專利名稱：用于治療白血病的方法和組合物的制作方法
用于治療白血病的方法和組合物發(fā)明背景發(fā)明領(lǐng)域用于治療白血病的BCR-ABL抑制劑和刺猬(hedgehog)途徑抑制劑的組合。相關(guān)
背景技術(shù)：
本領(lǐng)域已描述了刺猬(hedgehog)信號傳導(dǎo)途徑(參見例如Nybakken等人,Curr.Opin. Genet. Dev. 2002，12 :503-511 ;和 Lum等人，Science 2003，299 :2039-2045)。簡言之，在不存在刺猬(hedgehog)配體的情況下，跨膜受體Patched (Ptch)結(jié)合Smoothened (Smo)并阻斷Smo的功能。在配體存在時，這種抑制作用有所緩解，這使Smo引發(fā)信號傳導(dǎo)級聯(lián)，而導(dǎo)致轉(zhuǎn)錄因子Glis從融合的胞質(zhì)蛋白(cytoplasmic proteins fused) (Fu)和Suppressor of Fused(SuFu)釋放。在失活情況下，SuFu防止Glis轉(zhuǎn)位至細胞核。在活性情況下，F(xiàn)u抑制SuFu,從而Glis被釋放。Gli蛋白轉(zhuǎn)位至細胞核中并控制祀基因轉(zhuǎn)錄。BCR-ABL致癌基因是費城染色體(Ph) 22q的產(chǎn)物，并編碼嵌合BCR-ABL蛋白，該嵌合BCR-ABL蛋白已組成型激活A(yù)BL酪氨酸激酶活性。(Lugo等人，Science 1990，247 1079-1082)。BCR-ABL是慢性髓性白血病(aka慢性髓性白血病或CML)的潛在原因。2IOkDaBCR-ABL蛋白在CML患者中表達，但是從BCR基因中的替代斷裂點產(chǎn)生的190kDaBCR_ABL蛋白在Ph陽性(Ph+)急性成淋巴細胞性白血病(ALL)患者中表達。(Bartram等人，Nature1983，306 :277-280 ；Chan 等人，Nature 1987，325 :635-637)。已經(jīng)顯示BCR-ABL通過各種機制在定型髓樣或淋巴樣祖細胞或3T3成纖維細胞中誘導(dǎo)增殖和抗-細胞凋亡。(Pendergast等人，Cell 1993, 75 :175-85 ;Ilaria等人,J. Biol.Chem. 1996，271:31704-10 ；Chai 等人，J. Immunol. 1997，159 :4720-8 ；和 Skorski等人，EMBO J. 1997，16 :6151-61)。然而，關(guān)于BCR-ABL對造血干細胞(HSC)種群的作用知之甚少。最近的出版物表明發(fā)育途徑如fct信號傳導(dǎo)途徑或Polycomb基因BMIl可能與白血病干細胞的調(diào)節(jié)和擴增有關(guān)(Mohty等人，Blood, 2007 ;Hosen等人，Stem Cells, 2007)。BMIl和￠-連環(huán)蛋白在CML原始細胞危象(blast crisis)中均得以上調(diào)，且它們的表達與疾病的進展相關(guān)。具有獲得性P -連環(huán)蛋白表達的BCR-ABL陽性粒細胞-巨噬細胞祖細胞是原始細胞危象CML中的候選白血病干細胞。自我更新途徑與慢性期BCR-ABL陽性白血病干細胞的擴增有關(guān)，這種擴增導(dǎo)致惡性克隆的初期擴增。發(fā)明簡述本發(fā)明提供可用于抑制腫瘤細胞生長并用于治療多種癌癥的組合和治療性治療方法。一方面，本發(fā)明提供包含抑制刺猬(hedgehog)信號傳導(dǎo)途徑的第一活性劑和抑制BCR-ABL的第二活性劑的組合。另一方面，本發(fā)明提供包含治療有效量的抑制刺猬(hedgehog)信號傳導(dǎo)途徑的第一活性劑、抑制BCR-ABL的第二活性劑和藥學(xué)上可接受載體的藥物組合物。本發(fā)明還提供用于治療癌癥、特別是BCR-ABL陽性白血病如CML的方法，其包括向系統(tǒng)或?qū)ο笫┯弥委熡行Я康陌种拼题?hedgehog)信號傳導(dǎo)途徑的第一活性劑和抑制BCR-ABL的第二活性劑或其藥學(xué)上可接受的鹽或藥物組合物的組合物，由此治療所述BCR-ABL陽性白血病。例如，本發(fā)明的組合物可用于治療慢性髓性白血病或急性淋巴細胞白血病。而且，本發(fā)明提供治療有效量的包含抑制刺猬(hedgehog)信號傳導(dǎo)途徑的第一活性劑和抑制BCR-ABL的第二活性劑或其藥學(xué)上可接受的鹽的組合或其藥物組合物在制備用于治療細胞增殖性病癥、特別是BCR-ABL陽性白血病的藥劑中的用途。在上述組合物和使用本發(fā)明的組合物的方法中，本發(fā)明組合物中的第一活性劑可結(jié)合Smo。在其它實施方案中，本發(fā)明組合物中的第二活性劑是ABL抑制劑、ABL/Scr抑制齊U、極光(Aurora)激酶抑制劑或BCR-ABL的非-ATP競爭性抑制劑。在上述組合、組合物和使用本發(fā)明的組合物的方法中，可給包括細胞或組織的系 統(tǒng)施用本發(fā)明組合物。在一些實施方案中，可給人患者或動物對象施用本發(fā)明組合物。附圖簡述圖I表示“第一次再接種”實驗，其中用遞增濃度的化合物A處理3天后，由原代CML細胞的單菌落形成的第二代菌落的總數(shù)。結(jié)果表示為未處理對照的百分比。圖2表示在圖I的“第二次再接種”后形成的原代CML細胞的菌落總數(shù)。結(jié)果表示為未處理對照的百分比。表明第二次再接種后形成的菌落總數(shù)。圖3描述了在三次重復(fù)中所得第二代菌落的總數(shù)，表示為未處理對照的百分比。圖4是在用化合物A或尼羅替尼(nilotinib)或這兩種藥物處理3天的原代CML細胞的實驗中第二代菌落總數(shù)的示例性實施例。結(jié)果表示為未處理對照的百分比。圖5表明在暴露于化合物A、尼羅替尼或兩者組合7天后，在“第一次再接種”實驗中產(chǎn)生的第二代菌落的總數(shù)。結(jié)果表示為未處理對照的百分比。圖6表明在暴露于化合物A、尼羅替尼或兩者組合3天后，在“第一次再接種”試驗中產(chǎn)生的第二代菌落的總數(shù)。結(jié)果表示為未處理對照的百分比。圖7表明通過計算曲線下面積(AUC)而得的原代CML細胞用化合物A、尼羅替尼或這兩種藥物處理后的增殖指數(shù)(PD。該Pi既反映了產(chǎn)生的菌落也反映了它們的滅絕率。圖8是將2. 5X IO5個感染有Bcr_abl逆轉(zhuǎn)錄病毒的小鼠骨髓細胞以400ul/每孔(48孔板)接種于存在所示濃度的AMN107和化合物A的OPTI-MEM培養(yǎng)基(10% FBS, 0. I %2_ 疏基乙醇，50ng/ml SCF, 25ng/mlmIL_3 和 25ng/ml mIL-6)中。培養(yǎng) 3 天后，以 1500 個細胞/35_板的濃度將細胞接種在甲基纖維素中。在接種后10天對菌落形成進行評分。圖9 :將由圖8的第一次接種試驗獲得的菌落重懸浮，在含10% FCS的PBS中洗滌。將細胞重懸浮在OPTI-MEM培養(yǎng)基中，以5000個細胞/35mm板的濃度接種在甲基纖維素中。在接種后10天對菌落形成進行評分。

圖10比較了在小鼠CML模型中對照媒介物、化合物A、AMN107及化合物A與ANM107的組合的存活率。發(fā)明詳述通過下面代表性實例非限制性地進一步例證本發(fā)明，這些實例旨在闡述本發(fā)明且不被理解為局限于此。式I化合物-Smo抑制劑
一方面，本發(fā)明提供式I化合物
權(quán)利要求
1.組合，其包含為Smo抑制劑的第一活性劑和為BCR-ABL抑制劑的第二活性剤， 其中所述第一活性劑是式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽
2.權(quán)利要求I的組合，其中所述第一活性劑是2-甲基-4'-三氟甲氧基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(順式-2，6- ニ甲基-嗎啉-4-基)-吡啶-3-基]-酰胺或其藥學(xué)上可接受的鹽。
3.權(quán)利要求I的組合，其中所述第一活性劑是2-[(R) -4- (6-芐基-4，5- ニ甲基-噠嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6_四氫-2H-[1，2']聯(lián)吡嗪基-5'-基]-丙-2-醇或其藥學(xué)上可接受的鹽。
4.權(quán)利要求I的組合，其中所述第二活性劑是ABL抑制劑、ABL/Scr抑制劑、極光激酶抑制劑或BCR-ABL的非-ATP競爭性抑制劑。
5.權(quán)利要求I的組合，其中所述第二活性劑選自尼羅替尼(AMN107)、伊馬替尼(STI571) ,2,6,9-三取代的嘌呤類似物(例如AP23464)、AZD-0530、博舒替尼(SKI-606)、CPG070603、吡啶并[2, 3-d]嘧啶化合物(例如達沙替尼(BMS-354825))、PD166326、PD173955、PD180970)、0N012380.3-取代的苯甲酰胺衍生物(例如 INN0-406)、MK-0457(VX-680)、PHA-739358、鹽酸瑞他霉素(IPI-504)和 GNF-2。
6.權(quán)利要求5的組合，其中所述第二活性劑是尼羅替尼。
7.權(quán)利要求6的組合，其中所述第一活性劑是2-甲基-4'-三氟甲氧基-聯(lián)苯基-3-甲酸[6-(順式-2，6- ニ甲基-嗎啉-4-基)-吡啶-3-基]-酰胺或其藥學(xué)上可接受的鹽。
8.權(quán)利要求6的組合，其中所述第一活性劑是2-[(R) -4- (6-芐基-4，5- ニ甲基-噠嗪-3-基)-2-甲基-3，4，5，6_四氫-2H-[1，2']聯(lián)吡嗪基-5'-基]-丙-2-醇或其藥學(xué)上可接受的鹽。
9.藥物組合物，其包含為Smo抑制劑的第一活性劑和為BCR-ABL抑制劑的第二活性剤， 其中所述第一活性劑是式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽
10.權(quán)利要求I的組合在制備用于治療BCR-ABL陽性白血病的藥劑中的用途。
11.權(quán)利要求10的用途，其中所述BCR-ABL陽性白血病是慢性髓性白血病、急性髓性白血病或急性淋巴細胞白血病。
12.權(quán)利要求11的用途，其中所述BCR-ABL陽性白血病是慢性髓性白血病。
全文摘要
用于治療白血病的BCR-ABL抑制劑和刺猬(hedgehog)途徑抑制劑的組合。
文檔編號A61K31/506GK102695547SQ201080045836
公開日2012年9月26日 申請日期2010年8月11日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月12日
發(fā)明者D·歐文, M·多施, M·科普蘭德, P·W·曼雷, S·波伊克特 申請人:格拉斯哥大學(xué)董事會, 諾瓦提斯公司