專(zhuān)利名稱(chēng)：：截短的人乳頭瘤病毒58型l1蛋白的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及分子病毒學(xué)和免疫學(xué)領(lǐng)域。具體地，本發(fā)明涉及一種截短的人乳頭瘤病毒58型Ll蛋白，其編碼序列和制備方法，以及包含其的病毒樣顆粒，所述蛋白和病毒樣顆?？捎糜陬A(yù)防HPV(特別是HPV58)感染及由HPV(特別是HPV58)感染所導(dǎo)致的疾病例如宮頸癌等。本發(fā)明還涉及上述蛋白和病毒樣顆粒用于制備藥物組合物或疫苗的用途，所述藥物組合物或疫苗用于預(yù)防HPV(特別是HPV58)感染及由HPV(特別是HPV58)感染所導(dǎo)致的疾病例如宮頸癌等。
背景技術(shù)：
：人乳頭瘤病毒(HumanPapillomavirus,HPV)屬于乳頭瘤病毒科(Papillomaviridae)，為無(wú)包膜DNA病毒。該病毒基因組為雙鏈閉環(huán)DNA，大小約為7.281Λ，具有8個(gè)開(kāi)放閱讀框。該病毒基因組按功能的不同可以分為三個(gè)區(qū)域①早期區(qū)(E)，約4.51Λ，編碼El、E2、E4E7共6個(gè)與病毒復(fù)制，轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)化有關(guān)的非結(jié)構(gòu)蛋白；②晚期區(qū)(L)，約2.51Λ，編碼主要衣殼蛋白Ll和次要衣殼蛋白L2；③長(zhǎng)調(diào)控區(qū)(LCR)，位于L區(qū)末端與E區(qū)起始端之間，長(zhǎng)約800900bp，不編碼任何蛋白，含DNA復(fù)制和表達(dá)調(diào)控元件。HPV病毒顆粒直徑為4555nm，核衣殼呈20面體對(duì)稱(chēng)，有72個(gè)殼微粒，由Ll及L2組成。目前已知的HPV約有100多種亞型，在人群中主要引起皮膚，粘膜的疣狀病變。根據(jù)其與腫瘤發(fā)生的關(guān)系，HPV可分為3組①低或無(wú)致癌風(fēng)險(xiǎn)組，包括HPV6、11、39、41、42、43；②中度致癌風(fēng)險(xiǎn)組，包括HPV31、33、35、51、52；③高度致癌風(fēng)險(xiǎn)組，包括HPV16、18、58、45。HPV分子流行病學(xué)調(diào)查證實(shí)，高危型HPV感染是宮頸癌發(fā)生的重要啟動(dòng)因子。在所有宮頸癌標(biāo)本中，HPVDNA檢出率高達(dá)80%以上。宮頸癌是一種常見(jiàn)的女性惡性腫瘤，其發(fā)病率僅次于乳腺癌，是嚴(yán)重威脅女性健康的殺手。據(jù)統(tǒng)計(jì)，每年世界范圍內(nèi)約有490，000例的新發(fā)病例，約有270，000人死于該疾病(Boyle,P.，andJ.Ferlay.AnnOncol2005,16481-8)。在所有宮頸癌病例中，發(fā)生于發(fā)展中國(guó)家的占了約83%，在這些國(guó)家中，宮頸癌甚至能夠占到女性惡性腫瘤的15%。而在發(fā)達(dá)國(guó)家，這個(gè)數(shù)字僅占到1.5%。在撒哈拉以南地區(qū)，中南亞，拉丁美洲，東亞均為宮頸癌的高發(fā)區(qū)。我國(guó)也屬于宮頸癌高發(fā)區(qū)。在陜西略陽(yáng)縣，已婚婦女中宮頸癌的發(fā)病率高達(dá)1(^6/100000。有關(guān)世界范圍內(nèi)宮頸癌標(biāo)本中HPV型別分布的薈萃分析發(fā)現(xiàn)，宮頸癌中最常見(jiàn)的HPV型別依次是16、18、45、31、33、58、52、35、59、56、6、51、68、39、82、73、66和70(按照降序排列，CliffordGM,SmithJS,PlummerΜ,etal.BrJCancer,2003,88(1):63-73)。然而，HPV的型別分布表現(xiàn)出一定的地理分布及人群特點(diǎn)。特別地，在亞洲，HPV58的感染率高于歐美等發(fā)達(dá)國(guó)家。近期一項(xiàng)對(duì)中國(guó)婦女感染HPV型別的調(diào)查結(jié)果表明，在宮頸癌患者中HPV58的感染率為7.2%，在HPV16(58.7%)和HPV18(11.0%)之后，位于第3位，并且在高度鱗狀上皮病變、低度鱗狀上皮病變和正常婦女中，HPV58的感染率僅次于HPV16，位于第2位(YPBao,NLi,JSSmithandYLQiao.InternationalJournalofSTD&AIDS，2008，19:106-111)。這說(shuō)明HPV58在中國(guó)婦女中的感染率高于世界范圍水平，HPV58是中國(guó)婦女以及亞洲婦女普遍易感染的HPV型別。目前已上市的HPV疫苗為Merck的Gardasi1及GSK的Cervarix,上述兩種疫苗分別含有HPV6/11/16/18及HPV16/18VLP，但均不包含在中國(guó)及亞洲婦女中普遍易感的HPV58型別。因此，針對(duì)中國(guó)以及亞洲等發(fā)展中國(guó)家婦女安全有效的HPV疫苗，特別是針對(duì)HPV16,18及58等高危型別的疫苗，是有效預(yù)防宮頸癌，改善廣大婦女健康狀況，特別是我國(guó)及亞洲婦女健康狀況的有效途徑。HPVLl蛋白為主要衣殼蛋白，分子量為55_60kDa，是HPV疫苗主要靶蛋白。在多種表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)的HPVLl蛋白無(wú)需L2蛋白輔助即可形成在形態(tài)結(jié)構(gòu)上與天然病毒顆粒相似的病毒樣顆粒(Virus-LikeParticle，VLP)。該病毒樣顆粒為二十面體立體對(duì)稱(chēng)結(jié)構(gòu)，由72個(gè)Ll蛋白的五聚體組成。其保留了病毒顆粒的天然表位，具有較強(qiáng)的免疫原性，可誘導(dǎo)針對(duì)同型HPV病毒的中和抗體(Kirnbauer，R.，F(xiàn).Booy，etal.1992ProcNatlAcadSciUSA89(24):12180-4)。并且，病毒樣顆粒不帶有病毒核酸，無(wú)潛在致癌危險(xiǎn)，具有良好的安全性。因此，VLP疫苗已成為HPV疫苗發(fā)展的主要方向。HPVVLP疫苗研制的關(guān)鍵是能夠大量高效制備VLP樣品。目前較為常用的VLP表達(dá)系統(tǒng)可以分為真核表達(dá)系統(tǒng)及原核表達(dá)系統(tǒng)。常用的真核表達(dá)系統(tǒng)有痘病毒表達(dá)系統(tǒng)、昆蟲(chóng)桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)、酵母表達(dá)系統(tǒng)。在真核表達(dá)系統(tǒng)中所表達(dá)的HPVLl蛋白天然構(gòu)象破壞少，能自發(fā)形成VLP，往往只需進(jìn)行簡(jiǎn)單的密度梯度離心即可得到純化的VLP，為純化工作提供極大的便利。但是由于真核表達(dá)系統(tǒng)的表達(dá)量低，培養(yǎng)成本高，給大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)帶來(lái)了極大困難。目前已上市的HPV疫苗Gardasi1采用了釀酒酵母表達(dá)系統(tǒng)，其表達(dá)量低，生產(chǎn)成本高，因此該產(chǎn)品價(jià)位偏高，影響其廣泛應(yīng)用。在原核表達(dá)系統(tǒng)中利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)HPVLl蛋白已有報(bào)道。例如已報(bào)道利用大腸桿菌表達(dá)HPV16Ll蛋白(Banks,L.，G.Matlashewski，etal.(1987).JGenVirol68(Pt12):3081-9)。但是大腸桿菌表達(dá)的HPVLl蛋白大多失去其天然構(gòu)象，不能產(chǎn)生針對(duì)HPV的保護(hù)抗體?；蛘弑M管上述蛋白通過(guò)包含體純化，復(fù)性等步驟也可得到HPVVLP(Kelsall,S.R.andJ.K.Kulski(1995).JVirolMethods53(1):75-90)，但是在復(fù)性過(guò)程中蛋白損失量大，得率低，因此，難以在大規(guī)模生產(chǎn)上應(yīng)用。雖然HPVLl蛋白也可以在大腸桿菌中以正確構(gòu)象可溶性地表達(dá)，溶解于菌體的裂解上清中，但是其表達(dá)量較低，而且上清中雜蛋白種類(lèi)多且量大，要從中純化出目的蛋白難度相當(dāng)大。雖然也有文獻(xiàn)報(bào)道通過(guò)GST融合表達(dá)的方式可以增加上清中Ll蛋白的表達(dá)量，而且有助目的蛋白的純化(Li，M.，T.P.Cripe,etal.(1997).JVirol71(4):2988-95)，但融合蛋白的切割往往需要價(jià)格昂貴的酶，依然無(wú)法應(yīng)用于大規(guī)模生產(chǎn)。因此，本領(lǐng)域仍然需要能夠低成本獲得且能夠誘導(dǎo)針對(duì)HPV的保護(hù)性抗體的HPVLl蛋白及由其組成的病毒樣顆粒，從而使大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)宮頸癌疫苗成為可能。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明至少部分基于發(fā)明人的出人意料的發(fā)現(xiàn)利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)能大量表達(dá)可以誘導(dǎo)針對(duì)HPV58的中和抗體的截短的HPV58L1蛋白，該截短的HPV58L1蛋白具有高產(chǎn)率，且經(jīng)純化后蛋白的純度可達(dá)到至少50%或更高(例如60%，70%，80%，90%，95%，96%，97%，98%，99%)，并且純化后的所述蛋白經(jīng)進(jìn)一步處理可得到可誘導(dǎo)針對(duì)HPV58的保護(hù)性抗體的病毒樣顆粒。因此，在一個(gè)方面，本發(fā)明涉及N端截短了5-70個(gè)氨基酸，例如5-60個(gè)、15_60個(gè)、20-50個(gè)、30-45個(gè)、；35-40個(gè)，例如5個(gè)、15個(gè)、27個(gè)、；35個(gè)、40個(gè)、60個(gè)或70個(gè)氨基酸的HPV58L1蛋白或其變體。在一個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種截短的HPV58L1蛋白或其變體，其與野生型HPV58L1蛋白相比，N端截短了5-70個(gè)氨基酸，例如5-60個(gè)、15-60個(gè)、20-50個(gè)、30-45個(gè)、35-40個(gè)，例如5個(gè)、15個(gè)、27個(gè)、35個(gè)、40個(gè)、60個(gè)或70個(gè)氨基酸。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，與野生型HPV58L1蛋白相比，該截短的HPV58L1蛋白的N端截短了5-70個(gè)氨基酸，例如5個(gè)、15個(gè)、27個(gè)、35個(gè)、40個(gè)、60個(gè)或70個(gè)氨基酸。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，與野生型HPV58L1蛋白相比，該截短的HPV58L1蛋白的N端截短了35個(gè)氨基酸。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，該截短的HPV58L1蛋白(以下也簡(jiǎn)稱(chēng)為截短蛋白)具有SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO6或SEQIDN0:7所示的氨基酸序列。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，該截短蛋白具有如SEQIDNO:1所示的氨基酸序列。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及編碼本發(fā)明的截短蛋白或其變體的多核苷酸以及含有該多核苷酸的載體。可用于插入目的多核苷酸的載體是本領(lǐng)域公知的，包括但不限于克隆載體和表達(dá)載體。在一個(gè)實(shí)施方案中，載體是例如質(zhì)粒，粘粒，噬菌體，柯斯質(zhì)粒等等。在另一個(gè)方面，本發(fā)明還涉及包含上述多核苷酸或載體的宿主細(xì)胞。此類(lèi)宿主細(xì)胞包括但不限于，原核細(xì)胞例如大腸桿菌細(xì)胞，以及真核細(xì)胞例如酵母細(xì)胞，昆蟲(chóng)細(xì)胞，植物細(xì)胞和動(dòng)物細(xì)胞(如哺乳動(dòng)物細(xì)胞，例如小鼠細(xì)胞、人細(xì)胞等)。本發(fā)明的宿主細(xì)胞還可以是細(xì)胞系，例如細(xì)胞。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種HPV58病毒樣顆粒，其中該病毒樣顆粒含有本發(fā)明的截短蛋白或其變體，或者由本發(fā)明的截短蛋白或其變體組成或形成。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的HPV58病毒樣顆粒包含與野生型HPV58L1蛋白相比，N端截短了5-70個(gè)氨基酸，例如5-60個(gè)、15-60個(gè)、20-50個(gè)、30-45個(gè)、35-40個(gè)，例如5個(gè)、15個(gè)、27個(gè)、35個(gè)、40個(gè)、60個(gè)或70個(gè)氨基酸的截短的HPV58L1蛋白，或由所述蛋白組成或形成。在一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的HPV58病毒樣顆粒包含具有SEQIDN0:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO:6或SEQIDNO7所示序列的截短的HPV58L1蛋白，或由所述蛋白組成或形成。在另一個(gè)方面，本發(fā)明還涉及包含上述截短蛋白或其變體，或上述多核苷酸或載體或宿主細(xì)胞或HPV58病毒樣顆粒的組合物。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述組合物包含本發(fā)明的截短蛋白或其變體。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述組合物包含本發(fā)明的HPV58病毒樣顆粒。在另一個(gè)方面，本發(fā)明還涉及一種藥物組合物或疫苗，其包含本發(fā)明的HPV58病6毒樣顆粒，任選地還包含藥學(xué)可接受的載體和/或賦形劑。本發(fā)明的藥物組合物或疫苗可以用于預(yù)防HPV(特別是HPV58)感染或由HPV(特別是HPV58)感染所導(dǎo)致的疾病例如宮頸寺。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述HPV58病毒樣顆粒以預(yù)防HPV感染或?qū)m頸癌有效量存在。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物或疫苗還包含至少一種選自下列的病毒樣顆粒HPV6L1蛋白病毒樣顆粒，HPVlILl蛋白病毒樣顆粒，HPV16L1蛋白病毒樣顆粒，HPV18L1蛋白病毒樣顆粒，HPV31L1蛋白病毒樣顆粒，HPV33L1蛋白病毒樣顆粒，HPV45L1蛋白病毒樣顆粒，和HPV52L1蛋白病毒樣顆粒；優(yōu)選地，這些病毒樣顆粒各自獨(dú)立地以預(yù)防宮頸癌或者相應(yīng)HPV亞型感染有效量存在。本發(fā)明的藥物組合物或疫苗可通過(guò)本領(lǐng)域公知的方法進(jìn)行施用，例如但不限于通過(guò)口服或者注射進(jìn)行施用。在本發(fā)明中，特別優(yōu)選的施用方式是注射。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的藥物組合物或疫苗以單位劑量形式進(jìn)行施用。例如但不意欲限定本發(fā)明，每單位劑量中包含的HPV58病毒樣顆粒的量為5μg-80μg，優(yōu)選20μg-40yg。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種獲得本發(fā)明的截短蛋白的方法，其包括利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)本發(fā)明的截短蛋白，然后將含有該截短蛋白的裂解上清進(jìn)行純化處理。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，獲得本發(fā)明的截短蛋白的方法包括a)在大腸桿菌中表達(dá)所述截短蛋白，b)將表達(dá)所述截短蛋白的大腸桿菌在鹽濃度為100mM-600mM的溶液中破碎，分離得到上清液，c)用水或低鹽溶液將b)獲得的上清液的鹽濃度降至IOOmM或以下，最低至0，并收集沉淀，d)將c)獲得的沉淀在150mM-2500mM鹽溶液中重新溶解，同時(shí)加入還原劑，分離得到溶液，該溶液中含純度至少50%的截短的HPV58L1蛋白。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，上述步驟b)中的所述鹽濃度為200mM-500mM。更一般性地，本發(fā)明還涉及一種獲得HPVLl蛋白例如本發(fā)明的截短蛋白的方法，其包括a)在大腸桿菌中表達(dá)編碼HPVLl蛋白的HPVLl基因，b)將表達(dá)HPVLl蛋白的大腸桿菌在鹽濃度為100mM-600mM的溶液中破碎，分離得到上清液，c)用水或低鹽溶液將b)獲得的上清液的鹽濃度降至IOOmM或以下，最低至0，收集沉淀，d)將c)獲得的沉淀在150mM-2500mM鹽溶液中重新溶解，同時(shí)加入還原劑，分離得到溶液，該溶液中含純度至少50%的HPVLl蛋白。本發(fā)明還涉及一種獲得本發(fā)明的HPV58病毒樣顆粒的方法，其在如上獲得本發(fā)明的截短蛋白的基礎(chǔ)上，包括步驟e)將純度至少50%的本發(fā)明的截短的HPV58L1蛋白進(jìn)一步通過(guò)色譜層析進(jìn)行純化，f)將步驟e)中得到的截短蛋白去除還原劑。本發(fā)明還涉及一種制備疫苗的方法，其包括將本發(fā)明的HPV58病毒樣顆粒與藥學(xué)可接受的載體和/或賦形劑混合，任選地還混合一種或多種選自HPV6，11，16，18，31，33，45和52的HPV型別的病毒樣顆粒。如上所論述的，所獲得的疫苗可以用于預(yù)防HPV(特別是HPV58)感染或由HPV(特別是HPV58)感染所導(dǎo)致的疾病例如宮頸癌等。在另一個(gè)方面，本發(fā)明涉及一種預(yù)防HPV感染或由HPV感染所導(dǎo)致的疾病的方法，其包括將預(yù)防有效量的根據(jù)本發(fā)明的HPV58病毒樣顆?；蛩幬锝M合物或疫苗施用給受試者。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述HPV感染是HPV58感染。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述由HPV感染所導(dǎo)致的疾病包括但不限于，宮頸癌。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述受試者是哺乳動(dòng)物，例如人。在另一個(gè)方面，還涉及根據(jù)本發(fā)明的截短蛋白或其變體或HPV58病毒樣顆粒在制備藥物組合物或疫苗中的用途，所述藥物組合物或疫苗用于預(yù)防HPV感染或由HPV感染所導(dǎo)致的疾病。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述HPV感染是HPV58感染。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述由HPV感染所導(dǎo)致的疾病包括但不限于，宮頸癌。在另一個(gè)方面，還涉及根據(jù)本發(fā)明的截短蛋白或其變體或HPV58病毒樣顆粒，其用于預(yù)防HPV感染或由HPV感染所導(dǎo)致的疾病。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述HPV感染是HPV58感染。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述由HPV感染所導(dǎo)致的疾病包括但不限于，宮頸癌。本發(fā)明中相關(guān)術(shù)語(yǔ)的說(shuō)明及解釋在本發(fā)明中，除非另有說(shuō)明，否則本文中使用的科學(xué)和技術(shù)名詞具有本領(lǐng)域技術(shù)人員所通常理解的含義。并且，本文中所用的細(xì)胞培養(yǎng)、分子遺傳學(xué)、核酸化學(xué)、免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)室操作步驟均為相應(yīng)領(lǐng)域內(nèi)廣泛使用的常規(guī)步驟。同時(shí)，為了更好地理解本發(fā)明，下面提供相關(guān)術(shù)語(yǔ)的定義和解釋。根據(jù)本發(fā)明，表述“N端截短了X個(gè)氨基酸的蛋白質(zhì)”是指，用起始密碼子(用于起始蛋白質(zhì)翻譯)編碼的甲硫氨酸殘基置換蛋白質(zhì)N末端的第I-X位氨基酸殘基所獲得的蛋白質(zhì)。例如N端截短了35個(gè)氨基酸的HPV58L1蛋白是指，用起始密碼子編碼的甲硫氨酸殘基置換野生型HPV58L1蛋白N末端的第1-35位氨基酸殘基所獲得的蛋白質(zhì)。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語(yǔ)“變體”是指這樣的蛋白，其氨基酸序列與本發(fā)明的截短的HPV58L1蛋白(如SEQIDNO:1或SEQIDNO2所示的蛋白)的氨基酸序列具有一個(gè)或多個(gè)(例如1-10個(gè)或1-5個(gè)或1-3個(gè))氨基酸不同(例如保守氨基酸置換)或者具有至少60%，80%，85%，90%，95%，96%，97%，98%，或99%的同一性，并且其保留了所述截短蛋白的必要特性。此處術(shù)語(yǔ)“必要特性”可以是如下特性中的一個(gè)或者多個(gè)能夠誘導(dǎo)針對(duì)HPV58的中和抗體；能夠在大腸桿菌中可溶性地表達(dá)；利用本發(fā)明所涉及的表達(dá)純化方法能夠獲得高產(chǎn)率的純化蛋白。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語(yǔ)“同一性”用于指兩個(gè)多肽之間或兩個(gè)核酸之間序列的匹配情況。當(dāng)兩個(gè)進(jìn)行比較的序列中的某個(gè)位置都被相同的堿基或氨基酸單體亞單元占據(jù)時(shí)(例如，兩個(gè)DNA分子的每一個(gè)中的某個(gè)位置都被腺嘌呤占據(jù)，或兩個(gè)多肽的每一個(gè)中的某個(gè)位置都被賴(lài)氨酸占據(jù))，那么各分子在該位置上是同一的。兩個(gè)序列之間的“百分?jǐn)?shù)同一性”是由這兩個(gè)序列共有的匹配位置數(shù)目除以進(jìn)行比較的位置數(shù)目XlOO的函數(shù)。例如，如果兩個(gè)序列的10個(gè)位置中有6個(gè)匹配，那么這兩個(gè)序列具有60%的同一性。例如，DNA序列CTGACT和CAGGTT共有50%的同一性(總共6個(gè)位置中有3個(gè)位置匹配)。通常，在將兩個(gè)序列比對(duì)以產(chǎn)生最大同一性時(shí)進(jìn)行比較。這樣的比對(duì)可通過(guò)使用，例如，可通過(guò)計(jì)算機(jī)程序例如Align程序(DNAstar,Inc.)方便地進(jìn)行的Needleman等人(1970)J.Mol.Biol.48=443-453的方法來(lái)實(shí)現(xiàn)。還可使用已整合入ALIGN程序(版本2.0)的E.Meyers和W.Miller(Comput.ApplBiosci.，4:11-17(1988))的算法，使用PAMl20權(quán)重殘基表(weightresiduetable),12的缺口長(zhǎng)度罰分和4的缺口罰分來(lái)測(cè)定兩個(gè)氨基酸序列之間的百分?jǐn)?shù)同一性。此外，可使用已整合入GCG軟件包(可在誦.gcg.com上獲得)的GAP程序中的Needleman和Wunsch(JMoIBiol.48:444-453(1970))算法，使用Blossum62矩陣或PAM250矩陣以及16、14、12、10、8、6或4的缺口權(quán)重(gapweight)和1、2、3、4、5或6的長(zhǎng)度權(quán)重來(lái)測(cè)定兩個(gè)氨基酸序列之間的百分?jǐn)?shù)同一性。如本文中使用的，術(shù)語(yǔ)“保守置換”意指不會(huì)不利地影響或改變包含氨基酸序列的蛋白/多肽的生物學(xué)活性的氨基酸置換。例如，可通過(guò)本領(lǐng)域內(nèi)已知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)例如定點(diǎn)誘變和PCR介導(dǎo)的誘變引入保守置換。保守氨基酸置換包括用具有相似側(cè)鏈的氨基酸殘基替代氨基酸殘基的置換，例如用在物理學(xué)上或功能上與相應(yīng)的氨基酸殘基相似(例如具有相似大小、形狀、電荷、化學(xué)性質(zhì)，包括形成共價(jià)鍵或氫鍵的能力等)的殘基進(jìn)行的置換。已在本領(lǐng)域內(nèi)定義了具有相似側(cè)鏈的氨基酸殘基的家族。這些家族包括具有堿性側(cè)鏈(例如，賴(lài)氨酸、精氨酸和組氨酸)、酸性側(cè)鏈(例如天冬氨酸、谷氨酸)、不帶電荷的極性側(cè)鏈(例如甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、色氨酸)、非極性側(cè)鏈(例如丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸)、β分支側(cè)鏈(例如，蘇氨酸、纈氨酸、異亮氨酸)和芳香族側(cè)鏈(例如，酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、組氨酸)的氨基酸。因此，優(yōu)選用來(lái)自相同側(cè)鏈家族的另一個(gè)氨基酸殘基替代相應(yīng)的氨基酸殘基。鑒定氨基酸保守置換的方法在本領(lǐng)域內(nèi)是熟知的(參見(jiàn)，例如，Brummell等人，Biochem.32:1180-1187(1993)；Kobayashi等人ProteinEng.12(10):879-884(1999)；禾口Burks等人Proc.NatlAcad.SetUSA94:412-417(1997)，其通過(guò)引用并入本文)。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語(yǔ)“大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)”是指由大腸桿菌(菌株)與載體組成的表達(dá)系統(tǒng)，其中大腸桿菌(菌株)來(lái)源于市場(chǎng)上可得到的菌株，例如但不限于GI698、ER2566、BL21(DE3),B834(DE3),BLR(DE3)等等。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語(yǔ)“載體(vector)”是指，可將多核苷酸插入其中的一種核酸運(yùn)載工具。當(dāng)載體能使插入的多核苷酸所編碼的蛋白獲得表達(dá)時(shí)，載體稱(chēng)為表達(dá)載體。載體可以通過(guò)轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)導(dǎo)或者轉(zhuǎn)染導(dǎo)入宿主細(xì)胞，使其攜帶的遺傳物質(zhì)元件在宿主細(xì)胞中獲得表達(dá)。載體是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，包括但不限于質(zhì)粒；噬菌體；柯斯質(zhì)粒等等。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語(yǔ)“截短的HPV58L1蛋白”是指在野生型HPV58L1蛋白的N端和/或C端去掉一個(gè)或者多個(gè)氨基酸后的蛋白質(zhì)，其中野生型HPV58L1蛋白的例子包括但不限于NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中的ACJi;3480、ACX32376.1或ACK37663.1等全長(zhǎng)Ll蛋白。在本發(fā)明中，術(shù)語(yǔ)“截短的HPV58L1蛋白基因片段”是指這樣的基因片段，其與野生型HPV58L1蛋白基因相比，在5'端或3'端缺失編碼一個(gè)或多個(gè)氨基酸的核苷酸，其中野生型HPV58L1蛋白基因的全長(zhǎng)序列例如但不限于NCBI數(shù)據(jù)庫(kù)中的如下序列AY101598.2、D90400.UFJ407208.UFJ615305.1和FN178626.1等。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語(yǔ)“藥學(xué)可接受的載體和/或賦形劑”是指在藥理學(xué)和/或生理學(xué)上與受試者和活性成分相容的載體和/或賦形劑，其是本領(lǐng)域公知的(參見(jiàn)例如Remington‘sPharmaceuticalSciences.EditedbyGennaroAR,19thed.Pennsylvania=MackPublishingCompany，1995)，并且包括但不限于pH調(diào)節(jié)劑，表面活性劑，佐劑，離子強(qiáng)度增強(qiáng)劑。例如，PH調(diào)節(jié)劑包括但不限于磷酸鹽緩沖液；表面活性劑包括但不限于陽(yáng)離子，陰離子或者非離子型表面活性劑，例如Tween-80；佐劑包括但不限于鋁佐劑(例如氫氧化鋁)，弗氏佐劑(例如完全弗氏佐劑)；離子強(qiáng)度增強(qiáng)劑包括但不限于氯化鈉。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語(yǔ)“有效量”是指能夠有效實(shí)現(xiàn)預(yù)期目的的量。例如，預(yù)防疾病(例如HPV感染)有效量是指，能夠有效預(yù)防，阻止，或延遲疾病(例如HPV感染)的發(fā)生的量。測(cè)定這樣的有效量在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力范圍之內(nèi)。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語(yǔ)“色譜層析”包括但不限于離子交換色譜(例如陽(yáng)離子交換色譜)、疏水相互作用色譜、吸附層析法(例如羥基磷灰石色譜)、凝膠過(guò)濾(凝膠排阻)層析、親和層析法。根據(jù)本發(fā)明，本發(fā)明的截短的HPV58L1蛋白優(yōu)選通過(guò)如下步驟獲得將表達(dá)截短的HPV58L1蛋白的大腸桿菌在鹽濃度為100-600mM，優(yōu)選200_500mM的緩沖液中進(jìn)行破碎，離心破碎溶液，得到上清液；用水或低鹽濃度(通常低于破碎用的鹽濃度)的溶液降低所得上清液的鹽濃度至鹽濃度IOOmM-OmM,從而截短的HPV58L1蛋白在上清液中沉淀；將沉淀在含還原劑及鹽濃度為150-2500mM，優(yōu)選200mM以上的溶液中重新溶解，從而分離得到含截短的HPV58L1蛋白的溶液，其中所述蛋白的純度為至少50%，優(yōu)選至少70%，更優(yōu)選至少80%。可用于本發(fā)明的方法中的緩沖液是本領(lǐng)域公知的，包括但不限于，Tris緩沖液，磷酸鹽緩沖液，HEPES緩沖液，MOPS緩沖液等等。根據(jù)本發(fā)明，宿主細(xì)胞的破碎可通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的各種方法來(lái)實(shí)現(xiàn)，包括但不限于勻漿器破碎、均質(zhì)機(jī)破碎、超聲波處理、研磨、高壓擠壓、溶菌酶處理等等?？捎糜诒景l(fā)明的方法中的鹽包括但不限于酸式鹽，堿式鹽，中性鹽，例如堿金屬鹽、堿土金屬鹽、銨鹽、鹽酸鹽、硫酸鹽、碳酸氫鹽、磷酸鹽或磷酸氫鹽，特別是NaCl、KCl、NH4Cl,(NH4)2SO4中的一種或幾種。特別優(yōu)選的鹽是NaCl?？捎糜诒景l(fā)明的方法中的還原劑包括但不限于DTT，2-巰基乙醇，其用量包括但不限于10mM-100mM。根據(jù)本發(fā)明的HPV58病毒樣顆粒可通過(guò)如下步驟獲得將上述純度至少50%的截短的HPV58L1蛋白通過(guò)例如色譜層析進(jìn)行進(jìn)一步分離，得到經(jīng)純化的截短蛋白溶液；去除該溶液中的還原劑，得到所述HPV58病毒樣顆粒。去除還原劑的方式是本領(lǐng)域已知的，包括但不限于，透析，超濾或者層析等。發(fā)明的有益效果目前用于制備HPV病毒樣顆粒的表達(dá)系統(tǒng)可以分為真核表達(dá)系統(tǒng)和原核表達(dá)系統(tǒng)。在真核表達(dá)系統(tǒng)中表達(dá)的HPVLl蛋白天然構(gòu)象破壞少，能自發(fā)形成VLP，往往只需進(jìn)行簡(jiǎn)單的純化過(guò)程即可獲得具有正確構(gòu)象的VLP。但目前真核表達(dá)系統(tǒng)例如桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)和酵母表達(dá)系統(tǒng)存在表達(dá)量低，培養(yǎng)成本高等缺陷，給大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)帶來(lái)了極大困難。在原核表達(dá)系統(tǒng)中，大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)具有培養(yǎng)成本低，表達(dá)量大的優(yōu)點(diǎn)。然而，在大腸桿菌中表達(dá)的HPVLl蛋白往往失去正確的天然構(gòu)象，以包含體形式表達(dá)于沉淀中。目前對(duì)表達(dá)于包含體中的蛋白進(jìn)行復(fù)性依然是一個(gè)世界性難題。復(fù)性困難和效率低下使得從包含體中獲得有正確構(gòu)象的VLP難以在大規(guī)模生產(chǎn)中實(shí)施，只能局限于小規(guī)模的實(shí)驗(yàn)室研究中。雖然HPVLl也可以以正確構(gòu)象可溶性地表達(dá)于大腸桿菌中，但是其表達(dá)量低下。并且，從包含種類(lèi)繁多的可溶性蛋白的大腸桿菌裂解上清中純化出HPVLl蛋白也相當(dāng)困難，往往需要借助融合表達(dá)及親和層析等手段，而這些手段又往往需要昂貴的酶，因此，仍然無(wú)法實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。本發(fā)明提供的N端截短的HPV58L1蛋白和其制備方法有效地解決了上述問(wèn)題。首先，本發(fā)明使用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)來(lái)表達(dá)N端截短的HPV58L1蛋白，確保了其高表達(dá)量。其次，本發(fā)明采用溫和的手段選擇性沉淀大腸桿菌裂解上清中的截短蛋白，然后采用含鹽緩沖液重新溶解截短蛋白，從而在保持截短蛋白的正確構(gòu)象的前提下使蛋白純度有了顯著提高，并且獲得的截短蛋白溶液可以直接通過(guò)色譜層析例如離子交換層析及疏水交換層析進(jìn)行進(jìn)一步純化，獲得高純度的目的蛋白(例如純度達(dá)到80%)。進(jìn)一步，所獲得的高純度截短蛋白可以組裝為病毒樣顆粒，并且該病毒樣顆?？梢栽隗w內(nèi)誘導(dǎo)高滴度的針對(duì)HPV58的中和抗體，具有良好的免疫原性，是一種良好的疫苗形式，可用于預(yù)防HPV58對(duì)人體的感^feο由此可見(jiàn)，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)本發(fā)明的截短蛋白在保留全長(zhǎng)HPV58L1蛋白的抗原性、免疫原性及顆粒組裝能力的同時(shí)，可在大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)中實(shí)現(xiàn)大量表達(dá)；本發(fā)明所采用的制備方法無(wú)需使用昂貴的酶，成本低廉；截短蛋白在純化過(guò)程中構(gòu)象沒(méi)有經(jīng)過(guò)劇烈的變性復(fù)性過(guò)程，損失小，產(chǎn)率高；截短蛋白所形成的病毒樣顆粒能夠誘導(dǎo)高滴度的針對(duì)HPV的保護(hù)性抗體，可用于生產(chǎn)疫苗。因此，本發(fā)明的截短蛋白和其制備方法可應(yīng)用于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)，并且使大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)宮頸癌疫苗成為可能。下面將結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的實(shí)施方案進(jìn)行詳細(xì)描述，但是本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，下列附圖和實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明，而不是對(duì)本發(fā)明的范圍的限定。根據(jù)附圖和優(yōu)選實(shí)施方案的下列詳細(xì)描述，本發(fā)明的各種目的和有利方面對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)將變得顯然。圖1顯示了在本發(fā)明實(shí)施例2的不同步驟中獲得的HPV58N35C-L1蛋白的SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳的結(jié)果。泳道M蛋白分子量標(biāo)記；泳道1破菌上清(即，破碎菌體后離心獲得的上清)；泳道2無(wú)鹽沉淀產(chǎn)物(即，透析后離心獲得的沉淀)；泳道3重溶后上清(即，將無(wú)鹽沉淀產(chǎn)物重新溶解后離心獲得的上清)；泳道4重溶后沉淀(即，將無(wú)鹽沉淀產(chǎn)物重新溶解后離心獲得的沉淀)。結(jié)果顯示，HPV58N35C-L1蛋白在通過(guò)沉淀，重溶的步驟之后，純度從之前的約10%(參見(jiàn)泳道1)提高到了約70%(參見(jiàn)泳道3)。圖2顯示了實(shí)施例3中經(jīng)過(guò)陽(yáng)離子交換色譜純化和CHT-II(羥基磷灰石色譜)純化后獲得的HPV58N35C-L1的SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳的結(jié)果。泳道M:蛋白分子量標(biāo)記；泳道1，用CHT-II柱進(jìn)行純化時(shí)的上柱前樣品；泳道2，用CHT-II柱進(jìn)行純化時(shí)的流穿(flow-through)級(jí)分；泳道3，用500mmol/LNaCl進(jìn)行洗脫的洗脫級(jí)分；泳道4，用1000mmol/LNaCl進(jìn)行洗脫的洗脫級(jí)分(上樣體積為10μ1)；泳道5，用lOOOmmol/LNaCl進(jìn)行洗脫的洗脫級(jí)分(上樣體積為20μ1)。結(jié)果顯示，經(jīng)過(guò)CHT-II純化后，lOOOmmol/LNaCl洗脫的HPV58N35C-L1蛋白純度達(dá)到了98%左右。圖3顯示了實(shí)施例4中所得的HPV58N35C-L1病毒樣顆粒的透射電鏡觀察(放大50，000倍，Bar=0.2μm)的結(jié)果。視野中可見(jiàn)大量半徑為25nm左右的病毒樣顆粒，顆粒大小與理論大小相符，且均勻一致。圖4顯示了實(shí)施例4中所得的HPV58N35C-L1病毒樣顆粒的動(dòng)態(tài)光散射觀測(cè)結(jié)果。結(jié)果顯示，HPV58N35C-L1病毒樣顆粒的水化分子動(dòng)力學(xué)半徑為25.64nm，顆粒組裝百分比為100%。圖5顯示了實(shí)施例5中用HPV58N35C-L1病毒樣顆粒接種兔后不同階段血清的中和抗體滴度。在初次免疫兩個(gè)月后，中和抗體滴度即有明顯上升；在經(jīng)過(guò)一次加強(qiáng)免疫后，中和抗體的滴度即能達(dá)到IO5的較高水平?？v軸表示抗體中和滴度；橫軸表示采血時(shí)間。圖6顯示了實(shí)施例6得到的N端分別截短了5個(gè)、15個(gè)、27個(gè)、40個(gè)、60個(gè)和70個(gè)氨基酸的HPV58L1蛋白HPV58N5C-L1、HPV58N15C-LUHPV58N27C-L1、HPV58N40C-L1、HPV58N60C-L1和HPV58N70C-L1(其氨基酸序列分別為SEQIDNO:2、3、4、5、6和7)的SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳的結(jié)果。泳道M，蛋白分子量標(biāo)記；泳道1，截短的HPV58L1蛋白HPV58N5C-L1，上樣體積為10μ1；泳道2，截短的HPV58L1蛋白HPV58m5C_Ll，上樣體積為10μ1；泳道3，截短的HPV58L1蛋白HPV58N27C-L1，上樣體積為10μ1；泳道4，截短的HPV58L1蛋白HPV58N40C-L1，上樣體積為10μ1；泳道5，截短的HPV58L1蛋白HPV58N60C-L1,上樣體積為10μ1；泳道6，截短的HPV58L1蛋白HPV58N70C-L1，上樣體積為10μ1。結(jié)果顯示，實(shí)施例6得到的N端分別截短了5個(gè)、15個(gè)、27個(gè)、40個(gè)、60個(gè)和70個(gè)氨基酸的HPV58L1蛋白HPV58N5C-L1、HPV58N15C-LUHPV58N27C-L1、HPV58N40C-L1、HPV58N60C-L1和HPV58N70C-L1的蛋白純度均達(dá)到了98%以上。圖7顯示了實(shí)施例6中所述的HPV58N5C-L1、HPV58N15C-LUHPV58N27C-L1、HPV58N40C-LUHPV58N60C-L1和HPV58N70C-L1病毒樣顆粒的透射電鏡觀察(50，000倍，Bar=0.2μm)的結(jié)果。圖7A，HPV58N5C-L1病毒樣顆粒；圖7B，HPV58N15C-L1病毒樣顆粒；圖7C,HPV58N27C-L1病毒樣顆粒；圖7D，HPV58N40C-L1病毒樣顆粒；圖7E，HPV58N60C-L1病毒樣顆粒；圖7F，HPV58N70C-L1病毒樣顆粒。結(jié)果顯示，在圖7A-7F的視野中均可見(jiàn)大量半徑為25nm左右的病毒樣顆粒，顆粒大小與理論大小相符，且均勻一致。圖8顯示了實(shí)施例6中所述的HPV58N5C-L1、HPV58N15C-LUHPV58N27C-L1、HPV58N40C-LUHPV58N60C-L1和HPV58N70C-L1病毒樣顆粒的動(dòng)態(tài)光散射觀測(cè)結(jié)果。圖8A,HPV58N5C-L1病毒樣顆粒；圖8B，HPV58N15C-L1病毒樣顆粒；圖8C，HPV58N27C-L1病毒樣顆粒；圖8D，HPV58N40C-L1病毒樣顆粒；圖8E，HPV58N60C-L1病毒樣顆粒；圖8F，HPV58N70C-L1病毒樣顆粒。結(jié)果顯示，HPV58N5C-L1、HPV58N15C-LUHPV58N27C-L1、HPV58N40C-LUHPV58N60C-L1和HPV58N70C-L1病毒樣顆粒的水化分子動(dòng)力學(xué)半徑均為25nm左右，顆粒組裝百分比均為100%。序列信息本發(fā)明涉及的序列的信息提供于下面的表1中。表1:序列的描述1權(quán)利要求1.一種截短的HPV58L1蛋白或其變體，其與野生型HPV58L1蛋白相比，N端截短了5_70個(gè)氨基酸，例如5-60個(gè)、15-60個(gè)、20-50個(gè)、30-45個(gè)、；35_40個(gè)氨基酸；例如，與野生型HPV58L1蛋白相比，該截短的HPV58L1蛋白的N端截短了5個(gè)、15個(gè)、27個(gè)、35個(gè)、40個(gè)、60個(gè)或70個(gè)氨基酸；例如，該截短的HPV58L1蛋白具有SEQIDNO:1、SEQIDNO:2、SEQIDNO:3、SEQIDNO:4、SEQIDNO:5、SEQIDNO6或SEQIDNO7所示的氨基酸序列，更優(yōu)選具有SEQIDNO:1所示的氨基酸序列。2.一種分離的核酸，其編碼權(quán)利要求1的截短的HPV58L1蛋白或其變體。3.包含權(quán)利要求2的分離的核酸的載體。4.包含權(quán)利要求2的分離的核酸和/或權(quán)利要求3的載體的宿主細(xì)胞。5.一種HPV58病毒樣顆粒，其含有權(quán)利要求1的截短的HPV58L1蛋白或其變體，或者由權(quán)利要求1的截短的HPV58L1蛋白或其變體組成。6.一種組合物，其包含權(quán)利要求1的截短的HPV58L1蛋白或其變體，或權(quán)利要求2的分離的核酸，或權(quán)利要求3的載體，或權(quán)利要求4的宿主細(xì)胞，或權(quán)利要求5的HPV58病毒樣顆粒。7.一種藥物組合物或疫苗，其包含權(quán)利要求5的HPV58病毒樣顆粒，任選地還包含藥學(xué)可接受的載體和/或賦形劑，優(yōu)選地，所述HPV58病毒樣顆粒以預(yù)防HPV感染或?qū)m頸癌有效量存在；優(yōu)選地，所述藥物組合物或疫苗還包含至少一種選自下列的病毒樣顆粒HPV6L1蛋白病毒樣顆粒，HPVlILl蛋白病毒樣顆粒，HPV16L1蛋白病毒樣顆粒，HPV18L1蛋白病毒樣顆粒，HPV31L1蛋白病毒樣顆粒，HPV33L1蛋白病毒樣顆粒，HPV45L1蛋白病毒樣顆粒和HPV52L1蛋白病毒樣顆粒。8.獲得截短的HPV58L1蛋白的方法，其包括利用大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)權(quán)利要求1的截短的HPV58L1蛋白，然后將含有該蛋白的裂解上清進(jìn)行純化處理，優(yōu)選地，所述方法包括步驟a)在大腸桿菌中表達(dá)所述截短的HPV58L1蛋白，b)將表達(dá)所述截短的HPV58L1蛋白的大腸桿菌在鹽濃度為100mM-600mM的溶液中破碎，分離得到上清液，c)用水或低鹽溶液將b)獲得的上清液的鹽濃度降至IOOmM或以下，并收集沉淀，d)將c)獲得的沉淀在150mM-2500mM鹽溶液中重新溶解，同時(shí)加入還原劑，分離得到溶液，該溶液中含純度至少50%的截短的HPV58L1蛋白。9.制備權(quán)利要求5的HPV58病毒樣顆粒的方法，其包括步驟a)將純度至少50%的權(quán)利要求1的截短的HPV58L1蛋白通過(guò)色譜層析進(jìn)行純化，b)將步驟a)中得到的蛋白去除還原劑。10.一種制備疫苗的方法，其包括將權(quán)利要求5的HPV58病毒樣顆粒或通過(guò)權(quán)利要求9的方法獲得的HPV58病毒樣顆粒與藥學(xué)可接受的載體和/或賦形劑混合，任選地還混合一種或多種選自HPV6，11，16，18，31，33，45和52的HPV型別的病毒樣顆粒。11.一種預(yù)防HPV感染或由HPV感染所導(dǎo)致的疾病的方法，其包括將預(yù)防有效量的權(quán)利要求5的HPV58病毒樣顆粒，或通過(guò)權(quán)利要求9的方法獲得的HPV58病毒樣顆粒，或權(quán)利要求7的藥物組合物或疫苗，或通過(guò)權(quán)利要求10的方法獲得的疫苗施用給受試者，優(yōu)選地，所述HPV感染是HPV58感染；優(yōu)選地，所述由HPV感染所導(dǎo)致的疾病是宮頸癌；優(yōu)選地，所述受試者是哺乳動(dòng)物，例如人。12.權(quán)利要求1的截短的HPV58L1蛋白或其變體，或權(quán)利要求5的HPV58病毒樣顆粒，或通過(guò)權(quán)利要求8的方法獲得的截短的HPV58L1蛋白，或通過(guò)權(quán)利要求9的方法獲得的HPV58病毒樣顆粒在制備藥物組合物或疫苗中的用途，所述藥物組合物或疫苗用于預(yù)防HPV感染或由HPV感染所導(dǎo)致的疾病，優(yōu)選地，所述HPV感染是HPV58感染；優(yōu)選地，所述由HPV感染所導(dǎo)致的疾病是宮頸癌。13.權(quán)利要求1的截短的HPV58L1蛋白或其變體，或權(quán)利要求5的HPV58病毒樣顆粒，或通過(guò)權(quán)利要求8的方法獲得的截短的HPV58L1蛋白，或通過(guò)權(quán)利要求9的方法獲得的HPV58病毒樣顆粒，其用于預(yù)防HPV感染或由HPV感染所導(dǎo)致的疾病，優(yōu)選地，所述HPV感染是HPV58感染；優(yōu)選地，所述由HPV感染所導(dǎo)致的疾病是宮頸癌。全文摘要本發(fā)明涉及一種截短的人乳頭瘤病毒58型L1蛋白，其編碼序列和制備方法，以及包含其的病毒樣顆粒，所述蛋白和病毒樣顆?？捎糜陬A(yù)防HPV(特別是HPV58)感染及由HPV(特別是HPV58)感染所導(dǎo)致的疾病例如宮頸癌等。本發(fā)明還涉及上述蛋白和病毒樣顆粒用于制備藥物組合物或疫苗的用途，所述藥物組合物或疫苗用于預(yù)防HPV(特別是HPV58)感染及由HPV(特別是HPV58)感染所導(dǎo)致的疾病例如宮頸癌等。文檔編號(hào)A61P31/20GK102336822SQ20111019862公開(kāi)日2012年2月1日申請(qǐng)日期2011年7月15日優(yōu)先權(quán)日2010年7月16日發(fā)明者夏寧邵,孔祥林,張軍,李少偉,王穎彬,魏旻希申請(qǐng)人:廈門(mén)萬(wàn)泰滄海生物技術(shù)有限公司,廈門(mén)大學(xué)