專利名稱：雞傳染性法氏囊病特異性轉(zhuǎn)移因子的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及免疫調(diào)節(jié)劑技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種雞傳染性法氏囊病特異性轉(zhuǎn)移因子的制備方法。
背景技術(shù)：
雞傳染性法氏囊病(IBD)是由雞傳染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的一種主要侵害雛雞的急性、高度接觸性、免疫抑制性疾病。以法氏囊發(fā)炎、壞死、萎縮和法氏囊內(nèi)淋巴細(xì)胞嚴(yán)重受損為特征。從而引起雞的免疫機(jī)能障礙，干擾各種疫苗的免疫效果。發(fā)病率高，幾乎達(dá)100 %，死亡率低，一般為5 % 15 %，是目前養(yǎng)禽業(yè)最重要的疾病之一。雛雞群突然大批發(fā)病，2 3天內(nèi)可波及60% 70%的雞，發(fā)病后3 4天死亡達(dá)到高峰，7 8天后死亡停止。病初精神沉郁，采食量減少，飲水增多，有些自啄肛門，排白色水樣稀糞，重者脫水， 臥地不起，極度虛弱、最后死亡。耐過雛雞貧血消瘦，生長緩慢。剖檢可見法氏囊發(fā)生特征性病變，法氏囊呈黃色膠胨樣水腫、質(zhì)硬、粘膜上覆蓋有奶油色纖維素性滲出物。有時(shí)法氏囊粘膜嚴(yán)重發(fā)炎，出血，壞死，萎縮。另外，病死雞表現(xiàn)脫水，腿和胸部肌肉常有出血，顏色暗紅。腎腫脹，腎小管和輸尿管充滿白色尿酸鹽。脾臟及腺胃和肌胃交界處粘膜出血。一方面是由于該病病毒主要侵害雞的免疫器官，使機(jī)體自身免疫機(jī)能下降，導(dǎo)致患病雞對(duì)多種病原體的易感性增加，致使雞只死亡率、淘汰率上升，影響增重。另一方面是由于免疫抑制使接種了多種有效疫苗的雞只免疫應(yīng)答反應(yīng)下降或無免疫應(yīng)答。然而，目前在治療方面除了注射雞傳染性法氏囊病高免卵黃抗體(以下簡稱卵黃抗體)外，幾乎沒有更為有效地特異療法。獸用細(xì)胞因子類產(chǎn)品具有作用劑量小、生物活性高、作用迅速、療效確實(shí)等優(yōu)點(diǎn)， 因此該類產(chǎn)品具有廣闊的市場前景。但目前開發(fā)研制技術(shù)尚未成熟，此類產(chǎn)品開發(fā)與研制正處于初始階段，能在獸醫(yī)臨床大量應(yīng)用的則更少。雞傳染性法氏囊病轉(zhuǎn)移因子溶液是一類細(xì)胞因子制劑，輔以少量增效劑、穩(wěn)定劑等研制而成。本品生物活性高，具有廣譜增強(qiáng)免疫力、提高疫苗免疫效果、緩解疾病臨床癥狀等作用?，F(xiàn)將本品對(duì)雛雞細(xì)胞免疫增強(qiáng)作用臨床情況匯報(bào)如下。

發(fā)明內(nèi)容
為了解決以上治療雞傳染性法氏囊病的藥物單一和藥效不理想的問題，本發(fā)明提供了一種雞傳染性法氏囊病特異性轉(zhuǎn)移因子(以下簡稱雞特異性轉(zhuǎn)移因子)的制備方法， 制備的雞特異性轉(zhuǎn)移因子結(jié)合卵黃抗體以提高臨床療效。在2003年山東省12個(gè)雞場臨床試驗(yàn)性治療，取得了很好的效果。證明此方案能有效地控制雞法氏囊病情并起到很好的治療作用。本發(fā)明是通過以下措施實(shí)現(xiàn)的一種雞傳染性法氏囊病特異性轉(zhuǎn)移因子的制備方法，包括以下步驟(1)對(duì)每羽份健康家禽采用傳染性法氏囊病活疫苗B87毒株10個(gè)劑量進(jìn)行免疫，每個(gè)劑量病毒含量不低于IOOOELD5ci，7天后，再用傳染性法氏囊病活疫苗B38毒辣株20個(gè)劑量肌肉注射加強(qiáng)免疫，每個(gè)劑量病毒含量不低于2000ELD5(I，同時(shí)用傳染性法氏囊病油乳劑滅活苗0. 5mL皮下注射免疫，病毒含量為107_2TCID5tlA). lmL，7天后，再使用相同劑量注射傳染性法氏囊病活疫苗B38毒辣株加強(qiáng)一次免疫，當(dāng)瓊脂凝膠擴(kuò)散試驗(yàn)方法檢測血液中傳染性法氏囊病抗體水平達(dá)到24以上后，剖殺動(dòng)物采取新鮮脾臟、腎臟或法氏囊，組織粉碎、 勻漿后在零下20°C _30°C反復(fù)凍融8次以上，每次凍16h、融8h，一個(gè)循環(huán)共需Mh，4000rpm 離心，取上清，分子篩過濾，取相對(duì)分子質(zhì)量小于5000道爾頓的組分；(2)得到的相對(duì)分子質(zhì)量小于5000道爾頓的組分，濃縮至固含量為5mg/mL，每mL 中加入0. 2mg穩(wěn)定劑EDTA-Na2和0. 3mg復(fù)合熱保護(hù)劑，混勻后除菌，既得；所述復(fù)合熱保護(hù)劑為甘露醇乳糖殼聚糖甘油甘氨酸山梨醇按重量比 2:3:2:3:1: 2混合得到。制得的雞傳染性法氏囊病特異性轉(zhuǎn)移因子中多肽含量> 2. Omg/mL。雞傳染性法氏囊病特異性轉(zhuǎn)移因子中還含有微量的核酸、氨基酸及維生素、微量元素。因多肽含量高，易于檢測，是國家質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)的成分。本品采用以雞特異性轉(zhuǎn)移因子為主要成分研制開發(fā)的新型生化類免疫增強(qiáng)劑。本品劑量小、生物活性高、能夠有效提高畜禽的免疫力，同時(shí)能夠提高疫苗的免疫水平、最大可能地消除免疫應(yīng)激反應(yīng)。而且本品為生化產(chǎn)品，無毒副作用、無殘留，是一種高效無毒的綠色獸藥。適用于防治家禽傳染性法氏囊??；適用于畜禽免疫力低下，提高免疫力；適用于病毒病高發(fā)期，降低感染率及死亡率；適用于疫苗免疫效果不理想，能使疫苗免疫水平整齊、抗體高、有效抗體維持時(shí)間長；適用于應(yīng)激反應(yīng)，減少疫苗引起的呼吸道疾病等。用法與用量混飲、口月L點(diǎn)眼或噴霧。每IOmL用于1000羽家禽；家畜1000公斤。有效期4°C保存2年，-20°C冷凍保存5年。常溫保存6個(gè)月。本發(fā)明的有益效果1、比化藥類產(chǎn)品例如鹽酸左旋咪唑活性高、作用迅速、劑量少、無殘留；2、比中藥類作用迅速、使用方便、便于運(yùn)輸。3、小分子物質(zhì)，使用途徑多，飲水、口服、點(diǎn)眼、滴鼻、注射等均可。
具體實(shí)施例方式為了更好的理解本發(fā)明，下面結(jié)合具體實(shí)施例來進(jìn)一步說明。實(shí)施例1 (1)對(duì)每羽份健康家禽采用傳染性法氏囊病活疫苗B87毒株10個(gè)劑量進(jìn)行免疫， 每個(gè)劑量病毒含量不低于IOOOELD5ci，7天后，再用傳染性法氏囊病活疫苗B38毒辣株20個(gè)劑量肌肉注射加強(qiáng)免疫，每個(gè)劑量病毒含量不低于2000ELD5(I，同時(shí)用傳染性法氏囊病油乳劑滅活苗0. 5mL皮下注射免疫，病毒含量為107_2TCID5tlA). lmL，7天后，再使用相同劑量注射傳染性法氏囊病活疫苗B38毒辣株加強(qiáng)一次免疫，10天后測量抗體水平，瓊脂凝膠擴(kuò)散試驗(yàn)方法檢測血液中傳染性法氏囊病抗體水平達(dá)到24以上，剖殺動(dòng)物采取新鮮脾臟、腎臟或法氏囊，組織粉碎、勻漿后在零下20°C -30°C反復(fù)凍融8次以上，每次凍16h、融8h，一個(gè)循環(huán)共需Mh，4000rpm離心，取上清，分子篩過濾，取相對(duì)分子質(zhì)量小于5000道爾頓的組分；(2)得到的相對(duì)分子質(zhì)量小于5000道爾頓的組分，濃縮至固含量為5mg/mL，每mL中加入0. 2mg穩(wěn)定劑EDTA-Na2和0. 3mg復(fù)合熱保護(hù)劑，混勻后除菌，既得。制得的雞傳染性法氏囊病特異性轉(zhuǎn)移因子中多肽含量為2. 21mg/mL。復(fù)合熱保護(hù)劑為甘露醇乳糖殼聚糖甘油甘氨酸山梨醇按重量比 2:3:2:3:1: 2混合得到。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)一、雞傳染性法氏囊病特異性轉(zhuǎn)移因子促進(jìn)雛雞細(xì)胞免疫實(shí)驗(yàn)1試驗(yàn)材料1. 1試驗(yàn)動(dòng)物3日齡健康雛雞200只。1. 2試驗(yàn)藥品雞傳染性法氏囊病特異性轉(zhuǎn)移因子溶液，規(guī)格為5mL/瓶，含有雞傳染性法氏囊病特異性轉(zhuǎn)移因子5mg。1. 3飼料雛雞全價(jià)配合飼料。1. 4化學(xué)試劑淋巴細(xì)胞分離液、2. 5%戊二醛、副品紅溶液、4%亞硝酸鈉溶液、六偶氮副品紅溶液、醋酸萘酯溶液、磷酸鹽緩沖液、甲基綠染色液等，均購自有關(guān)單位或自行配制。1. 5主要儀器血球計(jì)數(shù)板、六位數(shù)分類計(jì)數(shù)器、雙目生物顯微鏡等。2試驗(yàn)方法2. 1試驗(yàn)分組將試驗(yàn)用雞隨機(jī)分成A、B、C、D、E五個(gè)組，每組40只。A、B為試驗(yàn)組，C、D對(duì)照組，E組為空白對(duì)照組。A組每只雞注射0. 05毫升雞傳染性法氏囊病特異性轉(zhuǎn)移因子溶液，B組每只雞口服0. 05毫升的雞傳染性法氏囊病特異性轉(zhuǎn)移因子溶液，C組口服 0. 05毫升的生理鹽水，D組注射0. 05毫升的生理鹽水，E組不作任何處理。2. 2試驗(yàn)方法A、B、C、D、E五組7日齡免疫前12小時(shí)按照分組分別使用本發(fā)明制備的雞傳染性法氏囊病特異性轉(zhuǎn)移因子和生理鹽水，分別于第14天、21天時(shí)采血進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)，并求其平均值。具體方法參見有關(guān)免疫學(xué)試驗(yàn)方法(ANAE法)。3試驗(yàn)結(jié)果T、B淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)結(jié)果見表1。從表中可以看出，14日齡雛雞的外周血 TC 值，A、B、C、D、E 組的平均 TC 值分別為 56. 167%,53. 468%,34. 167%,35. 123%, 32. 333%。經(jīng)統(tǒng)計(jì)處理表明，各試驗(yàn)組TC值與對(duì)照組相比提高顯著(t > 1. 96，P < 0. 05)。21日齡雛雞的外周血TC值，A、B、C、D、E組的平均TC值分別為65. 333 %、 61. 512%,38. 5433%,39. 586%,36. 127%.經(jīng)統(tǒng)計(jì)表明各試驗(yàn)組TC值與對(duì)照組相比提高非常顯著(t > 2. 57，P < 0. 01)。表1雞血液中T、B淋巴細(xì)胞比例統(tǒng)計(jì)表(ANAE染色法)
日齡組別T細(xì)胞百分率(％)B細(xì)胞百分率(％)A56.167 士 4.309aA43.833 士 4.336cCB53.468 士 7.043aA47.532 士 7.112cC14C34.167 士 0.983bB65.833 士 1.386bBD35.123 士 0.967bB64.877 士 0.667cCE32.333 士 3.327cC67.667 士 4.266aAA65.333 士 6.593aA34.667 士 6.487dCB61.512±6.285bA41.488 士 6.112cC21C38.543 士 4.037cB61.457 士 5.667bBD39.586 士 4.037cB60.414 士 3.936bBE36.127 士 2.608dC64.873 士 3.448aA注本結(jié)果為重復(fù)試驗(yàn)時(shí)測得，試驗(yàn)重復(fù)為6采取的是隨機(jī)區(qū)組試驗(yàn)的新復(fù)極檢驗(yàn)。數(shù)字后標(biāo)注字母表示顯著性檢驗(yàn)結(jié)果凡有相同字母者，差異不顯著；大寫字母表示 0. 01顯著水平；小寫字母表示0. 05顯著水平。4結(jié)論與討論4. 1本試驗(yàn)結(jié)果顯示，兩個(gè)試驗(yàn)組與對(duì)照組T淋巴細(xì)胞百分率差異顯著(P < 0. 05)，證明雞傳染性法氏囊病特異性轉(zhuǎn)移因子溶液對(duì)T細(xì)胞值具有明顯的提高作用。雞傳染性法氏囊病轉(zhuǎn)移因子溶液中含有生物活性的小肽，當(dāng)其進(jìn)入機(jī)體內(nèi)能夠提高免疫系統(tǒng)的功能，而T淋巴細(xì)胞作為免疫細(xì)胞的一種，也得到一定程度的提高，因此試驗(yàn)組T細(xì)胞百分率較對(duì)照組高，且差異顯著。4. 2注射組和口服組T細(xì)胞比例相差不顯著，證明注射和口服雞傳染性法氏囊病特異性轉(zhuǎn)移因子溶液的效果相同。由于該溶液含有小肽，通過注射途徑其被機(jī)體吸收的速度較快作用于機(jī)體，因此注射組會(huì)促進(jìn)T細(xì)胞比例升高。小肽分子量較小(低于10000道爾頓)，能夠不被胰蛋白酶、糜蛋白酶、胃蛋白酶、DNA酶和RNA酶等分解，因此當(dāng)其進(jìn)入體內(nèi)時(shí)會(huì)能夠快速被腸道吸收，進(jìn)入血液循環(huán)，從而作用于免疫系統(tǒng)，所以口服組T細(xì)胞比例也會(huì)升高。注射與口服途徑吸收利用有效成分的速度均較快，因此在臨床上表現(xiàn)為兩者促進(jìn)免疫的效果相當(dāng)，差異不顯著，因此該免疫增強(qiáng)劑使用較為方便。4. 3雞傳染性法氏囊病特異性轉(zhuǎn)移因子溶液具有較高生物活性，其作用機(jī)理與化學(xué)類免疫增強(qiáng)劑(例如鹽酸左旋咪唑等)存在較大差異。雞傳染性法氏囊病轉(zhuǎn)移因子溶液為動(dòng)物機(jī)體內(nèi)正常存在的物質(zhì)，正常狀態(tài)下其濃度較低，當(dāng)濃度提高后，其生物活性表現(xiàn)相當(dāng)顯著，能夠在較短時(shí)間內(nèi)提高機(jī)體免疫應(yīng)答反應(yīng)的強(qiáng)度及速度，因此生物活性優(yōu)勢較傳統(tǒng)化學(xué)類免疫增強(qiáng)劑很顯著，是很具有發(fā)展前途的生物免疫增強(qiáng)劑。二、雞傳染性法氏囊病特異性轉(zhuǎn)移因子對(duì)雞傳染性法氏囊病的治療實(shí)驗(yàn)1材料與方法
1. 1 材料1. 1. 1雞傳染性法氏囊病特異性轉(zhuǎn)移因子，本研究室制備，冷凍保存。1. 1.2雞轉(zhuǎn)移因子，本研究室制備，冷凍保存。1. 1. 3雞傳染性法氏囊病卵黃抗體，購于市場，冷凍保存。1. 1. 4供試雞的選擇供試雞分別選擇自然發(fā)病第二天雞群的商品雞病雞，隨機(jī)選擇病雞、死雞，解剖和實(shí)驗(yàn)診斷均符合法氏囊病病理變化特征的雞群為供試雞。分為3組， 每組均為500只，飼養(yǎng)管理環(huán)境條件相似。1. 2 方法1. 2. 1將雞傳染性法氏囊病特異性轉(zhuǎn)移因子及雞轉(zhuǎn)移因子取出，按照5mg/mL濃度稀釋，無菌分裝，4°C保存?zhèn)溆谩?. 2. 2將卵黃抗體取出，化凍后，4°C保存?zhèn)溆?，所用卵黃抗體為北京方信動(dòng)物藥業(yè)有限公司銷售的雞專用卵黃抗體注射液。1. 2. 2法氏囊病診斷根據(jù)臨床癥狀和病理剖檢變化，并結(jié)合實(shí)驗(yàn)室診斷，可確認(rèn)此病為雞傳染性法氏囊病。1. 2. 3治療試驗(yàn)試驗(yàn)分3組，第1組為卵黃抗體與雞傳染性法氏囊病特異性轉(zhuǎn)移因子體積比1 1混合，第2組為卵黃抗體+雞轉(zhuǎn)移因子組體積比1 1混合，第3組為卵黃抗體組。前2組均將兩種組分混勻后，放置室溫后均采用胸肌注射2mL/只。第3組將卵黃抗體放置室溫后采用胸肌注射2mL/只。注射后，各組均采用相同的措施，對(duì)癥下藥。2 結(jié)果從試驗(yàn)結(jié)果可以看出，各試驗(yàn)組對(duì)傳染性法氏囊病(IBD)有很好的治療作用，在用藥的第二天就能顯效，第三天內(nèi)就控制了病情，病雞停止死亡，其中卵黃抗體+雞傳染性法氏囊病特異性轉(zhuǎn)移因子組存活率達(dá)98. 4%，卵黃抗體+雞轉(zhuǎn)移因子組存活率達(dá)76. 0%， 卵黃抗體組存活率為74. 2%，差異顯著(P < 0. 05)，見表2。表2對(duì)傳染性法氏囊病的治療效果

3臨床擴(kuò)大治療效果根據(jù)試驗(yàn)結(jié)果，采用卵黃抗體+雞特異性轉(zhuǎn)移因子方案對(duì)臨床暴發(fā)的雞法氏囊病進(jìn)行擴(kuò)大試驗(yàn)，據(jù)統(tǒng)計(jì)治療20153只，治療康復(fù)19646只，治愈率達(dá)97%以上。用藥后第二天就可以控制死亡，第三天就可以好轉(zhuǎn)，第四天后能漸漸恢復(fù)食欲，一周后基本可以康復(fù)。4分析與討論4. 1雞傳染性法氏囊病是一種免疫抑制性、高度接觸性傳染病，多年來一直困擾著養(yǎng)雞業(yè)，給養(yǎng)雞業(yè)帶來致命性危害。雛雞主要依靠法氏囊產(chǎn)生抗體，當(dāng)法氏囊受到侵害時(shí)，機(jī)體產(chǎn)生免疫抗體的能力減退或消失，而導(dǎo)致免疫抑制，使幼雞群對(duì)疫苗接種的免疫應(yīng)答反應(yīng)下降，患病雞容易并發(fā)感染其它病毒病或細(xì)菌病，如雞新城疫、馬立克氏病、大腸桿菌病、沙門氏菌病和球蟲病等，給養(yǎng)雞業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。所以，平時(shí)一定要加強(qiáng)對(duì)該病的預(yù)防和控制。4. 2根據(jù)本病致病的原因是因?yàn)閾p害腎臟和法氏囊，所以首要問題是要從緩解腎臟衰弱，化解、排除有形物質(zhì)，疏通尿路，控制死亡著手。因?yàn)殡u傳染性法氏囊病特異性轉(zhuǎn)移因子對(duì)病理組織不但具有再生與修復(fù)作用，還能提高機(jī)體全方位的免疫力，所以使用該制劑后具有迅速控制病雞死亡，病程短、恢復(fù)快等特點(diǎn)，充分顯示出生化產(chǎn)品防治動(dòng)物疾病的優(yōu)勢。4. 3雞傳染性法氏囊病特異性轉(zhuǎn)移因子具有增強(qiáng)機(jī)體免疫作用，對(duì)法氏囊病的癥狀具有選擇性和針對(duì)性的作用。藥理學(xué)研究證明，雞傳染性法氏囊病特異性轉(zhuǎn)移因子是一種免疫活性物質(zhì)，能提高免疫原性能，具有增強(qiáng)機(jī)體網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的吞噬功能，此外，還能提高免疫器官的重量，提高白細(xì)胞總數(shù)及淋巴細(xì)胞數(shù)，增強(qiáng)抗體形成能力。因此，在生產(chǎn)實(shí)際中有很好的推廣應(yīng)用價(jià)值。貯存穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)產(chǎn)品的穩(wěn)定性是保證用藥安全有效的基本條件，尤其是多肽氨基酸類產(chǎn)品，在水中有效含量下降較快，因此穩(wěn)定性試驗(yàn)是該課題研究的一個(gè)重要課題。影響制劑穩(wěn)定性的因素，除其處方、工藝等因素外，還有溫度、光、濕度等因素。因此，對(duì)該產(chǎn)品進(jìn)行了影響因素試驗(yàn)、加速試驗(yàn)、室溫長期留樣考察試驗(yàn)。1. 1樣品選擇符合雞傳染性法氏囊病特異性轉(zhuǎn)移因子溶液質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的三批樣品作為穩(wěn)定性的樣品；對(duì)照品雞傳染性法氏囊病特異性轉(zhuǎn)移因子所使用的為甘露醇乳糖 甘氨酸重量配比為2:3:1的熱保護(hù)劑。1. 2貯存時(shí)間及條件1)影響因素試驗(yàn)A.高溫高濕試驗(yàn)將上述樣品與對(duì)照品分別置于市售包裝中置溫度40士2°C，相對(duì)濕度75%條件下3個(gè)月，每一個(gè)月檢測一次。B.光照試驗(yàn)將上述樣品與對(duì)照品分別放置于光照箱內(nèi)，設(shè)置光照度 4500士500Lx，溫度為25°C條件下10天，分別于第1天、3天、5天、10天取樣檢測一次。2)長期實(shí)驗(yàn)將上述樣品與對(duì)照品分別置于市售包裝中置溫度25士2°C，相對(duì)濕度60%條件下8個(gè)月，分別于0、2、4、6、7、8個(gè)月取樣檢驗(yàn)一次。1. 3測定指標(biāo)及方法檢驗(yàn)項(xiàng)目外觀；FoIin酚法測定多肽含量。1. 4、試驗(yàn)結(jié)果1)影響因素試驗(yàn)結(jié)果表3在高溫高濕實(shí)驗(yàn)條件下貯存結(jié)果統(tǒng)計(jì)表
保存時(shí)間(月)樣品批號(hào)外觀多肽含量測定(mg/mL)01淡黃色液體，無異味2.212淡黃色液體，無異味2.223淡黃色液體，無異味2.24比較例淡黃色液體，無異味2.2211淡黃色液體，無異味2.122淡黃色液體，無異味2.133淡黃色液體，無異味2.11比較例淡黃色液體，無異味1.9221淡黃色液體，無異味2.022淡黃色液體，無異味2.033淡黃色液體，無異味2.00比較例淡黃色液體，無異味1.7331淡黃色液體，無異味1.982淡黃色液體，無異味1.973淡黃色液體，無異味1.96比較例淡黃色液體，無異味1.55表4在光照實(shí)驗(yàn)條件下貯存結(jié)果統(tǒng)計(jì)表
權(quán)利要求
1.一種雞傳染性法氏囊病特異性轉(zhuǎn)移因子的制備方法，其特征是包括以下步驟(1)對(duì)每羽份健康家禽采用傳染性法氏囊病活疫苗B87毒株10個(gè)劑量進(jìn)行免疫，每個(gè)劑量病毒含量不低于IOOOELD5ci，7天后，再用傳染性法氏囊病活疫苗B38毒辣株20個(gè)劑量肌肉注射加強(qiáng)免疫，每個(gè)劑量病毒含量不低于2000ELD5(I，同時(shí)用傳染性法氏囊病油乳劑滅活苗0. 5mL皮下注射免疫，病毒含量為107_2TCID5tlA). lmL，7天后，再使用相同劑量注射傳染性法氏囊病活疫苗B38毒辣株加強(qiáng)一次免疫，當(dāng)瓊脂凝膠擴(kuò)散試驗(yàn)方法檢測血液中傳染性法氏囊病抗體水平達(dá)到24以上后，剖殺動(dòng)物采取新鮮脾臟、腎臟或法氏囊，組織粉碎、勻漿后在零下20°C _30°C反復(fù)凍融8次以上，每次凍16h、融8h，一個(gè)循環(huán)共需Mh，4000rpm離心，取上清，分子篩過濾，取相對(duì)分子質(zhì)量小于5000道爾頓的組分；(2)得到的相對(duì)分子質(zhì)量小于5000道爾頓的組分，濃縮至固含量為5mg/mL，每mL中加入0. 2mg穩(wěn)定劑EDTA-Na2和0. 3mg復(fù)合熱保護(hù)劑，混勻后除菌，既得；所述復(fù)合熱保護(hù)劑為甘露醇乳糖殼聚糖甘油甘氨酸山梨醇按重量比 2:3:2:3:1:2混合得到。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的制備方法，其特征在于制得的雞傳染性法氏囊病特異性轉(zhuǎn)移因子中多肽含量彡2.0 mg/mL。
全文摘要
本發(fā)明涉及免疫調(diào)節(jié)劑技術(shù)領(lǐng)域一種雞傳染性法氏囊病特異性轉(zhuǎn)移因子的制備方法對(duì)每羽份健康家禽采用傳染性法氏囊病活疫苗B87毒株、B38毒辣株、傳染性法氏囊病油乳劑滅活苗免疫，抗體水平達(dá)到24以上后，剖殺動(dòng)物采取新鮮脾臟、腎臟或法氏囊，組織粉碎、勻漿、反復(fù)凍融8次以上，離心取上清，過濾得相對(duì)分子質(zhì)量小于5000道爾頓的組分，加入穩(wěn)定劑EDTA-Na2和復(fù)合熱保護(hù)劑，除菌；復(fù)合熱保護(hù)劑為甘露醇乳糖殼聚糖甘油甘氨酸山梨醇按重量比2:3:2:3:1:2混合得到。比化藥類產(chǎn)品活性高、作用迅速、劑量少、無殘留；比中藥類作用迅速、使用方便、便于運(yùn)輸；小分子物質(zhì)，使用途徑多。
文檔編號(hào)A61P31/14GK102258537SQ20111019848
公開日2011年11月30日 申請(qǐng)日期2011年7月15日 優(yōu)先權(quán)日2011年7月15日
發(fā)明者徐懷英, 駱延波 申請(qǐng)人:駱延波