專(zhuān)利名稱(chēng)：前列腺分泌蛋白94/57(Psp94/57)及其同功多肽用于制備消除腫瘤抗藥(療)性的藥物及用途的制作方法
前列腺分泌蛋白94/57(Psp94/57)及其同功多肽用于制備 消除腫瘤抗藥(療)性的藥物及用途本發(fā)明涉及人自身分泌蛋白-前列腺分泌蛋白94/57以及具有相同功能的衍生多 肽用于制備消除腫瘤抗藥(療)性的藥物及用途；該藥物與化療、放療組合使用，可以更有 效的治療癌癥癌癥是威脅人類(lèi)健康最嚴(yán)重的疾病之一，常規(guī)療法例如化療、放療可以非常有效 地抑制腫瘤生長(zhǎng)，殺死癌細(xì)胞，通常是中、晚期癌癥患者以及術(shù)后患者的首選方法。但是這 種較好的療效僅僅能夠維持在治療的初期階段，隨著治療的進(jìn)行，一些沒(méi)有被殺死，存活下 來(lái)的癌細(xì)胞逐漸產(chǎn)生了抗性，而對(duì)原來(lái)的治療方法不再應(yīng)答，從而使治療的有效性逐漸喪 失，最終導(dǎo)致癌癥治療的失敗。而且這種抗性具有交叉性，通常對(duì)一種、兩種藥物產(chǎn)生抗性 后，同時(shí)也會(huì)對(duì)其他的藥物(未使用過(guò)的)產(chǎn)生抗性。所以抗性一旦產(chǎn)生，就很難再找到可 以有效殺死癌細(xì)胞的藥物/方法。據(jù)統(tǒng)計(jì)90%以上死于癌癥的患者都是因?yàn)榘┘?xì)胞產(chǎn)生抗 藥/療性，最后導(dǎo)致無(wú)藥可用所致。所以如果能抑制癌細(xì)胞產(chǎn)生抗藥(療)性，或使產(chǎn)生抗 藥(療)性的癌細(xì)胞喪失掉抗性，那么癌癥便不再是人人“談虎色變”的絕癥，便不再是嚴(yán) 重威脅人類(lèi)健康的不治之癥。所以目前對(duì)于癌癥治療的研究熱點(diǎn)主要集中在兩個(gè)方向一 個(gè)是尋找不同于常規(guī)治療的新方法、新藥物。這些新方法、新藥物能抑制或延遲抗藥(療) 性的產(chǎn)生；另一個(gè)方向就是尋找一些藥物、方法，可以使癌細(xì)胞的抗藥(療)性消失或部分 消失，而使常規(guī)的療法能夠重新殺死癌細(xì)胞，從而達(dá)到治愈癌癥、或延長(zhǎng)患者壽命的目的。前列腺分泌蛋白94是一個(gè)含有94個(gè)氨基酸的小蛋白(其還有一個(gè)同基因異構(gòu) 體，含有57個(gè)氨基酸)，主要由前列腺分泌，是前列腺分泌最豐富的三大蛋白之一。一些研 究表明該蛋白的表達(dá)量在前列腺癌癥病人中顯著降低，從早期病人到中、晚期病人，患者呈 遞減的趨勢(shì)，以至于在晚期患者中，該蛋白的表達(dá)量完全消失，所以該蛋白是前列腺癌癥患 者臨床診斷的一個(gè)潛在的生物標(biāo)記。同時(shí)，一些研究還表明，該蛋白具有抑制前列腺腫瘤細(xì) 胞生長(zhǎng)、殺死癌細(xì)胞的功能。該功能在細(xì)胞水平及動(dòng)物模型水平上均得到了證實(shí)。另外，據(jù) 最新的研究結(jié)果表明，編碼該蛋白的基因，是一個(gè)前列腺癌癥的敏感基因，在該基因啟動(dòng)子 的調(diào)控區(qū)存在一個(gè)單堿基突變，該突變會(huì)導(dǎo)致其蛋白表達(dá)量下降，從而使攜帶突變的個(gè)體 成為前列腺癌證的易感患者。而且相關(guān)研究顯示，許多前列腺癌癥患者都攜帶該單堿基突 變。除了前列腺分泌蛋白94/57本身外，根據(jù)該蛋白氨基酸序列合成的短肽，僅包含該蛋白 部分序列(例如PCR3145)同樣具有腫瘤抑制作用。而且在小規(guī)模病人群體的臨床試驗(yàn)中， 對(duì)前列腺癌癥患者表現(xiàn)出安全，無(wú)毒副作用的效果。但其對(duì)癌癥患者的治療作用并不十分 理想，主要起穩(wěn)定病情的作用。較大規(guī)模的改進(jìn)的臨床試驗(yàn)正在設(shè)計(jì)當(dāng)中。所以該前列腺 分泌蛋白以及其相關(guān)合成多肽是一種具有極大潛在價(jià)值的治療癌癥或相關(guān)應(yīng)用的新藥物。[發(fā)明內(nèi)容]本發(fā)明通過(guò)試驗(yàn)表明在對(duì)化療、放療已經(jīng)產(chǎn)生抗藥(療)性的前列腺癌、卵巢癌 細(xì)胞系細(xì)胞中，前列腺分泌蛋白94/57的表達(dá)量顯著降低，甚至完全消失(與其相對(duì)應(yīng)的非 抗藥/放射的細(xì)胞比較)。據(jù)此推測(cè)前列腺分泌蛋白94/57在腫瘤細(xì)胞的抗藥(療)性過(guò) 程中起非常重要的作用。本發(fā)明通過(guò)進(jìn)一步細(xì)胞水平的功能性試驗(yàn)表明外源性加入前列腺分泌蛋白94 或者同功多肽PCK3145，能夠使已經(jīng)產(chǎn)生抗藥性的前列腺癌、卵巢癌細(xì)胞，部分喪失其抗藥 性，使原有的藥物又重新對(duì)腫瘤細(xì)胞起有效的殺滅作用，即前列腺分泌蛋白94或者同功多 肽PCK3145與化療藥物聯(lián)合使用，可以更有效地殺死癌細(xì)胞(化療藥物已經(jīng)不能有效地殺 死這些具有抗性的癌細(xì)胞)。本發(fā)明通過(guò)更進(jìn)一步的小鼠腫瘤模型試驗(yàn)表明人工注射前列腺分泌蛋白94或 PCK3145，能夠使已經(jīng)具有抗藥性的前列腺癌、卵巢癌腫瘤，部分喪失其抗藥性，從而使化學(xué) 藥物對(duì)這些具有抗藥性的腫瘤重新起有效的抑制作用，即前列腺分泌蛋白94或者同功多 肽PCK3145與化療藥物聯(lián)合使用，可以更有效地抑制腫瘤生長(zhǎng)(化療藥物已經(jīng)不能有效地 抑制這些具有抗性的腫瘤)。同時(shí)本發(fā)明通過(guò)試驗(yàn)表明，單獨(dú)以前列腺分泌蛋白94或PCK3145處理已經(jīng)具有抗 藥性的癌細(xì)胞或腫瘤，其殺死癌細(xì)胞、抑制腫瘤生長(zhǎng)的作用較微弱，其作用大大小于前列腺 分泌蛋白94或PCK3145與化療藥物聯(lián)合使用的效果，即前列腺分泌蛋白94或PCK3145與 化療藥物組合用于治療具有抗藥性的癌癥時(shí)，其機(jī)理在于消除癌細(xì)胞的抗藥性，使已經(jīng)產(chǎn) 生抗藥性的癌細(xì)胞從新對(duì)化療藥物敏感，但其本身殺滅癌細(xì)胞的作用較微弱?；谏鲜鰞?nèi)容，本發(fā)明提供一種治療癌癥，尤其是對(duì)化療、放療已經(jīng)產(chǎn)生抗性癌癥 的藥物組合物，包括選自前列腺分泌蛋白94/57、其衍生多肽PCK3145或其同功多肽中的一 種或幾種，以及其他的抗癌藥，其中，前列腺分泌蛋白94/57、其衍生多肽PCK3145及其同 功多肽為天然提取物或化學(xué)合成的人工產(chǎn)物。本發(fā)明還提供選自前列腺分泌蛋白94/57、其衍生多肽PCK3145或其同功多肽中 的一種或幾種制備用于治療癌癥，尤其是對(duì)化療、放療已經(jīng)產(chǎn)生抗性癌癥的藥物組合物中 的用途，其中，所述藥物組合物還包括其他的抗癌藥，前列腺分泌蛋白94/57、其衍生多肽 PCK3145及其同功多肽為天然提取物或化學(xué)合成的人工產(chǎn)物。所述其他的抗癌藥為紫杉醇(Paclitaxel)，卡鉬(Carboplatin)，順鉬 (Cisplatin)等同類(lèi)藥物。藥物組合物可制成注射劑、片劑、丸劑、膠囊劑、溶液劑、懸浮劑或乳劑。所述癌癥為前列腺癌或卵巢癌。附圖
前列腺分泌蛋白94在抗藥/放射性細(xì)胞中的表達(dá)水平 [具體實(shí)施方式
]通過(guò)下述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。一 前列腺分泌蛋白94/57，在具有抗藥性以及具有抗放射性的前列腺、卵巢癌細(xì)
4胞系細(xì)胞中，其蛋白表達(dá)水平顯著降低。
通過(guò)一定時(shí)間的化學(xué)藥物或者放射線(xiàn)處理，前列腺、卵巢癌細(xì)胞系細(xì)胞產(chǎn)生了對(duì) 化學(xué)藥物或者放射線(xiàn)處理的抗性。Western Blot檢測(cè)前列腺分泌蛋白94/57表達(dá)水平。實(shí) 驗(yàn)結(jié)果表明與沒(méi)有經(jīng)過(guò)處理的細(xì)胞-對(duì)化學(xué)藥物或者放射性處理敏感的細(xì)胞相比，已經(jīng) 產(chǎn)生抗性的細(xì)胞其前列腺分泌蛋白94/57表達(dá)水平顯著降低。見(jiàn)附圖前列腺分泌蛋白94表 達(dá)水平在抗藥/放射性細(xì)胞中顯著降低1-5 前列腺癌細(xì)胞；6-10 卵巢癌細(xì)胞。1，6 非抗性 細(xì)胞；2，7 對(duì)放射線(xiàn)產(chǎn)生抗性的細(xì)胞；3，8 對(duì)化學(xué)藥物Paclitaxel產(chǎn)生抗性的細(xì)胞；4，9 對(duì) 化學(xué)藥物Cisplatin產(chǎn)生抗性的細(xì)胞；5，10 對(duì)化學(xué)藥物Carboplatin產(chǎn)生抗性的細(xì)胞二 前列腺分泌蛋白94可以部分消除人癌細(xì)胞系細(xì)胞的抗藥性，其與化療藥物結(jié) 合使用，能更有效地殺滅具有抗藥性的癌細(xì)胞。取處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的人癌細(xì)胞(具有抗藥性的前列腺、卵巢癌細(xì)胞)，培養(yǎng)于6孔 培養(yǎng)皿中。然后隨機(jī)將其分成4組，每組3個(gè)重復(fù)。各組分別處理如下1，DMS0對(duì)照組；2， 化學(xué)藥物(Carboplatin，Cisplatin，Paclitaxel)處理組；3，前列腺分泌蛋白94處理組； 4，前列腺分泌蛋白94+化學(xué)藥物(Carboplatin，Cisplatin，Paclitaxel)處理組。處理時(shí) 間4天，處理結(jié)束時(shí)，作細(xì)胞生長(zhǎng)、繁殖(MTT)檢測(cè)。各組之間進(jìn)行比較，并作t檢驗(yàn)。試驗(yàn) 結(jié)果見(jiàn)表1、表2。本試驗(yàn)分別在人前列腺以及人卵巢癌細(xì)胞中得到驗(yàn)證。試驗(yàn)重復(fù)3次。表1 前列腺分泌蛋白94對(duì)抗藥性的人前列腺癌細(xì)胞具有消除抗藥性的作用
Hl 處理濃度 細(xì)胞生長(zhǎng)、繁殖率ΓρΙ ____(平均值+/-標(biāo)準(zhǔn)誤)__
—DMSO5ul/ml1+/-0.09
前列腺分泌蛋白 f5ug/ml— 0.82+/-0.060.04
—Paclitaxel— 80 nM0.95+/-0.080.07 前列腺分泌蛋白 94 5ug/ml+80 nM 0.42+/-0.08 <0.01
+Paclitaxel
Cisplatin2.5 uM ~ 0.89+/-0.11005~
前列腺分泌蛋白 945ug/ml+2.5 uM0.51+/-0.10<0.01
+ Cisplatin
—Carboplatin5ug/ml— 0.95+/-0.Q9 ~~0.08 前列腺分泌蛋白 94 5ug/ml+5ug/ml 0.48+/-0.07<0.01
+ Carboplatin表2 前列腺分泌蛋白94對(duì)抗藥性的人卵巢癌細(xì)胞具有消除抗藥性的作用
Hl處理濃度I細(xì)胞生長(zhǎng)、繁殖率I ρ值
____(平均值+/-標(biāo)準(zhǔn)誤)__
DMSO5ul/ml1+/-0.05
前列腺分泌蛋白 94 5ug/ml0.89+/-0.09 "005^
Paclitaxel50nM0.94+/-0.09 008
前列腺分泌蛋白 945ug/ml+50nM0.47+/-0.12<0.01 ~ +Paclitaxel
_ Cisplatin2.0 uM0.88+/-0.070.0權(quán)利要求
一種治療癌癥，尤其是對(duì)化療、放療已經(jīng)產(chǎn)生抗性癌癥的藥物組合物，包括選自前列腺分泌蛋白94/57、其衍生多肽PCK3145或其同功多肽中的一種或幾種，以及其他的抗癌藥，其中，前列腺分泌蛋白94/57、其衍生多肽PCK3145及其同功多肽為天然提取物或化學(xué)合成的人工產(chǎn)物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物組合物，其包括前列腺分泌蛋白94/57或其衍生多肽 PCK3145，以及其他的抗癌藥。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的藥物組合物，所述其他的抗癌藥為紫杉醇 (Paclitaxel)，卡鉬(Carboplatin)，順鉬(Cisplatin)等同類(lèi)藥物。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3之一所述的藥物組合物，該藥物組合物是注射劑、片劑、丸劑、膠 囊劑、溶液劑、懸浮劑或乳劑。
5.選自前列腺分泌蛋白94/57、其衍生多肽PCK3145或其同功多肽中的一種或幾種制 備用于治療癌癥，尤其是對(duì)化療、放療已經(jīng)產(chǎn)生抗性癌癥的藥物組合物中的用途，其中，所 述藥物組合物還包括其他的抗癌藥，前列腺分泌蛋白94/57、其衍生多肽PCK3145及其同功 多肽為天然提取物或化學(xué)合成的人工產(chǎn)物。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的用途，所述藥物組合物包括前列腺分泌蛋白94/57或其衍生 多月太PCK3145。
7.根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的用途，所述其他的抗癌藥為紫杉醇Paclitaxel)，卡鉬 (Carboplatin)JI^S (Cisplatin)等同類(lèi)藥物。
8.根據(jù)權(quán)利要求5-7之一所述的用途，所述藥物組合物是注射劑、片劑、丸劑、膠囊劑、 溶液劑、懸浮劑或乳劑。
9.根據(jù)權(quán)利要求5-8之一所述的用途，所述癌癥為前列腺癌或卵巢癌。
全文摘要
化學(xué)藥物以及放射療法是常規(guī)治療癌癥的有效方法，但幾乎伴隨治療同時(shí)而產(chǎn)生的抗性使其有效性迅速降低、甚至消失，所以抗藥(療)性是成功治療癌癥的最大障礙之一。本發(fā)明提供了一種藥物組合及方法，可以使腫瘤的抗藥(療)性部分消失，從而使癌細(xì)胞恢復(fù)其對(duì)原有治療方法的敏感性，即該藥物結(jié)合化療或放療可以有效治療已經(jīng)產(chǎn)生抗性的癌癥。該藥物組合及方法使用包括人自身分泌蛋白Psp94/57，或以其氨基酸序列為基礎(chǔ)合成的短肽，以及經(jīng)過(guò)加工、修飾而具有相同功能的多肽，結(jié)合常用的化療藥物或放療，用于消除腫瘤的抗藥(療)性以及治療癌癥。
文檔編號(hào)A61K31/282GK101961484SQ20101025867
公開(kāi)日2011年2月2日 申請(qǐng)日期2010年8月19日 優(yōu)先權(quán)日2010年8月19日
發(fā)明者不公告發(fā)明人 申請(qǐng)人:劉金龍