專(zhuān)利名稱(chēng)：夏天無(wú)總生物堿精制物、其制備方法及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及夏天無(wú)總生物堿的精制物，這種精制物中畢扣扣靈的含量低于1重量％，本發(fā)明還涉及該精制物的制備方法以及其用于制備藥物制劑的用途。
背景技術(shù)：
生物堿是含負(fù)氧化態(tài)氮原子、存在于生物有機(jī)體中的環(huán)狀化合物，是許多中草藥的有效成分。夏天無(wú)系罌粟科植物伏生紫堇(CorydalisdecumbensCThunbJPers.)的干燥塊莖或全草，又名一粒金丹、野延胡、洞里神仙、伏地延胡等，為常用的行氣活血，通絡(luò)止痛藥，可用于中風(fēng)偏癱，跌撲損傷，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，坐骨神經(jīng)痛等諸多血液循環(huán)障礙疾病的治療。目前的研究表明夏天無(wú)發(fā)揮治療作用的成分是總生物堿。因此，已不斷有人開(kāi)發(fā)出了新的總生物堿提取工藝，包括極性溶劑提取-樹(shù)脂富集、超臨界二氧化碳萃取等，均能夠在一定程度上改善目前已有制劑中存在的問(wèn)題，得到總生物堿含量較高的提取物。但在總生物堿提取物總會(huì)有較高含量的致驚厥劑畢扣扣靈。如在中國(guó)專(zhuān)利CN1535969A公開(kāi)了一種夏天無(wú)總生物堿的制備方法，該方法使用極性溶劑對(duì)夏天無(wú)進(jìn)行滲漉，滲漉液濃縮后進(jìn)行大孔樹(shù)脂吸附層析，堿水除雜后以極性溶劑洗脫，最后回收溶劑得到夏天無(wú)總生物堿， 其重量分組成包括原阿片堿25-60%，四氫巴馬亭10-20%，畢扣扣靈10-20%，巴馬亭 10-20%，提取物中總生物堿用UV法或HPLC法檢測(cè)不少于80%。中國(guó)專(zhuān)利CN1010M377A 公開(kāi)的夏天無(wú)總生物堿重量百分比為原阿片堿20 30%，延胡索乙素15 25%，畢扣扣靈10 15%，鹽酸巴馬亭5 10%，夏無(wú)寧堿10 15%，紫堇爾明5 10%，總生物堿含量在提取物中重量比例不低于85%。中國(guó)專(zhuān)利CN101058576A公開(kāi)了一種通過(guò)優(yōu)化超臨界萃取條件，以超臨界(X)2為流體從夏天無(wú)中萃取總生物堿的方法，可以得到總生物堿含量達(dá) 90%以上的提取物，其中分離鑒定出的6個(gè)生物堿的含量可達(dá)80%，重量組成比如下原阿片堿15 35%，延胡索乙素10 25%，畢扣扣靈5 15%，鹽酸巴馬亭0. 05 2%，紫堇爾明5 15%，夏無(wú)寧堿15 30%。早在1934年Welch和Henderson就曾報(bào)導(dǎo)了畢扣扣靈的致驚厥作用(J Pharmacol Exp Ther 51 :482，1934)。上海藥物研究所的鄒網(wǎng)等在1976年曾發(fā)文報(bào)導(dǎo)了畢扣扣靈的致驚厥劑量其小鼠腹腔注射半數(shù)驚厥量為6. 25mg/kg，半數(shù)致死量(LD5tl)為7. Omg/kg，與經(jīng)典的驚厥劑比較，畢扣扣靈的效力僅次于士的寧?？拱d癇藥苯妥英鈉、三甲雙酮及苯巴比妥鈉均不能防止畢扣扣靈引起的驚厥。畢扣扣靈的存在使得夏天無(wú)總生物堿在用于臨床時(shí)存在致驚厥的隱患，且不利于提高總生物堿的使用劑量?；谌缟侠碛桑ǔＦ谕ハ奶鞜o(wú)總生物堿中的畢扣扣靈，但是畢扣扣靈與總生物堿提取物中的夏無(wú)寧堿和四氫巴馬亭同屬芐基四氫異喹啉類(lèi)，且畢扣扣靈與夏無(wú)寧堿在TLC上Rf值極為接近，在HPLC上保留時(shí)間極為接近。這使得常規(guī)的柱層析或萃取等分離手段在應(yīng)用于從夏天無(wú)總生物堿中分離、去除畢扣扣靈時(shí)效果不理想。因此如今仍期望新的提取方法，能得到畢扣扣靈含量較低或不含畢扣扣靈的夏天無(wú)總生物堿精制物。

發(fā)明內(nèi)容
申請(qǐng)人:意外地發(fā)現(xiàn)相對(duì)于夏天無(wú)總生物堿提取物中的其它生物堿，畢扣扣靈更易溶于稀堿溶液，因此本申請(qǐng)利用此特性采用下述方法，選擇性地除去或減少畢扣扣靈，得到了夏天無(wú)總生物堿精制物，其中畢扣扣靈含量低于1重量％或不含有畢扣扣靈，從而在臨床應(yīng)用時(shí)不會(huì)產(chǎn)生驚厥的副作用。本發(fā)明的夏天無(wú)總生物堿提取物中根據(jù)提取方法的不同，還可含有如10 25% 的原阿片堿、2 10%的巴馬亭、10 25%的延胡索乙素、15 35%的夏無(wú)寧堿、5 15% 的紫堇爾明等其它成分。本發(fā)明的夏天無(wú)總生物堿精制物的制備方法包括如下步驟(a)提取夏天無(wú)總生物堿，(b)減少或除去夏天無(wú)總生物堿中的畢扣扣靈，包括⑴以水溶性溶劑溶解夏天無(wú)總生物堿；(ii)加入稀堿溶液，充分混合反應(yīng)；(iii)以脂溶性溶劑萃取所得混合反應(yīng)液，收集有機(jī)相，以及(c)除去萃取液中的溶劑。步驟(a)的提取方法可使用本領(lǐng)域技術(shù)人員使用的任何方法，例如中國(guó)專(zhuān)利 CN1535969A所公開(kāi)的滲漉，CN101058576A所公開(kāi)的超臨界C02流體萃取法，CN1647816A所公開(kāi)的包含高速離心和膜分離技術(shù)在內(nèi)的提取方法，CN101289471A所公開(kāi)的將夏天無(wú)提取液通過(guò)陽(yáng)離子交換樹(shù)脂精制后得到夏天無(wú)生物堿的方法，CN1951429A所公開(kāi)的將夏天無(wú)鹽酸提取液依次通過(guò)大孔樹(shù)脂及氧化鋁柱層析后得到夏天無(wú)生物堿的方法。步驟(b)中的水溶性溶劑可選自DMS0、甲醇、乙醇、丙酮，優(yōu)選為DMS0。步驟(b) 中的稀堿溶液可以是本領(lǐng)域中任何已知的無(wú)機(jī)堿溶液。有機(jī)堿與畢扣扣靈反應(yīng)后會(huì)形成絡(luò)合物/復(fù)合物，在后續(xù)的萃取步驟中不利于與其它生物堿的分離，因此本發(fā)明不適用有機(jī)堿的稀溶液。無(wú)機(jī)堿例如堿金屬或堿土金屬的氫氧化物，例如氫氧化鋰、氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化鈣等，優(yōu)選使用氫氧化鈉；步驟(b)中的脂溶性溶劑包括所有的本領(lǐng)域所公知的脂溶性溶劑，例如乙酸乙酯、二氯甲烷、三氯甲烷、乙醚、石油醚、正己烷等，優(yōu)選使用二氯甲焼。目前國(guó)內(nèi)外已有夏天無(wú)片和夏天無(wú)注射液生產(chǎn)上市，夏天無(wú)片在中國(guó)藥典有收載。本發(fā)明的夏天無(wú)總生物堿提取物可用于制備各種藥物制劑，包括片劑、膠囊、丸劑、散齊 、顆粒劑、包合物、粉針劑、注射劑等，優(yōu)選是包合物和鹽酸凍干粉針劑。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1取夏天無(wú)藥材粉碎至30-40目，按600mL/kg的比例加入10%氨水浸潤(rùn)Ih后置入超臨界萃取釜中，萃取壓力35MPa，萃取溫度70°C，超臨界0)2流體流速45L/h，夾帶劑(無(wú)水乙醇)連續(xù)加入流速^OmL/h ；分離I溫度55°C，壓力IOMPa ；分離II溫度35°C，分離II 壓力為5MPa。35min后萃取停止，從分離I中分出提取液，減壓回收溶劑得夏天無(wú)總生物堿提取物4g (提取率為1. 93%，折合生藥材207. 3g)，經(jīng)HPLC測(cè)定提取物中夏無(wú)寧堿含量為35%，畢扣扣靈含量為8%，普羅托品含量為15%，延胡索乙素含量為20%，巴馬亭含量為 2 %。將此總生物堿提取物溶解于IOmLDMSO中，然后與4g/mL的NaOH液ImL混合，混合液澄清。將混合液于35度下磁力攪拌30分鐘后轉(zhuǎn)入250mL分液漏斗中，向其中加入SOmLCHCl3, 再向其中添加80mL水，震蕩后靜置待其分層后分出下層CHCl3。再次向分液漏斗中加入SOmL CHCl3,震蕩，靜置，分層后后分出下層CHCl3,重復(fù)此操作一次。合并3次CHCl3萃取液，共 240mL，減壓回收溶劑，得浸膏3. 5g，經(jīng)HPLC分析測(cè)定發(fā)現(xiàn)此浸膏中夏無(wú)寧堿含量38%，畢扣扣靈含量0.9%，普羅托品含量16.5%，延胡索乙素含量22%，巴馬亭含量2%，酸性染料比色法測(cè)定其總堿含量為90%。實(shí)施例2取夏天無(wú)藥材粉碎至30-40目，按600mL/kg的比例加入10%氨水浸潤(rùn)Ih后置入超臨界萃取釜中，萃取壓力35MPa，萃取溫度70°C，超臨界C02流體流速45L/h，夾帶劑(無(wú)水乙醇)連續(xù)加入流速^OmL/h ；分離I溫度55°C，壓力IOMPa ；分離II溫度35°C，分離II 壓力為5MPa。35min后萃取停止，從分離I中分出提取液，減壓回收溶劑得夏天無(wú)總生物堿提取物4g (提取率為1. 93%，折合生藥材207. 3g)，經(jīng)HPLC測(cè)定提取物中夏無(wú)寧堿含量為35%，畢扣扣靈含量為8%，普羅托品含量為15%，延胡索乙素含量為20%，巴馬亭含量為2%。將此總生物堿提取物溶解于IOmLDMSO中，然后與0. 4g/mL的NaOH液IOmL混合， 混合液澄清。將混合液于35度下磁力攪拌30分鐘后轉(zhuǎn)入250mL分液漏斗中，向其中加入 SOmLCHCl3,再向其中添加SOmL水，震蕩后靜置待其分層后分出下層CHCl3。再次向分液漏斗中加入80mL CHCl3，震蕩，靜置，分層后后分出下層CHCl3，重復(fù)此操作一次。合并3次CHCl3 萃取液，共MOmL，轉(zhuǎn)入500mL分液漏斗中，向其中加入200mL0. 4g/mL的NaOH液，震蕩，靜置，待分層后分出下層CHCl3，減壓回收溶劑，得浸膏3. 5g，經(jīng)HPLC分析測(cè)定發(fā)現(xiàn)此浸膏中夏無(wú)寧堿含量38 %，畢扣扣靈含量0. 3 %，普羅托品含量16. 5 %，延胡索乙素含量22 %，巴馬亭含量2%。實(shí)施例3取夏天無(wú)藥材粉碎至30-40目，按600mL/kg的比例加入10%氨水浸潤(rùn)Ih后置入超臨界萃取釜中，萃取壓力35MPa，萃取溫度70°C，超臨界C02流體流速45L/h，夾帶劑(無(wú)水乙醇)連續(xù)加入流速^OmL/h ；分離I溫度55°C，壓力IOMPa ；分離II溫度35°C，分離II 壓力為5MPa。35min后萃取停止，從分離I中分出提取液，減壓回收溶劑得夏天無(wú)總生物堿提取物4g (提取率為1. 93%，折合生藥材207. 3g)，經(jīng)HPLC測(cè)定提取物中夏無(wú)寧堿含量為 35%，畢扣扣靈含量為8%，普羅托品含量為15%，延胡索乙素含量為20%，巴馬亭含量為 2 %。將此總生物堿提取物溶解于IOmLDMSO中，然后與0. 4g/mL的NaOH液IOmL混合，混合液澄清。將混合液于常溫下放置30分鐘后轉(zhuǎn)入250mL分液漏斗中，向其中加入SOmLCHCl3, 再向其中添加80mL0. 4g/mL的NaOH液，震蕩后靜置待其分層后分出下層CHC13。再次向分液漏斗中加入80mL CHCl3，震蕩，靜置，分層后后分出下層CHC13。合并2次CHCl3萃取液， 共160mL，轉(zhuǎn)入500mL分液漏斗中，向其中加入IOOmLO. 4g/mL的NaOH液，震蕩，靜置，待分層后分出下層CHCl3，減壓回收溶劑，得浸膏3. 5g，經(jīng)HPLC分析測(cè)定發(fā)現(xiàn)此浸膏中夏無(wú)寧堿含量38%，普羅托品含量16. 5%，延胡索乙素含量22%，巴馬亭含量2%，未檢出畢扣扣靈。實(shí)施例4.Ikg夏天無(wú)藥材，粉碎至20目，使用50g/L的NaCO3水溶液1L，潤(rùn)濕1小時(shí)，用4L95%乙醇浸泡過(guò)夜后回流提取，溫度75度，恒溫加熱池，保溫池，共5次，回收溶劑得浸膏。將浸膏用10%鹽酸IL浸泡一夜，離心去沉淀后，以NaOH調(diào)節(jié)pH至13，得夏天無(wú)總堿沉淀，真空干燥后得樣品285g，經(jīng)HPLC測(cè)定提取物中夏無(wú)寧堿含量為20%，畢扣扣靈含量為5%，普羅托品含量為11%，延胡索乙素含量為15%，巴馬亭含量為2%，總生物堿含量為57%。取此總生物堿提取物12g溶解于15mLDMS0中，然后與0. 4g/mL的NaOH液15mL 混合，混合液澄清。將混合液于常溫下放置30分鐘后轉(zhuǎn)入250mL分液漏斗中，向其中加入 SOmLCHCl3,再向其中添加80mL0. 4g/mL的NaOH液，震蕩后靜置待其分層后分出下層CHC13。 再次向分液漏斗中加入80mL CHCl3，震蕩，靜置，分層后后分出下層CHC13。合并2次CHCl3 萃取液，共160mL，轉(zhuǎn)入500mL分液漏斗中，向其中加入IOOmLO. 4g/mL的NaOH液，震蕩，靜置，待分層后分出下層CHCl3，減壓回收溶劑，得浸膏8. 5g，經(jīng)HPLC分析測(cè)定發(fā)現(xiàn)此浸膏中夏無(wú)寧堿含量23. 5 %，普羅托品含量12. 5 %，延胡索乙素含量18 %，巴馬亭含量2 %，未檢出畢扣扣靈。酸性染料比色法測(cè)定其中總堿含量為68%。實(shí)施例5.不含畢扣扣靈夏天無(wú)總堿的應(yīng)用——包合物的制備取Ig去除畢扣扣靈的夏天無(wú)總堿溶于無(wú)水乙醇，IOg羥丙基β環(huán)糊精溶于IOOmL 無(wú)水乙醇，混合后常溫下磁力攪拌2. 5小時(shí)，減壓回收溶劑后得可溶于水的淡黃色粉末。實(shí)施例6.不含畢扣扣靈夏天無(wú)總堿的應(yīng)用——鹽酸凍干粉的制備取不含畢扣扣靈夏天無(wú)生物堿lg，加鹽酸使溶解，加入適量甘露醇，再用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH4 5，過(guò)0. 2 μ m微孔濾膜，分裝，凍干即可。
權(quán)利要求
1.一種夏天無(wú)總生物堿精制物，其中總生物堿含量為_(kāi)90%，其特征在于其中畢扣扣靈的含量低于1重量％或不含有畢扣扣靈。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的夏天無(wú)總生物堿精制物，其中總生物堿中還包含35重量％ 至38重量％的夏無(wú)寧堿、20重量％至30重量％的延胡索乙素、15重量％至30重量％的普羅托品、2重量％至10重量％的紫堇爾明和2重量％至10重量％的巴馬亭。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的夏天無(wú)總生物堿精制物的制備方法，包括以下步驟(a)提取夏天無(wú)總生物堿，(b)減少或除去步驟(a)的夏天無(wú)總生物堿提取物的畢扣扣靈，包括(i)以水溶性溶劑溶解夏天無(wú)總生物堿；(ii)加入稀堿溶液，充分混合反應(yīng)；(iii)以脂溶性溶劑萃取所得混合反應(yīng)液，收集有機(jī)相，以及(c)除去萃取液中的溶劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，步驟(b)所述水溶性溶劑選自DMS0、甲醇、乙醇或丙酮。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，步驟(b)所述的稀堿溶液為堿金屬或堿土金屬的氫氧化物的水溶液。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的制備方法，步驟(b)所述的稀堿溶液為稀氫氧化鈉溶液。
7.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其中步驟(b)所述的脂溶性溶劑選自二氯甲烷、 乙酸乙酯、三氯甲烷、乙醚、石油醚或正己烷。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其中步驟(b)所述的脂溶性溶劑為二氯甲烷。
9.根據(jù)權(quán)利要求3所述的制備方法，其中步驟(a)所述的提取方法選自滲漉法、超臨界 C02流體萃取法、膜分離法、離子交換法或樹(shù)脂法。
10.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的夏天無(wú)總生物堿精制物在制備藥物制劑中的用途。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的用途，所述藥物制劑是包合物或鹽酸凍干粉針。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)一種夏天無(wú)總生物堿精制物，其中總生物堿含量為55％-90％，其特征在于其中畢扣扣靈的含量低于1重量％或不含有畢扣扣靈，以及其制備方法和其在制備藥物制劑中的用途。本發(fā)明公開(kāi)的夏天無(wú)總生物堿精制物由于其畢扣扣靈含量低于1重量％或不含有畢扣扣靈，從而在臨床應(yīng)用時(shí)不會(huì)產(chǎn)生驚厥的副作用。
文檔編號(hào)A61P19/02GK102475743SQ201010562489
公開(kāi)日2012年5月30日 申請(qǐng)日期2010年11月26日 優(yōu)先權(quán)日2010年11月26日
發(fā)明者楊義芳, 袁輝 申請(qǐng)人:上海醫(yī)藥工業(yè)研究院