專利名稱：局部輔酶q10制劑及其使用方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供含有輔酶QlO(C0QlO)的藥物組合物和使用CoQlO治療癌癥、選擇 性降低癌細胞生長、誘導(dǎo)癌細胞凋亡和抑制腫瘤介導(dǎo)的血管發(fā)生的方法。
背景技術(shù)：
癌癥目前是發(fā)達國家里死亡的主要原因之一。雖然近期研究已經(jīng)大大增加了我 們對腫瘤發(fā)生分子機理的很多了解并提供了癌癥治療的許多新方法，但對多數(shù)惡性腫瘤 的標(biāo)準(zhǔn)療法仍然是整體切除術(shù)，化療，和放療。雖然日趨成功，但每種這些療法仍引起 眾多不受歡迎的副作用。例如，手術(shù)導(dǎo)致疼痛，對健康組織的外傷性損傷，以及疤痕。 放療和化療引起惡心，免疫抑制，胃潰瘍和繼發(fā)性腫瘤發(fā)生。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及發(fā)現(xiàn)CoQlO的局部制劑能降低動物受試對象中腫瘤生長速率。在 本文所述的實驗中，顯示CoQlO增加皮膚癌細胞而非正常細胞的培養(yǎng)物中細胞凋亡的速 率。此外，顯示用CoQlO局部制劑治療負(fù)瘤動物顯著降低動物中腫瘤生長的速率。配制成用于口服遞送的CoQlO已經(jīng)被用作膳食補充劑。然而，口服施用的 CoQlO被證明積累在肝臟——降低了它的系統(tǒng)利用度。與膳食補充劑形式的CoQlO相 比，用局部施用CoQlO所觀察到的抗腫瘤反應(yīng)可能與它較高的生物利用度有關(guān)。因此，本發(fā)明特征在于一種降低對象中腫瘤細胞生長速率或增加腫瘤細胞凋亡 速率的方法。該方法包括提供具有很多腫瘤細胞的對象和向該對象施用含有效量CoQlO 和藥物接受載體的組合物的步驟。另一方面，本發(fā)明特征在于含有效量CoQlO和制藥接受載體的組合物。在一個優(yōu)選實施方案中，該組合物是CoQlO的局部制劑，它包括至少約0.01重 量％直至30重量％ (w/w)的CoQlO和適于局部遞送CoQlO的載體。該藥物組合物優(yōu)選 包含作為活性成分的CoQlO和制藥接受的載體。該組合物包含輔酶Q10，phospholipon 90，甘油，丁基化羥基甲苯(BHT)，乙醇，中鏈甘油三酯(MCT)，和薰衣草精。優(yōu)選 地，phospholipon 90 是 phospholipon90G 禾口 / 或 phospholipon 90H。在一個優(yōu)選實施方案中，該藥物組合物包含至少約0.01%至約30% (w/w)的輔 酶Q10。該藥物組合物優(yōu)選含有約至約25% (w/w)之間的輔酶Q10。在另一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明提供一種治療癌癥患者的方法，包括向需要的患者施用含治療有效量的輔酶QlO的組合物；使腫瘤細胞與該組合物接觸導(dǎo)致腫瘤細胞裂解；從而治療該癌癥患者。
該藥物組合物優(yōu)選包含至少約0.01 %直至30% w/w的輔酶Q10，該藥物組合物 優(yōu)選包含約至約25% w/w的輔酶QlO。在另一個優(yōu)選實施方案中，該藥物組合物用任選的透皮增強劑配制為局部膏 劑。在另一些優(yōu)選實施方案中，治療有效量的輔酶QlO組合物與一種或多種化療藥 一起被施用。這些化療藥可與輔酶QlO聯(lián)合施用，或在其前或其后施用?；熕幍姆窍?制性實施例包括，但不限于環(huán)磷酰胺(CTX，25mg/kg/天，經(jīng)口)，紫杉醇類(太平洋 紫杉醇(paclitaxel)或多烯紫杉醇(docetaxel))，白消安，順鉬，環(huán)磷酰胺，甲氨喋呤，柔 紅霉素，多柔比星，美法侖，克拉屈濱，長春新堿，長春堿，和苯丁酸氮芥。在另一優(yōu)選實施方案中，所述藥物組合物，輔酶QlO組合物抑制對象中腫瘤細 胞生長，且所述方法包括向該對象施用含治療有效量的CoQlO的藥物組合物。優(yōu)選地， 在所述藥物組合物中輔酶QlO的治療有效量在約0.01 %和30% w/w輔酶QlO之間。抑制 腫瘤細胞生長涉及一或多個以下影響(1)在某種程度上抑制腫瘤生長，包括，(i)減慢 和(ii)生長完全停滯；(2)腫瘤細胞數(shù)量減少；(3)維持腫瘤大小；(4)腫瘤大小縮??； (5)抑制，包括(i)減少、(ii)減慢或(iii)完全阻止腫瘤細胞浸潤周圍器官；(6)抑制， 包括ω減少、Gi)減慢或Gii)完全阻止轉(zhuǎn)移；(7)增強抗腫瘤免疫應(yīng)答，其可導(dǎo)致ω 維持腫瘤大小，(ii)縮小腫瘤大小，(iii)減慢腫瘤生長，Gv)減少，減慢或阻止侵襲和/ 或(8)某種程度上，減輕與該疾病相關(guān)的一或多種癥狀的嚴(yán)重程度或數(shù)目。在另一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明提供一種選擇性誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡的方法， 該方法包括施用如標(biāo)準(zhǔn)測試測量的含輔酶QlO的藥物組合物。該藥物組合物優(yōu)選包含至 少約0.01%直至30% w/w的輔酶Q10。測量凋亡的方法包括但不限于線粒體膜染色測 試和/或膜聯(lián)蛋白-VPE測試。在一個優(yōu)選實施方案中，當(dāng)用線粒體膜染色測試和/或 膜聯(lián)蛋白-VPE測試測量時，該藥物組合物誘導(dǎo)至少約30%腫瘤細胞凋亡。優(yōu)選地，當(dāng) 用線粒體膜染色測試和/或膜聯(lián)蛋白-VPE測試測量時，該藥物組合物誘導(dǎo)至少約60% 腫瘤細胞凋亡；更優(yōu)選地，當(dāng)用線粒體膜染色測試和/或膜聯(lián)蛋白-VPE測試測量時， 該藥物組合物誘導(dǎo)約75%腫瘤細胞凋亡；更優(yōu)選地，當(dāng)用線粒體膜染色測試和/或膜聯(lián) 蛋白-VPE測試測量時，該藥物組合物誘導(dǎo)約90%，91%, 92%, 93%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99%和100%腫瘤細胞凋亡。在另一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明提供抑制腫瘤中血管發(fā)生的方法，該方法包 括使腫瘤與含輔酶QlO的藥物組合物接觸。優(yōu)選地，該藥物組合物含有至少約0.01%直 至30% w/w的輔酶QlO。本發(fā)明化合物的其它用途包括在治療動脈硬化、炎癥、和作為抗血管生成劑的 用途，尤其是用于治療癌癥，特別是實體癌例如位于肺、乳房、肝、腦或其他組織中的癌。除非另有限定，本文所用的全部技術(shù)術(shù)語具有與本發(fā)明所屬技術(shù)領(lǐng)域的 普通技術(shù)人員的通常理解相同的含義。醫(yī)學(xué)術(shù)語的通常理解的定義可見于Thomas LathropStedman, Stedman' s Medical Dictionary, Lippincott, Williams&Wilkins Philadelphia, PA, 2000。本文提及的所有出版物，專利申請，專利和其他參考文獻經(jīng)整體引用并入本文。在有沖突時，將以本說明書，包括定義，為準(zhǔn)。下文所討論的具體實施方案僅是舉 例說明并不限于此。本發(fā)明的其他方面由下文所述。


本發(fā)明在所附權(quán)利要求中具體指出。可通過參考以下說明并結(jié)合附圖更好的理 解本發(fā)明上述的和進一步的益處，其中圖1是一系列光學(xué)顯微圖，其顯示CoQlO對體外培養(yǎng)的人黑素瘤細胞 (SKMEL28)的影響。圖2顯示CoQlO降低36小時體外培養(yǎng)的人黑素瘤細胞系(SKMEL28)的增殖。圖3顯示CoQlO降低48小時體外培養(yǎng)的人黑素瘤細胞系(SKMEL28)的增殖。圖4顯示介質(zhì)對照不降低48小時體外培養(yǎng)的人黑素瘤細胞系(SKMEL28)的增殖。圖5比較CoQlO對體外培養(yǎng)的人黑素瘤和新生兒成纖維細胞中細胞凋亡的影 響。圖6顯示CoQlO降低48小時體外培養(yǎng)的鱗狀癌細胞增殖。圖7顯示CoQlO降低48小時體外培養(yǎng)的新生兒成纖維細胞增殖。圖8顯示CoQlO增加48小時體外培養(yǎng)的新生兒角質(zhì)形成細胞增殖。圖9顯示CoQlO降低48小時體外培養(yǎng)的乳腺癌細胞系(MCF-7)增殖。MCF-7 細胞系表達WNT7B癌基因并含有Tx-4癌基因。圖10顯示CoQlO降低72小時體外培養(yǎng)的乳腺癌細胞系(MCF-7)增殖。圖11是顯示對照和用CoQlO局部制劑處理30天后的CoQlO處理小鼠中誘導(dǎo)腫 瘤的照片。圖12是顯示對照和用CoQlO局部制劑處理30天后的CoQlO處理小鼠中誘導(dǎo)腫 瘤的照片。圖13是顯示從對照和CoQlO處理小鼠中切除的腫瘤照片。圖14顯示施用CoQlO對CoQlO處理小鼠或?qū)φ招∈?0天腫瘤大小的影響。對 照組與處理組的平均腫瘤質(zhì)量分別減少52.3%和54.0%。圖15是一系列顯微照片，顯示CoQlO對體外培養(yǎng)的人乳腺癌細胞(SK-BR-3) 的影響。SK-BR-3細胞系過表達Her2/c-erb_2基因，基因產(chǎn)物(ATCC)。圖16顯示CoQlO降低48小時體外培養(yǎng)的人乳腺癌細胞系(SK_BR_3)增殖。 SK-BR-3細胞系過表達Her2/c-erb_2基因基因產(chǎn)物(ATCC)。圖17顯示CoQlO降低72小時體外培養(yǎng)的人乳腺癌細胞系(SK_BR_3)增殖。 SK-BR-3細胞系過表達Her2/c-erb_2基因基因產(chǎn)物(ATCC)。圖18顯示CoQlO降低48小時體外培養(yǎng)的人乳腺癌細胞系(MDA-MB-468)增 殖。MDA-MB-468細胞系在p53基因有突變(ATCC)。圖19顯示CoQlO降低72小時體外培養(yǎng)的人乳腺癌細胞系(MDA-MB-468)增 殖。MDA-MB-468細胞系在p53基因有突變(ATCC)。圖20顯示CoQlO降低48小時體外培養(yǎng)的人乳腺癌細胞系(BT_20)增殖。BT_20細胞系表達WNT7B和WNT3癌基因(ATCC)。圖21顯示CoQlO降低72小時體外培養(yǎng)的人乳腺癌細胞系(BT_20)增殖。BT_20 細胞系表達WNT7BHE WNT3癌基因(ATCC)。圖22顯示CoQlO降低48小時體外培養(yǎng)的人肝細胞癌細胞系(Hep 3B)增殖。圖23顯示CoQlO降低72小時體外培養(yǎng)的人肝細胞癌細胞系(Hep 3B)增殖。圖24顯示CoQlO降低48小時體外培養(yǎng)的人骨肉瘤細胞系(143B)增殖。圖25顯示CoQlO降低72小時體外培養(yǎng)的人骨肉瘤細胞系(143B)增殖。圖26顯示CoQlO降低48小時體外培養(yǎng)的人前列腺癌細胞系(PC_3)增殖。圖27顯示CoQlO降低72小時體外培養(yǎng)的人前列腺癌細胞系(PC_3)增殖。圖28顯示CoQlO對24小時體外培養(yǎng)的人前列腺癌細胞系(PC_3)的線粒體極化 (凋亡指標(biāo))的影響。PC-3細胞培養(yǎng)物經(jīng)0.05、0.1和0.2mM濃度QlO處理24小時，然 后用JC-I以10微克/ml.處理30分鐘。用流式細胞儀測量綠熒光的吸收和水平，F(xiàn)Ll (綠 色熒光)。注意在0.2mM QlO處理的細胞(黃色圖)中觀察到綠熒光顯著增加。圖29A和29B是照片，顯示與缺少含CoQlO的組合物條件下的對照比較，含 CoQlO的組合物(圖29B)對組織中腫瘤介導(dǎo)的血管生成的抑制。
具體實施例方式本發(fā)明提供降低腫瘤細胞生長速率或增加腫瘤細胞凋亡速率的組合物及其方 法。本發(fā)明的組合物包括作為抗腫瘤劑的治療有效量的CoQlO和載體。本發(fā)明的一種 優(yōu)選組合物是一種CoQlO的局部制劑，包含至少約1 % CoQlO和輔助CoQlO局部遞送的 載體。本發(fā)明的一種最優(yōu)選組合物是一種CoQlO的局部制劑，包含約和15%之間的 CoQlO和輔助CoQlO局部遞送的載體。本發(fā)明殺死腫瘤細胞或降低其生長速率的方法包 括使細胞與有效濃度CoQlO接觸的步驟。下文所述的優(yōu)選實施方案舉例說明這些組合物和方法的適用性。盡管如此，從 這些實施方案的描述中，基于下文提供的描述可實現(xiàn)和/或?qū)嵤┍景l(fā)明的其他方面。在本發(fā)明公開和描述以前，應(yīng)該理解，本發(fā)明不限于本文所公開的特定結(jié)構(gòu)、 處理步驟或材料，而應(yīng)擴展到相關(guān)技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所認(rèn)可的其等同物。也應(yīng)理 解，本文所用的術(shù)語僅用作描述具體實施方案的目的，但并不打算限制于此。定義依照本發(fā)明并如本文所使用的，下面的術(shù)語被定義為以下含意，除非另有明確 說明。如本文所使用的，“a”，“an”，和“the”包括其復(fù)數(shù)形式，除非上下文另
有明確指示。如本文所使用的，“制藥接受的”組分是適用于人和/或動物而沒有不適當(dāng)?shù)牟?利副作用(例如毒性、刺激和變態(tài)反應(yīng))并具有合理的收益/風(fēng)險比例的成分。如本文所使用的，術(shù)語“安全和治療有效量”表示，當(dāng)以本發(fā)明的方式使用 時，足以產(chǎn)生期望的治療反應(yīng)而沒有不適當(dāng)?shù)牟焕弊饔?例如毒性、刺激和變態(tài)反應(yīng)) 并具有合理的收益/風(fēng)險比的成分的量?！爸委熒嫌行Я俊币馑际侵赣行Мa(chǎn)生期望治療 反應(yīng)的本發(fā)明化合物的量。例如，有效延緩癌生長或引起癌，肉瘤或淋巴瘤，或縮小癌 或阻止轉(zhuǎn)移的量。具體的安全和有效量或治療有效量將隨一些因素而變化，例如具體治療的疾病、患者身體狀況、治療的哺乳動物或動物的類型、治療持續(xù)時間、同時治療的 本性(假如有)、及所用具體劑型和化合物或其衍生物的結(jié)構(gòu)。如本文所使用的，“藥用鹽”包括，但不限于，堿性物質(zhì)如氨的礦物或有機酸 鹽；酸性物質(zhì)如羧酸的堿或有機鹽。優(yōu)選地用有機或無機酸制備這些鹽。這些優(yōu)選的酸 鹽是氯化物，溴化物，硫酸鹽，硝酸鹽，磷酸鹽，磺酸鹽，甲酸鹽，酒石酸鹽，馬來酸 鹽，蘋果酸鹽，檸檬酸鹽，甲苯酸鹽，水楊酸鹽，抗壞血酸鹽等等。最優(yōu)選的鹽是鹽酸鹽。如本文所使用的，“癌”表示在哺乳動物中發(fā)現(xiàn)的所有類型的癌或新生物或惡 性腫瘤，包括，但不限于白血病，淋巴瘤，黑素瘤，癌瘤和肉瘤。在優(yōu)選實施方案 中，CoQlO組合物用于治療各種類型的乳腺癌、前列腺癌、肝癌、骨癌。然而，使用 CoQlO組合物的治療不限于這些類型的癌。癌的實例是腦癌，乳癌，胰癌，宮頸癌，結(jié)腸癌，頭頸癌，腎癌，肺癌，非小 細胞肺癌，黑素瘤癌，間皮瘤癌，卵巢癌，肉瘤癌，胃癌，子宮癌和成神經(jīng)管細胞瘤 癌。如本文所使用的，術(shù)語“癌”，“新生物”，和“瘤”，可互換并且以單數(shù)或復(fù) 數(shù)形式使用，它們表示已經(jīng)惡性轉(zhuǎn)化的細胞，這種轉(zhuǎn)化使得它們對宿主生物體是病理性 的。通過公認(rèn)的技術(shù)，特別是組織學(xué)檢查，原發(fā)性癌細胞(即，從惡性轉(zhuǎn)化位點附近獲 得的細胞)可以容易地與非癌細胞區(qū)別開。如本文所用，癌細胞的定義不僅包括原發(fā)癌 細胞，還包括任何源自癌細胞祖先的細胞。這包括轉(zhuǎn)移的癌細胞，和來自癌細胞的體外 培養(yǎng)物及細胞系。當(dāng)提到一種通常表現(xiàn)為實體瘤形式的癌時，“臨床可檢測的”腫瘤是 一種可基于腫瘤實體而檢測的腫瘤；例如，通過方法例如CAT掃描、MR成像、X-射 線、超聲波或觸診，和/或由于可從患者獲得的樣品中一或多種癌特異性抗原的表達而 可以被檢測到。術(shù)語“肉瘤”通常表示由象胚胎結(jié)締組織這樣的物質(zhì)組成的腫瘤以及通常由嵌 入纖維狀或均勻物質(zhì)中的緊密堆積的細胞組成的腫瘤?？捎帽景l(fā)明組合物和任選增效劑 和/或化療劑治療的肉瘤的實施例包括，但不限于軟骨肉瘤，纖維肉瘤，淋巴肉瘤，黑 素肉瘤，粘液肉瘤，骨肉瘤，Abemethy’ s肉瘤，脂肪肉瘤(adipose sarcoma)，脂肪肉 瘤(liposarcoma)，泡狀軟部肉瘤，成釉細胞肉瘤，葡萄狀肉瘤，綠色肉瘤，絨膜癌，胚 胎性肉瘤，維爾姆斯瘤肉瘤，子宮內(nèi)膜肉瘤，間質(zhì)性肉瘤，尤因肉瘤，筋膜肉瘤，成纖 維細胞肉瘤，巨細胞肉瘤，粒細胞肉瘤，何杰金氏肉瘤，自發(fā)多發(fā)性有色出血性肉瘤，B 細胞的免疫母細胞肉瘤，淋巴瘤，T細胞的免疫母細胞肉瘤，Jensen’ s肉瘤，卡波西肉 瘤，肝巨噬細胞肉瘤，血管肉瘤，白色肉瘤，惡性間葉瘤肉瘤，骨膜外肉瘤，網(wǎng)狀細胞 肉瘤，勞斯肉瘤，漿液囊性肉瘤，滑膜肉瘤，和毛細管擴張肉瘤。所用術(shù)語“黑素瘤”意指由皮膚和其他器官的黑素細胞系統(tǒng)產(chǎn)生的腫瘤?？捎?本發(fā)明組合物和任選增效劑和/或另一種化療劑治療的黑素瘤包括，但不限于，例如， 肢端雀斑樣痣黑素瘤，無黑素性黑素瘤，良性青少年黑色素瘤，Claudman' s黑素瘤， S91黑素瘤，哈-帕二氏黑素瘤，青少年黑素瘤，惡性雀斑樣痣黑素瘤，惡性黑素瘤，結(jié) 節(jié)性黑素瘤，甲下黑素瘤，和淺表擴散性黑素瘤。術(shù)語“癌瘤”表示由上皮細胞構(gòu)成的惡性新生長，趨向于浸潤周圍組織及產(chǎn) 生轉(zhuǎn)移?？捎帽景l(fā)明組合物和任選增效劑和/或化療劑治療的癌瘤包括但不限于，例如，腺泡癌，腺泡狀癌，腺囊癌，囊性腺樣癌，腺瘤癌，腎上腺皮質(zhì)癌，蜂窩狀癌， 肺泡細胞癌，基底細胞癌，carcinoma basocellulare，基底樣癌，基底鱗狀細胞癌，細 支氣管肺泡癌，支氣管癌，支氣管源性癌，髓樣癌，膽管細胞癌，絨毛膜癌，膠樣 癌，粉刺癌，子宮體癌，篩狀癌，胸廓癌，皮膚癌，柱狀癌，柱狀細胞癌，管癌， carcinoma durum,胚性癌，腦樣癌，表皮樣癌(epiermoid carcinoma)，腺樣上皮細胞 癌，外生式癌，carcinoma ex ulcere，纖維癌，膠狀癌，膠體癌，巨細胞癌，巨細胞癌 (carcinomagigantocellulare)，腺癌，粒層細胞癌，毛囊基質(zhì)癌，血樣癌，肝細胞癌， Hurthle氏細胞癌，透明癌(hyllne carcinoma)，腎上腺樣癌，幼稚型胚性癌，原位癌， 表皮內(nèi)癌，上皮內(nèi)癌，Krompecher，s癌，Kulchitzky細胞癌，大細胞癌，豆?fàn)畎?豆?fàn)畎?carcinomalenticulare)，脂肪瘤癌，淋巴上皮癌，髓樣癌，髓樣癌(medullary carcinoma),黑色素癌，軟癌，粘液癌，粘液癌(carcinoma muciparam)，粘液細胞癌， 粘液表皮樣癌，粘液癌(carcinoma mucosum)，粘液癌(mucous carcinoma)，粘液瘤樣 癌，鼻咽癌，燕麥細胞癌，骨化性癌，骨樣癌，乳突狀癌，門靜脈周癌，浸潤前癌， 棘細胞癌，軟糊狀癌(pultaceous carcinoma)，腎的腎細胞癌，儲備細胞癌，肉瘤性癌， Schneiderian癌，硬癌(scirrhous carcinoma)，陰囊癌，印戒細胞癌，單純癌，小細胞 癌，馬鈴薯狀癌，球狀細胞癌，梭狀細胞癌，海綿體癌，鱗狀癌，鱗狀細胞癌，繩捆 癌，毛細血管性癌，毛細血管性癌(carcinoma telangiectodes)，移行細胞癌，結(jié)節(jié)性癌 (carcinomatubersum),結(jié)節(jié)t生癌(tuberous carcinoma)，撫狀癌，續(xù)毛狀癌。可用本發(fā)明組合物治療的另外的癌包括，例如何杰金氏病，非何杰金氏淋巴 瘤，多發(fā)性骨髓瘤，神經(jīng)母細胞瘤，乳癌，卵巢癌，肺癌，橫紋肌肉瘤，原發(fā)性血小板 增多癥，原發(fā)性巨球蛋白血癥，小細胞肺腫瘤，原發(fā)性腦腫瘤，胃癌，結(jié)腸癌，惡性胰 腺腦島瘤，惡性類癌，膀胱癌，癌變前皮膚損傷，睪丸癌，淋巴瘤，甲狀腺癌，神經(jīng)母 細胞瘤，食管癌，泌尿生殖道癌，惡性血鈣過多，宮頸癌，子宮內(nèi)膜癌，腎上腺皮質(zhì) 癌，和前列腺癌?！霸\斷”意指鑒別病理狀況的存在和本性。診斷方法在靈敏度和特異性上不 同。診斷測試的“靈敏度”是檢測陽性的患病個體百分比(“真陽性”百分比)。沒 被檢驗出的患病個體是“假陰性”。沒患病且測試中檢測為陰性的對象被稱為“真陰 性”。診斷測試的“特異性”是1減假陽性率，其中“假陽性”率被定義為檢測陽性的 非患病對象的比例。盡管特定的診斷方法不一定提供疾病的明確診斷，如果該方法提供 幫助診斷的陽性指標(biāo)就足夠了。術(shù)語“患者”或“個體”在本文中可互換使用，并表示待治療的哺乳動物對 象，以人患者為優(yōu)選。有些情況下，本發(fā)明的方法發(fā)現(xiàn)在實驗動物、獸醫(yī)應(yīng)用、和開發(fā) 疾病的動物模型中的用途，包括，但不限于，嚙齒動物和靈長類動物，所述嚙齒動物包 括小鼠、大鼠和倉鼠?！皹悠贰币云渥顝V泛的意義用于本文。包括多核苷酸、多肽、肽和抗體等的樣 品可以包含體液，細胞制備物的可溶性部分、或細胞生長介質(zhì)，從細胞分離或提取的染 色體、細胞器或膜；在溶液中或結(jié)合到培養(yǎng)基上的基因組DNA、RNA或cDNA、多肽或 肽，細胞，組織，組織印跡(tissueprint)，指紋、皮膚或毛發(fā)等等。“治療”是意圖阻止疾病發(fā)生或改變其病理或癥狀而進行的干預(yù)。因此，“治療”涉及治療性治療和預(yù)防性或防止性措施。需要治療的對象包括已經(jīng)有疾病的對象以 及需要預(yù)防疾病的對象。在腫瘤(例如癌癥)治療中，治療劑可以直接降低腫瘤細胞病 理，或使腫瘤細胞對其他治療劑的治療更敏感，例如，放療和/或化療。如本文所用， “改善”或“治療”涉及趨向正?；?例如在健康患者或個體內(nèi)獲得的值)的癥狀， 例如，當(dāng)用常規(guī)統(tǒng)計學(xué)檢驗確定時，與正?；档牟町惿儆?0%，優(yōu)選與正?；档牟?異少于約25%，更優(yōu)選與正?；档牟町惿儆?0%，以及還更優(yōu)選的與正常化值沒有顯 著差異。例如，“治療癌癥”或“腫瘤細胞”，涉及以下影響的一個或更多(1)在某 種程度上抑制腫瘤生長，包括，(i)減慢和Gi)生長完全停滯；(2)腫瘤細胞數(shù)量減少； (3)維持腫瘤大??；(4)腫瘤大小縮?。?5)抑制，包括(i)減少、(ii)減慢或(iii)完全 阻止腫瘤細胞浸潤周圍器官；(6)抑制，包括(i)減少、(ii)減慢或(iii)完全阻止轉(zhuǎn)移； (7)增強抗腫瘤免疫應(yīng)答，其可導(dǎo)致ω維持腫瘤大小，Gi)縮小腫瘤大小，(iii)減慢腫 瘤生長，(iv)減少，減慢或阻止侵襲和/或(8)某種程度上，減輕與該疾病相關(guān)的一或多 種癥狀的嚴(yán)重程度或數(shù)目。正如本文所使用的，“改善的癥狀”或“已治療的癥狀”表示趨向正?；档?癥狀，例如，當(dāng)用常規(guī)統(tǒng)計學(xué)檢驗確定時，與標(biāo)準(zhǔn)化值的差異少于50%，優(yōu)選與標(biāo)準(zhǔn)化 值的差異少于約25%，更優(yōu)選與標(biāo)準(zhǔn)化值的差異少于10%，以及還更優(yōu)選的與標(biāo)準(zhǔn)化值
沒有顯著差異?！摆吇蜃印笔菂⑴c細胞遷移和活化并在炎癥反應(yīng)中起作用的小細胞因子，所 述細胞包括吞噬細胞和淋巴細胞?！凹毎蜃印笔羌毎a(chǎn)生的蛋白質(zhì)，通過細胞因子影響的其它細胞表面的“細 胞因子受體”而影響細胞行為。由淋巴細胞產(chǎn)生的細胞因子有時被稱作“淋巴因子”。 細胞因子也根據(jù)特征被分為I型(例如IL-2和IFN- Y )和II型(例如IL-4和IL-10)。術(shù)語“調(diào)節(jié)”，意指任何提及的活動，例如，增加、增強、增加、激動(作為 激動劑起作用)、促進、減少、降低、抑制、阻斷、或拮抗(作為激動劑起作用)。調(diào)節(jié) 可以使活性增加超過基線值多于1倍、2倍、3倍、5倍、10倍、100倍等。調(diào)節(jié)還能使 活性減少到基線值以下。如本文所用，術(shù)語“對腫瘤細胞有選擇性的”涉及所述輔酶QlO藥物組合物的 作用，例如抑制腫瘤生長，細胞凋亡，抗血管生成作用，并且當(dāng)施用于正常細胞時這些 作用不能被檢測到，這正如以下實施例詳細描述。CoQlO 組合物在一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明提供用于治療癌癥的CoQlO組合物。該組合 物優(yōu)選包含至少約到約25% w/w的CoQIO，更優(yōu)選約到約20% w/w之間的 CoQIO。在下面實施例部分描述的代表性實施方案中，CoQlO的局部制劑被施用于負(fù)瘤 動物皮膚上以降低腫瘤生長速率。CoQlO可以粉末形式以任意適合數(shù)量(例如，Ikg)從 Pure Prescriptions (San Diego, CA)獲得?？梢允褂萌魏魏线m的載體遞送含CoQlO的組合 物。例如，脂質(zhì)體可作為載體使用。脂質(zhì)體制劑的一個實例具有以下組成Phospholipon 90G (American Lechitin, Stanford，CT)、Phospholipon 90H (AmericanLechitin, Stanford, CT)、甘油、丁化羥基甲苯(BHT)、乙醇、中鏈甘油三酯(MCT)，薰衣草精 (Sigma-Aldrich，St丄ouis，MO)和輔酶 QlO (Pure Prescriptions，SanDiego, CA)。制備該制劑的方法的一個實例要求首先將IOg Phospholipon 90H、5gPhospholipon 90G>與1.5g 中鏈甘油三酯、0.3gBHT和9ml乙醇在75°C溶解。接著，將12g輔酶QlO溶解到混合物 中。加入用氮飽和水制備的65ml ImM磷酸鹽緩沖液(pH 8.2)、13.3g甘油和50 μ L薰衣 草精。在高速混合器中以12,OOORPM混合上述混合物成膏狀。膏狀物在4°C儲存直至使用。對象因為來自許多不同物種的對象具有腫瘤并且易得腫瘤，所以本發(fā)明可兼容許多 類型的動物對象。這些動物的不完全的實例清單包括哺乳動物例如小鼠、大鼠、兔、山 羊、綿羊、豬、馬、牛、狗、貓和靈長類動物例如猴、猿和人。那些已知患有皮膚癌的 動物對象優(yōu)選用于本發(fā)明。尤其是，患有皮膚癌或其他腫瘤的人類患者是適用于本發(fā)明 的動物對象。通過將本文教導(dǎo)的方法與醫(yī)學(xué)和獸醫(yī)科學(xué)中已知的其它方法相適應(yīng)(例 如，根據(jù)動物對象的體重調(diào)整施用物質(zhì)的劑量)，本發(fā)明使用的組合物可容易的優(yōu)化以供 其他動物使用。藥物組合物以及向研究對象施用在一個優(yōu)選實施方案中，局部施用含CoQlO的組合物。優(yōu)選提供活性成分，即 CoQlO,作為藥物制劑。組合物實例將詳細描述于以下實施例。對于局部施用，活性成 分可以包括最終產(chǎn)物中制劑重量的0.001%至約20% w/w，盡管其可以包含多達制劑的 30% w/w,優(yōu)選約至約20%w/w。本發(fā)明的局部制劑，包括活性成分連同其一或多 種可接受載體和任選的任何其他治療成分。載體必須是“可接受的”，意思是與制劑的 其他成分兼容并對其接受者是無害的。本發(fā)明組合物既可以通過其自身施用于患者，也可以混有適合的載體或賦形劑 的藥物組合物的形式施用。在表現(xiàn)出相關(guān)疾病的患者的治療中，施用治療有效量的藥 劑，例如這些。治療有效劑量表示導(dǎo)致患者癥狀改善或延長生存的組合物的量。這些化合物的毒性和治療功效可通過標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)方法在細胞培養(yǎng)或?qū)嶒瀯游镏衼?測定，例如測定LD5Q(群體中50%致死的劑量)和ED5tl(群體中50%治療有效的劑量)。 毒性和治療效果之間的劑量比率是治療指數(shù)并且可被表示成比率LD5(i/ED5(i。表現(xiàn)出大的 治療指數(shù)的化合物是優(yōu)選的。從這些細胞培養(yǎng)測試和動物研究中獲得的數(shù)據(jù)可用于設(shè)計 一系列供人類使用的劑量。這些化合物的劑量優(yōu)選處于包括ED5tl而很少或沒有毒性的循 環(huán)濃度范圍內(nèi)。根據(jù)所用的劑量形式和所利用的給藥途徑，劑量可以在此范圍內(nèi)變化。對用于本發(fā)明方法的任何化合物，治療有效劑量可以從細胞培養(yǎng)測試中作初步 估計。例如，劑量可以配制成在動物模型中達到這樣的循環(huán)血漿濃度范圍，該范圍包括 細胞培養(yǎng)中測定的IC5(I?？墒褂眠@些信息更精確的測定用于人的劑量?？梢詼y量血漿水 平，例如通過HPLC。具體制劑、給藥途徑和劑量可由醫(yī)生個人視患者的狀況選定(例如見Fingl et al, inThe Pharmacological Basis of Therapeutics, 1975，Ch.lp.l)。應(yīng)該注意的是主治醫(yī)生
將知道由于毒性或由于器官機能障礙應(yīng)怎樣以及何時停止、中斷或調(diào)整給藥。相反地， 如果臨床反應(yīng)不足(排除毒性)，主治醫(yī)生也將知道調(diào)整治療到更高水平。感興趣的致癌 疾病治療中施用劑量的大小將隨待治療疾病的嚴(yán)重程度和施用途徑而變化。例如疾病的 嚴(yán)重程度可部分地通過標(biāo)準(zhǔn)預(yù)測評估法估計。此外，劑量以及可能劑量頻率也將根據(jù)年齡、體重和個體患者反應(yīng)而變化。與以上討論相應(yīng)的程序可以用于獸醫(yī)學(xué)中。根據(jù)治療的具體疾病，可以配制這些藥劑并系統(tǒng)性或局部性給藥。制劑和給 藥技術(shù)可見于 Remington，s Pharmaceutical Sciences, 18th ed.，Mack Publishing Co., Eastern，Pa.(1990)。合適的途徑可以包括口、直腸、透皮、陰道、跨黏膜或腸給藥； 胃腸道外遞送，包括肌肉內(nèi)、皮下、髓內(nèi)注射、以及胸內(nèi)、直接心室內(nèi)、靜脈內(nèi)、腹膜 內(nèi)、鼻內(nèi)或眼內(nèi)注射，僅僅列舉一些。上述組合物可以任何合適的劑型施用于對象。除了用CoQlO的局部制劑治療癌 癥外，在本發(fā)明的其他方面CoQlO可通過其他方法給藥。例如，CoQlO可被配制為胃 腸道外給藥，例如，皮下、靜脈內(nèi)、肌肉內(nèi)或腫瘤內(nèi)注射?？梢允褂闷渌f送方法，例 如，脂質(zhì)體遞送或從充有該組合物的裝置中擴散。該組合物可以單次推注，多次注射， 或通過連續(xù)輸液(例如，靜脈內(nèi)的或通過腹膜透析)給藥。對于胃腸道外給藥，組合物 優(yōu)選配制成無菌無熱源形式。通過簡單地向含有細胞的液體中加入組合物，本發(fā)明組合 物也能體外施用于細胞(例如，在體外培養(yǎng)中誘導(dǎo)癌細胞凋亡)。根據(jù)治療的具體疾病，可以配制這些藥劑并系統(tǒng)性或局部性給藥。制劑和給 藥技術(shù)可見于 Remington，s Pharmaceutical Sciences, 18th ed., Mack Publishing Co., Eastern，Pa.(1990)。合適的途徑可以包括口、直腸、透皮、陰道、跨黏膜或腸給藥； 胃腸道外遞送，包括肌肉內(nèi)、皮下、髓內(nèi)注射、以及胸內(nèi)、直接心室內(nèi)、靜脈內(nèi)、腹膜 內(nèi)、鼻內(nèi)或眼內(nèi)注射，僅僅列舉一些。對于注射，本發(fā)明的藥劑可以配制于水溶液中，優(yōu)選生理相容的緩沖液例如 Hanks' S溶液，Ringer’ s溶液，或生理鹽水緩沖液。對于跨粘膜給藥，制劑中使用待 滲透屏障適合的滲透劑。這些滲透劑為本領(lǐng)域所公知。使用藥學(xué)接受的載體配制本文公開用于實施本發(fā)明的組合物為適于系統(tǒng)給藥的 劑量是在本發(fā)明范圍內(nèi)。適當(dāng)選擇載體和合適的制造規(guī)范，本發(fā)明組合物，尤其是配制 成溶液的本發(fā)明組合物，可以胃腸道外給藥，例如通過靜脈內(nèi)注射。該化合物可使用本 領(lǐng)域技術(shù)人員公知的藥學(xué)接受的載體容易地配制成適合口服的劑量。為了由待治療患 者經(jīng)口攝入，這些載體能使本發(fā)明化合物配制成片、丸、膠囊、液體、凝膠、糖漿、漿 (slurries) >懸液等等。意欲細胞內(nèi)施用的藥劑可使用本領(lǐng)域普通技術(shù)人員熟知的技術(shù)施用。例如，這 些藥劑可包裹入脂質(zhì)體中，然后按上述方法給藥。脂質(zhì)體是具有水性內(nèi)部的球形脂質(zhì)雙 層。在脂質(zhì)體形成時存在于水溶液中的所有分子結(jié)合入所述水性內(nèi)部。脂質(zhì)體內(nèi)容物既 被保護免受外部微環(huán)境影響，又因為脂質(zhì)體與細胞膜溶合而被有效遞送到細胞質(zhì)內(nèi)。此 外，由于它們的疏水性，小的有機分子可以直接細胞內(nèi)施用。適用于本發(fā)明的藥物組合物包括這種組合物，其中含有能達到其預(yù)期目的的有 效量的活性成分。例如，見圖14。有效量的確定是在本領(lǐng)域技術(shù)人員能力范圍內(nèi)，尤 其是根據(jù)本文所提供的詳細公開。除了活性成分，這些藥物組合物也可含有包括賦形 劑和輔助劑的合適的藥物接受載體，其幫助將活性化合物加工成可藥用的制劑。配制 為口服施用的制劑可以是片、糖衣丸、膠囊或溶液的形式。本發(fā)明藥物組合物可用已 知方式制造，例如，依靠常規(guī)混合、溶解、制粒、制糖衣、懸浮、乳化、膠囊化、俘獲 (entrapping)或凍干工藝。
適合于局部施用的制劑包括適于透過皮膚到達所需治療部位的液體或半液體的 制劑，例如擦劑、洗劑、霜(cream)、膏(ointment)或糊，以及適合施用于眼、耳或鼻的 滴劑。根據(jù)本發(fā)明的滴劑可以包含無菌水或油溶液或懸液，并可以通過溶解活性成分于 殺菌和/或殺真菌劑和/或任何其他合適防腐劑的合適水溶液中而制備，并優(yōu)選包括表面 活性劑。然后可以通過過濾澄清并滅菌所得溶液并以無菌技術(shù)移入容器內(nèi)。適合于滴劑 內(nèi)含物的殺菌和殺真菌劑的實例是硝酸或醋酸苯汞(0.002% )、苯扎氯胺(0.01% )和醋酸 洗必泰(0.01%)。適合于油溶液制劑的溶劑包括甘油，稀釋醇和丙二醇。根據(jù)本發(fā)明的洗劑包括那些適合應(yīng)用于皮膚或眼的制劑。眼洗劑可以包括任選 含殺菌劑的無菌水溶液，并可以通過類似于制備滴劑的那些方法制備。應(yīng)用于皮膚的洗 劑或擦劑也可以包括加速干燥和冷卻皮膚的試劑，例如酒精或丙酮，和/或潤濕劑例如 甘油或象海貍油或花生油之類的油。根據(jù)本發(fā)明的霜、膏或糊是用于外部施用的活性成分的半固體制劑。在合適 的機器幫助下，以油脂性或非油脂性為基礎(chǔ)，將細分的或粉末形式的活性成分，單獨或 以溶液或懸液，混合入水或非水性流體中。該基礎(chǔ)可以包含烴例如硬、軟或液體石蠟， 甘油，蜂蠟，金屬皂；粘膠；天然來源的油例如杏仁、玉米、花生、海貍或橄欖油；羊 毛脂或其衍生物，或脂肪酸例如硬脂酸或油酸以及醇如丙二醇或macrogel。該制劑可 以摻入任何合適的表面活性劑例如陰離子、陽離子或非離子性表面活性劑例如失水山梨 醇酯或其聚氧乙烯衍生物。也可以包括助懸劑如天然膠、纖維素衍生物或無機物例如 silicaceous硅膠，和其它成分如羊毛脂(lanolin)。用于胃腸道外給藥的藥物組合物包括水溶形式活性化合物的水溶液。此外，活 性化合物的懸液可以制備成適當(dāng)?shù)挠托宰⑸鋺乙?。合適的親脂性溶劑或介質(zhì)包括脂肪油 例如芝麻油，或合成的脂肪酸酯，例如油酸乙酯或甘油三酯，或脂質(zhì)體。水性注射懸液 可以包含增加懸液粘性的物質(zhì)，例如羧甲基纖維素鈉、山梨醇或右旋糖苷。任選地，懸 液還可以包含合適的穩(wěn)定劑或增加化合物溶解性的試劑以允許制備高濃縮溶液?？赏ㄟ^組合活性組合物與固體賦形劑，任選地，在加入合適的助劑后，如果需 要，研磨所得混合物，并加工混合物顆粒，以獲得片劑或糖衣丸核心，從而獲得口服使 用的藥物制劑。合適的賦形劑是，特別是，填充劑如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或 山梨糖；纖維素制劑如，例如，玉米淀粉、小麥淀粉、稻米淀粉、馬鈴薯淀粉、明膠、 黃蓍膠、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉、和/或聚乙烯吡咯烷酮 (PVP) O如果需要，可以加入崩解劑，例如交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂、或海藻酸或其 鹽例如海藻酸鈉。向糖衣丸核心提供合適的包衣。為此目的，可以使用濃縮糖溶液，其任選地可 以包含阿拉伯樹膠、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、carbopol凝膠、聚乙二醇、和/或二氧化 鈦、漆溶液，和合適的有機溶劑或溶劑混合物。為識別或特征化活性化合物劑量的不同 組合，染料或顏料可加入到片劑或糖衣包衣中?？煽诜褂玫乃幬镏苿┌ㄓ擅髂z制成的推入配合式膠囊，以及由凝膠和增塑 劑如甘油或山梨醇制成的軟、密封膠囊。推入配合式膠囊可包含與填充劑如乳糖、粘合 劑如淀粉和/或潤滑劑如滑石粉或硬脂酸鎂和任選地穩(wěn)定劑混合的活性成分。在軟膠囊 中，活性化合物可溶解或懸于合適的液體中，例如脂肪油、液體石蠟或液態(tài)聚乙二醇。此外，可加入穩(wěn)定劑。如果期望，組合物可包括緩沖體系。選擇緩沖體系以維持或緩沖組合物的pH在 期望的范圍內(nèi)。如本文所使用的術(shù)語“緩沖體系”或“緩沖液”表示溶質(zhì)試劑，在水 溶液中，當(dāng)向其中加入酸或堿時，其可穩(wěn)定該溶液避免pH(或氫離子濃度或活性)大的變 化。溶質(zhì)試劑從而負(fù)責(zé)阻止或pH由起始緩沖pH值在上文所指示范圍內(nèi)變化，這些溶質(zhì) 試劑是公知的。盡管存在無數(shù)合適的緩沖液，一水合磷酸鉀是優(yōu)選緩沖液。藥物組合物的最終pH值可在生理相容范圍內(nèi)變化。必要地，最終pH值不刺激 人的皮膚并且優(yōu)選輔助活性化合物即CoQlO的透皮膚運輸。不破壞此限制，可選擇pH 值以提高CoQlO化合物的穩(wěn)定性及需要時調(diào)整其濃度。在一實施方案中，優(yōu)選pH值為 約3.0到約7.4，更優(yōu)選地約3.0到約6.5，最優(yōu)選地約3.5到約6.0。對于優(yōu)選的局部給藥介質(zhì)，組合物的剩余成分是水，其必須經(jīng)純化，例如， 去離子水?；诮M合物的總重，這些遞送介質(zhì)組合物包含水的范圍在超過約50%至約 95%。水的具體存在量不是關(guān)鍵的，然而，可以調(diào)節(jié)水含量以獲得期望粘度(通常約 50cps到約10,000cps)和/或其他成分的濃度。局部給藥介質(zhì)優(yōu)選具有至少約30厘泊的 粘度。也可使用其他已知的透皮皮膚滲透增強劑以輔助CoQlO的遞送。比如亞砜 例如二甲亞砜(DMSO)等等；環(huán)酰胺例如1-十二烷基氮雜環(huán)庚烷-2-酮(Azone ， NelsonReserch，Inc.的注冊商標(biāo))等等；酰胺例如N，N-二甲基乙酰胺(DMA) N，N_ 二 乙基甲苯酰胺，N，N-二甲基甲酰胺，N，N-二甲基辛酰胺，N，N-二甲基癸酰胺等 等；吡咯烷酮衍生物例如N-甲基-2-吡咯烷酮，2-吡咯烷酮，2-吡咯烷酮-5-羧酸， N-(2-羥乙基)-2_吡咯烷酮或其脂肪酸酯，1-月桂基-4-甲氧羰基-2-吡咯烷酮，N-牛 脂烷基吡咯烷酮等等；多羥基化合物例如丙二醇，乙二醇，聚乙二醇，二丙二醇，甘 油，己三醇等等；直鏈和支鏈脂肪酸例如油酸，亞油酸，月桂酸，戊酸，庚酸，己酸， 肉豆蔻酸，異戊酸，新戊酸(neopentanoic)，三甲基己酸，異硬脂酸等等；醇類例如乙 醇，丙醇，丁醇，辛醇，油醇(oleyl)，十八烷醇(Stearyl)，亞麻油醇(linoleyl)等等；陰 離子表面活性劑例如月桂酸鈉，月桂基硫酸鈉等等；陽離子表面活性劑例如苯扎氯銨， 十二烷基三甲基氯化銨，十六烷基三甲基溴化銨等等；非離子表面活性劑例如丙氧基聚 氧乙烯醚，例如，Poloxamer 231，Poloxamer 182, Poloxamer 184等等，乙氧基脂肪酸 例如Tween 20，Μγη·45等等，失水山梨醇衍生物例如Tween 40，Tween 60, Tween 80， Span 60等等，乙氧基化醇例如聚氧乙烯(4)月桂醚(Brij 30)，聚氧乙烯(2)油醚(Brij 93) 等等，卵磷脂和卵磷脂衍生物等等；萜類例如D-檸檬烯，α-菔烯，蒈烯，α-萜 品醇，香草醇(carvol)，香芹酮(carvone)，薄荷酮，檸檬烯氧化物，α-菔烯氧化物，桉 樹油等等。同樣適合作為皮膚滲透增強劑的是有機酸和酯例如水楊酸，水楊酸甲酯，檸檬 酸，琥珀酸等等。血管發(fā)生和血管發(fā)生依賴性疾病如本文所使用的，術(shù)語“血管生成抑制”或“抗血管生成”包括血管發(fā)生，意 思是指使新血管形成的程度、量或速率降低的作用。使組織中內(nèi)皮細胞增殖或遷移的程 度、量或速率降低的作用是抑制血管發(fā)生的具體實例。
術(shù)語“血管生成抑制性組合物”涉及含CoQlO的組合物，其抑制腫瘤介導(dǎo)的 血管發(fā)生過程例如內(nèi)皮細胞遷移、增殖、管形成，且隨后導(dǎo)致抑制從現(xiàn)有血管產(chǎn)生新 血管，從而抑制血管發(fā)生依賴性疾病，例如，腫瘤介導(dǎo)的血管發(fā)生。例如見圖29A和 29B，其中，與缺乏任何CoQlO的對照組織比較，含CoQlO的組合物抑制組織中腫瘤介 導(dǎo)的血管發(fā)生。含CoQlO的組合物被詳細描述于以下實施例。如本文所用，術(shù)語“血管發(fā)生依賴性疾病”意指血管發(fā)生或血管生成過程支持 或增加病理狀況的疾病。尤其是，血管發(fā)生依賴性疾病涉及腫瘤介導(dǎo)的血管發(fā)生。血管發(fā)生是從已有的毛細管或后毛細管小靜脈形成新血管。血管生成是由于從 作為內(nèi)皮細胞前體的成血管細胞形成新血管。兩種過程都導(dǎo)致新血管形成并包含在術(shù)語 血管發(fā)生依賴性疾病含義內(nèi)。相似地，如本文所使用的術(shù)語“血管發(fā)生”意思包括血管 全新形成，例如源于血管生成，以及那些源于現(xiàn)存動脈、毛細管和小靜脈的分支和芽支 的血管形成。血管發(fā)生，包括血管生成，是重要的生理過程，沒有它胚胎發(fā)育及傷口愈合將 不會發(fā)生。然而，作為向受影響組織內(nèi)的細胞提供充足的血液和營養(yǎng)供應(yīng)的手段，血 管發(fā)生也不適當(dāng)?shù)貐⑴c眾多病理狀況。這些病理狀況中有很多涉及異常的細胞增殖或調(diào) 控。血管發(fā)生被認(rèn)為對其有重要影響的這些狀況在本文中被稱為血管發(fā)生依賴性疾病。 然而，本發(fā)明的方法也能有益的被用來抑制與正常生理過程相關(guān)的血管發(fā)生。例如，抑 制與月經(jīng)周期相關(guān)的血管發(fā)生可預(yù)防性用作有效的節(jié)育方法。因此，以下參考血管發(fā)生 依賴性疾病治療的說明也可應(yīng)用于抑制正常血管發(fā)生反應(yīng)，其中存在預(yù)防或治療性需要 或有益。血管發(fā)生依賴性疾病包括，例如，炎癥性疾病例如免疫或非免疫炎癥、類風(fēng)濕 性關(guān)節(jié)炎、慢性關(guān)節(jié)風(fēng)濕癥和牛皮癬；與不適宜的或不合適的血管入侵有關(guān)的疾病例如 糖尿病性視網(wǎng)膜病、新生血管性青光眼、早產(chǎn)兒視網(wǎng)膜病、視網(wǎng)膜黃斑變性、角膜移植 排斥、晶狀體纖維增生、虹膜發(fā)紅、動脈粥樣硬化斑塊中的毛細管增生和骨質(zhì)疏松癥； 以及癌癥相關(guān)的疾病，包括例如，實體瘤、腫瘤轉(zhuǎn)移、血液中腫瘤例如白血病、血管纖 維瘤、卡波西肉瘤、良性腫瘤例如血管瘤、聽神經(jīng)瘤、纖維神經(jīng)瘤、沙眼和化膿性肉芽 腫，以及需要新血管形成來支持腫瘤生長的其它癌癥。血管發(fā)生依賴性疾病的其它實例 包括，例如，Osier-Webber綜合癥；心肌血管發(fā)生；斑塊新血管形成；毛細管擴張；血 友病性關(guān)節(jié)和創(chuàng)傷性肉芽。在其中血管發(fā)生對病理狀態(tài)的維持或發(fā)展起作用的其他疾病 是為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知的，并且相似地包含在本文所用術(shù)語的含義內(nèi)。優(yōu)選地，血管 發(fā)生介導(dǎo)的疾病是指腫瘤誘導(dǎo)的血管發(fā)生。血管發(fā)生抑制活性的體外生物學(xué)測試可以在幾個體外測試系統(tǒng)中檢測本發(fā)明的CoQlO化合物的血管發(fā)生抑制活性， 這是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所熟知的。內(nèi)皮細胞，例如，人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)或人 微血管內(nèi)皮細胞(HMVEC)可以制備或商業(yè)獲得，以2X IO5細胞/mL的濃度與纖維蛋白 原(5mg/mL)的磷酸鹽緩沖液(PBS)按1 1 (ν/ν)比例混合。加入凝血酶(5單位/mL 終濃度)并且混合物立即轉(zhuǎn)入24孔板(每孔0.5mL)。允許形成纖維蛋白膠，然后與測試 化合物一起將血管內(nèi)皮細胞生長因子(VEGF)和堿性成纖維細胞生長因子(FGF2)(各自 以5ng/mL終濃度)加入孔內(nèi)，如以下實施例所述。細胞在37°C、5%C02下培養(yǎng)4天，其間計數(shù)每個孔中的細胞，并按圓形、長形無分支、長形有一個分支、或長形有2個或多 個分支進行分類。對每個化合物濃度，結(jié)果表示為5個不同孔的平均數(shù)。典型地，在血 管發(fā)生抑制劑存在下，細胞保持圓形或形成未分化的管(例如，0或1個分支)。這種測 試在本領(lǐng)域被認(rèn)為可預(yù)測體內(nèi)血管發(fā)生效力(或血管發(fā)生抑制活性)(Gnmtet al.，InVitro Cell Dev.Biol. 27A 327-336(1991) ； Minetal., Cancer Res.56 2428-2433(1996))。在一種替代測試中，當(dāng)在Matrigel 基質(zhì)包被的培養(yǎng)板上培養(yǎng)內(nèi)皮細胞時可 觀察到內(nèi)皮細胞管形成，Matrigel 基質(zhì)包被培養(yǎng)板可從Becton Dickinson of Bedford, Pa. (Schnaper et al., J.Cell.Physiol. 165 107-118 (1995))商業(yè)獲得。將內(nèi)皮細胞(IXlO4 細胞/孔)轉(zhuǎn)移到Matrigel 基質(zhì)包被的24孔培養(yǎng)板上，48小時后對管形成進行定量。 通過與內(nèi)皮細胞同時或在其后的不同時間點加入抑制劑來測試抑制劑。該測試通過向內(nèi)皮細胞提呈特定類型的基底膜來模擬血管發(fā)生，基底膜即遷移 和分化的內(nèi)皮細胞預(yù)期可能首先遇到的基質(zhì)層。除了結(jié)合生長因子以外，Matrigel 基質(zhì) (和在基底膜原位)中發(fā)現(xiàn)的基質(zhì)成分或其蛋白水解產(chǎn)物也可以刺激內(nèi)皮細胞管形成，其 使得此模型可作為纖維蛋白凝膠血管發(fā)生模型的補充。此外，本發(fā)明化合物的血管發(fā)生活性可通過雞胚絨毛尿囊膜(CAM)測試來評估 (Oikawa et al., Cancer Lett.59 57-66 (1991))。聯(lián)合療法本發(fā)明的CoQlO治療組合物可與一般用于治療患者表現(xiàn)的特定腫瘤、疾病或障 礙的任何其他方法相結(jié)合。只要已知特定治療方法對患者狀況本身是無害的，而且不明 顯抵消CoQlO組合物治療，則其與本發(fā)明的結(jié)合是可以考慮的。在實體瘤治療中，本發(fā)明可與傳統(tǒng)方法例如外科手術(shù)、放療、化療等聯(lián)合使 用。因此本發(fā)明提供了聯(lián)合療法，其中CoQlO治療組合物與外科手術(shù)或放射治療同時、 在其前或其后使用；或與傳統(tǒng)化療劑、放療劑或其他抗血管發(fā)生劑、或靶向免疫毒素或 共凝集配體(coaguligand)治療同時、在其前或其后施用于患者。也可考慮將聯(lián)合療法用于其他血管疾病。其中一個具體實例是良性前列腺增生 (BPH),其可用CoQlO組合物聯(lián)合本領(lǐng)域目前實行的其他療法進行治療。例如，免疫毒 素靶向定位于BPH內(nèi)的標(biāo)志物，如PSA0當(dāng)一或多種藥劑與CoQlO組合物聯(lián)合使用時，不要求聯(lián)合結(jié)果是分別進行每種 療法時所觀察作用的累加。盡管一般期望至少是累加作用，但是超出一種單獨治療的任 何增加的抗腫瘤作用都是有益的。同樣，也不特別要求聯(lián)合治療表現(xiàn)出協(xié)同效應(yīng)，雖然 這的確是可能的并且是有益的。為了進行聯(lián)合抗腫瘤治療，可與另一種抗癌劑聯(lián)合以有效方式向動物施用 CoQlO組合物構(gòu)造物，所述方式可在動物體內(nèi)有效導(dǎo)致聯(lián)合抗腫瘤作用。因此將提供有 效量的制劑并持續(xù)有效的持續(xù)時間，以導(dǎo)致它們聯(lián)合存在于腫瘤脈管系統(tǒng)中并在腫瘤環(huán) 境中聯(lián)合發(fā)揮作用。為了達到此目標(biāo)，CoQlO組合物和其他抗癌劑可同時施用于動物， 或以單一組合物、或用不同給藥途徑作為兩種不同的組合物。作為替代，CoQlO組合物介導(dǎo)的治療可在第二種抗癌劑治療之前或之后，例 如，間隔可以是幾分鐘到幾周范圍。在某些實施方案中，抗癌劑和CoQlO組合物分別施 用于動物，確保顯著持續(xù)時間不短于兩次給藥之間的時間間隔，使得抗癌劑和CoQlO組合物仍能向腫瘤施加有益的聯(lián)合作用。在此情況下，可以考慮將腫瘤與兩種制劑在約5 分鐘至約一周內(nèi)接觸，并且更優(yōu)選地在約12-72小時內(nèi)，最優(yōu)選延遲時間僅約12-48小 時。在癌癥治療中一般性使用物質(zhì)組合是公知的。例如，美國專利No.5,710,134(經(jīng) 引用并入本文)公開了與無毒性物質(zhì)或“前藥”聯(lián)合使用的誘導(dǎo)腫瘤壞死的成分。壞死 過程釋放的酶把無毒的“前藥”切割為有毒的“藥”，其導(dǎo)致腫瘤細胞死亡。另外，美 國專利No.5,747,469 (經(jīng)引用并入本文)公開了編碼p53的病毒載體和DNA破壞劑的聯(lián)合 使用。任何這樣的相似方法可與本發(fā)明一起使用。有些情況下，甚至期望顯著延長治療時間，其中在各次給藥之間間隔幾天(2、 3、4、5、6 或 7)、幾周(1、2、3、4、5、6、7 或 8)或甚至幾個月(1、2、3、4、5、6、 7或8)。這在有些情況下是有利的，在這種情況下一種治療意圖實質(zhì)性破壞腫瘤，例如 CoQlO組合物治療，而另一種治療意圖微轉(zhuǎn)移或腫瘤再生長，例如施用抗腫瘤劑。也可以考慮利用多于一次施用CoQlO組合物或另一種抗癌劑。CoQlO組合物和 抗癌劑可以隔若干天或周交替施用；或者可以給予一系列CoQlO組合物治療，隨后給予 一系列抗癌劑治療。無論如何，為了用聯(lián)合療法來實現(xiàn)腫瘤退化，所必須的是以聯(lián)合的 有效發(fā)揮抗腫瘤作用的量遞送這兩種藥劑，而無論何時施用。在外科手術(shù)方面，任何外科介入可與本發(fā)明結(jié)合使用。關(guān)于放療，可以考慮誘 導(dǎo)局限于腫瘤細胞內(nèi)DNA損傷的任何機制，例如Y-照射、X-射線、UV-照射、微波 甚至電子發(fā)射等等。也可以考慮定向遞送放射性同位素至腫瘤細胞，并且這可與靶向抗 體或其他靶向手段聯(lián)合使用。細胞因子治療也已經(jīng)被證明是聯(lián)合療法的有效伙伴。多種細胞因子可在該聯(lián)合 方法中施用。細胞因子的實例包括IL-la，IL-I β，IL-2，IL_3，IL_4，IL_5，IL_6， IL-7, IL-8, IL-9, IL-10，IL-11, IL-12，IL-13，TGF- β , GM-CSF, M-CSF, G-CSF, TNFa, TNF β, LAF, TCGF, BCGF, TRF, BAF, BDG, MP, LIF, OSM, TMF, PDGF, IFN-a，IFN- β , IFN-Y。遵照臨床指征如患者病況和細胞因子的相對 毒性，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案施用細胞因子。子宮珠蛋白(uteroglobins)也可用于阻止或抑制轉(zhuǎn)移 (美國專利No.5,696,092 ；經(jīng)引用并入本文)。CoQlO組合物和聯(lián)合化療在某些實施方案中，本發(fā)明的CoQlO組合物可與另一化療劑聯(lián)合施用。不考 慮背后的機制，多種化療劑可用于本文所公開的聯(lián)合治療方法中。治療劑可包括，例 如，化療劑比如，環(huán)磷酰胺(CTX，25mg/kg/天，口服)、紫杉醇類(太平洋紫杉醇或 多烯紫杉醇)、白消安、順鉬、甲氨喋呤、環(huán)磷酰胺、柔紅霉素、多柔比星、美法侖、 克拉屈濱、長春新堿、長春堿、苯丁酸氮芥、他莫西芬(tamoxifen)、紫杉醇、依托泊 苷(etop0Side(VP-16))、阿霉素、5-氟尿嘧啶(5FU)、喜樹堿、放線菌素-D、絲裂霉素 C、順鉬(CDDP)、A-4磷酰膽堿類(combretastatin)及其衍生物和前藥。正如將被本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所理解的，化療劑的適當(dāng)劑量通常大約為那些已 經(jīng)用于臨床治療的劑量，其中化療制劑被單獨施用或與其他化療制劑聯(lián)合施用。僅作為 舉例，可以使用藥劑例如順鉬、和其他DNA烷化劑。順鉬已經(jīng)被廣泛用于治療癌癥，臨 床應(yīng)用中使用的有效劑量20mg/m2，每三周5天，總共三個療程。順鉬不能口服吸收，因此必須通過靜脈內(nèi)、皮下、腫瘤內(nèi)或腹膜內(nèi)注射給藥。進一步有用的藥劑包括干擾DNA復(fù)制、有絲分裂和染色體分離的化合物。這些 化療化合物包括阿霉素，也稱為多柔比星(doxorabiein)，依托泊苷(etoposide)，維拉帕 米(verapamil)，鬼臼毒素(podophyllotoxin)等等。廣泛用于臨床治療新生物時，這些化 合物通過靜脈推注法給藥，劑量范圍從阿霉素的25-75mg/m2間隔21天，到靜脈注射依 托泊苷35-50mg/m2或口服雙倍靜脈內(nèi)注射的劑量。也可以使用干擾多核苷酸前體合成及保真度的藥劑。特別有用的藥劑是已經(jīng) 接受過廣泛檢測并容易獲得的藥劑。如此，新生物組織優(yōu)先使用藥劑如5-氟尿嘧啶 (5-FU)，使該藥劑特別可用于靶向新生物的細胞。盡管非常毒，5-氟尿嘧啶，可應(yīng)用 于廣泛范圍的載體，包括局部的，然而通常使用靜脈給藥，劑量范圍是從3到15mg/kg/天。對于可用于和CoQlO組合物聯(lián)合治療中的其它化療劑的非限制性實例，技術(shù)人 員可以參考 “Remington，s Pharmaceutical Sciences"第 15 版，33 章，尤其是 624-652 頁。根據(jù)待治療對象的病況，劑量的一些變化將必然發(fā)生。負(fù)責(zé)用藥的醫(yī)生將能決定對 于個體治療對象的合適劑量?？寡馨l(fā)生術(shù)語“血管發(fā)生”涉及新血管的產(chǎn)生，這一般在組織或器官內(nèi)。在正常生理條 件下，人和動物僅在非常特殊的受限情況下經(jīng)歷血管發(fā)生。例如，通常在傷口愈合，胎 兒和胚胎發(fā)育及黃體、子宮內(nèi)膜和胎盤形成時觀察到血管發(fā)生。不受控制的(持續(xù)的和 /或無節(jié)制的)血管發(fā)生與多種疾病狀態(tài)有關(guān)，并出現(xiàn)于腫瘤生長和轉(zhuǎn)移中。受控制的和不受控制的血管發(fā)生都被認(rèn)為以相似的方式進行。被基底膜包圍的 內(nèi)皮細胞和外皮細胞形成毛細血管。血管發(fā)生從基底膜被內(nèi)皮細胞和白細胞釋放的酶侵 蝕開始。內(nèi)皮細胞，其排列于血管內(nèi)腔表面，然后穿過基底膜伸出。血管發(fā)生刺激物誘 導(dǎo)內(nèi)皮細胞遷移通過受侵蝕的基底膜。遷移細胞形成“芽”脫離母體血管，在此內(nèi)皮細 胞經(jīng)歷有絲分裂和增殖。內(nèi)皮細胞芽彼此融合形成毛細環(huán)，從而產(chǎn)生新血管。當(dāng)持續(xù)的、無節(jié)制的血管發(fā)生出現(xiàn)于腫瘤生長和轉(zhuǎn)移中時，本發(fā)明的治療方法 可與任何一種或多種“抗血管發(fā)生”療法結(jié)合使用?？梢院吐?lián)合治療結(jié)合使用的抗血管 發(fā)生劑的實例列于表1。列于其中的每種藥劑都是示例性的而決不限于此。
權(quán)利要求
1.包含CoQlO和藥物接受載體的組合物。
2.權(quán)利要求1的組合物，其中該組合物包含輔酶Q10、phospholipon90,甘油、丁 化羥基甲苯(BHT)、乙醇、中鏈甘油三酯(MCT)和薰衣草精。
3.權(quán)利要求2 的組合物，其中 phospholipon 90 是 phospholipon 90G。
4.權(quán)利要求2 的組合物，其中 phospholipon 90 是 phospholipon 90H。
5.權(quán)利要求2的組合物，其中組合物進一步包含phospholipon90G和 phospholipon90H。
6.權(quán)利要求1的組合物，其中組合物包含約到約25%(w/w)之間的輔酶Q10。
7.權(quán)利要求1的組合物，其中組合物包含約到約20%(w/w)之間的輔酶Q10。
8.治療癌癥患者的方法，包括向需要的患者施用，包含治療有效量的輔酶QlO的組合物； 使腫瘤細胞與所述組合物接觸導(dǎo)致腫瘤細胞裂解； 從而治療癌癥患者。
9.權(quán)利要求8的方法，其中組合物包含約直至25%w/w的輔酶Q10。
10.權(quán)利要求8的方法，其中組合物包含約到約20%w/w的輔酶Q10。
11.權(quán)利要求8的方法，其中包含輔酶QlO的組合物被配制為局部霜劑。
12.權(quán)利要求8的方法，其中治療有效量的輔酶QlO組合物與一種或多種化療劑一起 施用。
13.權(quán)利要求12的方法，其中化療劑可與包含治療有效量輔酶QlO的組合物共同施 用、在其前或其后施用。
14.權(quán)利要求12的方法，其中化療劑選自環(huán)磷酰胺(CTX，25mg/kg/天，口服)、 紫杉醇類(太平洋紫杉醇或多烯紫杉醇)、白消安、順鉬、環(huán)磷酰胺、甲氨喋呤、柔紅霉 素、多柔比星、美法侖、克拉屈濱、長春新堿、長春堿、及苯丁酸氮芥。
15.權(quán)利要求8的方法，其中治療導(dǎo)致腫瘤細胞生長的抑制。
16.抑制對象中腫瘤細胞生長的方法，該方法包括向?qū)ο笫┯煤o酶QlO的藥物組合物。
17.權(quán)利要求16的方法，其中藥物組合物包含約和25%w/w之間的輔酶Q10。
18.權(quán)利要求16的方法，其中藥物組合物包含約直至25%w/w的輔酶Q10。
19.權(quán)利要求16的方法，其中藥物組合物包含約到約20%w/w的輔酶Q10。
20.誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡的方法，該方法包括施用包含輔酶QlO的藥物組合物。
21.權(quán)利要求20的方法，其中藥物組合物包含約直至25%w/w的輔酶Q10。
22.權(quán)利要求20的方法，其中藥物組合物包含約到約20%w/w的輔酶Q10。
23.權(quán)利要求20的方法，其中經(jīng)線粒體膜染料測試和/或膜聯(lián)蛋白-VPE測試測量， 藥物組合物誘導(dǎo)至少約30%腫瘤細胞凋亡。
24.權(quán)利要求20的方法，其中經(jīng)線粒體膜染料測試和/或膜聯(lián)蛋白-VPE測試測量， 藥物組合物誘導(dǎo)約50%腫瘤細胞凋亡。
25.權(quán)利要求20的方法，其中經(jīng)線粒體膜染料測試和/或膜聯(lián)蛋白-VPE測試測量， 藥物組合物誘導(dǎo)約60%腫瘤細胞凋亡。
26.權(quán)利要求20的方法，其中經(jīng)線粒體膜染料測試和/或膜聯(lián)蛋白-VPE測試測量，2藥物組合物誘導(dǎo)約75%腫瘤細胞凋亡。
27.權(quán)利要求20的方法，其中經(jīng)線粒體膜染料測試和/或膜聯(lián)蛋白-VPE測試測量， 藥物組合物誘導(dǎo)約90%腫瘤細胞凋亡。
28.權(quán)利要求20的方法，其中經(jīng)線粒體膜染料測試和/或膜聯(lián)蛋白-VPE測試測量， 藥物組合物誘導(dǎo)約99.9%腫瘤細胞凋亡。
29.抑制腫瘤中血管發(fā)生的方法，該方法包括使腫瘤與含輔酶QlO的藥物組合物接觸。
30.權(quán)利要求29的方法，其中藥物組合物包含約直至25%w/w的輔酶Q10。
31.權(quán)利要求29的方法，其中藥物組合物包含約到約20%w/w的輔酶Q10。
32.試劑盒，包含 輔酶Q10， phospholipon 90, 甘油，丁化羥基甲苯(BHT)， 乙醇，中鏈甘油三酯(MCT)，和薰衣草精。
33.權(quán)利要求32 的試劑盒，其中 phospholipon 90 是 phospholipon 90G。
34.權(quán)利要求32 的試劑盒，其中 phospholipon 90 是 phospholipon 90H。
35.權(quán)利要求32的試劑盒，其中phospholipon90是phospholipon 90G和 phospholipon90H。
36.權(quán)利要求32的試劑盒，其中提供的輔酶QlO在約到約30%(w/w)之間。
全文摘要
CoQ10局部制劑降低動物對象中的腫瘤生長速率。在本發(fā)明所述實驗中，顯示CoQ10增加皮膚癌細胞而不是正常細胞的培養(yǎng)物中細胞凋亡的速率。此外，顯示用CoQ10局部制劑處理負(fù)瘤動物顯著降低動物中的腫瘤生長速率。
文檔編號A61K9/06GK102018693SQ20101050654
公開日2011年4月20日 申請日期2005年1月21日 優(yōu)先權(quán)日2004年1月22日
發(fā)明者凱瑟琳·J·魯塞爾, 卡魯恩·V·沃恩, 因杜謝卡爾·佩爾紹德, 夏松瀾, 尼文·拉金·納拉因, 李 杰 申請人:邁阿密大學(xué)