專利名稱：防治雞傳染性法氏囊病卵黃免疫球蛋白納米脂質(zhì)體的制法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于口服制品技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種防治雞傳染性法氏囊病卵黃免疫球蛋白納米脂質(zhì)體的制法。
背景技術(shù)：
目前，雞傳染性法氏囊病Qnfectious bursal disease，IBD)是一種由雙股RNA 病毒引發(fā)的破壞雞的免中樞器官法氏囊的病毒性傳染病。該病一方面由于雞只死亡率、淘汰率增加，影響雞體增重，造成直接經(jīng)濟(jì)損失；另一方面由于IBDV誘發(fā)免疫抑制，使雞群對(duì)多種疫苗(如雞新城疫活疫苗、雞傳染性支氣管炎活疫苗、雞馬立克氏病活疫苗等)的免疫應(yīng)答能力下降或無免疫應(yīng)答。同時(shí)由于機(jī)體免疫機(jī)能下降，病雞對(duì)病原體易感性增加，容易并發(fā)或繼發(fā)多種其他疾病，如大腸菌病等。對(duì)此病所采取的措施是進(jìn)行疫苗的免疫接種，但免疫效果并不理想，經(jīng)常出現(xiàn)免疫失敗的現(xiàn)象。一旦出現(xiàn)免疫失敗的雞群，則主要依靠被動(dòng)免疫的方法，對(duì)雞群注射免疫球蛋白?，F(xiàn)在所使用的免疫球蛋白主要是卵黃免疫球蛋白。這種免疫球蛋白在體內(nèi)很快被破壞，半衰期短，作用時(shí)間短。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明為解決公知技術(shù)中存在的技術(shù)問題而提供一種防治雞傳染性法氏囊病卵黃免疫球蛋白(IgY)納米脂質(zhì)體的制法。本發(fā)明的目的是提供一種利用脂質(zhì)體制藥技術(shù)，將卵黃免疫球蛋白包封，從而提高療效，具有工藝簡(jiǎn)單，經(jīng)濟(jì)實(shí)用，制劑性能穩(wěn)定，治療效果好，應(yīng)用范圍廣等特點(diǎn)的防治雞傳染性法氏囊病卵黃免疫球蛋白納米脂質(zhì)體的制法。脂質(zhì)體是由親油和親水的雙親分子所構(gòu)成的，在分子中親油性的尾端部分位于膜的中間，而親水首端部分形成膜的內(nèi)外表面，藥物被包容于雙分子層中；囊壁是由雙分子膜組成。因而，脂質(zhì)體是一種具有類似生物膜結(jié)構(gòu)的囊泡，可與細(xì)胞發(fā)生吸附、融合、脂交換將包封的藥物直接帶入細(xì)胞，使藥物具有細(xì)胞靶向性而提高治療指數(shù)或提高生物利用度。 通過脂質(zhì)體包被藥物可以免受各種生物酶的破壞，延長(zhǎng)藥物在血液循環(huán)中停留的時(shí)間，從而提高藥物的生物利用度，故對(duì)藥物具有保護(hù)作用，使藥物免受生物酶類的破壞和各種因素的干擾，有利于藥物在體內(nèi)的運(yùn)輸。本發(fā)明利用脂質(zhì)體制藥新技術(shù)，將卵黃免疫球蛋白包封，從而達(dá)到提高療效的目的。本發(fā)明為解決公知技術(shù)中存在的技術(shù)問題所采取的技術(shù)方案是
防治雞傳染性法氏囊病卵黃免疫球蛋白納米脂質(zhì)體的制法，其特征是黃免疫球蛋白納米脂質(zhì)體的制備包括以下工藝過程，
1)卵黃抗體的制備采用多次、交替的免疫方法，對(duì)雞進(jìn)行疫苗接種；當(dāng)雞卵黃抗體 AGPT檢測(cè)效價(jià)在1 :64以上時(shí)，收集卵黃；2)分離免疫球蛋白用乙酸一乙酸鈉緩沖液，將卵黃懸液進(jìn)行稀釋，攪拌、靜置、離心， 保留上清液；
3)制備脂質(zhì)體采用薄膜分散法，制成脂質(zhì)體薄膜；加入卵黃免疫球蛋白經(jīng)旋轉(zhuǎn)、攪拌，形成卵黃免疫球蛋白脂質(zhì)體囊體；用勻漿機(jī)對(duì)形成的脂質(zhì)體進(jìn)行重整，得到納米級(jí)的脂質(zhì)體。本發(fā)明防治雞傳染性法氏囊病卵黃免疫球蛋白納米脂質(zhì)體的制法還可以采用如下技術(shù)方案
所述的防治雞傳染性法氏囊病卵黃免疫球蛋白納米脂質(zhì)體的制法，其特點(diǎn)是分離免疫球蛋白時(shí)，用PH 4. 0 - 6. 0的乙酸一乙酸鈉緩沖液，將卵黃懸液進(jìn)行6 - 12倍稀釋，得到的上清液進(jìn)行濃縮處理。所述的防治雞傳染性法氏囊病卵黃免疫球蛋白納米脂質(zhì)體的制法，其特點(diǎn)是上清液采用超濾法進(jìn)行濃縮處理。所述的防治雞傳染性法氏囊病卵黃免疫球蛋白納米脂質(zhì)體的制法，其特點(diǎn)是分離免疫球蛋白時(shí)，靜置條件為2 — 6°C、12小時(shí)以上；離心條件為800 - 2000XgUO 一 30
mirio所述的防治雞傳染性法氏囊病卵黃免疫球蛋白納米脂質(zhì)體的制法，其特點(diǎn)是疫苗為弱毒疫苗、滅活疫苗和油乳劑疫苗；基礎(chǔ)免疫選用弱毒疫苗和滅活疫苗；加強(qiáng)免疫選用滅活疫苗和油乳劑疫苗。所述的防治雞傳染性法氏囊病卵黃免疫球蛋白納米脂質(zhì)體的制法，其特點(diǎn)是制成脂質(zhì)體薄膜時(shí)，卵磷脂和膽固醇的比例為6 - 8:1，維生素E為穩(wěn)定劑，用量3 — 7 %。，加工步驟為混合、有機(jī)溶劑溶解、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)、減壓、成膜。所述的防治雞傳染性法氏囊病卵黃免疫球蛋白納米脂質(zhì)體的制法，其特點(diǎn)是 制備脂質(zhì)體時(shí)，加入卵黃免疫球蛋白到脂質(zhì)體薄膜的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中進(jìn)行旋轉(zhuǎn)，時(shí)間10 -35min，形成卵黃免疫球蛋白脂質(zhì)體囊體。所述的防治雞傳染性法氏囊病卵黃免疫球蛋白納米脂質(zhì)體的制法，其特點(diǎn)是制備脂質(zhì)體時(shí)，用勻漿機(jī)對(duì)形成的脂質(zhì)體進(jìn)行重整包括切分、重整、再包裹得到納米級(jí)的脂質(zhì)體；勻漿機(jī)速度為8000 - 20000rpm,時(shí)間為5 — 20min。本發(fā)明具有的優(yōu)點(diǎn)和積極效果是
防治雞傳染性法氏囊病卵黃免疫球蛋白納米脂質(zhì)體的制法由于采用了本發(fā)明全新的技術(shù)方案，與現(xiàn)有技術(shù)相比，防治雞傳染性法氏囊病卵黃免疫球蛋白納米脂質(zhì)體的制法，利用脂質(zhì)體制藥技術(shù)，將卵黃免疫球蛋白包封，從而達(dá)到提高療效的目的，具有工藝簡(jiǎn)單，經(jīng)濟(jì)實(shí)用，產(chǎn)品性能穩(wěn)定，治療效果好，應(yīng)用范圍廣等優(yōu)點(diǎn)。


圖1是本發(fā)明的工藝流程示意圖。
具體實(shí)施例方式為能進(jìn)一步了解本發(fā)明的技術(shù)內(nèi)容、特點(diǎn)及功效，茲例舉以下實(shí)施例，并配合附圖詳細(xì)說明如下
4實(shí)施例1 參閱附圖1。本發(fā)明防治雞傳染性法氏囊病卵黃免疫球蛋白納米脂質(zhì)體的制備方法，包括以下工藝步驟
1、卵黃抗體的制備采用多次、交替的免疫方案，對(duì)實(shí)驗(yàn)雞進(jìn)行疫苗接種。當(dāng)實(shí)驗(yàn)雞卵黃抗體AGPT檢測(cè)效價(jià)在1 :64以上，收集卵黃。2、分離免疫球蛋白用pH 5.0的乙酸一乙酸鈉緩沖液，將卵黃懸液進(jìn)行9倍稀釋， 攪拌、靜置、離心、保留上清液。將上清液進(jìn)行濃縮處理。3、制備脂質(zhì)體采用薄膜分散法，制成脂質(zhì)體薄膜；加入卵黃免疫球蛋白經(jīng)旋轉(zhuǎn)、 攪拌，形成卵黃免疫球蛋白脂質(zhì)體囊體。再用高速勻漿機(jī)對(duì)已經(jīng)形成的脂質(zhì)體進(jìn)行重整，得到納米級(jí)的脂質(zhì)體。本實(shí)施例的具體工藝流程包括 1、卵黃抗體的制備
采用多次、交替的免疫方案，對(duì)實(shí)驗(yàn)雞進(jìn)行疫苗接種。所用疫苗為弱毒疫苗、滅活疫苗和油乳劑疫苗?；A(chǔ)免疫選用弱毒疫苗和滅活疫苗；加強(qiáng)免疫選用滅活疫苗和油乳劑疫苗； 為保持高水平的免疫效價(jià)而進(jìn)行的維護(hù)性免疫采用上述3種疫苗的交替使用，對(duì)不同疫苗的使用是根據(jù)抗體水平的不同作為依據(jù)來確定的。當(dāng)實(shí)驗(yàn)雞卵黃抗體AGPT檢測(cè)效價(jià)在1 :64以上，即可收集雞蛋，對(duì)其進(jìn)行浸泡消毒，無菌分離卵黃和蛋清，將卵黃勻漿并加入適量防腐劑，保存?zhèn)溆谩?、分離免疫球蛋白
取上述卵黃懸液，用0.05 mol / L，pH 5. 0的乙酸一乙酸鈉緩沖液，將卵黃懸液進(jìn)行9 倍稀釋，充分?jǐn)嚢韬螅?°C條件下靜置12小時(shí)以上。1 OOOXg離心20 min，棄去沉淀，保留上清液。將上清液采用超濾法對(duì)其進(jìn)行濃縮處理，超濾后的體積與原卵黃懸液相同。3、制備脂質(zhì)體
脂質(zhì)體制備采用薄膜分散法，卵磷脂和膽固醇的比例為7:1左右，以維生素E為穩(wěn)定劑，用量為5 %。左右。經(jīng)混合、有機(jī)溶劑溶解、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)、減壓、成膜等步驟初步制成脂質(zhì)體薄膜。將上述分離得到的卵黃免疫球蛋白加入到初步制成的脂質(zhì)體薄膜的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中進(jìn)行旋轉(zhuǎn)，使脂質(zhì)體薄膜對(duì)卵黃免疫球蛋白充分接觸并將其包裹，旋轉(zhuǎn)時(shí)間大約20分鐘左右，此時(shí)液體呈現(xiàn)均勻的乳白色，初步形成卵黃免疫球蛋白脂質(zhì)體囊體。將初步形成的卵黃免疫球蛋白脂質(zhì)體囊體轉(zhuǎn)移的高速勻漿機(jī)中，用高速勻漿機(jī)對(duì)已經(jīng)形成的脂質(zhì)體進(jìn)行切分、重整、再包裹等過程，以得到納米級(jí)的脂質(zhì)體。勻漿速度為 IOOOOrpm,時(shí)間為10分鐘左右。本實(shí)施例制備的防治雞傳染性法氏囊病卵黃免疫球蛋白納米脂質(zhì)體具有所述的優(yōu)點(diǎn)和積極效果。
權(quán)利要求
1.防治雞傳染性法氏囊病卵黃免疫球蛋白納米脂質(zhì)體的制法，其特征是黃免疫球蛋白納米脂質(zhì)體的制備包括以下工藝過程，1)卵黃抗體的制備采用多次、交替的免疫方法，對(duì)雞進(jìn)行疫苗接種；當(dāng)雞卵黃抗體 AGPT檢測(cè)效價(jià)在1 :64以上時(shí)，收集卵黃；2)分離免疫球蛋白用乙酸一乙酸鈉緩沖液，將卵黃懸液進(jìn)行稀釋，攪拌、靜置、離心， 保留上清液；3)制備脂質(zhì)體采用薄膜分散法，制成脂質(zhì)體薄膜；加入卵黃免疫球蛋白經(jīng)旋轉(zhuǎn)、攪拌，形成卵黃免疫球蛋白脂質(zhì)體囊體；用勻漿機(jī)對(duì)形成的脂質(zhì)體進(jìn)行重整，得到納米級(jí)的脂質(zhì)體。
2.按照權(quán)利要求1所述的防治雞傳染性法氏囊病卵黃免疫球蛋白納米脂質(zhì)體的制法， 其特征是分離免疫球蛋白時(shí)，用PH 4. 0 - 6. 0的乙酸一乙酸鈉緩沖液，將卵黃懸液進(jìn)行 6 - 12倍稀釋，得到的上清液進(jìn)行濃縮處理。
3.按照權(quán)利要求2所述的防治雞傳染性法氏囊病卵黃免疫球蛋白納米脂質(zhì)體的制法， 其特征是上清液采用超濾法進(jìn)行濃縮處理。
4.按照權(quán)利要求1所述的防治雞傳染性法氏囊病卵黃免疫球蛋白納米脂質(zhì)體的制法， 其特征是分離免疫球蛋白時(shí)，靜置條件為2 - 6°C、12小時(shí)以上；離心條件為2000Xg、 10 — 30 min0
5.按照權(quán)利要求1所述的防治雞傳染性法氏囊病卵黃免疫球蛋白納米脂質(zhì)體的制法， 其特征是疫苗為弱毒疫苗、滅活疫苗和油乳劑疫苗；基礎(chǔ)免疫選用弱毒疫苗和滅活疫苗； 加強(qiáng)免疫選用滅活疫苗和油乳劑疫苗。
6.按照權(quán)利要求1所述的防治雞傳染性法氏囊病卵黃免疫球蛋白納米脂質(zhì)體的制法， 其特征是制成脂質(zhì)體薄膜時(shí)，卵磷脂和膽固醇的比例為6 — 8:1，維生素E為穩(wěn)定劑，用量 3 - 7 %。，加工步驟為混合、有機(jī)溶劑溶解、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)、減壓、成膜。
7.按照權(quán)利要求1所述的防治雞傳染性法氏囊病卵黃免疫球蛋白納米脂質(zhì)體的制法， 其特征是制備脂質(zhì)體時(shí)，加入卵黃免疫球蛋白到脂質(zhì)體薄膜的旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)瓶中進(jìn)行旋轉(zhuǎn)，時(shí)間10 - 35min，形成卵黃免疫球蛋白脂質(zhì)體囊體。
8.按照權(quán)利要求1所述的防治雞傳染性法氏囊病卵黃免疫球蛋白納米脂質(zhì)體的制法， 其特征是制備脂質(zhì)體時(shí)，用勻漿機(jī)對(duì)形成的脂質(zhì)體進(jìn)行重整包括切分、重整、再包裹得到納米級(jí)的脂質(zhì)體；勻漿機(jī)速度為8000 - 20000rpm,時(shí)間為5 — 20min。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種防治雞傳染性法氏囊病卵黃免疫球蛋白納米脂質(zhì)體的制法。本發(fā)明屬于動(dòng)物藥品制劑技術(shù)領(lǐng)域。防治雞傳染性法氏囊病卵黃免疫球蛋白納米脂質(zhì)體的制備過程1、卵黃抗體的制備多次、交替免疫方法對(duì)雞進(jìn)行疫苗接種；當(dāng)雞卵黃抗體AGPT檢測(cè)效價(jià)在164以上時(shí)，收集卵黃；2、分離免疫球蛋白用乙酸—乙酸鈉緩沖液，將卵黃懸液進(jìn)行稀釋，攪拌、靜置、離心，保留上清液；3、制備脂質(zhì)體采用薄膜分散法，制成脂質(zhì)體薄膜；加入卵黃免疫球蛋白經(jīng)旋轉(zhuǎn)、攪拌，形成卵黃免疫球蛋白脂質(zhì)體囊體；用勻漿機(jī)對(duì)形成的脂質(zhì)體囊體進(jìn)行重整，得到納米級(jí)的脂質(zhì)體。本發(fā)明將卵黃免疫球蛋白包封，具有工藝簡(jiǎn)單，經(jīng)濟(jì)實(shí)用，制劑性能穩(wěn)定，治療效果好等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61K39/42GK102210863SQ20111009516
公開日2011年10月12日 申請(qǐng)日期2011年4月15日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月15日
發(fā)明者常蕊, 張文生, 張燕欣, 李富桂, 趙云英 申請(qǐng)人:張文生