專利名稱：一種蘿卜種子提取物及其制備方法與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種蘿卜種子提取物及其制備方法與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
寄生于皮膚角蛋白組織的淺部真菌稱為皮膚癬菌。由其引起的皮膚癬， 尤其手足癬(俗稱腳氣)、股癬是人類最多見(jiàn)的真菌病，皮膚癬菌分為毛癬菌屬 (Trichophyfon)、表皮痛菌屬(Epidermophyfon)禾口小抱子菌屬(Microsporum) 3 個(gè)屬。 在我國(guó)引起皮膚性真菌病的主要是石膏樣毛癬菌(Trichophyfon gypseum)、紅色毛癬菌 (Trichophyfon purpureatum)、絮狀表皮癬菌(Epidermophyfon floccosum)、奧杜安小 孢子菌(Microsporum audouini)、犬小孢子菌(Microsporum canis)禾口石膏樣小孢子菌 (Microsporum gypseum)等。大多數(shù)皮膚感染用外用的抗真菌劑多是化學(xué)制劑，如咪唑類(咪康唑，克霉唑， 益康唑，酮康唑)，環(huán)吡酮胺(ciclopirox)，萘替芬或特比萘芬，較新的系統(tǒng)性藥物包括伊 曲康唑和氟康唑，口服的三唑類以及特比萘芬等第二代的丙烯胺類藥物。酮康唑是一種 廣譜口服咪唑類衍生物，對(duì)皮膚癬菌感染有效，但是偶可產(chǎn)生肝毒性(可嚴(yán)重甚或致死)， 使其應(yīng)用受限。伊曲康唑與許多常用的處方藥會(huì)產(chǎn)生相互作用。特比萘芬使胃排空延遲， 3%-5%的病人出現(xiàn)胃腸道副作用，并且在用藥前及用藥后需定期查肝功能?；尹S霉素是系 統(tǒng)性抗真菌藥物中應(yīng)用最廣泛的，但是隨之而來(lái)的副作用，例如頭痛，胃腸疼痛，光敏感，皮 疹或白細(xì)胞減少，血管性水腫。也可發(fā)生眩暈及較少的紅斑狼瘡的加重或短暫的聽(tīng)力減退。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種制備蘿卜提取物的方法。本發(fā)明所提供的制備蘿卜提取物的方法，包括如下步驟將消毒的蘿卜種子與水 混合，將混合物打成勻漿，將得到的勻漿離心，取上清液，即得到蘿卜提取物。所述方法中，在所述將混合物打成勻漿前，包括將所述混合物靜置12h的步驟。上述過(guò)程中，所述水的pH值為7. O。上述過(guò)程中，所述消毒的蘿卜種子與水的體積比為1 (4-6)或1 4或1 5 或 1 6。上述過(guò)程中，所述離心方式為以5000r/min-11000r/min或8000r/min或5000r/ min 或 11000r/min 的速度離心 5min，旋轉(zhuǎn)半徑為 80mm-150mm 或 80mm 或 IOOmm 或 150mm。上述過(guò)程中，所述消毒的蘿卜種子是按照如下消毒方法得到的先用水將蘿卜種 子浸泡30min-60min或30min或45min或60min，去掉水，依次用75%乙醇水溶液和水沖洗 浸泡后的種子，得到所述消毒的蘿卜種子。 上述過(guò)程中，所述水為蒸餾水或無(wú)菌去離子水。 上述過(guò)程中，所述蘿卜為蘿卜屬植物；或所述蘿卜屬植物為蘿卜(Raphanus sativus L)ο
由上述任一所述的方法得到的蘿卜提取物也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。由上述任一所述的方法得到的蘿卜提取物在制備抑菌劑中的應(yīng)用也屬于本發(fā)明 的保護(hù)范圍。由上述任一所述的方法得到的蘿卜提取物在制備治療皮膚病藥物中的應(yīng)用也屬 于本發(fā)明的保護(hù)范圍。本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種抑菌劑。本發(fā)明所提供的抑菌劑，其活性成分為由上述任一所述的方法得到的蘿卜提取 物。上述抑菌劑中，所述抑菌劑為抑制如下菌的抑菌劑毛癬菌屬(Trichophyfon) 菌、表皮癬菌屬(Epidermophyfon)菌或小孢子菌屬(Microsporum)菌；所述毛癬菌屬(Trichophyfon)菌為石膏樣毛癬菌(Trichophyfon gypseum)或 紅色毛癬菌(Trichophyfon purpureatum)，所述表皮癬菌屬(Epidermophyfon)菌為絮狀 表皮癬菌(Epidermophyfon floccosum),所述小孢子菌屬(Microsporum)菌為奧杜安小 孢子菌(Microsporum audouini)、犬小孢子菌(Microsporum canis)或石膏樣小孢子菌 (Microsporum gypseum)。本發(fā)明的最后一個(gè)目的是提供一種治療皮膚病藥物。本發(fā)明所提供的治療皮膚病藥物，其活性成分為由上述任一所述的方法得到的蘿 卜提取物。上述治療皮膚病藥物中，所述皮膚病為皮膚真菌病。所述皮膚真菌病可為皮膚癬。 所述皮膚癬為頭癬、體癬、股癬、手足癬(俗稱腳氣)、花斑癬或甲癬。上述治療皮膚病藥物中，所述皮膚真菌病是由如下菌引起的毛癬菌屬 (Trichophyfon)菌、表皮癬菌屬(Epidermophyfon)菌或小孢子菌屬(Microsporum)菌；所述毛癬菌屬(Trichophyfon)菌為石膏樣毛癬菌(Trichophyfon gypseum)或 紅色毛癬菌(Trichophyfon purpureatum)，所述表皮癬菌屬(Epidermophyfon)菌為絮狀 表皮癬菌(Epidermophyfon floccosum),所述小孢子菌屬(Microsporum)菌為奧杜安小 孢子菌(Microsporum audouini)、犬小孢子菌(Microsporum canis)或石膏樣小孢子菌 (Microsporum gypseum).實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明提取物具有抑制引起皮膚病的真菌的功能；抑菌圈實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明提取物的抑菌圈直徑明顯大于對(duì)照組；皮膚病治療實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明提取 物的治療效果明顯好于對(duì)照組，療效快，無(wú)痛無(wú)副作用。另外，本發(fā)明提取物的制備方法簡(jiǎn) 單，材料來(lái)源廣泛，成本低。因此，本發(fā)明提取物在真菌性皮膚病治療領(lǐng)域?qū)⒂袕V闊的應(yīng)用 前景。
具體實(shí)施例方式下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑得到。蘿卜種子為普通白蘿卜的種子，中文名蘿卜.學(xué)名Raphanus sativus L.。蘿卜種子購(gòu)自農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)。實(shí)施例1、蘿卜種子提取物的制備及功能驗(yàn)證
一 .制備程序如下1、消毒先用無(wú)菌去離子水將蘿卜種子浸泡45min以軟化種子表面附著的雜物，去掉水， 用75%乙醇水溶液沖洗浸泡后的種子2次，而后用無(wú)菌去離子水沖洗種子2次，得到消毒的 蘿卜種子。2、將消毒的蘿卜種子與無(wú)菌去離子水按照1 5的體積比混勻，靜置12h。將浸泡 容器內(nèi)的所有物質(zhì)一起打成勻漿，將得到的勻漿以8000r/min的速度離心5min，旋轉(zhuǎn)半徑 為100mm，取上清液，即得到蘿卜種子提取物，密封保存。二、抑菌實(shí)驗(yàn)將實(shí)驗(yàn)一制備的蘿卜提取物直接作為抑菌劑。以石膏樣毛癬菌(Trichophyfon gypseum進(jìn)行如下抑菌實(shí)驗(yàn)。石膏樣毛癬菌(Trichophyfon gypseum)購(gòu)自遼寧中醫(yī)學(xué)院，產(chǎn)品目錄號(hào)為 LZY8905.以石膏樣毛癬菌(Trichophyfon gypseum)為例，描述抑菌實(shí)驗(yàn)，其他菌株的實(shí)驗(yàn) 方法相同。培養(yǎng)菌株沙氏瓊脂培養(yǎng)基培養(yǎng)1周，溫度27 °C，獲得較多的石膏樣毛癬菌菌絲 體，再將其移植到其它沙氏瓊脂平板培養(yǎng)基上增殖，27°C培養(yǎng)1-2周。制備菌液用無(wú)菌去離子水清洗培養(yǎng)皿上的真菌孢子，獲得菌液.制備菌板高溫滅菌的沙氏瓊脂培養(yǎng)基，在溫度降到50-60°C時(shí)，將制備好的菌液 混入，搖勻，待其凝固之后即成為菌板。接種抑菌劑在培養(yǎng)皿中央打一直徑0. 5cm的孔，往里面滴注100 μ L蘿卜種子提 取物，然后密封培養(yǎng)，從第4天起可以觀察到菌板中央出現(xiàn)明顯的抑菌圈，抑菌圈外圍則長(zhǎng) 滿菌絲。同時(shí)以市售常見(jiàn)抗真菌藥品達(dá)克寧為對(duì)照。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)，結(jié)果取平均數(shù)。抑菌圈大小結(jié)果如下對(duì)于石膏樣毛癬菌(Trichophyfon gypseum)，實(shí)驗(yàn)組2· 5cm ；對(duì)照組2· 0cm.三、治療皮膚病實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)均經(jīng)過(guò)志愿者同意。實(shí)驗(yàn)中志愿者患有腳癬，由石膏樣毛癬菌引起，共5例，均為在校大學(xué)生，患病部 位均為腳丫，其中4例患病程度中等，僅局部潰爛，1例較為嚴(yán)重，腳趾間皮膚嚴(yán)重潰爛，氣 味難聞。藥用方法將人體患病部位清洗，然后直接涂抹蘿卜種子提取物，涂抹劑量約 lml，每天1次，晚上睡前洗腳后涂抹，共3天。同時(shí)以涂抹達(dá)克寧霜?jiǎng)閷?duì)照。從5名志愿者中選擇2例患病程度中等、僅局部 潰爛的患者作為對(duì)照組.(1)療效結(jié)果實(shí)驗(yàn)組經(jīng)過(guò)3天，涂抹3次，治愈；對(duì)照組經(jīng)過(guò)7天，涂抹7次，治愈。
(2)副作用結(jié)果實(shí)驗(yàn)組，副作用0，經(jīng)隨后6個(gè)月內(nèi)不定期訪問(wèn)，未見(jiàn)復(fù)發(fā)；對(duì)照組，7天之后治愈，但隨后1個(gè)月內(nèi)跟蹤訪問(wèn)，有復(fù)發(fā)，繼續(xù)涂抹達(dá)克寧霜?jiǎng)?已無(wú)太明顯治療效果，說(shuō)明前期未徹底治愈，后期治療時(shí)，該類型真菌對(duì)藥劑產(chǎn)生了耐受 性。四、耐酸性、耐堿性和熱穩(wěn)定性檢測(cè)耐酸性、耐堿性檢測(cè)將蘿卜種子勻漿研磨提取的介質(zhì)(即無(wú)菌去離子水)通過(guò)酸 堿度調(diào)節(jié)，達(dá)到PH值分別為4 (酸性)和10 (堿性)，然后再重復(fù)上述由二 三的實(shí)驗(yàn)步驟， 抑菌圈比原酸堿度為7. 0(中性)的介質(zhì)減小約10%。熱穩(wěn)定性檢測(cè)由步驟一得到的蘿卜上清液，在80°C水浴60min，然后重復(fù)步驟 二，檢測(cè)發(fā)現(xiàn)其抑菌圈大小沒(méi)有發(fā)生變化。結(jié)論蘿卜種子提取物在pH為4和10時(shí)，能保持90%的活性；在80°C水浴60min 能保持100%的活性。實(shí)施例2、蘿卜種子提取物的制備及功能驗(yàn)證一、制備步驟如下1、消毒先用無(wú)菌去離子水將蘿卜種子浸泡30min以軟化種子表面附著的雜物，去掉水， 用75%乙醇水溶液沖洗浸泡后的種子2次，而后用無(wú)菌去離子水沖洗種子2次，得到消毒的 蘿卜種子。2、將消毒的蘿卜種子與無(wú)菌去離子水按照1 4的體積比混勻，靜置12h。將浸泡 容器內(nèi)的所有物質(zhì)一起打成勻漿，將得到的勻漿以5000r/min的速度離心5min，旋轉(zhuǎn)半徑 為80mm，取上清液，即得到蘿卜種子提取物，密封保存。二、抑菌實(shí)驗(yàn)方法與實(shí)施例1中所述一致。結(jié)果與實(shí)施例1中實(shí)驗(yàn)組結(jié)果無(wú)顯著差異。三、治療皮膚病實(shí)驗(yàn)志愿者的發(fā)病情況患病部位均為腳丫，患病程度中等，僅局部潰爛。結(jié)果與實(shí)施例1中實(shí)驗(yàn)組結(jié)果無(wú)顯著差異。四、耐酸性、耐堿性和熱穩(wěn)定性檢測(cè)方法與實(shí)施例1中所述一致。結(jié)果與實(shí)施例1中實(shí)驗(yàn)組結(jié)果無(wú)顯著差異。實(shí)施例3、蘿卜種子提取物的制備及功能驗(yàn)證一、制備步驟如下1、消毒先用無(wú)菌去離子水將蘿卜種子浸泡60min以軟化種子表面附著的雜物，去掉水， 用75%乙醇水溶液沖洗浸泡后的種子2次，而后用無(wú)菌去離子水沖洗種子2次，得到消毒的 蘿卜種子。2、將消毒的蘿卜種子與無(wú)菌去離子水按照1 6的體積比混勻，靜置12h。將浸泡 容器內(nèi)的所有物質(zhì)一起打成勻漿，將得到的勻漿以llOOOr/min的速度離心5min，旋轉(zhuǎn)半徑 為150mm，取上清液，即得到蘿卜種子提取物，密封保存。二、抑菌實(shí)驗(yàn)
方法與實(shí)施例1中所述一致。結(jié)果與實(shí)施例1中實(shí)驗(yàn)組結(jié)果無(wú)顯著差異。三、治療皮膚病實(shí)驗(yàn)志愿者的發(fā)病情況患病部位均為腳丫，患病程度中等，僅局部潰爛。結(jié)果與實(shí)施例1中實(shí)驗(yàn)組結(jié)果無(wú)顯著差異。四、耐酸性、耐堿性和熱穩(wěn)定性檢測(cè)方法與實(shí)施例1中所述一致。結(jié)果與實(shí)施例1中實(shí)驗(yàn)組結(jié)果無(wú)顯著差異。
權(quán)利要求
一種制備蘿卜提取物的方法，包括如下步驟將消毒的蘿卜種子與水混合，將混合物打成勻漿，將得到的勻漿離心，取上清液，即得到蘿卜提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述方法中，在所述將混合物打成勻漿 前，包括將所述混合物靜置12h的步驟。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于所述消毒的蘿卜種子與水的體積比 為 1 (4-6)或 1 4或 1 5或 1 6;所述離心方式為以 5000r/min-11000r/min 或 8000r/min 或 5000r/min 或 11000r/min 的速度離心5min,旋轉(zhuǎn)半徑為80mm-150mm或80mm或IOOmm或150mm。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于所述消毒的蘿卜種子是按照如 下消毒方法得到的先用水將蘿卜種子浸泡30min-60min或30min或45min或60min，去掉 水，依次用75%乙醇水溶液和水沖洗浸泡后的種子，得到所述消毒的蘿卜種子。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于所述水為蒸餾水或無(wú)菌去離子水。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于所述蘿卜為蘿卜屬植物；所述蘿 卜屬植物為蘿卜(Raphanus sativus L.)。
7.由權(quán)利要求1-6中任一所述的方法得到的蘿卜提取物。
8.蘿卜種子或權(quán)利要求7所述蘿卜提取物在制備抑菌劑中的應(yīng)用；蘿卜種子或權(quán)利要 求7所述蘿卜提取物在制備治療皮膚病藥物中的應(yīng)用。
9.一種抑菌劑，其活性成分為蘿卜種子或權(quán)利要求7所述蘿卜提取物；或一種治療皮 膚病藥物，其活性成分為蘿卜種子或權(quán)利要求7所述蘿卜提取物。
10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用或根據(jù)權(quán)利要求9所述的抑菌劑或藥物，其特征在于 所述抑菌劑為抑制如下菌的抑菌劑毛癬菌屬(Trichophyfon)菌、表皮癬菌屬(Epidermophyfon)菌或小孢子菌屬(Microsporum)菌；所述毛癬菌屬(Trichophyfon)菌為石膏樣毛癬菌(Trichophyfon gypseum)或紅 色毛癬菌(Trichophyfon purpureatum),所述表皮癬菌屬(Epidermophyfon)菌為絮狀 表皮癬菌(Epidermophyfon floccosum),所述小孢子菌屬(Microsporum)菌為奧杜安小 孢子菌(Microsporum audouini)、犬小孢子菌(Microsporum canis)或石膏樣小孢子菌 (Microsporum gypseum)；所述皮膚病為皮膚真菌??；和/或，所述皮膚真菌病為皮膚癬；和/或，所述皮膚癬為 頭癬、體癬、股癬、手足癬、花斑癬或甲癬；所述皮膚真菌病是由如下菌引起的毛癬菌屬(Trichophyfon)菌、表皮癬菌屬 (Epidermophyfon)菌或小孢子菌屬(Microsporum)菌；所述毛癬菌屬(Trichophyfon)菌為石膏樣毛癬菌(Trichophyfon gypseum)或紅 色毛癬菌(Trichophyfon purpureatum),所述表皮癬菌屬(Epidermophyfon)菌為絮狀 表皮癬菌(Epidermophyfon floccosum),所述小孢子菌屬(Microsporum)菌為奧杜安小 孢子菌(Microsporum audouini)、犬小孢子菌(Microsporum canis)或石膏樣小孢子菌 (Microsporum gypseum)。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種蘿卜提取物及其制備方法與應(yīng)用。該制備蘿卜提取物的方法，包括如下步驟將消毒的蘿卜種子用水浸泡，將浸泡容器內(nèi)的所有物質(zhì)打成勻漿，將得到的勻漿離心，取上清液，即得到蘿卜提取物。實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明提取物具有抑制引起皮膚病的真菌的功能；抑菌圈實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明提取物的抑菌圈直徑明顯大于對(duì)照組；皮膚病治療實(shí)驗(yàn)表明，本發(fā)明提取物的治療效果明顯好于對(duì)照組，療效快，無(wú)痛無(wú)副作用。另外，本發(fā)明提取物的制備方法簡(jiǎn)單，材料來(lái)源廣泛，成本低。因此，本發(fā)明提取物在真菌性皮膚病治療領(lǐng)域?qū)⒂袕V闊的應(yīng)用前景。
文檔編號(hào)A61K36/31GK101982185SQ20101052057
公開(kāi)日2011年3月2日 申請(qǐng)日期2010年10月20日 優(yōu)先權(quán)日2010年10月20日
發(fā)明者余文剛, 宋希強(qiáng), 徐詩(shī)濤, 楊澤秀, 楊逢春 申請(qǐng)人:海南珠峰園林科技有限公司