專利名稱：吡非尼酮在制備防治眼科手術(shù)后增殖性疾病的藥物中的應(yīng)用及其滴眼液的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于防治眼科疾病的藥物領(lǐng)域，具體涉及吡非尼酮在制備防治眼科手術(shù)后增殖性疾病，特別是白內(nèi)障手術(shù)后晶狀體后囊膜混濁的藥物中的應(yīng)用及其滴眼液。
背景技術(shù)：
白內(nèi)障是全球排名第一位的致盲眼病。白內(nèi)障的防治研究是防盲治盲及公共衛(wèi)生工作的重點項目，具有顯著的現(xiàn)實意義。目前白內(nèi)障的防治以手術(shù)治療-白內(nèi)障囊外摘除或超聲乳化白內(nèi)障吸出聯(lián)合人工晶體植入術(shù)為主。隨著手術(shù)技術(shù)日臻完善及手術(shù)器械的不斷發(fā)展，白內(nèi)障手術(shù)的成功率和復(fù)明質(zhì)量已大幅提高，絕大部分白內(nèi)障患者可以通過手術(shù)治療復(fù)明，但是白內(nèi)障術(shù)后發(fā)生的后囊膜混濁(posterior capsule opacification, PCO, 也即后發(fā)性白內(nèi)障)卻不同程度的對患者造成視物遮擋，成為最大的影響白內(nèi)障患者術(shù)后視功能恢復(fù)的因素。因此如何預(yù)防或減少晶狀體后囊膜或囊袋的纖維化，減少PCO的發(fā)生， 是目前白內(nèi)障防治的重點之一。PCO是白內(nèi)障術(shù)后殘留的晶狀體上皮細(xì)胞增殖及膠原產(chǎn)生以及囊袋纖維化皺縮所引起。PCO目前的防治方法主要是針對晶狀體上皮細(xì)胞的增殖、分化、遷移，以及晶狀體囊袋纖維化的抗細(xì)胞代謝藥和對細(xì)胞因子進(jìn)行適當(dāng)調(diào)控的制劑等(細(xì)胞因子受體抑制劑)。近幾年來隨著對預(yù)防后發(fā)性白內(nèi)障多途徑的研究，人們發(fā)現(xiàn)多肽生長因子在PCO的形成和發(fā)展中起著重要的作用，其中TGF-β家族是傷口修復(fù)纖維化的系列反應(yīng)(包括細(xì)胞增殖、分化、遷移等)的啟動點之一，TGF-β因子在誘導(dǎo)、調(diào)節(jié)細(xì)胞外基質(zhì)降解等方面起正性調(diào)控作用。如能減少或阻斷TGF-β的表達(dá)，將能從該途徑阻斷或干擾晶狀體囊創(chuàng)傷愈合過程的纖維化進(jìn)程，達(dá)到減少PCO的目的。吡非尼酮(pirfenidone，PFD)是一種新型廣譜的抗炎抗纖維化藥物，為吡啶酮衍生物，化學(xué)名為5-甲基-1-苯基-2 [1H]-吡啶酮，分子量為185. 23，常溫下為白色或淡黃色粉末。目前PFD的口服制劑已經(jīng)在歐美、日本和印度上市，被廣泛應(yīng)用于全身多種組織纖維化疾病治療中，能下調(diào)多種細(xì)胞因子的產(chǎn)生，抑制膠原合成，以及阻止成纖維細(xì)胞增殖，抗纖維化作用顯著，且細(xì)胞毒性小，安全、高效。目前吡非尼酮口服制劑已用于特發(fā)性肺纖維化、多發(fā)性硬化、原發(fā)性硬化性膽管炎、慢性丙型肝炎、骨髓纖維變性、神經(jīng)纖維瘤病、硬化性腹膜炎和纖維變性腎功能障礙的抗纖維化臨床治療中。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的第一個目的是提供吡非尼酮在制備防治眼科手術(shù)后增殖性疾病的藥物中的應(yīng)用。所述的吡非尼酮在制備防治眼科手術(shù)后增殖性疾病的藥物中的應(yīng)用，尤其是指吡非尼酮在制備防治白內(nèi)障術(shù)后后囊膜混濁的藥物中的應(yīng)用。所述的藥物優(yōu)選為滴眼液。
本發(fā)明的第二個目的是提供一種新型、可局部應(yīng)用、安全高效的用于防治眼科手術(shù)后增殖性疾病的滴眼液，其特征在于，包括有效劑量的吡非尼酮和輔料。優(yōu)選，按總質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計，所述的吡非尼酮在滴眼液中的含量為0. 5 1 %，進(jìn)一步優(yōu)選為0. 5%。優(yōu)選，所述的滴眼液，按總質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計，含有吡非尼酮0. 5 1%、NaCl 0. 7 0. 75%、枸櫞酸鈉0. 2%、硫柳汞0. 002%、余量為水。藥理學(xué)實驗一、吡非尼酮滴眼液眼內(nèi)藥代動力學(xué)研究取實施例2配制好的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0. 5%的吡非尼酮滴眼液分別放置于常溫及冰箱冷藏保存6個月，觀察其色澤，顏色、溶解度、pH值及含量的穩(wěn)定性。取常溫保存6個月、冷藏保存6個月的0. 5%的吡非尼酮滴眼液各1ml，置IOOml 容量瓶中，加入甲醇溶液至稀釋至100ml，搖勻，備用。檢測時再分別取上述溶液O.aiil，加 Λ 1. 8ml甲醇溶液，搖勻，12000rpm離心5min,取上清20 μ 1進(jìn)樣行HPLC檢測，以吡非尼酮的標(biāo)準(zhǔn)品作為參照。以外標(biāo)法吡啡尼酮峰面積比計算含量回收率。結(jié)果表明0. 5%的吡非尼酮滴眼液常溫保存6月、冷藏保存6月均無色透明，未見有變色、混濁、沉淀物及結(jié)晶等改變，HPLC檢測無雜峰。表1表示的是常溫保存6月及冷藏保存6個月后含量回收率測定RSD及RE均小于士的規(guī)定值。PH值穩(wěn)定，常溫保存與冷藏保存無差異。說明該滴眼液穩(wěn)定好，可以常溫或冷藏保存。表1 0. 5%吡非尼酮滴眼液含量回收率測定結(jié)果
ι V 11‘IOO0O)PH Ι Ι,':.;:「。: .Y 6 1·；；,"" I fi.' /,' f 11 . M . I > ； I.5 ■ ( 6 .JΙ'-,Ι' ΙΙΙ ‘ MEAN= RE i % ) RSD (%):SD) 100.8=0,1 0.78 0.06ioas±o.i * 0.84 0.126.76±0.0 -3.38 0.231 6.SO=CKOl -2.86 0.15 女 P > 0. 05將新西蘭大白兔(雌雄不拘，體重2 2. ^g，購自廣東省醫(yī)學(xué)實驗動物中心)60 只，隨機分為10組，用微量移液器準(zhǔn)確量取50 μ 1 0.5%的吡非尼酮滴眼液滴入結(jié)膜囊，輕拉下瞼確保液體不溢出。分別于滴眼后2、5、8、10、15、20、30、60、90、120min分鐘處死一組兔子，迅速摘取眼球，抽取房水、玻璃體，剪除結(jié)膜、角膜、鞏膜等組織，生理鹽水沖洗，濾紙吸干，置于EP管內(nèi)稱重，-20°C冷藏備用。組織剪碎勻漿后用500μ1甲醇萃取，離心取上清 40°C溫浴氮氣吹干，IOOyl甲醇重新定容，離心取上清進(jìn)樣行HPLC檢測藥物濃度。濃度計算采用加權(quán)最小二乘法進(jìn)行回歸分析。均數(shù)間的比較采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件分析。藥代動力學(xué)參數(shù)采用wirmonlin 5. 0軟件進(jìn)行非房室模型數(shù)據(jù)處理。研究結(jié)果表明吡非尼酮具有較好的眼內(nèi)穿透性，角膜、結(jié)膜、鞏膜、房水中消除半衰期分別為 18. 26,34. 2,39. 48、15. 71min，峰濃度分別達(dá) 9. 64mg/g,9. 62mg/g,2. 13mg/ g、34.88mg/L。藥物在這4種組織的半衰期均較短，代謝快。玻璃體內(nèi)藥物濃度較低為 0. 52mg/L,半衰期相對較長達(dá)為70. Qlmin0本實驗發(fā)現(xiàn)吡非尼酮在兔眼具有良好的組織穿透性，可在房水中達(dá)到較高濃度，能夠從眼內(nèi)外同時發(fā)揮抗瘢痕化的作用。由于它在眼組織中的消除半衰期短，需要頻繁滴眼才能維持有效濃度。為了減少滴眼的次數(shù)，可采用在滴眼液中加入賦形劑的方法，增加淚液黏度，使藥物分布更均勻，減少藥物經(jīng)淚道排出的速率。目前常用的有生物黏附性凝膠，其中包括羥丙纖維素(HPC)、聚丙烯酸類(PAA)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙二醇(PEG)、聚半乳糖醛酸(PLA)、木質(zhì)葡聚糖(xyloglucan)、葡聚糖 (Dextrans)等；在位形成凝膠，如溫度敏感型有Poloxamer (泊洛沙姆)等，pH值敏感型有卡波姆(carbopol)，離子敏感型凝膠有海藻酸鹽等。這些賦形劑都可以增加藥物在眼表的停留時間，提高藥物的生物利用度。另外還有脂質(zhì)體、納米顆粒、眼植入物等多種緩釋或提高眼內(nèi)通透性的輔助措施可以增強眼內(nèi)藥物的濃度。因此，吡非尼酮作為滴眼劑在眼部具有廣闊的應(yīng)用前景。二、吡非尼酮滴眼液眼內(nèi)毒性研究1、實驗動物新西蘭大白兔，雌雄不拘，體重2-2. 5Kg,隨機分入空白對照、0. 1 %、0. 5 %、1 %的吡非尼酮滴眼液(即分別是實施例1、2和3的滴眼液)，MMC(0. 25mg/ml)(批號:505AGB， Kyowa Hakko Kogyo公司)組各3只。均采用小梁切除術(shù)處理。取材時摘除眼球后，迅速用雙面刀片將眼球剖成兩半，取手術(shù)對側(cè)半眼球分別固定于FFA眼球固定液與2. 5%戊二醛緩沖液中。眼表耐受性試驗采用未經(jīng)處理的新西蘭白兔，每組3只，共12只。2、實驗方法2. 1給藥方式空白對照組不做任何處理；滴眼液組每日6次，每次1滴，持續(xù)28天；MMC組眼球于術(shù)中0. 25mg/ml的MMC棉片放置于鞏膜及結(jié)膜瓣下5分鐘后大量生理鹽水沖洗凈殘余MMC。2. 2眼表毒性評價眼表毒性采用改良的Draize Test評價方法，眼刺激反應(yīng)評分和眼刺激評價標(biāo)準(zhǔn)如表2和表3所示。表2:眼刺激反應(yīng)評分
權(quán)利要求
1.吡非尼酮在制備防治眼科手術(shù)后增殖性疾病的藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的眼科手術(shù)后增殖性疾病為白內(nèi)障術(shù)后后囊膜混濁。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述的藥物為滴眼液。
4.一種用于防治眼科手術(shù)后增殖性疾病的滴眼液，其特征在于，包括有效劑量的吡非尼酮和輔料。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的用于防治眼科手術(shù)后增殖性疾病的滴眼液，其特征在于，按總質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計，所述的吡非尼酮在滴眼液中的含量為0. 5 1%。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用于防治眼科手術(shù)后增殖性疾病的滴眼液，其特征在于，按總質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計，所述的吡非尼酮在滴眼液中的含量為0. 5%。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用于防治眼科手術(shù)后增殖性疾病的滴眼液，其特征在于，所述的滴眼液，按總質(zhì)量分?jǐn)?shù)100%計，含有吡非尼酮0. 5 l%、NaCl 0. 7 0. 75%、枸櫞酸鈉0. 2%、硫柳汞0. 002%、余量為水。
全文摘要
本發(fā)明公開了吡非尼酮在制備防治眼科手術(shù)后增殖性疾病的藥物中的應(yīng)用及其滴眼液。本發(fā)明將吡非尼酮配制成滴眼液，經(jīng)過實驗發(fā)現(xiàn)，其穩(wěn)定性好，并且具有較好的眼內(nèi)組織穿透性，能抑制HLECs的遷移和增殖，在作用范圍(0～1mg/ml)內(nèi)對HLECs無細(xì)胞毒性，吡非尼酮在0～1％范圍內(nèi)，在眼部連續(xù)用藥，一個月內(nèi)用藥安全，無明顯毒副作用。吡非尼酮可延緩?fù)醚跴haco術(shù)后PCO的發(fā)生，減少HLECs的增殖，減少PCO對光學(xué)區(qū)的遮擋，且PFD應(yīng)用于兔眼Phaco術(shù)后未見明顯眼表損傷或術(shù)后炎癥加重，未見嚴(yán)重不良反應(yīng)發(fā)生。因此本發(fā)明的吡非尼酮可以用于防治眼科手術(shù)后增殖性疾病，特別是白內(nèi)障術(shù)后發(fā)生的后囊膜混濁。
文檔編號A61P7/02GK102349901SQ20111022884
公開日2012年2月15日 申請日期2011年8月10日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月10日
發(fā)明者余敏斌, 葉成添, 孫國英, 楊揚帆, 林羨釵 申請人:中山大學(xué)中山眼科中心