專利名稱：Trpm7基因及其表達(dá)產(chǎn)物的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種基因的應(yīng)用，特別是涉及一種TRPM7基因及其表達(dá)產(chǎn)物的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
蛋白激酶是由人類基因組中最大的一類基因所編碼，其作用是通過(guò)將磷酸基團(tuán)轉(zhuǎn)移至底物蛋白上，來(lái)調(diào)控各種蛋白的活性、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及細(xì)胞生物學(xué)過(guò)程，人類基因組編碼超過(guò)57個(gè)激酶家族之中的518種蛋白激酶，大約有55%已知的原癌基因編碼蛋白激酶，其余多數(shù)的原癌基因則編碼可激活蛋白質(zhì)激酶或被激酶磷酸化的特異蛋白。所有蛋白激酶參與細(xì)胞信號(hào)通路，參與心血管疾病、糖尿病、感染性疾病、關(guān)節(jié)炎和其它免 疫紊亂、神經(jīng)系統(tǒng)如老年性癡呆癥，阿默海茨癥AD等發(fā)病機(jī)制，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)與超過(guò)400種人類疾病與蛋白激酶相關(guān)。美國(guó)FDA的制藥和生物技術(shù)公司中有四分之一的藥物研究開(kāi)發(fā)方案集中在研發(fā)新的蛋白激酶抑制劑，這些藥物應(yīng)用于治療包括腫瘤、炎癥、心力裳竭、糖尿病和神經(jīng)系統(tǒng)疾病，超過(guò)60種的蛋白激酶抑制劑正在臨床試驗(yàn)之中，其中許多已開(kāi)發(fā)上市，如諾華(Novartis)的Gleevec ，阿利斯康(AstraZeneca)的Iressa ,施貴寶的 Tarceva (Genentech and OSI Pharmaceuticals),拜爾的 Nexavar (Bayer),輝瑞的Sutent (Pfzer), Sprycel (Bristol-Myers Squibb),和葛蘭素史克的Tykerb (GlaxoSmithKline)]，制藥公司清楚地認(rèn)識(shí)到蛋白激酶抑制劑的重要性，已成為藥物研發(fā)的熱點(diǎn)。肝癌嚴(yán)重威脅著我國(guó)人民的生命健康。肝癌的診斷，尤其早期診斷是臨床診療和預(yù)后的關(guān)鍵。肝癌的治療在過(guò)去20年來(lái)已取得很大的進(jìn)展，外科手術(shù)切除及肝臟移植屬于“根治性”治療，仍是肝癌治療的首要選擇。隨著肝癌早期診斷水平的提高及腫瘤治療生物學(xué)概念的改變，腫瘤局部非手術(shù)治療在肝癌治療中的地位日益提高。經(jīng)導(dǎo)管動(dòng)脈內(nèi)化療栓塞(TACE)已成為不能切除肝癌治療的首選方法，是中晚期肝癌治療的重要手段。該方法可使90%以上的肝癌患者受益，但總體療效有待提高。此外，經(jīng)皮肝穿刺瘤內(nèi)無(wú)水乙醇治療(PEI)也是較常用的局部化療方法，對(duì)癌直徑< 3cm的肝癌及門(mén)靜脈癌栓的治療有一定價(jià)值。但目前肝癌的化療藥物基本沿用其他腫瘤的治療藥物，針對(duì)性差，療效不佳，因此，迫切需要尋找新的作用靶點(diǎn)，研究和開(kāi)發(fā)肝癌特異的新藥物，提高化療的特異性和有效性。近幾年來(lái)隨著對(duì)肝癌基礎(chǔ)研究的深入，生物治療在肝癌的綜合治療中取得了較大進(jìn)展，成了繼手術(shù)、放療、化療后腫瘤治療的第四大療法，如免疫治療、基因治療，包括抗血管生成、自殺基因治療、腫瘤疫苗治療、siRNA技術(shù)等。但許多生物治療的臨床療效仍不十分滿意，且絕大多數(shù)還處在實(shí)驗(yàn)研究階段，相關(guān)的關(guān)鍵理論和實(shí)驗(yàn)技術(shù)仍需進(jìn)一步研究和發(fā)展。
TRPM7基因編碼的蛋白既是一種離子通道又是絲/蘇氨酸蛋白激酶，其激酶活性對(duì)增加細(xì)胞內(nèi)鈣離子水平、調(diào)節(jié)鎂離子平衡的離子通道功能是必需的。本發(fā)明中首次公開(kāi)了干擾TRPM7基因能夠抑制肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，提示TRPM7基因是一種新型的制備肝癌治療藥物的靶點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題之一是提供一種TRPM7基因及其表達(dá)產(chǎn)物在制備治療肝癌的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題之二是提供三對(duì)TRPM7基因的siRNA，該三對(duì)siRNA可用于制備治療肝癌的藥物。為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)在本發(fā)明的一方面，提供了一種TRPM7基因在制備治療肝癌的藥物中的應(yīng)用。所述治療肝癌的藥物包括通過(guò)RNA干擾抑制TRPM7基因表達(dá)的雙鏈核糖核酸、攜帶特異性針對(duì)TRPM7基因干擾其表達(dá)的DNA載體、腺病毒或腺相關(guān)病毒載體、能夠抑制TRPM7蛋白激酶活性的化合物、多肽、單克隆抗體。為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明中TRPM7基因作為制備肝癌治療藥物的靶點(diǎn)，本發(fā)明通過(guò)如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)I、化學(xué)合成雙鏈核糖核酸分子，其序列特異性針對(duì)TRPM7基因序列，利用脂質(zhì)體包裹遞送至肝癌細(xì)胞內(nèi)，干擾TRPM7基因的表達(dá)，CCK-8法測(cè)量肝癌細(xì)胞Huh-7，H印3B，MHCC-97H，MHCC-97L生長(zhǎng)活性。本發(fā)明中實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明特異性針對(duì)TRPM7基因的小核糖核酸分子能夠抑制肝癌細(xì)胞體外的生長(zhǎng)，說(shuō)明TRPM7基因可用作制備肝癌治療藥物的靶基因。本發(fā)明中用于特異性干擾TRPM7基因的小核糖核酸序列設(shè)計(jì)原則如下(I)從轉(zhuǎn)錄本(mRNA)的AUG起始密碼開(kāi)始，尋找“AA” 二連序列，并記下其3’端的19個(gè)堿基序列，作為潛在的siRNA靶位點(diǎn)。有研究結(jié)果顯示GC含量在45% -55%左右的siRNA要比那些GC含量偏高的更為有效。Tuschl等建議在設(shè)計(jì)siRNA時(shí)不要針對(duì)5’和3’端的非編碼區(qū)(untranslated regions, UTRs),原因是這些地方有豐富的調(diào)控蛋白結(jié)合區(qū)域，而這些UTR結(jié)合蛋白或者翻譯起始復(fù)合物可能會(huì)影響siRNA核酸內(nèi)切酶復(fù)合物結(jié)合mRNA從而影響siRNA的效果。(2)將潛在的序列和相應(yīng)的基因組數(shù)據(jù)庫(kù)(人，或者小鼠，大鼠等等)進(jìn)行比較，排除那些和其他編碼序列/EST同源的序列。例如使用BLAST(www. ncbi. nlm. nih. gov/BLAST/)。(3)選出合適的目標(biāo)序列進(jìn)行合成。通常一個(gè)基因需要設(shè)計(jì)多個(gè)靶序列的siRNA，以找到最有效的siRNA序列體外評(píng)估干擾TRPM7基因表達(dá)，肝癌細(xì)胞克隆形成能力、軟瓊脂克隆形成能力、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡等細(xì)胞生物學(xué)特性的改變。2、體外評(píng)估干擾TRPM7基因表達(dá)，肝癌細(xì)胞克隆形成能力、軟瓊脂克隆形成能力、細(xì)胞周期、細(xì)胞凋亡等細(xì)胞生物學(xué)特性的改變。3、利用各種載體，包括DAN載體、腺病毒、腺相關(guān)病毒載體來(lái)干擾TRPM7基因的表達(dá)，達(dá)到體內(nèi)干擾TRPM7基因的效果，檢測(cè)它們對(duì)裸鼠皮下移植瘤、肝臟原位接種瘤的治療效果，從而實(shí)現(xiàn)抑制肝癌細(xì)胞體內(nèi)增殖的目的。4、獲得能夠特異性抑制TRPM7基因激酶活性的多肽、單克隆抗體，達(dá)到抑制TRPM7激酶活性的目的，從而實(shí)現(xiàn)抑制肝癌細(xì)胞體內(nèi)增殖的目的。在本發(fā)明中，可以使用一系列本領(lǐng)域已知的方法來(lái)制備針對(duì)TRPM7蛋白特異的抗體。例如，將提純的人TRPM7基因產(chǎn)物或它的抗原片段注射入動(dòng)物體內(nèi)以產(chǎn)生多克隆抗體。同樣，表達(dá)人TRPM7蛋白或它的抗原的細(xì)胞也可以用來(lái)對(duì)動(dòng)物致免疫而產(chǎn)生抗體。根據(jù)本發(fā)明制備的抗體可以是單克隆抗體，這些單克隆抗體可用雜交瘤及時(shí)制備。本發(fā)明的抗體包括可以阻抑TRPM7功能的抗體，也可以是不影響人TRPM7功能的抗體。每一類抗體都可以通過(guò)對(duì)人TRPM7基因產(chǎn)物的片段或功能域致免疫而產(chǎn)生，而人TRPM7基因產(chǎn)物及其片段可以用重組方法產(chǎn)生或用多肽合成儀進(jìn)行合成。與非修飾形式的TRPM7基因產(chǎn)物結(jié)合的抗體，可以利用在原核細(xì)胞例如E. coli中產(chǎn)生的基因產(chǎn)物來(lái)免疫動(dòng)物而得到。與翻譯后修飾形式如糖基化或磷酸化TRPM7蛋白或多肽結(jié)合的抗體，可以利用在真核細(xì)胞如酵母或昆蟲(chóng)細(xì)胞中產(chǎn)生的基因產(chǎn)物來(lái)免疫動(dòng)物而得到。5、獲得能夠特異性抑制TRPM7基因激酶活性的化合物，達(dá)到抑制TRPM7激酶活性的目的，從而現(xiàn)實(shí)抑制肝癌細(xì)胞增殖的目的。在本發(fā)明中，TRPM7蛋白激酶特異性抑制劑可以使用一系列已知的方法來(lái)制備。例如，建立特異性激酶活性檢測(cè)體系，對(duì)小分子化合物庫(kù)進(jìn)行高通量篩選；或者利用計(jì)算機(jī)輔助的方法進(jìn)行激酶結(jié)構(gòu)建模，分子對(duì)接的方法預(yù)測(cè)出高可信度的抑制物，再通過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證
坐寸o在本發(fā)明的另一方面，提供用于制備治療肝癌的藥物的TRPM7基因的三對(duì)siRNA，分別為 TRPM7-sil，TRPM7-si2，TRPM7-si3。其中，TRPM7_sil 的正義鏈具有如 SEQ ID NO. I所示序列，TRPM7-sil的反義鏈具有如SEQ ID NO. 2所示序列。TRPM7_si2的正義鏈具有如SEQ ID NO. 3所示序列，TRPM7-si2的反義鏈具有如SEQ ID NO. 4所示序列。TRPM7_si3的正義鏈具有如SEQ ID NO. 5所示序列，TRPM7-si3的反義鏈具有如SEQ ID NO. 6所示序列。本發(fā)明實(shí)驗(yàn)證實(shí)通過(guò)TRPM7基因序列特異性siRNA干擾可以顯著抑制肝癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，因此TRPM7基因及其表達(dá)產(chǎn)物可用于肝癌治療的藥物靶點(diǎn)，提供了新的肝癌治療的基因靶點(diǎn)?？傊?，本發(fā)明TRPM7基因?yàn)榉乐胃伟┨峁┝诵碌闹委煱悬c(diǎn)和有效新藥。


下面結(jié)合附圖與具體實(shí)施方式
對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明圖I為實(shí)施例I中RNAi篩選技術(shù)體系示意圖。圖2為實(shí)施例I中全激酶組規(guī)模RNAi細(xì)胞學(xué)篩選生長(zhǎng)相關(guān)激酶的總體分布情況示意圖。其中，圖3A的橫坐標(biāo)參數(shù)表示在四株肝癌細(xì)胞H印3B，Huh-7，MHCC-97H，MHCC-97L中每個(gè)siRNA影響細(xì)胞活性的程度,縱坐標(biāo)參數(shù)表示細(xì)胞學(xué)篩選中每個(gè)siRNA的變異系數(shù)情況。圖3B顯示了細(xì)胞RNAi篩選中四株細(xì)胞Z值的頻數(shù)分布情況。圖3為實(shí)施例I中細(xì)胞RNAi篩選中每株細(xì)胞Z值區(qū)段頻數(shù)累計(jì)分布曲線及根據(jù)5 %可信區(qū)間、10 %分析區(qū)間取得相應(yīng)的臨界Z值，用于獲取篩選中有意義的siRNA及對(duì)應(yīng)的激酶基因。圖4為實(shí)施例I中在篩選體系中5%可信區(qū)間、10%分析區(qū)間內(nèi)四株肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)必須的siRNAs及相應(yīng)激酶數(shù)量示意圖。圖5為實(shí)施例I中RNAi篩選體系鑒定干擾TRPM7基因?qū)λ闹旮伟┘?xì)胞生長(zhǎng)活性的影響情況示意圖，結(jié)果顯示RNA干擾TRPM7基因能夠抑制肝癌細(xì)胞H印3B、MHCC_97H的生長(zhǎng)。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明。以下實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條件，例如Sambrook等人,分子克隆實(shí)驗(yàn)室手冊(cè)(NewYork ColdSpring Harbor Laboratory Press, 1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。實(shí)施例I全激酶組范圍內(nèi)RNAi篩選肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)必需激酶基因 RNAi作為一種簡(jiǎn)單快速、特異、高效、經(jīng)濟(jì)、效果可預(yù)測(cè)的技術(shù)，具有明顯的優(yōu)點(diǎn)，它比反義核酸技術(shù)優(yōu)越，比基因敲除簡(jiǎn)單，具有很好的應(yīng)用前景。具體可用于以下幾個(gè)方面基因功能分析；研究信號(hào)傳導(dǎo)通路的新途徑；新藥物的研究和開(kāi)發(fā)；基因治療。RNAi只抑制致病基因，而不影響正常等位基因的功能，具有較高的選擇性和特異性，能減少非特異作用引起的副作用。腫瘤發(fā)生是多基因相互作用的基因網(wǎng)絡(luò)調(diào)控的結(jié)果，傳統(tǒng)技術(shù)誘發(fā)的單一癌基因的阻斷不可能完全抑制或逆轉(zhuǎn)腫瘤的生長(zhǎng)，而RNAi可以利用同一基因家族的多個(gè)基因具有一段同源性很高的保守序列這一特性，設(shè)計(jì)針對(duì)這一區(qū)段序列的dsRNA分子，只注射一種dsRNA即可以產(chǎn)生多個(gè)基因同時(shí)沉默的效應(yīng)，也可以同時(shí)注射多種dsRNA而將多個(gè)序列不相關(guān)的基因同時(shí)沉默。針對(duì)人類基因組上所有激酶及激酶相關(guān)基因的siRNAs庫(kù)通過(guò)商業(yè)化途徑獲得(Stealth RNAi Human Kinase Collection, Invitrogen, Catalog no. 12938-200)。每套Stealth RNAi Collection 由若干 96 孔板組成,2nmoles 的 Stealth RNAi 溶解在 100 U I的 IX RNA 退火 / 稀釋溶液中(IOmM Tris-HCl，pH 8. 0 ；20mM NaCl ；lmM EDTA, pH 8. 0)，終濃度為20 u MoCCK-8測(cè)定細(xì)胞活性CCK_8試劑可用于簡(jiǎn)便而準(zhǔn)確的細(xì)胞增殖和毒性分析。其基本原理為該試劑中含WST-8 [其化學(xué)名稱為2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2，4_ 二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽]，它在電子載體I-甲氧基-5-甲基吩嗪硫酸二甲酯(I-MethoxyPMS)的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲染料(Formazan dye)。細(xì)胞增殖越多越快,則顏色越深；細(xì)胞毒性越大,則顏色越淺。對(duì)于同樣的細(xì)胞，顏色的深淺和細(xì)胞數(shù)目呈線性關(guān)系。分光光度計(jì)讀數(shù)，產(chǎn)生原始細(xì)胞活性數(shù)據(jù)，實(shí)驗(yàn)流程如圖I所示。原始數(shù)據(jù)經(jīng)過(guò)標(biāo)準(zhǔn)化，數(shù)據(jù)校正、Z值評(píng)估等步驟，得到siRNA庫(kù)對(duì)肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)影響的數(shù)據(jù)(見(jiàn)圖2-5)，用于進(jìn)一步分析。如圖5所示，siRNAs干擾TRPM7基因?qū)λ闹旮伟┘?xì)胞H印3B，Huh-7, MHCC-97H，MHCC-97L生長(zhǎng)活性的影響結(jié)果顯示RNA干擾TRPM7基因能夠顯著抑制肝癌細(xì)胞H印3B，MHCC-97H的生長(zhǎng)。實(shí)施例2shRNAs干擾TRPM7基因抑制肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)將構(gòu)建好的質(zhì)粒pSUPER質(zhì)粒轉(zhuǎn)染肝癌細(xì)胞后48小時(shí)后抽提細(xì)胞株RNA，定量PCR鑒定RNA干擾的效果，確認(rèn)質(zhì)粒能夠發(fā)揮RNAi效應(yīng)后，與pcDNA3. I (質(zhì)粒質(zhì)量比5 : I)共轉(zhuǎn)染，將細(xì)胞重新接種于IOcm大盤(pán)中培養(yǎng)，同時(shí)培養(yǎng)液中加入新霉素G418進(jìn)行篩選培養(yǎng)
4 6周，去除培養(yǎng)液，IXPBS漂洗兩遍后結(jié)晶紫染色后拍照計(jì)數(shù)。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明定量PCR檢測(cè)shRNAs有效沉默TRPM7基因的表達(dá)，并且顯著抑制細(xì)胞克隆形成能力。實(shí)施例3免疫檢測(cè)
I.抗原蛋白獲得(I)利用基因工程表達(dá)可從Genebank數(shù)據(jù)庫(kù)中獲得人TRPM7基因的cDNA序列，通過(guò)PCR擴(kuò)增獲得編碼框，插入原核生物或真核生物表達(dá)載體中，表達(dá)TRPM7蛋白，并按基因工程表達(dá)產(chǎn)物的純化體系純化蛋白。2.抗體制備可采用以下幾種方法制備抗體(I)細(xì)胞融合法用上述制備的TRPM7蛋白免疫動(dòng)物(包括兔子、山羊等)，獲得脾臟細(xì)胞，再與骨髓瘤細(xì)胞融合，并按常規(guī)單克隆抗體制備技術(shù)制備單克隆抗體。(2)利用噬菌體表面展示庫(kù)，克隆免疫動(dòng)物的脾臟IgG可變區(qū)并表達(dá)成基因工程單克隆抗體。
(3)利用純化的蛋白免疫動(dòng)物，制備多抗血清。實(shí)施例4TRPM7基因的小干擾核糖核酸(siRNA)體外化學(xué)合成小干擾核糖核酸(siRNA)具有快速、簡(jiǎn)單和特異性強(qiáng)等特點(diǎn)，在抗腫瘤治療等方面有廣泛的應(yīng)用前景。針對(duì)TRPM7基因mRNA設(shè)計(jì)合成三條siRNAs，對(duì)應(yīng)靶序列分別如下TRPM7-sil :正義鏈GGGAGCCUGUCACAGUGUAUCGUUU (SEQ ID NO 1),反義鏈AAACGAUACACUGUGACAGGCUCCC(SEQ ID NO 2)；TRPM7-si2 正義鏈CAACUAAUUCUGUUCGUCUGAUGUU(SEQ ID NO 3),反義鏈AACAUCAGACGAACAGAAUUAGUUG(SEQ ID NO 4)；TRPM7-si3 :正義鏈GGUGGUUAAUACAUGGUCAAGUAUU(SEQ ID NO :5);反義鏈AAUACUUGACCAUGUAUUAACCACC(SEQ ID NO :6)。另外設(shè)置無(wú)關(guān)序列作為陰性對(duì)照siRNA，其序列如下正義鏈，5’-UUCUCCGAACGUGUCACGUdTdT-3’(SEQ ID NO :7)，反義鏈，5’-ACGUGACACGUUCGGAGAAdTdT-3’(SEQ ID NO :8)。在96孔板中每孔接種3X 103Huh-7，H印B，MHCC-97H和MHCC-97L細(xì)胞(來(lái)源于中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞庫(kù))，待細(xì)胞密度達(dá)到40%左右時(shí)，利用脂質(zhì)體(Lipofectamine 2000)轉(zhuǎn)染試劑分別將上述3種siRNA按終濃度50nmol/L轉(zhuǎn)染進(jìn)Huh_7，IfepB，MHCC-97H和MHCC-97L細(xì)胞中，4h后換成含10%胎牛血清的DMEM。以24h為I個(gè)檢測(cè)單位培養(yǎng)7d，每天檢測(cè)I次該細(xì)胞密度。每孔待測(cè)細(xì)胞液中加IOy L CCK-8，37°C孵育lh。利用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下檢測(cè)其吸光度以代表細(xì)胞存活能力，繪制生長(zhǎng)曲線。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明特異性干擾TRPM7表達(dá)的小干擾核糖核酸(siRNA)能夠抑制肝癌細(xì)胞系MHCC-97H的生長(zhǎng)，肝癌細(xì)胞的存活率明顯低于對(duì)照組的細(xì)胞，說(shuō)明人TRPM7基因的表達(dá)下調(diào)能在一定程度上抑制肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)。序列表〈110〉上海人類基因組研究中心<120>TRPM7基因及其表達(dá)產(chǎn)物的應(yīng)用<130>CPC-NP-11-15115<160>8<170>PatentIn version 3. 3<210>1
<211>25<212>RNA〈213〉人工序列〈220〉<221>misc_RNA〈222〉(I)(25)<223>siRNA〈400〉I gggagccugu cacaguguau cguuu 25<210>2<211>25<212>RNA〈213〉人工序列〈220〉<221>misc_RNA〈222〉(I)(25)<223>siRNA<400>2aaacgauaca cugugacagg cuccc 25<210>3<211>25<212>RNA〈213〉人工序列〈220〉<221>misc_RNA〈222〉(I)(25)<223>siRNA〈400>3caacuaauuc uguucgucug auguu 25<210>4<211>25<212>RNA〈213〉人工序列〈220〉<221>misc_RNA〈222〉(I)(25)<223>siRNA<400>4aacaucagac gaacagaauu aguug 25
<210>5<211>25<212>RNA〈213〉人工序列〈220〉<221>misc_RNA 〈222〉(I)(25)<223>siRNA<400>5ggugguuaau acauggucaa guauu 25<210>6<211>25<212>RNA〈213〉人工序列〈220〉<221>misc_RNA〈222〉(I)(25)<223>siRNA<400>6aauacuugac cauguauuaa ccacc 25<210>7<211>21<212>RNA〈213〉人工序列〈220〉<221>misc_RNA〈222〉(I)(21)<223>siRNA<400>7uucuccgaac gugucacgut t 21<210>8<211>21<212>RNA〈213〉人工序列〈220〉<221>misc_RNA〈222〉(I)(21)<223>siRNA<400>8
acgugacacg uucggagaat t 2權(quán)利要求
1.ー種TRPM7基因及其表達(dá)產(chǎn)物的應(yīng)用，其特征在于，所述TRPM7基因及其表達(dá)產(chǎn)物在制備治療肝癌的藥物中的應(yīng)用。
2.如權(quán)利要求I所述的應(yīng)用，其特征在于，所述治療肝癌的藥物包括通過(guò)RNA干擾抑制TRPM7基因表達(dá)的雙鏈核糖核酸、攜帶特異性針對(duì)TRPM7基因干擾其表達(dá)的DNA載體、腺病毒或腺相關(guān)病毒載體、能夠抑制TRPM7蛋白激酶活性的化合物、多肽、單克隆抗體。
3.用于制備治療肝癌的藥物的ー對(duì)TRPM7基因的siRNA，其特征在于所述siRNA的正義鏈具有如SEQ ID NO. I所示序列，所述siRNA的反義鏈具有如SEQ ID NO. 2所示序列。
4.用于制備治療肝癌的藥物的ー對(duì)TRPM7基因的siRNA，其特征在于所述siRNA的正義鏈具有如SEQ ID NO. 3所示序列，所述siRNA的反義鏈具有如SEQ ID NO. 4所示序列。
5.用于制備治療肝癌的藥物的ー對(duì)TRPM7基因的siRNA，其特征在于所述siRNA的正義鏈具有如SEQ ID NO. 5所示序列，所述siRNA的反義鏈具有如SEQ ID NO. 6所示序列。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種TRPM7基因及其表達(dá)產(chǎn)物的應(yīng)用，用于制備肝癌治療的產(chǎn)品。本發(fā)明的TRPM7基因及其表達(dá)產(chǎn)物可作為制備治療肝癌藥物的靶基因，提供新的肝癌治療途徑。
文檔編號(hào)A61P1/16GK102690866SQ20111006990
公開(kāi)日2012年9月26日 申請(qǐng)日期2011年3月23日 優(yōu)先權(quán)日2011年3月23日
發(fā)明者李坤雨, 鄧慶, 韓澤廣 申請(qǐng)人:上海人類基因組研究中心