗體，并且描述于申請(qǐng)序列號(hào)11/833，473。表I提供了實(shí)施例所述制劑使用的抗體的重和輕鏈可變區(qū)的序列信息以及各個(gè)CDR(可變區(qū)序列亞組)的序列信息。關(guān)于特異結(jié)合TOGFR-a的其他人抗體的其他信息能見(jiàn)于美國(guó)序列號(hào)11/833，473，所述專(zhuān)利通過(guò)引用全文納入本文。表1.抗I3DGFR-a抗體的序列
權(quán)利要求
1.一種制劑，所述制劑包含: a)水性運(yùn)載體； b)lmg/ml-100mg/ml特異結(jié)合H)GFR-a并且抑制表達(dá)TOGFR-a的細(xì)胞生長(zhǎng)的抗體或抗體片段； c)4%-20% (重量/體積)鹿糖； d)0.01%-0.1%(重量/體積)聚山梨酯80 (PS80);和 e)乙酸鈉緩沖液， 其中，所述制劑的PH為ρΗ4.0 - ρΗ6.0。
2.一種制劑，所述制劑由下列組成: a)水性運(yùn)載體； b)lmg/ml-100mg/ml特異結(jié)合H)GFR-a并且抑制表達(dá)TOGFR-a的細(xì)胞生長(zhǎng)的抗體或抗體片段； c)4%-20% (重量/體積)鹿糖； d)0.01%-0.1% (重量/體積)聚山梨酯80 (PS80);和 e)乙酸鈉緩沖液， 其中，所述制劑的PH是ρΗ4.0 - ρΗ6.0。`
3.如權(quán)利要求1或2所述的制劑，其特征在于，(b)包含全長(zhǎng)IgG單克隆抗體。
4.如權(quán)利要求1-3中任一項(xiàng)所述的制劑，其特征在于，所述抗體或抗體片段的存在濃度是 20mg/ml-50mg/ml。
5.如權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的制劑，其特征在于，所述抗體或抗體片段的存在濃度是 20mg/ml。
6.如權(quán)利要求1-4中任一項(xiàng)所述的制劑，其特征在于，所述抗體或抗體片段的存在濃度是 50mg/ml。
7.如權(quán)利要求1-6中任一項(xiàng)所述的制劑，其特征在于，所述抗體或抗體片段包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:1的重鏈多肽。
8.如權(quán)利要求1-7中任一項(xiàng)所述的制劑，其特征在于，所述抗體或抗體片段包括含有氨基酸序列SEQ ID NO:2的輕鏈多肽。
9.如權(quán)利要求1-8中任一項(xiàng)所述的制劑，其特征在于，所述抗體或抗體片段與重鏈多肽含SEQ ID NO:1氨基酸序列且輕鏈多肽含SEQ ID NO: 2氨基酸序列的抗體結(jié)合相同的表位。
10.如權(quán)利要求1-9中任一項(xiàng)所述的制劑，其特征在于，所述抗體或抗體片段包含: 有氨基酸序列SEQ ID NO:3的VH CDRl ； 有氨基酸序列SEQ ID NO:4的VH CDR2 ； 有氨基酸序列SEQ ID NO:5的VH CDR3 ； 有氨基酸序列SEQ ID NO:6的VL CDRl ； 有氨基酸序列SEQ ID NO:7的VL CDR2 ;和 有氨基酸序列SEQ ID NO:8的VL CDR3。
11.如權(quán)利要求ι- ο中任一項(xiàng)所述的制劑，其特征在于，所述抗體或抗體片段與包含下列結(jié)構(gòu)域的抗體結(jié)合相同的表位:有氨基酸序列SEQ ID NO:3的VH CDRl ； 有氨基酸序列SEQ ID NO:4的VH CDR2 ； 有氨基酸序列SEQ ID NO:5的VH CDR3 ； 有氨基酸序列SEQ ID NO:6的VL CDRl ； 有氨基酸序列SEQ ID NO:7的VL CDR2 ;和 有氨基酸序列SEQ ID NO:8的VL CDR3。
12.如權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)所述的制劑，其特征在于，所述制劑包含6%(w/v)鹿糖。
13.如權(quán)利要求1-11中任一項(xiàng)所述的制劑，其特征在于，所述制劑包含10%(w/v)鹿糖。
14.如權(quán)利要求1-13中任一項(xiàng)所述的制劑，其特征在于，所述制劑包含0.05%(w/v)PS80。
15.如權(quán)利要求1-14中任一項(xiàng)所述的制劑，其特征在于，所述制劑包含50mM乙酸鈉緩沖液。
16.如權(quán)利要求1-15中任一項(xiàng)所述的制劑，其特征在于，所述制劑的pH是5.5。
17.如權(quán)利要求1-16中任一項(xiàng)所述的制劑，其特征在于，據(jù)分析超速離心(AUC)所測(cè)定，所述制劑中的所述抗體或抗體片段在2-8° C和23-27° C有基本相似的可逆自體締合(RSA)特性。
18.如權(quán)利要求1-17中任一項(xiàng)所述的制劑，其特征在于，所述制劑中所述抗體或抗體片段的RSA不能由高 效大小排阻色譜(HPSEC)和動(dòng)態(tài)光散射(DLS)檢出。
19.如權(quán)利要求1-18中任一項(xiàng)所述的制劑，其特征在于，所述制劑中大于95%的所述抗體或抗體片段是單體形式，并且在10mg/ml時(shí),2-8° C下,HPSEC不能檢出所述抗體或抗體片段的RSA。
20.如權(quán)利要求1-19中任一項(xiàng)所述的制劑，其特征在于，據(jù)動(dòng)態(tài)光散射(DLS)測(cè)定，所述制劑中所述抗體或抗體片段在5° C的流體力學(xué)半徑與25° C的沒(méi)有顯著區(qū)別。
21.如權(quán)利要求1-20中任一項(xiàng)所述的制劑，其特征在于，所述制劑適合靜脈內(nèi)給予。
22.如權(quán)利要求1-21中任一項(xiàng)所述的制劑，其特征在于，所述水性運(yùn)載體是水。
23.如權(quán)利要求1-22中任一項(xiàng)所述的制劑，其特征在于，所述制劑是無(wú)熱原的。
24.如權(quán)利要求1-23中任一項(xiàng)所述的制劑，其特征在于，所述制劑還包含防腐劑以延長(zhǎng)保存期限。
25.如權(quán)利要求1-24中任一項(xiàng)所述的制劑，其特征在于，據(jù)高效大小排阻色譜(HPSEC)測(cè)定，所述制劑在2-8° C穩(wěn)定至少2年。
26.如權(quán)利要求25所述的制劑，其特征在于，據(jù)高效大小排阻色譜(HPSEC)測(cè)定，所述制劑的純度在至少兩年內(nèi)每年下降小于0.5%。
27.如權(quán)利要求1-26中任一項(xiàng)所述的制劑，其特征在于，所述制劑基本沒(méi)有組氨酸。
28.如權(quán)利要求1-27中任一項(xiàng)所述的制劑，其特征在于，所述制劑基本沒(méi)有任何其他表面活性劑。
29.如權(quán)利要求1-28中任一項(xiàng)所述的制劑，其特征在于，所述制劑基本沒(méi)有任何其他糖或多元醇。
30.如權(quán)利要求1-29中任一項(xiàng)所述的制劑，其特征在于，所述制劑基本沒(méi)有任何其他鹽。
31.如權(quán)利要求1-30中任一項(xiàng)所述的制劑，其特征在于，所述制劑適合凍干。
32.—種制劑，所述制劑基本由下列組成: a)無(wú)菌水； b)20mg/ml特異結(jié)合TOGFR-α并且抑制表達(dá)H)GFR-a的細(xì)胞生長(zhǎng)的抗體或抗體片段； c)10% (重量/體積)蔗糖； d)0.05%(重量/體積)聚山梨酯80 (PS80);和 e)50mM乙酸鈉緩沖液， 其中，所述制劑的pH是pH5.5。
33.一種制劑，所述制劑基本由下列組成: a)無(wú)菌水； b)50mg/ml特異結(jié)合TOGFR-α并且抑制表達(dá)H)GFR-a的細(xì)胞生長(zhǎng)的抗體或抗體片段； c)10% (重量/體積)蔗糖； d)0.05%(重量/體積)聚山梨酯80 (PS80);和 e)50mM乙酸鈉緩沖液， 其中，所述制劑的pH是pH5.5。
34.如權(quán)利要求32或33所述的制劑，其特征在于，所述抗體或抗體片段包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:1的重鏈多肽。
35.如權(quán)利要求32-34中任一項(xiàng)所述的制劑，其特征在于，所述抗體或抗體片段包含含有氨基酸序列SEQ ID NO:2的輕鏈多肽。
36.如權(quán)利要求32-35中任一項(xiàng)所述的制劑，其特征在于，所述抗體或抗體片段與重鏈多肽含SEQ ID NO:1氨基酸序列且輕鏈多肽含SEQ ID NO: 2氨基酸序列的抗體結(jié)合相同的表位。
37.如權(quán)利要求32-36中任一項(xiàng)所述的制劑，其特征在于，所述抗體或抗體片段包含 有氨基酸序列SEQ ID NO:3的VH CDRl ； 有氨基酸序列SEQ ID NO:4的VH CDR2 ； 有氨基酸序列SEQ ID NO:5的VH CDR3 ； 有氨基酸序列SEQ ID NO:6的VL CDRl ； 有氨基酸序列SEQ ID NO:7的VL CDR2 ;和 有氨基酸序列SEQ ID NO:8的VL CDR3。
38.如權(quán)利要求32-37中任一項(xiàng)所述的制劑，其特征在于，所述抗體或抗體片段與包含下列結(jié)構(gòu)域的抗體結(jié)合相同的表位: 有氨基酸序列SEQ ID NO:3的VH CDRl ； 有氨基酸序列SEQ ID NO:4的VH CDR2 ； 有氨基酸序列SEQ ID NO:5的VH CDR3 ； 有氨基酸序列SEQ ID NO:6的VL CDRl ； 有氨基酸序列SEQ ID NO:7的VL CDR2 ;和 有氨基酸序列SEQ ID NO:8的VL CDR3。
39.如權(quán)利要求32-38中任一項(xiàng)所述的制劑，其特征在于，據(jù)AUC測(cè)定，所述制劑中所述抗體或抗體片段在2-8° C的不可逆自體締合(非RSA)特性與23-27° C的基本相似。
40.如權(quán)利要求32-39中任一項(xiàng)所述的制劑，其特征在于，所述制劑中所述抗體或抗體片段的RSA在10mg/ml、2-8° C時(shí)不能由HPSEC檢出。
41.如權(quán)利要求32-40中任一項(xiàng)所述的制劑，其特征在于，所述制劑中大于95%的所述抗體或抗體片段在2-8° C下是單體形式。
42.如權(quán)利要求32-41中任一項(xiàng)所述的制劑，其特征在于，據(jù)動(dòng)態(tài)光散射(DLS)所測(cè)定，所述制劑中所述抗體或抗體片段在5° C的流體力學(xué)半徑與25° C的沒(méi)有顯著區(qū)別。
43.如權(quán)利要求32-42中任一項(xiàng)所述的制劑，其特征在于，所述制劑適合靜脈內(nèi)給藥。
44.如權(quán)利要求32-43中任一項(xiàng)所述的制劑，其特征在于，所述水是無(wú)菌水。
45.如權(quán)利要求32-44中任一項(xiàng)所述的制劑，其特征在于，所述制劑是無(wú)熱原的。
46.如權(quán)利要求32-45中任一項(xiàng)所述的制劑，其特征在于，據(jù)ICHQlA指南的長(zhǎng)期穩(wěn)定性研究測(cè)定，所述制劑在約2-8° C穩(wěn)定至少2年。
47.如權(quán)利要求46所述的制劑，其特征在于，據(jù)高效大小排阻色譜(HPSEC)測(cè)定，所述制劑的純度在至少兩年內(nèi)每年下降小于0.5%。
48.如權(quán)利要求32-47中任一項(xiàng)所述的制劑，其特征在于，所述制劑不適合凍干。
49.一種制劑，所述制劑包含: a)水性運(yùn)載體； b)lmg/ml-100mg/ml抗體或抗體片段； c)4%-20% (重量/體積)鹿糖； d)0.01%-0.1% (重量/體積)聚山梨酯80 (PS80);和 e)乙酸鈉緩沖液， 其中，所述制劑的pH是pH4.0-pH6.0，并且，在約2_8° C測(cè)定的所述制劑中所述抗體或抗體片段的非RSA趨勢(shì)與在約23-27° C測(cè)定的基本相同。
50.一種制劑，所述制劑包含: a)水性運(yùn)載體； b)lmg/ml-100mg/ml抗體或抗體片段； c)4%-20% (重量/體積)鹿糖； d)0.01%-0.1%(重量/體積)聚山梨酯80 (PS80);和 e)乙酸鈉緩沖液， 其中，所述制劑的PH是pH4.0-pH6.0,并且，所述制劑中大于95%的所述抗體或抗體片段在2-8° C是非自體締合的單體形式。
51.一種制劑，所述制劑由下列組成: a)水性運(yùn)載體；b)lmg/ml-100mg/ml抗體或抗體片段； c)4%-20% (重量/體積)鹿糖； d)0.01%-0.1%(重量/體積)聚山梨酯80 (PS80);和 e)乙酸鈉緩沖液， 其中，所述制劑的PH是pH4.0-pH6.0，并且，所述制劑中所述抗體或抗體片段在約2-8° C測(cè)定的非RSA趨勢(shì)與在約23-27° C測(cè)定的基本相同。
52.一種制劑，所述制劑由下列組成: a)水性運(yùn)載體； b)lmg/ml-100mg/ml抗體或抗體片段； c)4%-20% (重量/體積)鹿糖； d)0.01%-0.1%(重量/體積)聚山梨酯80 (PS80);和 e)乙酸鈉緩沖液， 其中，所述制劑的pH是pH4.0-pH6.0，并且其中所述制劑中大于95%的所述抗體或抗體片段在2-8° C是非自體締合的單體形式。
53.一種消除或降低制劑中抗體的可逆自體締合(RSA)的方法，所述方法包含: 提供包含抗體或抗體片段的起始制劑，所述起始制劑中所述抗體或抗體片段的RSA可由HPSEC在i)約2-8° C和/或ii)大于4mg/ml濃度下測(cè)出，并且所述起始制劑中抗體或抗體片段包含高分子量形式； 加入蔗糖到所述起始制劑中以提供有約4%-約20%(重量/體積)蔗糖的改變制劑， 其中，當(dāng)在約2-8° C、在給定濃度比較時(shí)，所述改變制劑中抗體或抗體片段的RSA相對(duì)于所述起始制劑抗體或抗 體片段的RSA消除或降低。
54.如權(quán)利要求53所述的方法，其特征在于，所述方法還包含: 測(cè)定所述改變制劑中所述抗體或抗體片段的流體力學(xué)半徑，并將其與所述起始制劑中所述抗體或抗體片段的流體力學(xué)半徑進(jìn)行比較，其中在約2-8° C以給定抗體濃度比較時(shí)，所述改變制劑中所述抗體或抗體片段的流體力學(xué)半徑相對(duì)于所述起始制劑的流體力學(xué)半徑消除或降低。
55.如權(quán)利要求54所述的方法，其特征在于，所述改變制劑的流體力學(xué)半徑由DLS測(cè)定。
56.如權(quán)利要求53-55中任一項(xiàng)所述的方法,其特征在于,所述方法還包含: 使用HPSEC測(cè)定所述改變制劑中所述抗體或抗體片段的RSA趨勢(shì)并將其與所述起始制劑中所述抗體或抗體片段的RSA趨勢(shì)進(jìn)行比較，在約2-8° C以給定抗體濃度比較時(shí)，所述改變制劑中所述抗體或抗體片段的RSA趨勢(shì)相對(duì)于所述起始制劑消除或降低。
57.如權(quán)利要求53-56中任一項(xiàng)所述的方法,其特征在于,所述方法還包含: 在約2-8° C和約23-27° C測(cè)定所述改變的制劑中所述抗體或抗體片段的RSA趨勢(shì)，并確證所述改變制劑中所述抗體或抗體片段在2-8° C測(cè)定的非RSA趨勢(shì)和23-27° C測(cè)定的基本相似。
58.如權(quán)利要求57所述的方法，其特征在于，通過(guò)AUC分析在約2-8°C和約23-27° C的RSA趨勢(shì)。
59.如權(quán)利要求53-58中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述改變制劑中所述抗體或抗體片段的RSA不能由HPSEC檢出。
60.如權(quán)利要求53-59中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述抗體或抗體片段在所述起始制劑和改變制劑中的存在濃度是約lmg/ml -約100mg/ml。
61.如權(quán)利要求60所述的方法，其特征在于，所述抗體或抗體片段在所述起始制劑和改變制劑中的存在濃度是約20mg/ml。
62.如權(quán)利要求60所述的方法，其特征在于，所述抗體或抗體片段在所述起始制劑和改變制劑中的存在濃度是約50mg/ml。
63.如權(quán)利要求60所述的方法，其特征在于，所述抗體或抗體片段在所述改變制劑中的存在濃度是約20mg/ml。
64.如權(quán)利要求60所述的方法，其特征在于，所述抗體或抗體片段在所述改變制劑中的存在濃度是約50mg/ml。
65.如權(quán)利要求53-64中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述將蔗糖加入所述起始制劑包含加入蔗糖以使改變制劑中蔗糖的終濃度為約10%(w/v)。
66.一種消除或降低制劑中抗體的可逆自體締合(RSA)的方法，所述方法包含 a)提供包含抗體或抗體片段的起始制劑，其中，在10mg/ml的濃度、約2_8°C用HPSEC可檢出所述起始制劑中所述抗體或抗體片段的RSA ； b)使用一種或多種試驗(yàn)測(cè)定所述起始制劑中所述抗體或抗體片段的生物物理屬性； c)將所述起始制劑的蔗糖含量調(diào)節(jié)至終濃度約4%-約20%(w/v)以生成改變的制劑；和 d)使用一種或多種試驗(yàn)測(cè)定所述改變制劑中所述抗體或抗體片段的生物物理屬性； 其中，在約2-8° C、在給定濃度比較時(shí)，所述改變制劑中抗體或抗體片段的RSA相對(duì)于所述起始制劑抗體或抗體片段的RSA消除。
67.如權(quán)利要求66所述的方法，其特征在于，步驟(c)進(jìn)行多于一次。
68.如權(quán)利要求67所述的方法，其特征在于，步驟(c)和(d)進(jìn)行多于一次。
69.如權(quán)利要求66-68中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，步驟(b)和(d)包含評(píng)價(jià)相同的生物物理屬性。
70.如權(quán)利要求69所述的方法，其特征在于，所述生物物理屬性是高效大小排阻色譜(HPSEC)測(cè)定中指示RSA趨勢(shì)的特征色譜峰。
71.如權(quán)利要求70所述的方法，其特征在于，所述特征色譜峰是所述峰有峰肩。
72.如權(quán)利要求66-71中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，在兩個(gè)不同溫度測(cè)評(píng)所述生物物理屬性。
73.如權(quán)利要求66-72中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述生物物理屬性是動(dòng)態(tài)光散射測(cè)定的所述起始制劑和/或所述改變制劑中抗體或抗體片段的流體力學(xué)半徑。
74.如權(quán)利要求66-73中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述生物物理屬性是流體力學(xué)半徑，并且所述方法包含測(cè)定所述改變制劑中所述抗體或抗體片段的流體力學(xué)半徑并將其與所述起始制劑中所述抗體或抗體片段的流體力學(xué)半徑進(jìn)行比較，其中在約2-8° C、給定抗體濃度比較時(shí)，所述改變制劑中所述抗體或抗體片段的流體力學(xué)半徑相對(duì)于所述起始制劑的流體力學(xué)半徑降低。
75.如權(quán)利要求74所述的方法，其特征在于，所述改變制劑的流體力學(xué)半徑由DLS測(cè)定。
76.如權(quán)利要求66-75中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述抗體或抗體片段在所述起始制劑和改變制劑中的存在濃度是約lmg/ml -約100mg/ml。
77.如權(quán)利要求76所述的方法， 其特征在于，所述抗體或抗體片段在所述起始制劑和改變制劑中的存在濃度是約20mg/ml。
78.如權(quán)利要求77所述的方法，其特征在于，所述抗體或抗體片段在所述起始制劑和改變制劑中的存在濃度是約50mg/ml。
79.如權(quán)利要求78所述的方法，其特征在于，所述抗體或抗體片段在所述改變制劑中的存在濃度是約20mg/ml。
80.如權(quán)利要求79所述的方法，其特征在于，所述抗體或抗體片段在所述改變制劑中的存在濃度是約50mg/ml。
81.如權(quán)利要求66-80中任一項(xiàng)所述的方法，其特征在于，所述調(diào)整蔗糖含量包含加入蔗糖以使經(jīng)改變制劑中蔗糖的終濃度為約10%(w/v)。
82.—種包含如權(quán)利要求53-81中任一項(xiàng)所述方法生成的抗體或抗體片段的制劑。
83.一種治療需要治療的患者中腫瘤病癥的方法，所述方法包含給予所述患者有效量的如權(quán)利要求1-52中任一項(xiàng)所述制劑。
84.如權(quán)利要求83所述的方法，其特征在于，所述制劑作為治療方案的一部分與一種或多種其他藥劑或治療方式聯(lián)合施用。
85.如權(quán)利要求83或84所述的方法，其特征在于，所述腫瘤病癥是癌癥。
86.—種生產(chǎn)包含R SA降低的抗體或抗體片段的制劑的方法，所述方法包含: 生成抗體或抗體片段；和 將所述抗體或抗體片段配制為包含下列組分的制劑: 水性運(yùn)載體； lmg/ml-100mg/ml所述抗體或抗體片段；4%-20% (重量/體積)鹿糖；0.01%-0.1%(重量/體積)表面活性劑；和 乙酸鹽緩沖液， 其中，所述制劑的PH是ρΗ4.0 - ρΗ6.0 ； 其中如下選擇用于所述制劑的蔗糖量: 提供包含抗體或抗體片段的起始制劑，其中，在約2-8° C用HPSEC可檢出所述起始制劑中所述抗體或抗體片段的RSA，并且所述起始制劑中所述抗體或抗體片段由高分子量形式組成； 將蔗糖加入所述起始制劑中以提供有4%-20%(重量/體積)蔗糖的改變制劑， 其中，在約2-8° C、給定抗體濃度比較時(shí)，所述改變制劑中抗體或抗體片段的RSA相對(duì)于所述起始制劑下降。
87.—種生產(chǎn)包含RSA降低的抗體或抗體片段的制劑的方法，所述方法包含: 生成抗體或抗體片段；和 將所述抗體或抗體片段配制成包含下列組分的制劑 水性運(yùn)載體； lmg/ml-100mg/ml所述抗體或抗體片段； 4%-20% (重量/體積)鹿糖；0.01%-0.1%(重量/體積)表面活性劑；和 乙酸鹽緩沖液， 其中，所述制劑的PH是ρΗ4.0 - ρΗ6.0 ；其中如下選擇用于所述制劑的蔗糖量: a)提供包含抗體或抗體片段的起始制劑，其中，在10mg/ml的濃度、約2_8°C用HPSEC可檢出所述起始制劑中所述抗體或抗體片段的RSA ； b)使用一種或多種試驗(yàn)測(cè)定所述起始制劑中所述抗體或抗體片段的生物物理屬性； c)將所述起始制劑的蔗糖含量調(diào)節(jié)至終濃度約4%-約40%(w/v)生成改變的制劑；和 d)使用一種或多種試驗(yàn)測(cè)定所述改變制劑中所述抗體或抗體片段的生物物理屬性， 其中，在約2-8° C、在給定濃度比較時(shí)，所述改變制劑中抗體或抗體片段的RSA相對(duì)于所述起始制劑抗體或抗體片段的RSA下降。
88.如權(quán)利要求86或87所述的方法，所述方法包含 生成抗體或抗體片段；和 將所述抗體或抗體片段配制成包含下列組分的制劑 水性運(yùn)載體； .lmg/ml-100mg/ml所述抗體或抗體片段； .4%-20% (重量/體積)鹿糖； .0.01%-0.1%(重量/體積)表面活性劑；和 乙酸鈉緩沖液， 其中，所述制劑的PH是ρΗ4.0 - ρΗ6.0。
全文摘要
本發(fā)明涉及包含蔗糖的制劑，和制備所述制劑的方法，其中所述蔗糖含量促進(jìn)降低或消除所述制劑中抗體的可逆自體締合(RSA)。本發(fā)明也涉及包含抗PDGFR-α抗體或抗體片段的制劑。這種抗體能用于各種治療方法。本申請(qǐng)還涉及消除或降低制劑中抗體RSA趨勢(shì)的方法。
文檔編號(hào)A61K47/08GK103108658SQ201180042125
公開(kāi)日2013年5月15日 申請(qǐng)日期2011年7月1日 優(yōu)先權(quán)日2010年7月2日
發(fā)明者M·N·季米特洛娃, N·莫迪 申請(qǐng)人:米迪繆尼有限公司