專(zhuān)利名稱(chēng)：人乳頭瘤病毒藥物組合物及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種基因工程方法制備技術(shù)領(lǐng)域，特別是來(lái)自人乳頭瘤(HPV)的病毒樣顆粒(VLPs)的藥物組合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
人乳頭瘤病毒(HPV)是一類(lèi)雙鏈小分子DNA病毒，具有嚴(yán)格的種屬特異性，主要感染人的皮膚和黏膜組織，引起相應(yīng)部位上皮組織的增生性病變。在臨床上，根據(jù)HPV亞型致病力大小或致癌危險(xiǎn)性大小不同可將HPV分為低危型和高危型兩大類(lèi)。低危型HPV主要引起肛門(mén)皮膚及男性外生殖器、女性大小陰唇、尿道口、陰道下段的外生性疣類(lèi)病變和低度子宮頸上皮內(nèi)瘤，其病毒亞型主要有HPV6、11、30、39、42、43型及HPV44型。高危型HPV除可引起外生殖器疣外，更重要的是引起外生殖器癌、宮頸癌及高度子宮頸上皮內(nèi)瘤，其病毒亞型主要有 HPV16、18、31、33、35、45、51、52、56、58 型和 HPV61 型。最新研究表明HPV除了直接導(dǎo)致子宮頸癌，還與支氣管肺癌、直腸癌、口腔癌和皮膚癌有重大關(guān)系。根據(jù)國(guó)際衛(wèi)生組織WHO的有關(guān)資料顯示，除了導(dǎo)致子宮頸癌，HPV感染還能導(dǎo)致60%的皮膚癌，60%的食管癌，50%的肺癌、50%的乳腺癌、25%的口腔癌等人類(lèi)重大疾病。HPV編碼包括八個(gè)早期(El E7)和兩個(gè)晚期(Li L2)基因，Ll蛋白是主要衣殼蛋白，并具有陽(yáng) 60KDa的分子量，Ll蛋白或Ll和L2蛋白組合在酵母菌，昆蟲(chóng)細(xì)胞、哺乳動(dòng)物細(xì)胞或細(xì)菌中的表達(dá)可以導(dǎo)致病毒樣顆粒(VLPs)的自組裝(參見(jiàn)Papillomaviruses Reviews Current Research on Papillomaviruses ；Lacey, ed. Leeds, UK :Leeds Medical Information, pp 101-12(1996))，VLPs形式上與真實(shí)的病毒體相似，并且一旦給予動(dòng)物或人類(lèi)，能夠引起高滴度的中和抗體，由于VLPs不包含潛在致癌的病毒基因組，因此作為HPV 疫苗有很高的安全性。用HPV病毒樣顆粒(VLPs)作為有潛力的疫苗預(yù)防HPV，在本領(lǐng)域是眾所周知的。現(xiàn)已經(jīng)證明，接種VLPs 二價(jià)HPV16和HPV18和四價(jià)HPV6、11、16和18的疫苗在患者體內(nèi)產(chǎn)生免疫應(yīng)答是有效的，但成功的疫苗不僅要求在機(jī)體內(nèi)產(chǎn)生免疫應(yīng)答，而且還可以有效地激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生免疫記憶，當(dāng)再次遇到病原體時(shí)，產(chǎn)生迅速而有效的免疫應(yīng)答。免疫記憶的維持依賴(lài)于抗原特異性的細(xì)胞免疫與體液免疫。T淋巴細(xì)胞是抗原特異性細(xì)胞免疫系統(tǒng)的效應(yīng)細(xì)胞，主要包括輔助性T細(xì)胞(⑶4+)和細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL)(⑶8+)，二者在清除或控制感染的過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。CD4+T細(xì)胞主要發(fā)揮MHC-II類(lèi)分子限制的輔助B淋巴細(xì)胞(TH2)產(chǎn)生抗體及產(chǎn)生與維持抗原特異性⑶8+T記憶細(xì)胞(THl)的作用.其調(diào)節(jié)活性主要包括(1)對(duì)B細(xì)胞的輔助作用，促進(jìn)B細(xì)胞的抗體亞型轉(zhuǎn)換，同源染色體突變及生發(fā)中心的B細(xì)胞分化為漿細(xì)胞與記憶性細(xì)胞；(2)⑶4+T細(xì)胞對(duì)naive⑶8+T細(xì)胞的輔助作用，促進(jìn)其向效應(yīng)性細(xì)胞和記憶性細(xì)胞分化，并維持功能狀態(tài)；(3)CD4+T細(xì)胞對(duì)巨噬細(xì)胞和APCs的調(diào)節(jié)作用。而具有相對(duì)較短效應(yīng)階段的CD8+T細(xì)胞應(yīng)答對(duì)靶細(xì)胞直接發(fā)揮MHC-I類(lèi)分子限制的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)作用或是通過(guò)釋放細(xì)胞因子來(lái)阻止病原體的生長(zhǎng)和存活，其效應(yīng)功能只有在抗原存在下才能發(fā)揮，可見(jiàn)抗原的存在是作為以即時(shí)開(kāi)啟方式存活的效應(yīng)T細(xì)胞的開(kāi)關(guān)。隨著抗原的清除效應(yīng)功能終止并形成記憶性CD8+T細(xì)胞，定位于病原體入侵的黏膜部位，當(dāng)再次遇到抗原時(shí)既迅速發(fā)展成為效應(yīng)細(xì)胞。體液免疫應(yīng)答的多種成分在病原體感染的防御過(guò)程中發(fā)揮著不同的作用。由Bl群B細(xì)胞分化發(fā)育的漿細(xì)胞分泌多特異性抗體(自然抗體)，構(gòu)成病原體感染防御的的第一道防線(xiàn)，這些抗體具有多種作用如在感染的初始階段限制病原體的擴(kuò)散，形成免疫復(fù)合物激活獲得性免疫應(yīng)答，被招募到生發(fā)中心及激活補(bǔ)體，同時(shí)起到連接天然免疫與獲得性免疫的橋梁作用；由長(zhǎng)壽命漿細(xì)胞分泌的記憶性抗體是第二道防線(xiàn)，主要分布在外周循環(huán)及黏膜部位，具有高親和力與高特異性，可以更有效的防御病原體感染；記憶性B細(xì)胞構(gòu)成免疫防御的第三道防線(xiàn)，發(fā)揮有兩種作用，一方面當(dāng)再次遇到抗原時(shí)產(chǎn)生迅速而有效的應(yīng)答反應(yīng)，另一方面作為長(zhǎng)壽命漿細(xì)胞的支持系統(tǒng)，保持長(zhǎng)壽命漿細(xì)胞數(shù)量的平衡。因此，現(xiàn)階段開(kāi)發(fā)的目標(biāo)是在保持完整的VLPs構(gòu)型的前提下，延長(zhǎng)VLPs的保存期限，同時(shí)不僅要增強(qiáng)機(jī)體對(duì)VLPs的免疫應(yīng)答，而且還要通過(guò)添加相關(guān)成分，激發(fā)機(jī)體對(duì)VLPs產(chǎn)生免疫記憶，并在患者體內(nèi)產(chǎn)生長(zhǎng)效免疫。佐劑是一類(lèi)與抗原合用并能增強(qiáng)和調(diào)節(jié)抗原免疫應(yīng)答的物質(zhì)。在疫苗中添加佐劑可以使疫苗更好的發(fā)揮作用效果并提高保護(hù)效率，因此佐劑是疫苗研究中一個(gè)重要的環(huán)節(jié)。至今文獻(xiàn)發(fā)表的新佐劑，約有數(shù)百種，不同的佐劑有不同促進(jìn)免疫反應(yīng)的機(jī)制。佐劑可以改變免疫系統(tǒng)的功能，影響細(xì)胞因子的產(chǎn)生和調(diào)節(jié)功能。有的佐劑可加強(qiáng)整個(gè)免疫系統(tǒng)的功能；多數(shù)佐劑則可以加強(qiáng)某些細(xì)胞因子的分泌或抑制?，F(xiàn)已知人和鼠的免疫T細(xì)胞有Thl和Th2。Thl主要促進(jìn)補(bǔ)體結(jié)合抗體和遲緩型過(guò)敏反應(yīng)，相關(guān)的細(xì)胞因子有IFN-γ、IL-2、IL-12等；Th2促進(jìn)循環(huán)抗體，分析型抗體，包括IgE的產(chǎn)生，相關(guān)細(xì)胞因子有IL-4、IL-5和IL-10等。有的佐劑可以加強(qiáng)Thl，有的佐劑加強(qiáng)Th2。雖然佐劑種類(lèi)繁多，但并不是所有佐劑都適合人體使用?，F(xiàn)階段被批準(zhǔn)上市的佐劑也只用幾種。而且某種佐劑也只被批準(zhǔn)用于某種特定的疫苗，并不意味著可用于其他疫苗。將傳統(tǒng)佐劑用于新型疫苗，也不一定能起到良好的免疫效果，所有的新疫苗與佐劑的配伍必須經(jīng)過(guò)嚴(yán)格的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)和人體臨床實(shí)驗(yàn)，才能確定其是否具有實(shí)用價(jià)值。細(xì)胞因子是機(jī)體內(nèi)免疫細(xì)胞或非免疫細(xì)胞產(chǎn)生的一組具有廣泛生物學(xué)活性的異質(zhì)性肽類(lèi)調(diào)節(jié)因子，在體內(nèi)能激活和調(diào)節(jié)免疫性細(xì)胞，對(duì)免疫應(yīng)答的產(chǎn)生和調(diào)節(jié)具有重要作用。每種細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)作用都具有多樣性。目前，對(duì)各種細(xì)胞因子確定的作用機(jī)制雖然尚不清晰，但通過(guò)大量研究表明，細(xì)胞因子可以有效的刺激細(xì)胞免疫，與疫苗聯(lián)合使用對(duì)機(jī)體產(chǎn)生良好的免疫促進(jìn)作用。并且現(xiàn)階段已經(jīng)有多種細(xì)胞因子批準(zhǔn)上市，在臨床上使用多年，對(duì)其作用效果和不良反應(yīng)比較明晰，將其作為疫苗的組分，被認(rèn)為是安全可靠的。但細(xì)胞因子在體內(nèi)半衰期短且造價(jià)昂貴，如與靶向抗原單獨(dú)使用，其作用時(shí)間與機(jī)體免疫應(yīng)答時(shí)間不同步，因此無(wú)法達(dá)到良好的免疫效果。如與傳統(tǒng)佐劑聯(lián)合使用，可以有效的避免自身的弊端，延長(zhǎng)其在體內(nèi)的半衰期，并可以減少用量。同時(shí)也可以有效的補(bǔ)充傳統(tǒng)佐劑自身對(duì)機(jī)體的細(xì)胞免疫不足的缺陷。因此現(xiàn)階段需要找到一種可長(zhǎng)期保持HPV VLPs穩(wěn)定性和增強(qiáng)其免疫原性的新的藥物組合物，明確配伍關(guān)系，并且生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單，生產(chǎn)成本較低，對(duì)人體安全可靠是至關(guān)重要的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種儲(chǔ)存穩(wěn)定并能起到長(zhǎng)效免疫的人乳頭瘤(HPV)病毒樣顆粒(VLPs)的藥物組合物及其應(yīng)用。根據(jù)我們多次實(shí)驗(yàn)得出在VUs溶液中使用適宜的鹽濃度、緩沖液和PH值能有效的防止VLPs的吸附，減少VLPs的聚集并增加其穩(wěn)定性，并不影響其免疫原性，其中加入相關(guān)的細(xì)胞因子免疫促進(jìn)劑可以顯著性的增加該藥物的免疫原性，使的該藥物可以高效并持續(xù)的刺激人體自身免疫系統(tǒng)，產(chǎn)生高滴度的中和性抗體，并產(chǎn)生免疫記憶，從而達(dá)到對(duì)HPV所引起相關(guān)疾病的預(yù)防和治療的目的。因此本發(fā)明使用的藥物組合物，具有生產(chǎn)成本低，工藝簡(jiǎn)單，安全可靠等諸多優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的本發(fā)明提供了一種用于預(yù)防和治療由HPV感染而導(dǎo)致相關(guān)疾病的人乳頭瘤病毒藥物組合物，它包括下述成份及用量范圍組成(I)HPV病毒樣顆粒(VLPs)吸附于佐劑，其VLPs濃度范圍為10 60 μ g/ml ；(2)細(xì)胞因子免疫促進(jìn)劑，其活性范圍為1 5000萬(wàn)國(guó)際單位；(3)NaCl鹽溶液，其濃度范圍為0. IM 0. 4M ；(4) 一種注射用的緩沖液，其濃度范圍5mM 20mM，保持疫苗的pH在5. 5 7. 5 ；(5)非離子表面活性劑，其濃度范圍0. 0005% 0. 05% ；(6)以注射用水溶解。本發(fā)明根據(jù)需要，還加入藥物組合物總量的0. 1 10%。pH調(diào)節(jié)劑。本發(fā)明所選用的免疫原性物質(zhì)包括HPV6a、HPV6b、HPVll、HPV16、HPV18、HPV31或 HPV32的一種、二種或二種以上任意組合，及其他HPV亞型所形成的VLPs，由于形成機(jī)理相同，同樣也適合本藥物組合物。據(jù)研究表明其中各型的HPV VUs的最適含量為10 60 μ g/ ml，選擇含量如低于10 μ g/ml，體內(nèi)將無(wú)法產(chǎn)生高滴度的中和性抗體，從而無(wú)法達(dá)到長(zhǎng)效免疫的目的。如要達(dá)到相同的免疫效果，需短期內(nèi)頻繁給藥，這樣不僅增加患者痛苦，反復(fù)免疫將降低機(jī)體的免疫力，從而破壞患者自身免疫系統(tǒng)。選擇含量如高于60 μ g/ml，機(jī)體將出現(xiàn)輕微的不良反應(yīng)，如高于100 μ g/ml，機(jī)體不良反應(yīng)較嚴(yán)重。本發(fā)明所選用的佐劑包括鋁佐劑、Ca3(P04)2、MF59、SAF、QS-21、3-0_去酰化單磷酸類(lèi)脂(3D-MPL)、免疫刺激復(fù)合物(ISC0M)、聚丙乙交酯(PLG)、AGP、脂質(zhì)A衍生物和CpG的一種、二種或二種以上任意組合。其中優(yōu)選的佐劑為鋁佐劑、ISCOM佐劑、3-0-去酰化單磷酸類(lèi)脂(3D-MPL)佐劑、Cei3(PO4)2佐劑或MF59佐劑。鋁佐劑的包含范圍比較廣泛，包括氫氧化鋁(Al (OH)3)佐劑，磷酸鋁(AlPO4)佐劑， 羥基磷酸鋁佐劑，非晶形的羥基磷酸鋁硫酸鹽(AAiB)佐劑，明礬(KAl (SO4)-12H20)佐劑或納米鋁佐劑。長(zhǎng)期以來(lái)，鋁佐劑一直是疫苗上應(yīng)用最廣泛的佐劑，當(dāng)以合適的劑量使用時(shí)，鋁佐劑是被認(rèn)為最為安全可靠的?，F(xiàn)世界上大部分國(guó)家已經(jīng)批準(zhǔn)，將鋁佐劑作為人用佐劑使用。 雖然現(xiàn)階段鋁佐劑的作用機(jī)理研究的還不是很清晰，但通常認(rèn)為將抗原吸附在鋁佐劑上， 鋁佐劑可以有效的刺激體液免疫，產(chǎn)生更高滴度的IgG、IgE，激活Th2細(xì)胞。本發(fā)明的細(xì)胞因子免疫促進(jìn)劑選自干擾素(IFN)，白細(xì)胞介素(IL)，粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)或趨化因子(TCA)的一種、二種或二種以上任意組合。本發(fā)明所述的細(xì)胞因子免疫促進(jìn)劑選自白細(xì)胞介素(IL)，其白細(xì)胞介素(IL)優(yōu)
5選為白細(xì)胞介素(II)。本發(fā)明所述藥物組合物的應(yīng)用，其給藥途徑為皮內(nèi)注射、皮下注射、皮下輸液、肌內(nèi)注射、靜脈注射或靜脈輸液。本發(fā)明所選用的細(xì)胞因子免疫促進(jìn)劑是一類(lèi)由活化的免疫細(xì)胞(淋巴細(xì)胞、單核巨噬細(xì)胞等)和相關(guān)細(xì)胞(纖維細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞等)產(chǎn)生的具有調(diào)節(jié)細(xì)胞功能的高活性、多功能蛋白質(zhì)多肽分子或糖蛋白，它們通過(guò)與高親和力的特異性受體相互作用，在體內(nèi)能激活和調(diào)節(jié)免疫活性細(xì)胞并使之增生，從而增強(qiáng)了體液免疫、細(xì)胞免疫和非特異性免疫功能， 使機(jī)體在短時(shí)間內(nèi)快速高效的產(chǎn)生高滴度的HPV中和性抗體和免疫記憶。與相關(guān)佐劑聯(lián)合使用，可以有效的避免細(xì)胞因子在體內(nèi)作用時(shí)間短，刺激不長(zhǎng)久的避端。延長(zhǎng)其在局部組織的存留時(shí)間，起到緩慢釋放的作用。其中IL-2可以作用于多種細(xì)胞，包括T、B淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和NK細(xì)胞等，對(duì)免疫應(yīng)答具有廣泛的上調(diào)作用。據(jù)研究表明將靶向抗原與IL-2肌肉注射小鼠體內(nèi)，所得到的抗體滴度和CD4+T細(xì)胞增殖均提高100倍以上，體外檢測(cè)脾細(xì)胞分泌的各種細(xì)胞因子的量， 發(fā)現(xiàn)IL-2大幅度地加強(qiáng)了 IFN- y、IL-2的分泌，而對(duì)IL-4只有輕微的加強(qiáng)，說(shuō)明IL-2主要是加強(qiáng)了機(jī)體的Thl型免疫應(yīng)答，并且有助于打破免疫耐受，一般認(rèn)為大部分感染性疾病的預(yù)防及腫瘤的治療，能夠激發(fā)機(jī)體產(chǎn)生Thl型免疫應(yīng)答的疫苗才是有效的，因此本專(zhuān)利優(yōu)先選擇將鋁佐劑與IL-2聯(lián)合使用。這樣可以有效的彌補(bǔ)鋁佐劑無(wú)法激活機(jī)體Thl細(xì)胞的缺陷。IL-12在體內(nèi)主要參與細(xì)胞免疫應(yīng)答，將靶向抗原與IL-12肌肉注入小鼠體內(nèi)，T 細(xì)胞明顯增加，CTL活性顯著提高。但對(duì)體液免疫應(yīng)答起到抑制作用，表現(xiàn)為抗體滴度下降和B細(xì)胞減少。GM-CSF在免疫應(yīng)答反應(yīng)中主要通過(guò)調(diào)節(jié)抗原遞呈細(xì)胞的數(shù)量和功能來(lái)增強(qiáng)免疫應(yīng)答強(qiáng)度。與靶向抗原一起注入小鼠體內(nèi)，抗體的陽(yáng)轉(zhuǎn)率明顯提高，經(jīng)檢測(cè)其特異性CD4+T 細(xì)胞的增殖和CTL活性均增強(qiáng)。IFN-Y主要通過(guò)參與Th細(xì)胞向Thl型分化來(lái)調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答，但對(duì)體液免疫應(yīng)答呈抑制作用或無(wú)任何影響。TCA3是β趨化細(xì)胞因子家族中一員，能夠募集和激活單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和中性粒細(xì)胞。與靶向抗原一起注入小鼠體內(nèi)可以特異性CTL效應(yīng)顯著提高，使IgGh略有上升， 說(shuō)明TCA3可以加強(qiáng)原誘生的Thl型免疫應(yīng)答。本發(fā)明所選用的鹽溶液為NaCl，此鹽溶液的選擇為本領(lǐng)域所公知，從機(jī)體的適應(yīng)性考慮，最適鹽濃度為0. 1 0. 2M,但據(jù)研究發(fā)現(xiàn)，增加鹽溶液的離子強(qiáng)度可以提高HPV VLPs的穩(wěn)定性和溶解度，進(jìn)而有效的防止由于溫度升高而導(dǎo)致的VLPs間的相互聚集。由于高鹽濃度在注射劑中是受到限制的，因此從穩(wěn)定性方面考慮，優(yōu)選鹽濃度為0. 25 0. 35M。 增加鹽濃度雖然能解決上述問(wèn)題，但高鹽濃度的注射劑會(huì)導(dǎo)致血漿的滲透壓紊亂，無(wú)法進(jìn)行靜脈途徑給藥，同樣皮下、肌肉、腹腔途徑給藥時(shí)將增加人體的疼痛感。因此本專(zhuān)利優(yōu)選藥物組合物的鹽濃度為HPV VLPs濃度低于100μ g/ml時(shí)選用等滲NaCl溶液，濃度為 0. 15M。HPV VLPs濃度高于200 μ g/ml時(shí)選用NaCl溶液濃度為0. 32M。本發(fā)明中所選用溶劑pH值在5. 5 7. 5的范圍內(nèi)，其HPV VLPs才能保持穩(wěn)定并形成完整的空間構(gòu)象。據(jù)研究表明，低PH值可以使高濃度HPV VUs之間帶上相同電荷，減少聚集，避免聚沉而導(dǎo)致的蛋白變性，從而使疫苗失去免疫原性。因此本專(zhuān)利優(yōu)選藥物組合物的PH值為HPV VLPs濃度低于120 μ g/ml時(shí)選用pH值為6. 5 7. 5。HPV VLPs濃度高于180 μ g/ml時(shí)選用pH值為5. 5 6. 5。本發(fā)明中所選用的緩沖溶液為磷酸鹽緩沖液或組氨酸緩沖液，緩沖液的濃度為 5mM 20mM。磷酸鹽緩沖液是本領(lǐng)域較常用的緩沖體系，其緩沖范圍為pH值6 8。組氨酸緩沖液的緩沖范圍為pH值5. 5 6. 5。據(jù)研究表明，磷酸鹽緩沖液由于其產(chǎn)生的離子能與鋁佐劑相互作用，導(dǎo)致疫苗注射劑的穩(wěn)定性下降，因此其與鋁佐劑不能同時(shí)使用。如需同時(shí)使用，需增加鋁佐劑在藥物組合物中的濃度。同時(shí)磷酸鹽緩沖液在低溫保存時(shí)，會(huì)導(dǎo)致磷酸鹽的吸出，致使注射劑PH值漂移。高濃度HPV VUs會(huì)由于pH值的不穩(wěn)定而聚沉。從而導(dǎo)致免疫原性下降。組氨酸緩沖液的緩沖范圍適用于高濃度HPV VLPs的保存，低溫不會(huì)引起緩沖體系的不穩(wěn)定，因此本專(zhuān)利優(yōu)選藥物組合物的緩沖體系為HPV VUs濃度低于 130 μ g/ml時(shí)選用磷酸鹽緩沖液。HPV VLPs濃度高于200 μ g/ml時(shí)選用組氨酸緩沖液。本發(fā)明中所選用的表面活性劑為非離子表面活性劑，其中包括聚山梨酯80 (如 TWEEN 80 )、聚山梨酯20 (如TWEEN 20 )。其中優(yōu)選的活性劑為聚山梨酯80。據(jù)研究表明，聚山梨酯80不僅可以起到增加HPV VLPs在藥物組合物中的溶解度，而且還能保護(hù)HPV VUs鋁佐劑在運(yùn)輸?shù)倪^(guò)程中，避免由于劇烈的震蕩而導(dǎo)致的蛋白活性的降低。但由于過(guò)高濃度的聚山梨酯80在機(jī)體內(nèi)會(huì)起到輕微的降壓與溶血的作用，因此本專(zhuān)利優(yōu)選聚山梨酯 80在藥物組合物中的濃度范圍為0. 0005% 0. 5% (重量/體積)。本發(fā)明的特點(diǎn)是應(yīng)用本發(fā)明提供的方法，可以生產(chǎn)一種免疫原性好、相容性好、儲(chǔ)存時(shí)間長(zhǎng)且穩(wěn)定的HPV多價(jià)疫苗。本發(fā)明還具有制備方法簡(jiǎn)單、生產(chǎn)成本低、應(yīng)用效果好等特點(diǎn)。


圖1為HPV16 VUs吸附在不同鋁佐劑上，保存在2 8°C的條件下，不同藥物組合物穩(wěn)定性比較情況。圖2為HPV18 VLPs與MPL混合，吸附在不同鋁佐劑上，保存在2 8°C的條件下， 不同藥物組合物穩(wěn)定性比較情況。圖3為HPV6 VLPs與ISCOMATRIX 混合，吸附在不同鋁佐劑上，保存在2 8°C 的條件下，不同藥物組合物穩(wěn)定性比較情況。圖4為HPVll VLPs與QS-21與MPL分別吸附在明礬上，保存在2 8°C的條件下， 不同藥物組合物穩(wěn)定性比較情況。圖5為HPV16 VLPs吸附在( (PO4)2佐劑上，保存在2 8°C的條件下，不同藥物
組合物穩(wěn)定性比較情況。圖6為HPV18 VLPs吸附在MF59佐劑上，保存在2 8°C的條件下，不同藥物組合物穩(wěn)定性比較情況。
具體實(shí)施例方式下面將通過(guò)實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說(shuō)明，但下述的實(shí)例僅是本發(fā)明其中的例子，并不代表本發(fā)明所限定的權(quán)利范圍。
將HPV6 VLPs, HPVll VLPs, HPV16 VLPs, HPV18 VLPs (純度在 95% 以上)分別保存在0. 5M NaCl, 0. 003% Tween 80，pH6. 2的溶液中，無(wú)菌過(guò)濾，稀釋至濃度為lmg/ml， 在-70°C的條件下儲(chǔ)存。實(shí)施例1 選用鋁佐劑配制藥物組合物，監(jiān)測(cè)HPV VLPs長(zhǎng)期保存的穩(wěn)定性及其相
關(guān)應(yīng)用。藥物組合物穩(wěn)定性考察配制以Al (OH)3作為佐劑的HPV16 VLPs
成分
HPV16 VLPs
Al (OH) 3 佐劑(Sigma 公司) NaCl
L-組氨酸
Tween80 (Fluka 公司)余量為注射用水。按上述藥物組合物的配方進(jìn)行配制，調(diào)節(jié)pH值至6. 2 士 0. 1，定容至55ml。將此無(wú)菌藥物組合物分裝至無(wú)菌的西林瓶中，每瓶加入0. 5ml，分裝100支，在整個(gè)配制過(guò)程中通過(guò)無(wú)菌過(guò)濾的氮?dú)庖耘懦恐锌諝?，最后軋蓋制成HPV16 VUs藥物組合物。配制以AAHS作為佐劑的HPV16 VLPs
成分含量
HPVl 6 VLPs160pg/ml
AAHS 佐齊Ij450|ag/ml
NaCl0.32M
L-組氨酸IOmM
Tween80 (Fluka 公司)0.01%余量為注射用水。按上述藥物組合物的配方進(jìn)行配制，調(diào)節(jié)pH值至6. 2 士 0. 1，定容至55ml。將此藥物組合物分裝至無(wú)菌的西林瓶中，每瓶加入0. 5ml，分裝100支，在整個(gè)配制過(guò)程中通過(guò)無(wú)菌過(guò)濾的氮?dú)庖耘懦恐锌諝?，最后軋蓋制成HPV16 VLPs藥物組合物。將以Al (OH)3作為佐劑的HPV16 VLPs藥物組合物與以AAHS作為佐劑的HPV16VLPs 藥物組合物各100支置于2 8°C的冰箱中，定期取樣進(jìn)行BIAcore分析(利用一種HPV16 VUs的中和性抗體進(jìn)行分析)目的蛋白的百分含量。每次檢測(cè)時(shí)以-70°C保存的HPV6 VLPs 藥物組合物作為陽(yáng)性對(duì)照。檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖1。實(shí)施例2 選用新型MPL佐劑配制藥物組合物，監(jiān)測(cè)HPV VLPs長(zhǎng)期保存的穩(wěn)定性及其相關(guān)應(yīng)用。
含量 16(^g/ml 45(^g/ml 0.32M IOmM 0.01%
藥物組合物穩(wěn)定性考察配制以MPL/A1 (OH)3 作為佐劑的 HPV18 VLPs
成分
HPVl 8 VLPs
MPL (Corixa 公司)
Al (OH) 3 佐劑(Sigma 公司)
NaCl
NaH2P04.2H20 TritonX-IOO (Sigma 公司)
80pg/ml lOOpg/ml lmg/ml
150mM 8mM 0.02%余量為注射用水。按上述藥物組合物配方進(jìn)行配制，調(diào)節(jié)pH值至7. 2 士 0. 1，定容至55ml。將此藥物組合物分裝至無(wú)菌的西林瓶中，每瓶加入0. 5ml，分裝100支，在整個(gè)配制過(guò)程中通過(guò)無(wú)菌過(guò)濾的氮?dú)庖耘懦恐锌諝?，最后軋蓋制成HPV18 VLPs藥物組合物。配制以MPL/A1P04 作為佐劑的 HPV18 VLPs 余量為注射用水。按上述藥物組合物的配方進(jìn)行配制，調(diào)節(jié)pH值至7. 2 士 0. 1，定容至55ml。將此藥物組合物分裝至無(wú)菌的西林瓶中，每瓶加入0. 5ml，分裝100支，在整個(gè)配制過(guò)程中通過(guò)無(wú)菌過(guò)濾的氮?dú)庖耘懦恐锌諝?，最后軋蓋制成HPV18 VLPs藥物組合物。將以MPL/A1 (OH)3作為佐劑的HPV18 VLPs藥物組合物與以MPL/A1P04作為佐劑的 HPV18 VLPs藥物組合物各100支置于2 8。C的冰箱中，定期取樣進(jìn)行BIAcore分析(利用一種HPV18 VUs的中和性抗體進(jìn)行分析)目的蛋白的百分含量。每次檢測(cè)時(shí)以-70°C保存的HPV18 VUs藥物組合物作為陽(yáng)性對(duì)照。檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖2。實(shí)施例3 選用新型ISCOMATRIX 佐劑配制藥物組合物，監(jiān)測(cè)HPV VLPs長(zhǎng)期保存的穩(wěn)定性及其相關(guān)應(yīng)用。藥物組合物穩(wěn)定性考察
配制以ISCOMATRIX /AAHS 作為佐劑的 HPV6 VLPs
成分
HPV18 VLPs MPL (Corixa 公司) AlPO4佐劑 NaCl
NaH2P04.2H20 TritonX-100 (Sigma 公司)
lOOpg/ml
lmg/ml 150mM 8mM 0.02%
含量 80μ^ηι1
9成分含量HPV6 VLPs80pg/mlISCOMATRIX 120μ_1AAHS佐劑450μβ/mlNaCl0.32ML-咪唑IOmMTween20 (Fluka 公司)0.01%余量為注射用水。按上述藥物組合物的配方進(jìn)行配制，調(diào)節(jié)pH值至6. 2 士 0. 1，定容至55ml。將此藥物組合物分裝至無(wú)菌的西林瓶中，每瓶加入0. 5ml，分裝100支，在整個(gè)配制過(guò)程中通過(guò)無(wú)菌過(guò)濾的氮?dú)庖耘懦恐锌諝?，最后軋蓋制成HPV6 VLPs藥物組合物。配制以ISCOMATRIX /AlPO4 作為佐劑的 HPV6 VLPs
成分含量HPV6VLPs8(^g/mlISCOMATRIX AlPO4佐劑45(^g /mlNaCl0.32ML-咪唑IOmMTween20 (Fluka 公司)0.01%余量為注射用水。按上述藥物組合物的配方進(jìn)行配制，調(diào)節(jié)pH值至6. 2 士 0. 1，定容至55ml。將此藥物組合物分裝至無(wú)菌的西林瓶中，每瓶加入0. 5ml，分裝100支，在整個(gè)配制過(guò)程中通過(guò)無(wú)菌過(guò)濾的氮?dú)庖耘懦恐锌諝?，最后軋蓋制成HPV6 VLPs藥物組合物。將以ISCOMATRIX /AAHS作為佐劑的HPV6 VLPs藥物組合物與以ISCOMATRIX /AlPO4作為佐劑的HPV6 VLPs藥物組合物各100支置于2 8°C的冰箱中，定期取樣進(jìn)行 BIAcore分析(利用一種HPV6 VLPs的中和性抗體進(jìn)行分析)目的蛋白的百分含量。每次檢測(cè)時(shí)以-70°C保存的HPV6 VUs藥物組合物作為陽(yáng)性對(duì)照。檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖3。實(shí)施例4 選用新型QS-21佐劑配制藥物組合物，監(jiān)測(cè)HPV VLPs長(zhǎng)期保存的穩(wěn)定性及其相關(guān)應(yīng)用。藥物組合物穩(wěn)定性考察配制以QS-21/MPL/明礬作為佐劑的HPVll VLPs 成分含量HPVll VLPs80pg/mlQS-21 (ANTIGENICS 公司)ΙΟΟμ^ηιΙMPLΙΟΟμ^ιπΙ明礬佐劑lmg/mlKCl150mMNaH2P04.2H208mMTriton X-114 (Sigma 公司)0.02%余量為注射用水。按上述藥物組合物的配方進(jìn)行配制，調(diào)節(jié)pH值至7.2 士 0. 1，定容至55ml。將此藥物組合物分裝至無(wú)菌的西林瓶中，每瓶加入0. 5ml此藥物組合物，分裝100 支，在整個(gè)配制過(guò)程中通過(guò)無(wú)菌過(guò)濾的氮?dú)庖耘懦恐锌諝猓詈筌埳w制成HPVll VUs藥物組合物。配制以QS-21/明礬作為佐劑的HPVll VLPs
成分
HPVll VLPs
QS-21 (ANTIGENICSSg)
明礬佐劑 KCl
NaH2P04.2H20 Triton X-114 ( Sigma 公司)余量為注射用水。按上述藥物組合物的配方進(jìn)行配制，調(diào)節(jié)pH值至7. 2 士 0. 1，定容至55ml。將此藥物組合物分裝至無(wú)菌的西林瓶中，每瓶加入0. 5ml，分裝100支，在整個(gè)配制過(guò)程中通過(guò)無(wú)菌過(guò)濾的氮?dú)庖耘懦恐锌諝?，最后軋蓋制成HPVll VLPs藥物組合物。將以QS-21/MPL/明礬作為佐劑的HPVll VUs藥物組合物與以QS-21/明礬作為佐劑的HPVll VLPs藥物組合物各100支置于2 8°C的冰箱中，定期取樣進(jìn)行BIAcore分析 (利用一種HPVll VUs的中和性抗體進(jìn)行分析)目的蛋白的百分含量。每次檢測(cè)時(shí)以-70°C 保存的HPVll VUs藥物組合物作為陽(yáng)性對(duì)照。檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖4。實(shí)施例5 選用Qi3 (PO4) 2佐劑配制疫苗藥物組合物，監(jiān)測(cè)HPV VLPs長(zhǎng)期保存的穩(wěn)定性及其相關(guān)應(yīng)用。配制相關(guān)溶液配制以Cei3(PO4)2 作為佐劑的 HPV31 VLPs
含量
80Hg/ml 120μ^ιη1 lmg/ml 150mM 8mM 0.02%成分含量
HPV3 IVLPs80pg/ml
C^3(PO4)2 佐劑(Fluka 公司)lmg/ml
Na2SO480mM
NaH2PO4^H2O8mM
NP-40 (Sigma 公司)0.01%
余量為注射用水。按上述藥物組合物配方進(jìn)行配制，調(diào)節(jié)pH值至7. 2 士 0. 1，定容至55ml。將此藥物組合物分裝至無(wú)菌的西林瓶中，每瓶加入0. 5ml，分裝100支，在整個(gè)配制過(guò)程中通過(guò)無(wú)菌過(guò)濾的氮?dú)庖耘懦恐锌諝?，最后軋蓋制成HPV31 VLPs藥物組合物。將以Qi3(PO4)2作為佐劑的HPV31 VLPs藥物組合物各100支置于2 8°C的冰箱中，定期取樣進(jìn)行BIAcore分析(利用一種HPV31 VUs的中和性抗體進(jìn)行分析)目的蛋白的百分含量。每次檢測(cè)時(shí)以-70°C保存的HPV31 VUs藥物組合物作為陽(yáng)性對(duì)照。檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖5。實(shí)施例6 選用新型MF59佐劑配制疫苗藥物組合物，監(jiān)測(cè)HPV VLPs長(zhǎng)期保存的穩(wěn)定性及其相關(guān)應(yīng)用。藥物組合物穩(wěn)定性考察配制以MF59作為佐劑的HPV33 VLPs
HPV33 VLPs150pg/ml
MF59 佐劑45(^g/ml
NaCl0.32M
L-甘氨酸IOmM
Pluronicl21 (BASF 公司)0.02%余量為注射用水。按上述藥物組合物配方進(jìn)行配制，調(diào)節(jié)PH值至6. 2 士 0. 1，定容至55ml。將此藥物組合物分裝至無(wú)菌的西林瓶中，每瓶加入0. 5ml，分裝100支，在整個(gè)配制過(guò)程中通過(guò)無(wú)菌過(guò)濾的氮?dú)庖耘懦恐锌諝?，最后軋蓋制成HPV33 VLPs藥物組合物。將以MF59作為佐劑的HPV33 VUs藥物組合物各100支置于2 8°C的冰箱中，定期取樣進(jìn)行BIAcore分析(利用一種HPV33 VLPs的中和性抗體進(jìn)行分析)目的蛋白的百分含量。每次檢測(cè)時(shí)以-70°C保存的HPV33 VUs藥物組合物作為陽(yáng)性對(duì)照。檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖 6。實(shí)施例7 =VLPs的免疫原性實(shí)驗(yàn)根據(jù)上述實(shí)施例1 4所述的藥物組合物配方配制HPV16 VLPs藥物組合物用于相關(guān)的免疫檢測(cè)和動(dòng)物免疫實(shí)驗(yàn)。小鼠免疫實(shí)驗(yàn)選取8 12周BALB/c小鼠，隨機(jī)分組，每組12只；按下述方案(見(jiàn)表一)在小鼠右側(cè)徑前肌肉處注射免疫。免疫血清抗體檢定第二次免疫后14天，對(duì)小鼠進(jìn)行摘除眼球取血，用15ml —次性離心管收集血液， 在4°C條件下，IOOOOg離心30min，收集血清，_20°C保存?zhèn)溆谩Ｓ肏PV16 VLPs作包被抗原， ELISA方法檢測(cè)免疫小鼠血清中的HPV16抗體效價(jià)。其中，A組免疫血清均未檢測(cè)到抗體活性，B組免疫血清的抗體滴度約1 1000，C組免疫血清的抗體滴度約1 3000，D、E、F組免疫血清的抗體滴度約1 5000，G、H組免疫血清的抗體滴度約1 7000。 小鼠紅細(xì)胞血凝抑制實(shí)驗(yàn)由于HPV病毒具有凝集小鼠紅細(xì)胞的能力，但此特性可以被相應(yīng)的特異性抗體所抑制，所以我們利用其特性，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)來(lái)檢測(cè)免疫小鼠的血清中是否產(chǎn)生了針對(duì)VLPs的特異性抗體和其含量。經(jīng)檢測(cè)小鼠紅細(xì)胞懸液與倍比稀釋的HPV16 VUs相互作用，結(jié)果當(dāng)IOM倍稀釋時(shí)，VUs使鼠紅細(xì)胞呈“++”凝集的最高稀釋倍數(shù)，即定義為一個(gè)病毒單位。血凝抑制實(shí)驗(yàn)選取4個(gè)病毒單位即VLPs按1 256 (618. 54ng/孔)稀釋。以618. Mng/孔VUs與不同倍比稀釋的小鼠免疫血清進(jìn)行紅細(xì)胞凝集抑制實(shí)驗(yàn)， 實(shí)驗(yàn)結(jié)果(見(jiàn)表二)，B組免疫血清的血凝抑制效價(jià)為1 8，C組免疫血清的血凝抑制效價(jià)為1 16，D、E、F組免疫血清的血凝抑制效價(jià)為1 32，G、H組免疫血清的血凝抑制效價(jià)為1 1沘。免疫小鼠產(chǎn)生的抗體能與VLPs正確地結(jié)合即能阻止VLPs與紅細(xì)胞表面受體結(jié)合。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果證實(shí)了小鼠免疫血清的抗體能識(shí)別VLPs構(gòu)象表位，并且具有血凝抑制活性。實(shí)施例8 疫苗中不同配比對(duì)小鼠Thl/Th2型細(xì)胞因子變化的影響根據(jù)上述實(shí)施例1所述的藥物組合物配方，采用Al (OH)3佐劑加入相關(guān)免疫促進(jìn)劑配制HPV16 VLPs藥物組合物用于相關(guān)的免疫檢測(cè)和動(dòng)物免疫實(shí)驗(yàn)。小鼠免疫實(shí)驗(yàn)選取8 12周BALB/c小鼠，隨機(jī)分6組，每組25只。其中設(shè)立對(duì)照組(Al (OH) 3 佐劑)，IL-2組，IL-12組，GM-CSF組，IFN- γ組，TCA3組共6組，小鼠腿部肌肉注射疫苗各 150 μ 1/只，免疫方案為0，30天，2針免疫，分別于初次免疫后的1，2，3，4周及加強(qiáng)免疫后第2周，所有小鼠均經(jīng)眼眶靜脈取血，分離血清后儲(chǔ)存于-20°C。檢測(cè)血清中細(xì)胞因子水平使用BDTM Cytometric Bead Array (CBA)Mouse Thl/Th2 Cytokine Kit和流式細(xì)胞儀(FACS Calibur)，對(duì)不同的血清樣品同時(shí)進(jìn)行5個(gè)細(xì)胞因子(TNF，IFN-γ，IL_5，IL-4， IL-2)的定量測(cè)定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)免疫促進(jìn)劑加入后，可以刺激小鼠產(chǎn)生較強(qiáng)的細(xì)胞免疫應(yīng)答，誘導(dǎo)產(chǎn)生的Th 1/Th2型細(xì)胞因子均隨時(shí)間的變化而變化。五種細(xì)胞因子均在第4周達(dá)到最大值。 其中IL-2和IFN- γ組在第2、3、4周都能顯示誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生較高的細(xì)胞因子水平，明顯高于對(duì)照組。說(shuō)明該種免疫促進(jìn)劑初次免疫能增強(qiáng)疫苗的非特異性免疫應(yīng)答，對(duì)增強(qiáng)疫苗的免疫原性有較好的作用。實(shí)施例9 =HPV感染患者臨床體外實(shí)驗(yàn)
子宮頸癌患者的血清抗體ELISA檢測(cè)將適量的HPV16 VLPs PBS稀釋的包被液100 μ 1/孔加入96孔酶標(biāo)板中，置于4°C 包被過(guò)夜。傾去孔內(nèi)液體，用PBS洗液洗滌3次。隨后加入1 % BSA-PBS 100 μ 1/孔，室溫封閉Ihr后PBS洗液洗滌3次。加入用0. 1 % BSA-PBSl 3000稀釋的患者血清，室溫孵育 Ihr后PBS洗液洗滌3次。之后加入用0. 1 % BSA-PBSl 3000稀釋的HRP標(biāo)記的羊抗鼠 IgGlOO μ 1/孔。室溫靜置Ihr后PBS洗液洗滌4次。每孔加入100 μ 1 OPD底物緩沖液，避光反應(yīng)lOmin。最后每孔加入100 μ 1終止液終止反應(yīng)。用酶標(biāo)儀與490nm波長(zhǎng)檢測(cè)每孔光密度值，患者血清檢測(cè)結(jié)果呈陽(yáng)性，即患者血清抗體滴度在1 3000以上。通過(guò)ELISA檢測(cè)得出子宮頸癌患者的血清抗體與HPV16 VUs產(chǎn)生免疫反應(yīng)，結(jié)果表明患者血清抗體滴度較高，并且通過(guò)體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)，HPV16 VUs可以在患者體內(nèi)產(chǎn)生相應(yīng)的抗體。從而對(duì)相應(yīng)的適應(yīng)癥患者達(dá)到預(yù)防和治療的目的。其中，由HPV感染而導(dǎo)致的各類(lèi)疾病，其中包括由HPV所引起的子宮頸炎、子宮頸息肉、子宮頸肥大、尖銳濕疣、乳腺癌、支氣管肺癌、直腸癌、食道癌、咽癌、口腔癌、皮膚癌等相關(guān)疾病。可以利用上述方法，但不局限于上述方法進(jìn)行臨床體外實(shí)驗(yàn)。
1權(quán)利要求
1.一種人乳頭瘤病毒藥物組合物，用于預(yù)防和治療由人乳頭瘤病毒所引起的相關(guān)疾病，其特征是它包括下述成份及用量范圍組成(1)HPV病毒樣顆粒(VLPs)吸附于佐劑，其VLPs濃度范圍為10 60μ g/ml ；(2)細(xì)胞因子免疫促進(jìn)劑，其活性范圍為1 5000萬(wàn)國(guó)際單位；(3)NaCl鹽溶液，其濃度范圍為0.IM 0. 4M ；(4)一種注射用的緩沖液，其濃度范圍5mM 20mM，保持疫苗的pH在5. 5 7. 5 ；(5)非離子表面活性劑，其濃度范圍0.0005% 0. 05% ；(6)以注射用水溶解。
2.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的藥物組合物，其特征是所包含的HPVVUs選自HPV6a、 HPV6b、HPVll、HPV16、HPV18、HPV31 或 HPV32 的一種、二種或二種以上任意組合。
3.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的藥物組合物，其特征是佐劑選自鋁佐劑、fe3(P04)2、MF59、 SAF、QS21、3D-MPL、ISC0M、PLG、AGP、脂質(zhì)A衍生物或CpG的一種、二種或二種以上任意組合。
4.根據(jù)權(quán)利要求3中所述的藥物組合物，其特征是鋁佐劑選自氫氧化鋁(Al(OH)3)佐劑，磷酸鋁(AlPO4)佐劑，羥基磷酸鋁佐劑，非晶形的羥基磷酸鋁硫酸鹽(AAiB)佐劑，明礬 (KAl (SO4)-12H20)佐劑或納米鋁佐劑。
5.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的藥物組合物，其特征是細(xì)胞因子免疫促進(jìn)劑選自干擾素 (IFN)，白細(xì)胞介素(IL)，粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)或趨化因子(TCA)的一種、二種或二種以上任意組合。
6.根據(jù)權(quán)利要求5中所述的藥物組合物，其特征是所述的細(xì)胞因子免疫促進(jìn)劑選自白細(xì)胞介素(IL)。
7.根據(jù)權(quán)利要求6中所述的藥物組合物，其特征是所述的白細(xì)胞介素(IL)選自白細(xì)胞介素(II)、
8.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的藥物組合物，其特征是緩沖液選自磷酸鹽緩沖液或組氨酸緩沖液。
9.根據(jù)權(quán)利要求1中所述的藥物組合物，其特征是非離子表面活性劑選自聚山梨酯 80或聚山梨酯20。
10.根據(jù)權(quán)利要求1中所述藥物組合物的應(yīng)用，其特征是其給藥途徑為皮內(nèi)注射、皮下注射、皮下輸液、肌內(nèi)注射、靜脈注射或靜脈輸液。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種用于預(yù)防和治療由人乳頭瘤病毒所引起相關(guān)疾病的人乳頭瘤病毒藥物組合物，其特征在于由以下成分組成為活性成分的人乳頭瘤病毒樣顆粒(HPV VLPs)、為促進(jìn)免疫反應(yīng)的佐劑，為激活細(xì)胞免疫使之持久且高效產(chǎn)生免疫應(yīng)答的細(xì)胞因子免疫促進(jìn)劑、為維持VLPs完整空間構(gòu)型和一定溶解度的鹽溶液、維持一定pH值生理上可相溶的緩沖液、保護(hù)VLPs避免劇烈震蕩而導(dǎo)致活性下降的非離子表面活性劑、余量為水。其特點(diǎn)是將HPV VLPs制備成保持其完整的空間構(gòu)型的、高效免疫的、儲(chǔ)存穩(wěn)定的液體藥物組合物。用于預(yù)防和治療由于HPV感染所導(dǎo)致的各類(lèi)疾病，具有使用安全、方便、經(jīng)濟(jì)、無(wú)任何副作用等特點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61K39/39GK102349996SQ20111031351
公開(kāi)日2012年2月15日 申請(qǐng)日期2011年10月17日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月17日
發(fā)明者侯緒鳳, 劉穎, 包士中, 婁競(jìng), 李柯, 袁杰, 靳征 申請(qǐng)人:沈陽(yáng)三生制藥有限責(zé)任公司