專利名稱：：利用IFN-β治療慢性炎性脫髓鞘性多神經(jīng)病的制作方法利用IFN-β治療慢性炎性脫髓鞘性多神經(jīng)病本申請是中國申請03825372.0的分案申請，該母案于2003年9月沈日以國際申請?zhí)朠CT/US2003/030532提交，于2005年5月25日進入中國國家階段，本分案采用了與該母案一致的發(fā)明名稱。
背景技術(shù)：
：慢性炎性脫髓鞘性多神經(jīng)病(chronicinflammationdemyelinatingpolyneuropathy)(CIDP)是神經(jīng)疾病，其特征在于腿和臂的慢性進行性無力和感覺功能障礙。這種疾病是對外周神經(jīng)髓鞘破壞的結(jié)果。神經(jīng)根腫脹也是該疾病的特征。盡管所述疾病出現(xiàn)在任何年齡和性別，CIDP更常見于年輕成年人，且在男性中比女性更為常見。癥狀包括麻刺感(tingling)或麻木(從腳趾和手指開始)，臂和腿的無力(weakness)，肌肉疼痛(achingpaininthemuscle)，深肌腱反射喪失(無反射(areflexia))，疲勞以及感覺異常。CIDP與一些其它疾病相關(guān)。例如，發(fā)現(xiàn)在三分之一的人免疫缺陷病毒(HIV)-血清陽性患者中可將炎性脫髓鞘性神經(jīng)病(例如CIDP)診斷為外周神經(jīng)疾病。發(fā)現(xiàn)CIDP出現(xiàn)在患有狼瘡(lupus)，副蛋白血癥(paraproteinemia)，淋巴瘤或糖尿病的個體中。未經(jīng)治療的CIDP的特征是累積性失能(accumulatingdisability)，并需要物理和專業(yè)治療，矯形器，以及長期治療。醫(yī)學(xué)知識豐富的醫(yī)師的密切隨診觀察對于調(diào)整治療而言是必要的。目前治療CIDP的方法包括給藥皮質(zhì)類固醇諸如潑尼松，其可單獨給藥或與免疫抑制藥物聯(lián)合給藥。免疫抑制藥物也可在缺乏類固醇的條件下給藥。血漿置換(plasmapheresis)(血漿交換(plasmaexchange))以及靜脈內(nèi)免疫球蛋白(IVIg)療法也相對有效并且是目前使用的。IVIg甚至可用作一線治療。同樣，物理治療可也改善肌肉力量，功能和活動性，并使攣縮(contracture)發(fā)展最小化。CIDP的病程在不同個體之間差異很大。一些人發(fā)作CIDP然后自愈，而另一些人可出現(xiàn)多次發(fā)作并在復(fù)發(fā)間期部分恢復(fù)。該疾病是獲得性神經(jīng)病的可治療病因，且推薦早期開始治療以預(yù)防神經(jīng)細(xì)胞的丟失。然而，一些個體仍遺留有一些殘留的麻木或無力。因此，目前治療CIDP的方法包括有害的方法(例如類固醇或免疫抑制劑)；昂貴的方法(例如，IVIg和血漿置換)；或不方便的方法(例如，血漿置換)。因此，非常需要治療慢性脫髓鞘性神經(jīng)病例如CIDP的有效治療方法，所述方法與現(xiàn)有的方法相比毒性較低，較不昂貴并且更為方便。
發(fā)明內(nèi)容一個實施方案中，本發(fā)明提供治療哺乳動物中慢性脫髓鞘性運動神經(jīng)病的方法。所述方法可包括給藥哺乳動物治療有效量的IFN-β治療劑。IFN-β治療劑可經(jīng)由非皮下的胃腸外途徑，例如經(jīng)肌內(nèi)給藥。優(yōu)選實施方案中，所述神經(jīng)病是慢性炎性脫髓鞘性神經(jīng)病(CIDP)。IFN-β治療劑可包括人IFN-β。例如，所述IFN-β治療劑可包括與具有SEQIDNO4的全長成熟人IFN-β至少約95%同一性的蛋白。所述IFN-β治療劑可包括具有SEQIDNO:4的全長成熟人IFN-β。所述IFN-β治療劑還可包括與異源多肽例如人免疫球蛋白分子恒定區(qū)融合的、具有SEQIDNO:4的全長成熟人IFN-β。所述免疫球蛋白分子可為IgGl的重鏈。IFN-β治療劑可包括SEQIDNO:14.IFN-β治療劑還可包括PEG化的IFN-β。IFN-β治療劑或包含它的組合物可包含穩(wěn)定劑諸如蛋白與氨基酸等，例如，所述穩(wěn)定劑可為精氨酸。IFN-β治療劑或包含它的組合物可具有約4.0-7.2的ρΗ。IFN-β治療劑可每周給藥一次，兩次或三次。在具體實施方案中，IFN-β治療劑以約6或12百萬國際單位(MIU)給藥。IFN-β治療劑可經(jīng)肌內(nèi)或經(jīng)皮下給藥。優(yōu)選實施方案中，所述個體是哺乳動物，優(yōu)選為人。本發(fā)明還提供治療神經(jīng)病例如CIDP的方法，包括給藥患有神經(jīng)病的個體治療有效量的IFN-β治療劑，并給藥所述個體免疫抑制劑或?qū)λ鰝€體進行血漿置換。所述方法可包括將選自下組的免疫抑制劑給藥所述個體類固醇(steroid)，硫唑嘌呤(azothioprine),環(huán)孢霉素(cyclophosphamide),環(huán)磷酉先胺(cyclophosphamide)或霉酚酸酉旨(mycophenolate)。本發(fā)明還包括治療神經(jīng)病例如CIDP的方法，包括對患有神經(jīng)病的個體聯(lián)合給藥治療有效量的IFN-β治療劑以及第二種針對所述神經(jīng)病的治療，其中所述IFN-β治療劑的給藥經(jīng)由非皮下的胃腸外途徑。所述IFN-β治療劑的給藥可經(jīng)肌內(nèi)給藥。如果所述IFN-β治療劑是CIDP，所述第二種治療可選自給藥類固醇；給藥IVIg；給藥抗炎藥或血漿置換。另一實施方案中，本發(fā)明提供治療神經(jīng)病例如CIDP的方法，包括對患有神經(jīng)病的個體聯(lián)合給藥治療有效量的IFN-β治療劑以及第二種針對所述神經(jīng)病的治療，其中每周給藥IFN-β治療劑一次。如果所述神經(jīng)病是CIDP，所述第二種CIDP療法可選自給藥類固醇；給藥IVIg；給藥抗炎藥或血漿置換。另一實施方案中，本發(fā)明提供治療接受第一種CIDP療法的個體中的CIDP的方法，所述第一種CIDP療法選自給藥類固醇；給藥IVIg;給藥抗炎藥以及血漿置換，其中改進包括除給藥所述個體第一種CIDP療法以外，給藥IFN-β治療劑以有效緩解CIDP的癥狀，其中所述IFN-β治療劑的劑量可有效明顯減少第一種CIDP療法的劑量或頻率，且所述IFN-β治療劑經(jīng)由非皮下的胃腸外途徑給藥。在治療CIDP的另一方法中，個體接受選自給藥類固醇；給藥IVIg；給藥抗炎藥或血漿置換的第一種CIDP療法，所述改進包括除給藥所述個體第一種CIDP療法以外，每周給藥一次IFN-β治療劑以有效緩解CIDP的癥狀，所述IFN-β治療劑的劑量可有效地明顯減少第一種CIDP療法的劑量或頻率?；加蠧IDP的個體可通過接受選自給藥類固醇；給藥IVIg；給藥抗炎藥或血漿置換的第一種CIDP療法來進行治療，其中的改進包括除給藥所述個體第一種CIDP療法以外，給藥IFN-β治療劑以有效緩解CIDP的癥狀，所述IFN-β治療劑的劑量可有效明顯減少第一種CIDP療法的劑量或頻率。更具體地，本發(fā)明涉及73.IFN-β治療劑在制備用于治療慢性脫髓鞘性運動神經(jīng)病的藥物中的用途。74.項1的用途，其中所述IFN-β治療劑經(jīng)由非皮下的胃腸外途徑給藥。75.項2的用途，其中所述IFN-β治療劑是經(jīng)肌內(nèi)給藥的治療劑。76.項1-3之一的用途，其中所述慢性脫髓鞘性運動神經(jīng)病是慢性炎性脫髓鞘性神經(jīng)病(CIDP)。77.項1-4之一的用途，其中所述IFN-β治療劑包含成熟IFN-β。78.項1-5之一的用途，其中所述IFN-β治療劑缺乏第一個蛋氨酸。79.項1-6之一的用途，其中所述IFN-β是人IFN-β。80.項7的用途，其中所述IFN-β與具有SEQIDNO:4的全長成熟人IFN-β具有至少約95%的同一性。81.項8的用途，其中所述IFN-β包含SEQIDNO:4。82.項1-9之一的用途，其中所述IFN-β是糖基化的。83.項1-9之一的用途，其中所述IFN-β是非糖基化的。84.項7的用途，其中所述IFN-β是IFN-β-Ia085.項7的用途，其中所述IFN-β是IFN-β-lb。86.項1-13之一的用途，其中所述IFN-β治療劑包括與免疫球蛋白分子恒定區(qū)融合的IFN-β。87.項14的用途，其中所述免疫球蛋白分子是人免疫球蛋白分子。88.項15的用途，其中所述免疫球蛋白分子是IgGl的重鏈。89.項16的用途，其中所述IFN-β包含SEQIDNO:14。90.項1-17之一的用途，其中所述IFN-β治療劑包括PEG化的IFN-β。91.項1-18之一的用途，其中所述IFN-β治療劑包含穩(wěn)定劑。92.項19的用途，其中所述穩(wěn)定劑是酸性氨基酸。93.項20的用途，其中所述穩(wěn)定劑是精氨酸。94.項1-21之一的用途，其中所述IFN-β治療劑的ρΗ為約4.0到7.2。95.項1-2及4-22之一的用途，其中所述IFN-β治療劑通過靜脈內(nèi)(i.v.)給藥。96.項之1-23之一的用途，包括將數(shù)個劑量的IFN-β治療劑給藥哺乳動物。97.項M的用途，其中所述IFN-β治療劑以約6MIU的劑量每周施用一次。98.項M的用途，其中所述IFN-β以約6MIU的劑量每周施用兩次。99.項M的用途，其中所述IFN-β治療劑以約12MIU的劑量每周施用一次。100.項M的用途，其中所述IFN-β治療劑以約12MIU的劑量每周施用兩次。101.項1-之一的用途，其中所述哺乳動物是人。102.項1-之一在制備藥物中的用途，所述藥物施用于個體，其中以前沒有發(fā)現(xiàn)所述個體抵抗慢性脫髓鞘性神經(jīng)病的其它治療。103.項1-30之一的用途，其中所述藥物與包含免疫抑制劑或血漿置換的治療聯(lián)用給藥。104.項30的用途，其中所述藥物與包含免疫抑制劑的治療聯(lián)合給藥，所述免疫治療劑選自類固醇，硫唑嘌呤，環(huán)孢霉素，環(huán)磷酰胺或霉酚酸酯。105.項2-32之一的用途，其中所述藥物給藥與包含第二種CIDP療法的治療聯(lián)合，其中IFN-β治療劑經(jīng)由非皮下的胃腸外途徑給藥。106.項2-32之一的用途，其中所述藥物與包含第二種CIDP療法的治療聯(lián)合給藥，其中每周給藥IFN-β治療劑一次。107.項33或34的用途，其中所述第二種CIDP療法選自給藥IVIg；給藥類固醇；給藥抗炎藥或血漿置換。108.項1-30之一的用途，其中將所述藥物給藥正接受另一種療法的個體以便治療慢性脫髓鞘性運動神經(jīng)病，且上述治療還包括停用所述另一種療法。109.治療哺乳動物中慢性脫髓鞘性運動神經(jīng)病的方法，包括將治療有效量的IFN-β治療劑給藥所述哺乳動物。110.項37的方法，其中所述IFN-β治療劑經(jīng)由非皮下的胃腸外途徑給藥。111.項37的方法，其中所述IFN-β治療劑是經(jīng)肌內(nèi)給藥的治療劑。112.項37的方法，其中所述慢性脫髓鞘性運動神經(jīng)病是慢性炎性脫髓鞘性神經(jīng)病(CIDP)。113.項37-40之一的方法，其中所述IFN-β治療劑包括成熟IFN-β。114.項37-41之一的方法，其中所述IFN-β治療劑缺乏第一個蛋氨酸。115.項37-42之一的方法，其中所述IFN-β是人IFN-β。116.項43的方法，所述IFN-β與具有SEQIDNO:4的全長成熟人IFN-β具有至少約95%的同一性。117.項44的方法，其中所述IFN-β包含SEQIDNO:4。118.項37-45之一的用途，其中所述IFN-β是糖基化的。119.項37-46之一的用途，其中所述IFN-β是非糖基化的。120.項43的用途，其中所述IFN-β是IFN-β-la。融合的給藥.121.項43的用途，其中所述IFN-β是IFN-β-lb。122.項37-49之一的用途，其中所述IFN-β治療劑包括與免疫球蛋白分子恒定區(qū)IFN-β123.124.125.126.127.128.129.130.131.132.133.134.135.136.137.項項項項項項項項項50的用途，其中所述免疫球蛋白分子是人免疫球蛋白分子。51的用途，其中所述免疫球蛋白分子是IgGl的重鏈。52的用途，其中所述IFN-β包含SEQIDNO:14。37-53之一的用途，其中所述IFN-β治療劑包括PEG化的IFN-β。37-之一的用途，其中所述IFN-β治療劑包含穩(wěn)定劑。55的用途，其中所述穩(wěn)定劑是酸性氨基酸.56的用途，其中所述穩(wěn)定劑是精氨酸。37-57之一的方法，其中所述IFN-β治療劑的ρΗ為約4.0到7.2。37-38及40-58之一的方法，其中所述IFN-β治療劑通過靜脈內(nèi)(i.v.)項37-60之一的方法，包括將數(shù)個劑量的IFN-β治療劑給藥哺乳動物。項60的方法，其中所述IFN-β治療劑以約6MIU的劑量每周施用一次。項60的方法，其中所述IFN-β以約6MIU的劑量每周施用兩次。項60的方法，其中所述IFN-β治療劑以約12MIU的劑量每周施用一次t項60的方法，其中所述IFN-β治療劑以約12MIU的劑量每周施用兩次t項37-64之一的方法，其中所述哺乳動物是人。138.治療CIDP的方法，包括將藥物有效量的IFN-β治療劑給藥患有CIDP的個體，以及進一步將免疫抑制劑給藥所述個體或?qū)λ鰝€體進行血漿置換。139.項66的方法，包括給藥所述個體選自類固醇，硫唑嘌呤，環(huán)孢霉素，環(huán)磷酰胺或霉酚酸酯的免疫抑制劑。140.治療CIDP的方法，包括將藥物有效量的IFN-β治療劑與第二種CIDP療法聯(lián)合給藥患有CIDP的患者，其中所述IFN-β治療劑經(jīng)由非皮下的胃腸外途徑給藥。141.項68的方法，其中所述第二種CIDP療法選自給藥IVIg；給藥類固醇；給藥抗炎藥或血漿置換。142.治療CIDP的方法，包括將藥物有效量的IFN-β治療劑與第二種CIDP療法聯(lián)合給藥患有CIDP的患者，其中每周給藥所述IFN-β治療劑一次。143.項70的方法，其中所述第二種CIDP療法選自給藥IVIg;給藥類固醇；給藥抗炎藥或血漿置換。144.在選自給藥類固醇；給藥抗炎藥；給藥IVIG或血漿置換的、用于治療正在接受第一種CIDP療法的個體中CIDP的方法中，其中的改進包括給藥該個體所述第一種CIDP療法以及一定劑量的IFN-β治療劑以便有效緩解CIDP的癥狀，所述一定劑量的IFN-β治療劑可有效地明顯降低該第一種CIDP療法的劑量或頻率，其中所述IFN-β治療劑的給藥經(jīng)由非皮下的胃腸外途徑。145.在選自給藥類固醇；給藥抗炎藥；給藥IVIG或血漿置換的、用于治療正在接受第一種CIDP療法的患者中CIDP的方法中，其中的改進包括給藥該個體所述第一種CIDP療法以及每周一次一定劑量的IFN-β治療劑以便有效緩解CIDP的癥狀，所述一定劑量的IFN-β治療劑可有效地明顯降低該第一種CIDP療法的劑量或頻率。146.在選自給藥類固醇；給藥抗炎藥；給藥IVIG或血漿置換的、用于治療正在接受第一種CIDP療法的患者中CIDP的方法中，其中的改進包括給藥該個體所述第一種CIDP療法以及一定劑量的IFN-β治療劑以便有效緩解CIDP的癥狀，所述一定劑量的IFN-β治療劑可有效地明顯降低該第一種CIDP療法的劑量或頻率。附圖簡述圖IA-C顯示一種融合蛋白的核苷酸序列(SEQIDNO11)和氨基酸序列(SEQIDNO12)，該融合蛋白的組成為VCAM信號序列與成熟全長人IFN-β(SEQIDNO:3和4)融合，該成熟全長人IFN-β與人IgGlFc(ZL5107)的鉸鏈區(qū)、CH2和CH3區(qū)融合，其中SEQIDNO4的第162位甘氨酸被半胱氨酸取代。圖2A-C顯示一種融合蛋白的核苷酸序列(SEQIDNO13)和氨基酸序列(SEQIDNO14)序列，該融合蛋白的組成為VCAM信號序列與成熟全長人IFN-β(SEQIDNO3和4)融合，該成熟全長人IFN-β與G4S連接體(linker)融合，該G4S連接體與人IgGlFc(ZL6206)的鉸鏈區(qū)、CH2和CH3區(qū)融合，其中SEQIDNO:4的第162位甘氨酸被半胱氨酸取代。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供了治療慢性脫髓鞘性神經(jīng)病，例如CIDP的方法，包括給藥治療有效量的IFN-β治療劑。1.定義為更清楚和簡明地指出本發(fā)明的主題，對本說明書和所附權(quán)利要求中所使用的術(shù)語給出如下定義。除非文中另有清楚的描述，說明書和所附權(quán)利要求中所使用的單數(shù)形式“一種”，“該”和“所述”包括指稱對象的復(fù)數(shù)?！奥匝仔悦撍枨市远嗌窠?jīng)病”可與“CIDP.”互換使用。以下疾病與CIDP相同或基本相同，并由此用于本文時包括在術(shù)語“CIDP”中“慢性復(fù)發(fā)性(relapsing)多神經(jīng)病，”“慢性特發(fā)性(idiopathic)脫髓鞘性多神經(jīng)病，”“慢性炎性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)根病(polyradiculoneuropathy)，”和“慢性獲得性(acquired)脫髓鞘性多神經(jīng)病”(“CADP”)。CIDP具有慢性漸進性、逐步或復(fù)發(fā)性病程(見，例如，Dyck等(1993)，Dyck,P.J.，Thomas,PlK.,Griffin,J.W.,Low,P.Α.,Poduslo,J.F.(Eds),PeripheralPolyneuropathy,3rded.Saunders,Philadelphia,pp.1498-1517)。CIDP的病理特點是神經(jīng)內(nèi)膜中的節(jié)段性脫髓鞘和髓鞘再生(remyelination)以及單核細(xì)胞浸潤(Dyck等，見上文)。CIDP有時稱為多發(fā)性硬化(MS)的周圍神經(jīng)對應(yīng)疾病(peripheralcounterpart)(ToykaandHartung(1996)Curr.Opin.Neurol.9，240-250)。有時也稱其為格林-巴利綜合征(GuiIlain-Barresyndrome)的慢性形式。診斷CIDP的標(biāo)準(zhǔn)包括臨床的，電生理學(xué)的以及腦脊液(CSF)標(biāo)準(zhǔn)，其描述見于adhocsubcommitteeoftheAmericanAcademyofNeurologyAIDStaksforce(1991)Neurology41:617。診斷實驗包括9孔圓柱實驗(nineholepegtest)；10米行走實驗(IOmeterswalkingtest)；Rankin評分(scale)或其改進形式；以及MRC總分(MRCsumscore)^^(Mathiowetzφ(1985)OccupationalTherapyJ.ofRes.524；Thompson等(1996)J.Neurol.243280；Collen等(1990)Int.DisabilityStudies126；vanSwieten等(1988)Mroke19:604andKleyweg等(1991)MuscleNerve14:1103)。神經(jīng)學(xué)評估還包括神經(jīng)學(xué)失能評分(NeurologicDisabilityScale)(NDS)；失能評分(disabilityscale)(0，健康；1，較少指征；2，能無需輔助行走但不能跑；3，能在幫助下行走5米；4，輪椅/臥床)；Hammersmith運動能力實驗(HammersmithMotorAbilityTest)(HMAT)(DyckP.J.，In"PeripheralNeuropathy"(1993)，見上文，686-697頁；Scott等(1982)MuscleNerve5:291)；以及神經(jīng)傳導(dǎo)實驗(testingofnerveconduction)。肌肉評估包括運動功能評估，例如如本領(lǐng)域已知的通過測定最大主動等長收縮(maximalvoluntaryisometriccontractions)(MVIC)；以及測定肌肉力量。其它失能測定還包括行走指數(shù)(AmbulationIndex)；功能獨立性測定(theFunctionalIndependenceMeasure)；Guy，s神經(jīng)失能評分(Guy，sNeurologicalDisabilityScale)(GNDS)；醫(yī)學(xué)研究會總分(theMedicalResearchCouncilsumscore)；感覺總分(thesensorysumscore)；以及Hughes功能評分(theHughesfunctionalscale)(Hauser等(1983)N.Engl.J.Med.308173；Hall等(1993)J.HeadTraumaRehabilitation860；Sharrack^(1996)J.Neurol.243:S32andMerkies等Q002)Neurology59:84)。CIDP的電生理標(biāo)準(zhǔn)由美國神經(jīng)學(xué)會專門小組委員會(AdHocSubcommitteeoftheAmericanAcademyofNeurology)(AAN)于1991年提出，并在最近進行了修訂(Nicolas等(2002)MuscleNerve25:26。用于感覺-運動免疫介導(dǎo)的多神經(jīng)病(sensory-motorimmune-mediatedpolyneuropathy)，例如CIDP和格林巴利綜合征(GBS)的另一實驗是炎性神經(jīng)病病因以及治療(INCAT)感覺總分(sensorysumscore)(ISS)的心理測量評估(psychometricevaluation)(Merkies等(2000)Neurology54943)。CIDP患者中出現(xiàn)人白細(xì)胞抗原Dw3，DRw3，Al和B8的頻率高于健康人群(Zvartau-Hind^(2002)ChronicInflammatoryDemyeIinatingPolyradiculoneuropathy,atwww.emedicine.com/neuro)。“IFN-β-la”指IFN-β分子，其具有野生型人IFN-β的氨基酸序列并且是糖基化的?！癐FN-β-lb”是指具有野生型人IFN-β的氨基酸序列的IFN-β分子，其中第17位的半胱氨酸被絲氨酸取代；第1位的甲硫氨酸(“起始物甲硫氨酸”)缺失，且該分子未被糖基化。"IFN-β變體”是指這樣的野生型IFN-β蛋白質(zhì)，其具有一或多種修飾，例如氨基酸缺失、添加、取代、翻譯后修飾，或包括一或多個非天然存在的氨基酸殘基或殘基之間的連接。術(shù)語“IFN-β變體”還包括IFN-β的一部分?！吧锘钚訧FN-β變體”是對神經(jīng)病，例如CIDP具有至少部分治療活性的IFN-β變體。例如，IFN-β變體可以是相對于野生型IFN-β而言含有一個或多個氨基酸的插入、缺失或取代的天然存在的IFN-β，即天然存在的變體或多態(tài)性變體，或者可以是非天然存在的IFN-β。IFN-β的“國際單位”或(IU)指世界衛(wèi)生組織(WHO)干擾素國際標(biāo)準(zhǔn)(WorldHealthOrganization(WHO)InternationalStandardforInterferon)tll^jK立?！胺蛛x的”(可以與“基本上純的”互換使用)在用于多肽時，是指這樣的多肽，借助其來源或操作，其可(i)作為部分表達載體的表達產(chǎn)物存在于宿主細(xì)胞中；或(ii)連接于蛋白質(zhì)或其它化學(xué)部分，所述物質(zhì)不包括與其天然連接的蛋白質(zhì)或其它化學(xué)部分；或(iii)不存在于自然界，例如，通過將至少一個疏水性部分附加或添加到蛋白質(zhì)來通過化學(xué)方法操作所述蛋白質(zhì)，從而使該蛋白質(zhì)成為非天然形式?！胺蛛x的”蛋白質(zhì)還包括(i)化學(xué)合成的；或(ii)在宿主細(xì)胞中表達并通過純化從相結(jié)合的污染蛋白質(zhì)中分離。該術(shù)語一般指已經(jīng)同與其天然結(jié)合的其它蛋白質(zhì)和核酸分開的多肽。優(yōu)選的，所述多肽還與諸如用于純化它的抗體或凝膠基質(zhì)(聚丙烯酰胺)等物質(zhì)分開。當(dāng)應(yīng)用于核酸時，“分離的”(可以與“基本上純的”互換使用)是指RNA或DNA多核苷酸、部分基因組多核苷酸、cDNA或合成多核苷酸，由于其起源或操作，其(i)不和與其天然結(jié)合的所有核苷酸相結(jié)合(如作為表達載體或其一部分存在于宿主細(xì)胞中)；或(ii)與自然狀況下并不與之連接的核酸或其它化學(xué)部分連接；或(iii)為天然不存在的?！胺蛛x的”還指下列多核苷酸序列，所述序列(i)通過例如聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)在體外擴增；(ii)通過化學(xué)方法合成；(iii)通過克隆而重組地產(chǎn)生；或(iv)通過切割和凝膠分離來純化。“多灶性運動神經(jīng)病”或“MMN”是慢性免疫介導(dǎo)的脫髓鞘性神經(jīng)病，其特征是定位于周圍神經(jīng)解剖分布區(qū)域的不對稱性肌肉無力和肌萎縮的逐漸進展(Pestronk等(1988)Ann.Neurol.24:73andKornberg等(1995)Ann.Neurol,(suppl.1)S43)。多灶性運動神經(jīng)病的電生理特點是持續(xù)性傳導(dǎo)阻滯。臨床上，這種疾病也描述為伴隨多灶性運動傳導(dǎo)阻滯的、CIDP不對稱性純運動變體。在多灶性運動神經(jīng)病的發(fā)展過程中，其多灶性特征以基本對稱的模式逐漸發(fā)展，臨床上與CIDP的運動形式相似。病理研究將這兩種疾病聯(lián)系在一起(Krendel等(1996)Ann.Neurol.40:948andOh等(1995)Neurology45:1828)。大多數(shù)患有多灶性運動神經(jīng)病的患者具有較高滴度的抗神經(jīng)節(jié)苷酯GMl抗體(Pestronk等，見上文andKornberg等，見上文)。當(dāng)核酸與另一核酸序列發(fā)生功能上的關(guān)系時，該核酸即為“可操作地連接于”另一核酸。例如，如果DNA表達為參與多肽分泌的前蛋白，則編碼前序列或分泌型前導(dǎo)序列(例如，信號序列或信號肽)的DNA與編碼該多肽的DNA可操作性地連接；如果啟動子或增強子影響編碼序列的轉(zhuǎn)錄，則啟動子或增強子可操作地連接于該序列；如果核糖體結(jié)合位點的位置有利于翻譯，則該核糖體結(jié)合位點可操作地連接于編碼序列。一般而言，“可操作地連接于”是指被連接的DNA序列是連續(xù)的，并且在例如分泌型前導(dǎo)序列的情況下為鄰接的并處于閱讀相。連接(linking)通過在方便的限制性位點進行接合(ligation)來完成。若這樣的位點不存在，可依照常規(guī)實施方法使用合成的寡核苷酸接頭(adaptor)或連接體(linker)。“同一性百分比”或“相似性百分比”指兩種多肽、分子之間或兩種核酸之間的序列相似性。如果所比較的兩種序列中的同一位置被相同堿基或氨基酸單體亞基所占據(jù)，則所述兩個分子在該位置上是相同的。兩種序列之間的同一性百分比是兩種序列的匹配性或同一性位置的數(shù)目除以所比較的位置數(shù)目之后再XlOO的函數(shù)。例如，如果在兩種序列中，10個位置中的6個是匹配的或同一的，則這兩種序列具有60%的同源性。作為例示，DNA序列CTGACT和CAGGTT享有50%同源性(所有6個位置中有3個匹配)。一般而言，比較是在對兩種序列進行比對以產(chǎn)生最大同一性時進行的。使用例如下面詳細(xì)描述的Karlin和Altschul的方法可以提供這種比對。當(dāng)涉及核酸時，“同源性百分比”和“同一性百分比”可互換使用，而在涉及多肽時，“同源性百分比”是指相似性的程度，其中表示其它氨基酸的保守性取代的氨基酸被認(rèn)為與這些其它氨基酸是同一的。參照序列中殘基的“保守取代”是用與相應(yīng)的參照殘基在物理或功能上相似的氨基酸進行的取代，所述氨基酸例如具有相似的大小，形狀，電荷，化學(xué)性質(zhì)，包括形成共價鍵或氫鍵的能力等。特別優(yōu)選的保守取代是滿足Dayhoff等，5:AtlasofProteinSequenceAndStructure,5:Suppl.3,chapter22:354-352，Nat.Biomed.Res.Foundation,Washington,D.C.(1978)中定義的“可接受的點突變”標(biāo)準(zhǔn)的那些取代。兩個氨基酸序列或兩個核酸序列的同源性百分比和同一性百分比可采用如Karlin和Altschul(Proc，Nat.Acad.Sci.，USA90:5873(1993)所改進的Karlin和Altschul的比對算法(Proc.Nat.Acad.Sci.，USA87:2264(1990)進行確定。將所述算法納入Altschul等，J.Mol.Biol.215:403(1990)等的NBLAST或XBLAST程序中。BLAST搜索采用NBLAST程序，評分=100，字長(wordlength)=12來實施，以獲得與本發(fā)明的核酸同源的核苷酸序列。BLAST蛋白分搜索采用XBLAST程序，評分=50，字長=3來實施，以獲得與對照多肽同源的氨基酸序列。為得到用于比較的缺口比對，使用如Altschul等，NuleicRes.,25=3389(1997)中所述的有缺口的BLAST(gappedBLAST)。當(dāng)使用BLAST和有缺口的BLAST時，使用各程序(XBLAST和NBLAST)的默認(rèn)參數(shù)。參見http//www/ncbi.nlm，nih.govρ生活質(zhì)量可通過EuroQoLvisualanaloguescale和EuroQoL調(diào)查問卷總分(questionnairesumscore)；theMedicalOutcomeStudy36-itemshort-formhealthstatusscale(SF-36)；以及VisualAnalogueScale(VAS)(EuroQoLGroup(1990)HealthPolicy16:199andMerkies等(2002)Neurology59:84)評估。如果聯(lián)合給藥中的IFN-β治療劑的量相對于沒有IFN-β治療而言足以導(dǎo)致疾病的至少一個癥狀在臨床上顯著性改善，則該IFN-β治療劑被稱為具有“療效”，且該IFN-β治療劑的量被稱為“治療上有效的”。在優(yōu)選實施方案中，給藥患CIDP患者治療有效量的IFN-β治療劑導(dǎo)致CIDP的至少一種癥狀例如肌肉或神經(jīng)障礙的改善?！耙吧虸FN-β“指天然或重組的IFN-β，其具有天然IFN-β的通常存在的氨基酸序列。SEQIDΝ0:1和2中分別列出野生型天然存在的人IFN-β的核苷酸和氨基酸序列，其分別與GenBank登錄號Μ28622和ΑΑΑ36040的序列相同。2.IFN-β治療劑可根據(jù)本發(fā)明使用的IFN-β治療劑包括野生型IFN-β及其生物活性變體，例如，天然存在的和非天然存在的變體。SEQIDNO:1和2中分別列出野生型天然存在的人IFN-β的核苷酸和氨基酸序列，其分別與GenBank登錄號Μ28622和ΑΑΑ36040的序列相同。這些IFN還被描述于，例如，Seghal(1985)J.InterferonRes.5:521中。全長人IFN-β蛋白質(zhì)的長度為187個氨基酸，SEQIDNO:1的編碼序列對應(yīng)于76-639位核苷酸。信號序列對應(yīng)于1-21位氨基酸。該IFN-β的成熟形式的氨基酸序列對應(yīng)于22-187位氨基酸(SEQIDNO:1的139-639位核苷酸)。SEQIDNO:4和3中分別列出了成熟人IFN-β蛋白質(zhì)及編碼所述蛋白質(zhì)的核苷酸序列。哺乳動物細(xì)胞中產(chǎn)生的IFN-β是糖基化的。天然存在的野生型IFN-β在SEQIDNO4的成熟多肽的殘基80(Asn80)或SEQIDNO2的未成熟多肽的殘基101(Asn101)處是糖基化的。IFN-β治療劑還包括非人IFN-β，例如，來自脊椎動物，諸如哺乳動物，例如，非人靈長類，牛，羊，豬，馬，貓，犬，大鼠和小鼠；或鳥類或兩棲動物。來自這些物種的IFN-β序列可獲自GenBank和/或公開出版物，或可通過這樣的核酸來確定，所述核酸與來自其它物種的IFN-β發(fā)生低嚴(yán)謹(jǐn)度雜交而被分離。野生型IFN-β蛋白質(zhì)的變體包括含有與野生型IFN-β具有至少約70%、80%、90%,95^^98%或99%同一性或同源性的氨基酸序列的蛋白質(zhì)，例如含有SEQIDN0:2或4的人IFN-β。變體可具有一個或多個氨基酸取代、缺失或添加。例如，可以使用野生型IFN-β蛋白質(zhì)的生物活性片段。所述片段可具有在蛋白質(zhì)的C-或N-末端缺失的、添加的或取代的1、2、3、5、10或20個氨基酸。變體還可具有1、2、3、5、10或達20個氨基酸的取代、刪除或添加。一些變體可具有低于約50、40、30、25、20、15、10、7或5個氨基酸的取代、缺失或添加。取代可以用天然存在的氨基酸或用其類似物例如D-立體異構(gòu)氨基酸來進行。本發(fā)明的范圍還包括由在嚴(yán)謹(jǐn)條件下與編碼天然存在IFN-β的核酸或其互補鏈發(fā)生雜交的核酸所編碼的IFN-β變體，所述核酸例如，SEQIDNO:1或3所示。促進DNA雜交的適宜的嚴(yán)謹(jǐn)條件，例如，6.0X氯化鈉/枸酸鈉(SSC)，約450C，隨后在50°C用2.0XSSC進行洗滌是本領(lǐng)域技術(shù)人員所已知的，或可見于CurrentProtocolsinMolecularBiology,JohnWiley&Sons，N.Y.(1989),6.3.1-6.3.6；Sambrook等，1989,MolecularCloning,ALaboratoryManual,ColdSpringHarborPress,N.Y；S.Agrawal(ed.)MethodsinMolecularBiology,volume20；andTijssen(1993)LaboratoryTechniquesinbiochemistryandmolecularbiology-hybridizationwithnucleicacidprobes,例如，partIchapter2“Overviewofprinciplesofhybridizationandthestrategyofnucleicacidprobeassays",Elsevier,NewYork。例如，洗漆步驟中的鹽濃度可選自低嚴(yán)謹(jǐn)度的約2.0XSSC,50°C至高嚴(yán)謹(jǐn)度的約0.2XSSC,50°C。此外，洗滌步驟中的溫度可從低嚴(yán)謹(jǐn)條件即室溫(約22°C)增至高嚴(yán)謹(jǐn)條件即約65°C。溫度和鹽均可改變，或者溫度或鹽濃度可保持恒定而其它變量改變。示例性雜交條件包括約50°C、在6.Ox氯化鈉/檸檬酸鈉(SSC)中雜交，然后在室溫、0.2xSSC中洗滌。洗滌步驟的溫度可增加到約45°C，50°C，55°C，60°C或65"C從而增加雜交的嚴(yán)謹(jǐn)度。雜交也可在hSSC，4xSSC,3xSSC，2xSSC,IxSSC或0.2xSSC中進行。雜交可進行至少約1小時，2小時，5小時，12小時或M小時。雜交也可包括另一種影響嚴(yán)謹(jǐn)度的試劑，例如甲酰胺。例如嚴(yán)謹(jǐn)性雜交可在存在50%甲酰胺的條件下進行，其中的甲酰胺可增加給定溫度條件下雜交的嚴(yán)謹(jǐn)度。洗滌步驟可在清潔劑例如SDS諸如0.1或0.2%SDS的存在下進行。雜交后可進行洗滌，所述洗滌可包括單個洗滌步驟或至少兩步洗滌(可在相同或不同鹽度和溫度下進行)。例如，雜交后可在65°C進行兩步洗滌，每一步都為在hSSC，0.SDS中、約20分鐘，然后在65°C進行兩步洗滌，每一步都在0.2xSSC,0.SDS中、約20分鐘。示例性嚴(yán)謹(jǐn)性雜交條件包括在溶液中在65%雜交過夜，所述溶液包含50%甲酰胺，IOxDenhardt(0.2%Ficoll,·2%聚乙烯吡咯烷酮，0.2%牛血清白蛋白)和200μg/ml變性載體DNA(例如，剪切過的鮭精DNA)，然后在65°C進行兩步洗滌，每一步都為在&SSC，0.1%SDS中、約20分鐘，然后在65°C進行兩步洗滌，每一步都在0.2xSSC,0.1%SDS中、約20分鐘。雜交可由以下步驟組成在溶液中使兩種核酸進行雜交，或?qū)⑷芤褐械暮怂崤c附著在固相支持物(例如濾膜)上的核酸進行雜交。在具體的條件下，例如當(dāng)一種核酸位于固相支持物上時，雜交前可進行預(yù)雜交步驟，所述預(yù)雜交步驟進行至少約1小時，3小時或10小時，并可在與所述雜交溶液(不含探針)相同的溶液中和相同的溫度條件下進行。在優(yōu)選的實施方案中，編碼IFN-β變體的核酸與SEQIDNO1或3之一或其互補體在中等嚴(yán)謹(jǐn)條件下例如在約2.OXSSC和約40°C雜交并進行洗滌。在具體優(yōu)選的實施方案中，編碼IFN-β變體的核酸與SEQIDNO:1或3之一或其互補體在高嚴(yán)謹(jǐn)條件下例如在約0.2XSSC和約65°C雜交并進行洗滌。示例性修飾是對蛋白質(zhì)的二級和三級結(jié)構(gòu)影響最小的保守性修飾。示例性保守性取代包括Dayhoff在AtlasofProteinSequenceandStructure5(1978),以及Argos在EMBOJ.，8，779-785(1989)中所公開的那些取代。例如，屬于下組之一的氨基酸代表保守性改變ala，pro，gly，gin,asn，ser，thr；cys，ser，tyr，thr；val，ile，leu,met，ala，phe；lys，arg，his；禾口phe，tyr,trp，his。其它修飾包括用一種氨基酸取代另一種，所述取代不一定代表保守性取代。例如，可進行基本上不影響IFN-β三維結(jié)構(gòu)的取代。非糖基化人IFN-β的三維結(jié)構(gòu)描述于，例如Radhakrishnan等·(1996)Structure4:1453中，而糖基化IFN-β的三維結(jié)構(gòu)描述于，例如Karpusas等.(1997)PNAS94:11813)中。基本上，IFN-β包括五個螺旋螺旋A(由SEQIDNO4的大約2-22位氨基酸組成)；螺旋Β(由SEQIDNO4的大約51-71位氨基酸組成)；螺旋C(由SEQIDNO4的大約80-107位氨基酸組成)；螺旋D(由SEQIDNO4的大約118-136位氨基酸組成)和螺旋E(由SEQIDNO4的大約139-162位氨基酸組成)(Karpusas等，如上)。螺旋A，B，C和E構(gòu)成左旋的、2型四-螺旋束。長的反手環(huán)(overhandloop)(AB環(huán))連接螺旋A和B,而三個較短的環(huán)(稱為BC,CD和DE)連接剩余的螺旋(Karpusa等，如上)。在先的研究已經(jīng)顯示出IFN-β分子的N-末端，C-末端和糖基化C螺旋區(qū)不位于受體結(jié)合位點內(nèi)(參見，WO00/23472和USSN09/832,659)。由此，這些區(qū)域中的突變不會對IFN分子的生物活性產(chǎn)生顯著的不利作用。先前還已知螺旋C中的突變(成熟人IFN-β的81，82，85，86和89位氨基酸)導(dǎo)致相對于野生型IFN-β具有較高抗病毒活性分子(參見，WO00/23472和USSN09/832，659)。相似地，已經(jīng)顯示出螺旋A中的突變(成熟人IFN-β的2，4，5，8和11位氨基酸)和CD環(huán)(110，11，113，116和119位氨基酸)相對于天然存在的野生型人IFN-β具有較高的受體結(jié)合活性以及較高的抗病毒和抗增生活性(參見，WO00/2；3472和USSN09/832,659)。其它優(yōu)選的修飾或取代消除了分子間交聯(lián)或錯誤二硫鍵形成的位點。例如，已知IFN-β具有三個cys殘基(位于SEQIDNO:4的野生型位點17，31和141)。一種IFN變體是其中17位cys(C)被ser(S)取代的IFN，例如美國專利4，588，585所述。其它IFN-β變體包括，在根據(jù)野生型IFN-β(具有，例如SEQIDNO4)編號時，具有例如，17位的cys(C)被一個或多個ser⑶取代以及101位val(V)被phe(F)、trp(W)、tyr⑴或his(H)，優(yōu)選為phe(F)所取代的IFN-β變體，諸如美國專利6，127，332中所述。其它優(yōu)選的變體包括含有野生型IFN-β的序列(例如，含有SEQIDNO4)的多肽，其中當(dāng)根據(jù)野生型IFN-β編號時，101位val(V)被phe(F)、tyr(Y)、trp(W)、hiS(H)或phe(F)所取代，這同樣在例如美國專利6，127，332中所述。其它IFN-β變體是缺少起始物甲硫胺酸的成熟IFN-β分子，例如，SEQIDNO4的甲硫氨酸1。示例性IFN-β變體缺少起始物甲硫氨酸并具有至少一個氨基酸取代，例如在成熟形式的17位，如美國專利號4，588，585中所述。IFN-β分子還可通過用一個或多個衍生化氨基酸(可以是天然或非天然的氨基酸，其中正常存在的側(cè)鏈或末端基因通過化學(xué)反應(yīng)進行修飾)取代一個或多個氨基酸進行修飾。所述修飾包括，例如，Y-羧基化，β-羧基化，PEG化，硫酸化，磺化，磷酸化，酰胺化，酯化，N-乙?；?，芐基?；?carbobenzylation)，甲苯磺?；?tosylation)和本領(lǐng)域已知的其它修飾。其它修飾包括使用氨基酸類似物或衍生的氨基酸，其中側(cè)鏈被延長或縮短，同時仍能提供羧基、氨基或其它反應(yīng)性前體官能團用于進行環(huán)化反應(yīng)，以及具有包含適宜官能團的變體側(cè)鏈的氨基酸類似物。例如，受試化合物可包括氨基酸類似物，例如氰基丙氨酸、刀豆氨酸(canavanine)、S_亞甲胱氨酸(djenkolicacid)、正亮氨酸、3_磷酸絲氨酸、高絲氨酸、二羥基苯丙氨酸、5-羥色氨酸、1-甲基組氨酸、3-甲基組氨酸、二氨基庚二酸、鳥氨酸或二氨基丁酸。其它適用于此處的具有側(cè)鏈的天然存在的氨基酸代謝產(chǎn)物或前體可被本領(lǐng)域技術(shù)人員所識別，且包含在本發(fā)明的范圍內(nèi)。其它IFN-β變體包括反轉(zhuǎn)或逆向(retro)肽序列?！胺崔D(zhuǎn)”或“逆向”肽序列是指共價結(jié)合的氨基酸殘基(或其類似物或模擬物)的全部序列的一部分，其中氨基酸主鏈中肽鍵結(jié)構(gòu)的正常羧基至氨基方向被反轉(zhuǎn)從而，以常規(guī)的左至右方向進行閱讀時，肽的氨基部分在羧基部分之前(而非之后)。一般參見，Goodman,Μ.和Chorev，Μ.AccountsofChem.Res.1979，12，423。此處描述的反轉(zhuǎn)方向的肽包括(a)其中一個或多個氨基端殘基被改為反轉(zhuǎn)(“rev”)方向(由此在分子的最左部產(chǎn)生第二個“羧基端”)的那些肽，和(b)其中一個或多個羧基端殘基被改為反轉(zhuǎn)(“rev”)方向(在分子的最右部產(chǎn)生第二個“氨基端”)的那些肽。在正常方向的殘基和反轉(zhuǎn)方向的殘基之間的交界處不能形成肽(酰胺)鍵。因此，本發(fā)明的一些反轉(zhuǎn)的多肽可通過使用適宜的氨基酸模擬物部分，采用反轉(zhuǎn)的肽(反轉(zhuǎn)的酰胺)鍵來連接序列兩個相鄰部分而形成。在上述(a)的情況下，二酮化合物的中心殘基可方便地用于連接含有兩個酰胺鍵的結(jié)構(gòu)從而得到肽模擬物結(jié)構(gòu)。在上述(b)的情況下，二酮化合物的中心殘基也可用于連接含有兩個酰胺鍵的結(jié)構(gòu)從而得到肽模擬物結(jié)構(gòu)。此外，在所述多肽中鍵合的反轉(zhuǎn)方向一般還需要反轉(zhuǎn)的氨基酸殘基的對映結(jié)構(gòu)體構(gòu)型的反轉(zhuǎn)，以便保持與非反轉(zhuǎn)的肽的側(cè)鏈空間定向相似。肽反轉(zhuǎn)部分中氨基酸的構(gòu)型優(yōu)選為(D)，而非反轉(zhuǎn)部分的構(gòu)型優(yōu)選為(L)。當(dāng)適于優(yōu)化結(jié)合活性時，相反或混合的構(gòu)型也是可接受的。多肽的修飾進一步描述于，例如，美國專利號6，399，075中。IFN-β治療劑還包括與一或多種異源多肽融合的IFN-β蛋白質(zhì)及其變體(例如，成熟蛋白質(zhì))。例如，為了延長IFN-β蛋白質(zhì)的半壽期或增加其產(chǎn)生，可加入異源多肽。示例性異源多肽包括免疫球蛋白(Ig)分子或其部分，例如，Ig分子的輕鏈或重鏈的恒定區(qū)。在一個實施方案中，IFN-β蛋白質(zhì)或其變體與免疫球蛋白輕鏈和/或重鏈的鉸鏈區(qū)和恒定區(qū)的全部或部分融合或連接。因此，本發(fā)明描述了包括如下部分的分子的特征=(I)IFN-β蛋白質(zhì)部分(即，IFN-β或其變體)，(第二個肽，例如，能增加IFN-β部分的可溶性或體內(nèi)壽命的肽，例如，免疫球蛋白超家族成員或其片段或一部分，例如，IgG的一部分或片段，例如，人IgGl重鏈恒定區(qū)，例如，CH2，CH3及鉸鏈區(qū)。具體來說，“IFN-β/Ig融合體”是包含與免疫球蛋白鏈的N-末端連接的具有生物活性的IFN-β部分的蛋白質(zhì)。一種IFN-β/Ig融合體是“IFN-β/Fe融合體”，其是包含與至少部分免疫球蛋白恒定區(qū)連接的IFN-β部分的蛋白質(zhì)。優(yōu)選的Fc融合體包括與含有免疫球蛋白重鏈C末端區(qū)的抗體片段連接的IFN-β部分。融合蛋白可包括IFN-β多肽或其變體，異源多肽可與其N及其C末端連接。異源多肽對于IFN-β多肽或其變體而言也可是內(nèi)部的。一個實施方案中，融合蛋白的通式為Χ-Υ-Ζ，其中X是含有IFN-β的氨基酸序列的多肽，或其一部分或變體；Y是任選的連接體部分；而Z是一種多肽，其包含除X部分的干擾素β以外的至少部分多肽。在其它實施方案中，融合蛋白具有式Ζ-Υ-Χ，其中非IFN-β多肽融合至連接體的N末端部分，所述連接體被融合至IFN-β多肽或其部分或變體的N末端部分。Z部分可以是包含免疫球蛋白樣區(qū)的部分多肽。所述其它多肽的實例包括CD1，CD2，CD4以及I類和II類主要組織相容性抗原的成員。所述多肽的實例參見美國專利5,565,335(Capon等)。Z部分可以包括例如多個組氨酸殘基，或者優(yōu)選地包括免疫球蛋白的Fc區(qū)，這里定義的“Fe”是包括免疫球蛋白重鏈的C末端區(qū)的抗體的片段。Y部分可以是能使IFN-β部分保持其生物活性的任何連接體。Y部分還可以是約2-約5個氨基酸；約3-約10個氨基酸長或10個以上氨基酸。在優(yōu)選的實施方案中，Y包括或由GlyGlyGlyGlykr(SEQIDNO:6)所組成，所述序列由例如核苷酸序列GGCGGTGGTGGCAGC(SEQIDNO幻所編碼。Y還包括或由腸激酶識別位點，例如，AspAspAspAspLys(SEQIDNO:8)組成，所述序列由例如GACGATGATGACMG(SEQIDNO:7)所編碼。在其它實施方案中，Y包括或由Sei^erGlyAspAspAspAspLys(SEQIDN0:10)組成，所述序列由例如AGCTCCGGAGACGATGATGACAAG(SEQIDNO9)所編碼。此外，還可采用將兩種分子結(jié)合在一起的任何化學(xué)反應(yīng)實施IFN-β部分(X)與第二、非IFN-β部分Z(例如免疫球蛋白的Fc區(qū))之間的偶聯(lián)，只要X和Z部分保持其各自的活性即可。所述化學(xué)結(jié)合可包括很多化學(xué)機制，例如共價鍵結(jié)合，親和性結(jié)合，嵌入，配位結(jié)合和絡(luò)合作用。在IFN-β部分和Z部分之間形成共價結(jié)合的代表性偶聯(lián)劑(即通式中的連接體“Y”)可以包括有機化合物，例如硫酯類，碳化二亞酰胺，琥珀酰亞胺酯類，二異氰酸酯，例如甲苯_2，6-二異氰酸酯，谷二醛(gluteraldehydes)，重氮苯和六亞甲基二胺類，例如雙-(對重氮苯甲?；?p-diazonium-benzoyl))-乙二胺，亞氨酸酯類的雙功能衍生物，例如己二酰亞胺酸二甲酯(diamethyladipimidate)，和雙活性氟化合物(bis-activefluorinecompounds)諸如1，5-二氟-2，4-二硝基苯等。所列出的物質(zhì)并非意在窮盡本領(lǐng)域公知的多種類別的化學(xué)偶聯(lián)劑。其中的很多種是可通過商業(yè)途徑獲得的，例如N-琥珀酰亞胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)，1-乙基-3-(3-二甲基氨基-丙基)碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC)；4-琥珀酰亞胺基氧基羰基-α-甲基-α吡啶基-二硫代)-甲苯(SMPT=PierceChem.Co.，Cat.#215586)。優(yōu)選的IFN-β/Ig融合蛋白包括或由SEQIDNO12所組成，其中SEQIDNO12包含與人IgGlFc(ZL51o7)融合的全長成熟形式的人IFN-β(即，SEQIDNO:4)(參見WO00/23472和USSN09/832,659)(參見圖1)。SEQIDNO11中列出了相應(yīng)的核苷酸序列。編碼人IFN-β的DNA終止于核苷酸三聯(lián)體568-570(編碼精氨酸的AAC)，而編碼人IgGl恒定區(qū)DNA開始于三聯(lián)體(編碼門冬氨酸的GAC)，核苷酸號始于SEQIDNO11的574位。SEQIDΝ0:14中列出了另一優(yōu)選的IFN-β/Ig融合蛋白，其由SEQIDNO13編碼(參見WO00/23472和USSN09/832，659)(參見圖幻。這種融合蛋白包含與G4S連接體相連接的人IFN-β。G4S連接體(由SEQIDNO7的571-585位核苷酸所編碼)包含氨基酸序^lJGGGGS(SEQIDNO:9)。制備這些蛋白質(zhì)的方法描述于WO00/23472和USSN09/832,659中。在優(yōu)選的實施方案中，IFN-β多肽經(jīng)其C-末端與免疫球蛋白Fc區(qū)的至少一部分融合。IFN-β形成氨基端部分，而Fc區(qū)形成羧基端部分。在這些融合蛋白中，F(xiàn)c區(qū)優(yōu)選限于恒定區(qū)的鉸鏈區(qū)以及CH2和CH3區(qū)。這些融合體中的Fc區(qū)還可限于能形成分子間二硫鍵的鉸鏈區(qū)部分、以及CH2和CH3區(qū)或其功能等效體。這些恒定區(qū)可來源于任何哺乳動物性來源(優(yōu)選人類)，并可源于任何適宜的類型和/或同種型，包括IgA，IgD,IgM,IgE和IgGl，IgG2,IgG3和IgG4。編碼Ig融合體的重組核酸分子可通過本領(lǐng)域已知的任何方法獲得(Maniatis等，1982,MolecularCloning；ALaboratoryManual,ColdspringHarborLaboratory,ColdSpringHarbor,N.Y.)，或獲自公眾可得到的克隆。例如，Robinson,R.等，PCT申請，公開號TO87/(^671中教導(dǎo)了編碼免疫球蛋白的重或輕鏈恒定區(qū)的基因的制備方法。編碼干擾素分子或片段的cDNA序列可直接與編碼重Ig恒定區(qū)的cDNA相連或可借助連接序列與之相連。在本發(fā)明的其它實施方案中，可制備重組載體系統(tǒng)以使編碼干擾素β的序列適應(yīng)于含有合成鉸鏈區(qū)的正確的閱讀框。此外，需要包括與免疫球蛋白基因的3'側(cè)翼區(qū)相對應(yīng)的核酸其作為重組載體系統(tǒng)的一部分，所述基因包含RNA切割/多腺苷酸化位點和下游序列。此外，可能需要改造位于編碼免疫球蛋白融合蛋白的序列上游的信號序列以易于從用重組載體轉(zhuǎn)化的細(xì)胞中分泌融合的分子。本發(fā)明提供了包括融合蛋白在內(nèi)的二聚體融合分子以及單體或多聚體分子。所述多聚體可通過使用通常為多價的Ig分子(諸如IgM五聚體或IgA二聚體)的Fc區(qū)或其一部分來生成。應(yīng)當(dāng)理解，可能需要J鏈多肽來形成和穩(wěn)定IgM五聚體和IgA二聚體?？蛇x地，IFN-β融合蛋白的多聚體可采用對Ig分子的Fc區(qū)具有親和力的蛋白質(zhì)，諸如蛋白A來形成。例如，可將多個IFN-β/免疫球蛋白融合蛋白與蛋白質(zhì)A-瓊脂糖珠結(jié)合。這些多價形式是可以使用的，因為其具有多個干擾素β受體結(jié)合位點。例如，二價可溶性IFN-β可由被連接體區(qū)(Y部分)隔離的SEQIDNO4的1-166位氨基酸(或由SEQ.ID.NO3的1-498位核酸所編碼的氨基酸)(通式中的X部分)的兩個串聯(lián)重復(fù)所組成，該重復(fù)與免疫球蛋白恒定區(qū)(Z部分)的至少一部分相結(jié)合?？蛇x的多價體形式還可通過，例如，采用常規(guī)偶聯(lián)技術(shù)通過化學(xué)方法將IFN-β/Ig融合體與任何臨床上可接受的載體分子相偶聯(lián)來構(gòu)建，所述載體為選自Ficoll、聚乙二醇或葡聚糖的聚合物。可選地，IFN-β可通過化學(xué)方法與生物素偶聯(lián)，然后使生物素-干擾素3Fc結(jié)合物與抗生物素蛋白結(jié)合，結(jié)果產(chǎn)生四價抗生物素蛋白/生物素/干擾素β分子。IFN-β/Ig融合體還可與二硝基苯酚(DNP)或三硝基苯酚(TNP)共價偶聯(lián)，結(jié)果得到用抗-DNP或抗-TNP-IgM沉淀的結(jié)合物，以形成具有對干擾素β受體結(jié)合位點的效價為10的十聚結(jié)合物。本發(fā)明的蛋白質(zhì)的衍生物還包括保持生物活性的初級蛋白的多種結(jié)構(gòu)形式。由于存在可電離的氨基和羧基，例如，IFN-β蛋白質(zhì)及其變體可以是酸性或堿性鹽形式，或可以是中性形式。各氨基酸殘基還可通過氧化或還原進行修飾。此外，IFN-β的一級氨基酸結(jié)構(gòu)(包括N-和/或C-末端)或IFN-β聚糖可通過以下方式進行修飾(“衍生”)與其它化學(xué)部分，諸如糖基基團、聚亞烷基二醇聚合物諸如聚乙二醇、脂類、磷酸鹽、乙酰基等形成共價的或聚集的結(jié)合物，或形成氨基酸序列突變體。干擾素β/Ig的其它衍生物包括干擾素β或其片段與其它蛋白質(zhì)或多肽形成的共價或聚集結(jié)合物，諸如通過在重組培養(yǎng)中作為附加的N-末端或C-末端而合成。例如，結(jié)合的肽可以是在蛋白質(zhì)N-末端區(qū)的信號(或前導(dǎo))多肽序列，其在共翻譯或翻譯后水平上指導(dǎo)蛋白質(zhì)從其合成位點轉(zhuǎn)至其在細(xì)胞膜或細(xì)胞壁內(nèi)或外的功能位點(例如，酵母α-因子前導(dǎo)序列)。例如，信號肽可以是IFN-β的信號肽，即SEQIDNO:2的1-21位氨基酸(對應(yīng)于SEQIDNO:1的76-138位核苷酸)。信號肽還可以是VCAM的信號肽，S卩，SEQIDNO12的1-位氨基酸(由SEQIDNO11的1_72核苷酸所編碼)。異源多肽(例如肽)或其它分子還可以用作標(biāo)記或用于輔助IFN-β治療劑的純化。所述肽是本領(lǐng)域眾所周知的。例如，本發(fā)明的多核苷酸可在框內(nèi)與標(biāo)記序列(本文也稱編碼“Tag肽”的“Tag序列”)融合，其能允許本發(fā)明的多肽的標(biāo)記和/或純化。在優(yōu)選的實施方案中，標(biāo)記序列是六組氨酸標(biāo)記，例如，由PQE-9載體所提供的。許多其它Tag肽可經(jīng)商業(yè)途徑獲得。其它經(jīng)常使用的Tags包括myc-表位(例如，參見Ellison等.(1991)JBiolChen^66:21150-21157)，其包括來自c-myc的10個殘基的序列，pFLAG系統(tǒng)(InternationalBiotechnologies^w]),pEZZ-^SA^^(Pharmaciii，NJ)，禾口i^gdfil桿菌(haemophilusinfluenza)血凝素蛋白質(zhì)的16個氨基酸的部分。此外，只要試劑，例如與Tag多肽特異性相互作用的抗體能夠獲得或可被制備或鑒定，可將任何多肽用作Tag。在一個實施方案中，IFN-β蛋白質(zhì)或其變體在N-或C-端與下述肽之一融合HisHisHisHisHisHis(SEQIDNO16)，其可由核苷酸序列CATCATCATCATCATCAT(SEQIDNO:15)編碼；SerGlyGlyHisHisHisHisHisHis(SEQIDNO18)，其可由核苷酸序列TCCGGGGGCCATCATCATCATCATCAT(SEQIDNO15)所編碼和^rGlyGlyHisHisHisHisHisHisSerSerGlyAspAspAspAspLys(SEQIDNO:20)，其可由核苷酸序列TCCGGGGGCCATCATCATCATCATCATAGCTCCGGAGACGATGATGACAAG(SEQIDNO19)所編碼。干擾素β的氨基酸序列還可以連接于肽AspTyrLysAspAspAspAspLys(DYKDDDDK)(SEQIDNO21)(Hopp等，Bio/Technology6:1204，1988)。后一序列是高度抗原性的并提供與特異性單克隆抗體可逆性結(jié)合的表位，使得可以進行所表達的重組蛋白的快速測定和便易的純化。該序列還可被牛粘膜腸激酶在緊接Asp-Lys對之后的殘基進行特異性切割。在其它實施方案中，IFN-β治療劑包括與白蛋白、其變體或一部分融合的IFN-β蛋白質(zhì)或其變體?？砂矗?，WO01/77137中所述制備融合蛋白。IFN-β治療劑還可包括不是多肽的分子，例如，與聚合物如生物可降解的聚合物共價或非共價連接的IFN-β蛋白質(zhì)或其變體。例如，IFN-β蛋白質(zhì)或其變體可以是PEG化的，例如，與聚乙二醇(PEG)連接，如W000/23114中所述。在本發(fā)明的寬范圍中，單個聚合物分子可用于與IFN-β的結(jié)合。應(yīng)當(dāng)理解，只要適于最終應(yīng)用，結(jié)合的聚合物可使用任何基團、部分或其它結(jié)合的種類。例如，在一些應(yīng)用中，將能夠賦予聚合物UV-降解抗性、或抗氧化或其它性質(zhì)或特性的功能性部分與聚合物共價結(jié)合是有用的。作為另一例子，在一些應(yīng)用中，使聚合物功能化以使其具有反應(yīng)性或可交聯(lián)性，有利于增強整個結(jié)合后的物質(zhì)的多種性質(zhì)或特性。由此，該聚合物可包含任何官能度、重復(fù)基團、連接或其它構(gòu)成性結(jié)構(gòu)，所述構(gòu)成特性不會妨礙結(jié)合的IFN-β組合物對其預(yù)期目的的功效的其它構(gòu)成結(jié)構(gòu)。雖然偶聯(lián)也可通過非末端反應(yīng)基團的分枝形成，但IFN-β最優(yōu)選經(jīng)聚合物上的末端反應(yīng)性基團進行偶聯(lián)。此處將具有反應(yīng)性基團的聚合物命名為“活化的聚合物”。反應(yīng)性基團選擇性地與蛋白質(zhì)上的游離氨基或其它反應(yīng)性基團反應(yīng)。活化的聚合物發(fā)生反應(yīng)，從而可在任何可用的IFN-β氨基諸如賴氨酸的α氨基或ε氨基處發(fā)生結(jié)合。IFN-β的游離的羧基基團，適宜活化的羰基，羥基，胍基，氧化的碳水化合物部分和巰基(若可用)也可用作結(jié)合位點。雖然聚合物可結(jié)合于IFN-β分子或其變體或者與IFN-β分子直接或間接連接的其它氨基酸的任何地方，用于聚合物偶聯(lián)的最優(yōu)選的位點是IFN-β分子的N-末端。第二位點位于或鄰近C-末端，且通過糖部分。因此，本發(fā)明預(yù)期了其最優(yōu)選的實施(i)IFN-β方案或其變體的N-末端偶聯(lián)的聚合物結(jié)合物(polymerconjugate)；(ii)IFN-β或其變體的C-末端偶聯(lián)的聚合物結(jié)合物；(iii)聚合物結(jié)合物的糖-偶聯(lián)的結(jié)合物；(iv)以及IFN-β蛋白質(zhì)或其變體的Ν-，C-和糖偶聯(lián)的聚合物結(jié)合物。根據(jù)蛋白質(zhì)濃度，一般采用大約1.0至大約10摩爾的活化的聚合物/每摩爾蛋白質(zhì)。最終的量平衡在使反應(yīng)程度最大化和產(chǎn)物非特異修飾最小化之間，同時，在維持最佳活性的同時(如果可能)使蛋白質(zhì)半壽期最優(yōu)化。優(yōu)選的，蛋白質(zhì)的生物學(xué)活性保留至少大約50%，最優(yōu)選保留100%?？梢酝ㄟ^使生物學(xué)活性物質(zhì)與惰性聚合物發(fā)生反應(yīng)的任何合適方法進行反應(yīng)，如果反應(yīng)基團位于N末端的α-氨基上，則優(yōu)選ρΗ大約5-7。一般而言，該過程涉及制備活化的聚合物(其可能具有至少一個末端羥基)，然后使蛋白質(zhì)與活化的聚合物發(fā)生反應(yīng)，以產(chǎn)生適合于配制的可溶性蛋白質(zhì)。上述修飾反應(yīng)可以通過可能涉及一個或多個步驟的多種方法進行。如上所述，本發(fā)明最優(yōu)選的實施方案利用了IFN-βN末端與聚合物的連接。選擇性得到N末端修飾的IFN-β的適宜方法是可以獲得。還原性烷基化法例示了一種方法，該方法利用了IFN-β上可用于衍生化的不同種類伯氨基團(賴氨酸的氨基對N末端甲硫氨酸的氨基)的不同反應(yīng)性。在適當(dāng)?shù)倪x擇條件下，可以實現(xiàn)含羰基的聚合物在IFN-β的N末端對其基本上選擇性地進行衍生化。該反應(yīng)在能夠利用賴氨酸ε-氨基和IFN-β的N末端殘基的α-氨基之間的pKa差異的ρΗ條件下進行。該類化學(xué)方法是本領(lǐng)域普通技術(shù)人所熟知的。例如，可以使用這樣的反應(yīng)方案，其中所述選擇性通過在低ρΗ(—般5-6)，在可使PEG-醛聚合物與IFN-β在氰基硼氫鈉存在時發(fā)生反應(yīng)的條件下進行反應(yīng)而得以維持。在對PEG-IFN-β進行純化并用SDS-PAGE，MALDI質(zhì)譜和肽測序/作圖進行分析后，產(chǎn)生了N末端由PEG部分特異性靶向的IFN-β。IFN-β的晶體結(jié)構(gòu)顯示出N和C末端彼此接近(參見Karpusas等，1997，Proc.Natl.Acad.Sci.94:11813-11818)由此，IFN-β的C末端的修飾也應(yīng)當(dāng)對活性具有最小的影響。在沒有簡單的化學(xué)策略可以將聚亞烷基二醇聚合物(諸如PEG)靶向在C末端時，可直接通過基因改造產(chǎn)生可用于靶向聚合物部分的位點。例如，在C末端或其附近的位點摻入Cys允許使用馬來酰亞胺、乙烯砜或鹵代醋酸酯活化的聚亞烷基二醇(如PEG)進行特異修飾。由于這些試劑具有對Cys的高選擇性，故這些衍生物可特異性用于改造的半胱氨酸的修飾。其它策略，諸如摻入可被靶向的組氨酸標(biāo)記(Fancy等，(1996)Chem.&Biol.3551)或附加的糖基化位點，代表了用于修飾IFN-β的C末端的其它選擇。IFN-β上的聚糖也位于允許進一步修飾而不改變活性的位置。用于靶向糖作為化學(xué)修飾位點的方法也是已知的，因此可以將聚亞烷基二醇聚合物直接且特異性添加到IFN-β上經(jīng)氧化而活化的糖。例如，可以產(chǎn)生聚乙二醇-酰胼，其可通過與醛和酮縮合形成相對穩(wěn)的腙連接。此特性已經(jīng)用于通過氧化的寡糖連接對蛋白質(zhì)進行修飾.參見Andresz，H.等，(1978),Makromol.Chem.179:301。具體而言，用亞硝酸鹽(酯)處理PEG-羧甲基酰胼產(chǎn)生的PEG-羧甲基氮化物是能與氨基發(fā)生反應(yīng)的親電子活性基團。此反應(yīng)也可以用于制備聚亞烷基二醇修飾的蛋白質(zhì)。參見美國專利4，101，380和4，179，337。巰基連接體介導(dǎo)的化學(xué)方法能進一步促進蛋白質(zhì)的交聯(lián)。該過程例如，可通過使用諸如高碘酸鈉在碳水化合物部分上產(chǎn)生反應(yīng)性醛基，通過醛形成胱胺結(jié)合體，并通過胱胺上的疏基誘導(dǎo)交聯(lián)等步驟進行實施(參見P印insky，B.等，(1991)，J.Biol.Chem.，26618244-18249和Chen，L.L.等，(1991)J.Biol.Chem.，26618237-18243)。由此，這類化學(xué)方法被認(rèn)為也適于用聚亞烷基二醇聚合物進行的修飾，其中向糖中摻入連接體并將聚亞烷基二醇聚合物附于該連接體上。雖然含有氨基巰基(aminothiol)或胼的連接體能夠用于加入單個聚合物基團，連接體的結(jié)構(gòu)可以有所變化以便加入多個聚合物，和/或改變聚合物相對于IFN-β的空間取向。示例性聚合物包括水溶性聚合物諸如聚亞烷基二醇聚合物。所述聚合物的非限制性實例包括其它聚環(huán)氧烷同聚物，諸如聚丙二醇、聚氧乙烯化多元醇、其共聚物和其嵌段共聚物。適宜的水溶性和非肽聚合物主鏈的其它實例包括聚(氧乙烯化多元醇)、聚(烯醇)、聚(乙烯基砒咯烷酮)、聚(羥基丙基甲基丙烯酰胺(hydroxypropylmethacrylamide))、聚(α-羥酸(hydroxyacid))、聚(乙烯醇)、聚磷腈、聚唑啉、聚(N-丙烯酰嗎啉)及其共聚物、三元共聚物，及其混合物。在一個實施方案中，聚合物主鏈?zhǔn)瞧骄肿恿繛榧s200Da至約400，OOODa的聚(乙二醇)或一甲氧基聚乙二醇(monomethoxypolyethyleneglycol)(mPEG)。應(yīng)當(dāng)理解，其它相關(guān)的聚合物也適用于實施本發(fā)明，而術(shù)語PEG或聚(乙二醇)的使用意在包括而非排除該方面。術(shù)語PEG包括任何形式的聚(乙二醇)，包括烷氧基PEG，雙功能PEG、多臂(multi-armed)PEG、叉狀(forked)PEG、分枝(branched)PEG、懸垂(pendent)PEG或其中具有可降解鍵的PEG。在一個實施方案中，在興趣聚合物系統(tǒng)中摻入C1-C4烷基聚亞烷基二醇的聚亞烷基二醇?xì)埢?，?yōu)選聚乙二醇(PEG)，或這種二醇的聚(氧)烯二醇?xì)埢?。由此，蛋白質(zhì)所附著的聚合物可以是聚乙二醇(PEG)的同聚物或聚氧乙烯化多元醇，條件是在所有情況中該聚合物在室溫均可溶于水。所述聚合物的非限制性實例包括聚環(huán)氧烷同聚物，諸如PEG或聚丙二醇、聚氧乙烯化二元醇、其共聚物和其嵌段共聚物，條件是維持該嵌段共聚物的水溶性。聚氧乙烯化多元醇的實例包括，例如，聚氧乙烯化甘油、聚氧乙烯化山梨醇、聚氧乙烯化葡萄糖等等。聚氧乙烯化甘油的甘油主鏈與天然存在于例如動物或人中的單、二、和三甘油酯的主鏈相同。因此，這種分支化不必視為機體的外來試劑。作為聚環(huán)氧烷的替代，可以使用葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、聚丙烯酰胺、聚乙烯醇、基于碳水化合物的聚合物等等。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將領(lǐng)會，前文所列均為示例，本發(fā)明涵蓋具有本文所述性質(zhì)的所有聚合物材料。聚合物可為任何具體分子量，但是其分子量優(yōu)選大約300至100，000，更優(yōu)選10，000至40，000。具體而言，20，000以上的分子量對于防止由于腎過濾導(dǎo)致的蛋白質(zhì)損失而言最佳。在本發(fā)明的實踐中，在聚亞烷基二醇衍生化聚合物-IFN-β綴合物的配制中具有很多有利性，這與聚亞烷基二醇衍生物的下列特性相關(guān)水溶性的改進，同時不誘發(fā)抗原性或免疫原性應(yīng)答；高度生物相溶性；聚亞烷基二醇衍生物不存在體內(nèi)生物降解；和易于被活有機體排泄。此外，在本發(fā)明的其它方面，可以利用與聚合物組分共價鍵合的IFN-β，其中結(jié)合的性質(zhì)波及可切割的共價化學(xué)鍵。這使得能夠在從IFN-β上切割下聚合物的過程中進行控制。IFN-β藥物和聚合物之間的這種共價鍵可以通過化學(xué)或酶反應(yīng)切割。聚合物-IFN-β產(chǎn)物保留了可接受量的活性。同時，結(jié)合的聚合物中存在的聚乙二醇部分賦予聚合物-IFN-β結(jié)合物高水溶性和長時間在血液中循環(huán)的能力。作為這些改進特征的結(jié)果，本發(fā)明涵蓋了活性聚合物-IFN-β種類經(jīng)胃腸外、經(jīng)鼻、和經(jīng)口的遞送和前述IFN-β經(jīng)水解切割后在體內(nèi)應(yīng)用中的生物利用度?？墒褂枚喾N反應(yīng)方案而很容易地實施聚合物與IFN-β的反應(yīng)而得到各種結(jié)合物，例如在N末端結(jié)合的產(chǎn)物，IFN-β結(jié)合物的活性和穩(wěn)定性可以使用不同分子大小的聚合物通過多種方式進行改變。綴合物的溶解性可以通過改變摻入聚合物組合物中的聚乙二醇片段的比例和大小進行改變。在一個實施方案中，通過蛋白質(zhì)與活化的聚亞烷基二醇化合物(PCG)制備根據(jù)本發(fā)明的結(jié)合物。例如，在存在還原劑(例如，氰基硼氫化鈉)時，IFN可經(jīng)由還原型烷基化而與PEG-醛反應(yīng)以產(chǎn)生PEG-蛋白質(zhì)結(jié)合物(經(jīng)由胺鍵連接)。參見，例如，歐洲專利0154316B1和國際專利申請?zhí)朠CT/US03/01559。在本發(fā)明的一些實施方案中，人IFN-β用下述活化的聚亞烷基二醇進行PEG化20kDamPEG-0-2-甲基丙醛，20kDamPEG-0-ρ-甲苯基-0-2-甲基丙醛，20kDamPEG-0-m-甲苯基-0-2-甲基丙醛，20kDamPEG-0-ρ-苯乙醛，20kDamPEG-0-ρ-苯基丙醛和20kDamPEG-0-m-苯乙酸，從而分別得到20kDamPEG-0-2-甲基丙酸-修飾的IFN-β，20kDamPEG-0-ρ-甲苯基-0-2-甲基丙醛-修飾的IFN-β，20kDamPEG-0-m-甲苯基-0-2-甲基丙酸-修飾的IFN-β，20kDamPEG-0-ρ-苯乙醛-修飾的IFN-β，20kDamPEG-0-ρ-苯丙醛-修飾的IFN-β和20kDamPEG-0-m-苯乙醛-修飾的IFN-β。下面給出用20kDamPEG-0-2-甲基丙醛和20kDamPEG-0-ρ-苯乙醛修飾的人IFN-β的制備和特征的詳細(xì)敘述，其還公開于國際專利申請PCT/US03/01559中。在一個實施方案中，PEG化的IFN-β的制備如下。將IOOmM磷酸鈉pH7.2,200mMNaCl中的、250μg/ml的IFN-β，例如未經(jīng)配制的AVONEX(IFN-β-Ia批量中間體(bulkintermediate)(已通過所有為用于人體進行的試驗的臨床大批量藥物))用等體積IOOmMMESpH5.0稀釋，然后用HCl將pH調(diào)整至5.0。將樣品以6mgIFN-β/ml樹脂加入SP-Sepharose:FF柱(Pharmacia，Piscataway，NJ)。用5mM磷酸鈉pH5.5,75mMNaCl洗柱，然后用30mM磷酸鈉pH6.0,600mMNaCl洗脫產(chǎn)物。分析洗脫級分在^Onm的吸光度值，采用lmg/ml溶液的消光系數(shù)為1.51而從吸光度來估計樣品中干擾素的濃度。在來自SP洗脫物的lmg/ml溶液中，將0.5M磷酸鈉pH6.0加至50mM，將氰基棚S化納(Aldrich,Milwaukee,WI)力口至5mM，而將20KPEG酸(ShearwaterPolymers,Huntsville,AL)加至5mg/ml。將樣品于室溫保溫20小時。通過在Superose6FPLC分離柱(sizingcolumn)(Pharmacia)(用5mM磷酸鈉pH5.5，150mMNaCl作為流動相)和SP-SepharoseFF上進行順序?qū)游霾襟E以從反應(yīng)產(chǎn)物中純化PEG化的干擾素。分離柱導(dǎo)致修飾的和未修飾的IFN-β的基線分離。來自凝膠過濾的含PEG-干擾素β的洗脫合并物用水按11進行稀釋，然后以2mg干擾素β/ml樹脂加入SP-S^harose柱。用5mM磷酸鈉pH5.5，75mMNaCl洗柱，然后用5mM磷酸鈉pH5.5,800mMNaCl從柱洗脫PEG化干擾素β。通過^Onm的吸光度分析蛋白質(zhì)含量。由于PEG部分對280nm的吸光度不產(chǎn)生影響，報道了干擾素等效物中PEG化干擾素的濃度。所得PEG化的IFN-β的這些方法和特征描述被進一步描述在WO00/23114中。IFN-β的PEG的結(jié)合未顯示出改變了其抗病毒活性。此外，發(fā)現(xiàn)PEG化的IFN-β的比活性遠高于(約10倍)非PEG化IFN-β的比活性(TO00/23114)。IFN-β還可用可以購買的(例如，購自Fluka公司(目錄號75936，Ronkonkoman，NY))5ΚPEG-醛部分按照上述與20KPEG醛相同的方案進行PEG化。20kDamPEG-0-2-甲基丙醛-修飾的IFN-β的制備如下。將IOOmM磷酸鈉pH7.2，200mMNaCl中、IOml250μg/ml未經(jīng)配制的AVONEX(IFN-β-Ia批量中間體(已通過所有為用于人體進行的試驗的臨床大批量藥物))用12ml的165mMMESpH5.0和50μ1的5ΝHCl稀釋。將樣品加入300μ1SP-SepharoseFF柱(Pharmacia)。用3X300μ1的5mM磷酸鈉pH5.5，75mMNaCl洗柱，然后用5mM磷酸鈉pH5.5,600mMNaCl洗脫蛋白質(zhì)。分析洗脫級分在^Onm的吸光度，采用lmg/ml溶液的消光系數(shù)為1.51，而從吸光度來估計樣品中IFN-β的濃度。合并洗脫峰級分以得到3.66mg/mL的IFN-β濃度，其隨后用水稀釋至1.ang/mL。在來自洗脫的SP-S印harose洗脫合并物的0.8mLIFN-β中，將0.5Μ磷酸鈉ρΗ6.0加至50mM，將氰基硼氫化鈉(Aldrich)加至5mM，而將20kDamPEG-0-2-甲基丙醛加至5mg/ml。將樣品在黑暗中于室溫保溫16小時。通過0.5mLSP-SepharoseFF柱如下從反應(yīng)混合物中純化PEG化IFN-β如下用2.4mL20mMMESρΗ5.0稀釋0.6ml的反應(yīng)混合物，然后將其加入SP-S印harose柱。用磷酸鈉pH5.5，75mMNaCl洗柱，然后用25mMMESpH6.4，400mMNaCl從柱洗脫PEG化的IFN-β。以5mM磷酸鈉ρΗ5.5，150mMNaCl作為流動相在Superose6HR10/30FPLC分離柱上進一步純化PEG化IFN-β。以20mL/h在分離柱(25mL)上進行分離，收集0.5mL級分。通過^Onm的吸光度來分析洗脫級分的蛋白質(zhì)含量，合并所述級分，并確定合并物的蛋白質(zhì)濃度。由于PEG部分對^Onm的吸光度不產(chǎn)生影響，報道了IFN等效物中PEG化的IFN-β濃度。取合并物樣品進行分析，剩余部分可用含HAS的配制緩沖液稀釋至30μg/mL,以0.25mL/管進行等分，保存于_70°C。20kDamPEG-0-p-苯乙酸-修飾的IFN-β的制備如下。將IOOmM磷酸鈉ρΗ7.2，200mMNaCl中、250μg/ml20ml未經(jīng)配制的AVONEX(IFN-β-Ia批量中間體(已通過所有為用于人體進行的試驗的臨床大批量藥物))用2細(xì)1的165mMMESρΗ5.0，100μ1的5ΝHC1，和24mL水進行稀釋。將樣品加入600μ1SP-SepharoseFF柱(Pharmacia)。用2Χ900μ1的5mM磷酸鈉pH5.5,75mMNaCl洗柱，然后用5mM磷酸鈉pH5.5,600mMNaCl洗脫蛋白質(zhì)。分析洗脫級分的^Onm的吸光度，采用lmg/ml溶液的消光系數(shù)為1.51而從吸光度來估計樣品中IFN-β的濃度。合并洗脫峰級分以得到2.;3mg/mL的IFN-β濃度，其隨后用水稀釋至1.2mg/mL0在來自SP-S印harose洗脫合并物的1.2mLIFN-β-Ia中，將0.5Μ磷酸鈉ρΗ6.0加至50mM，將氰基硼氫化鈉(Aldrich)加至5mM，而將20kDamPEG-0-ρ-苯乙醛加至10mg/ml。將樣品在黑暗中于室溫保溫18小時。在0.75mLSP-SepharoseFF柱上如下從反應(yīng)混合物中純化PEG化的IFN-β如下用7.5mL20mMMESpH5.0,7.5mL水，和5μ1的5NHCl稀釋反應(yīng)混合物，然后將其加入SP-S^harose柱。用磷酸鈉pH5.5,75mMNaCl洗柱，然后用20mMMESpH6.0,600mMNaCl從柱洗脫PEG化的IFN-β。以5mM磷酸鈉pH5.5，150mMNaCl作為流動相在Superose6HR10/30FPLC分離柱上進一步純化PEG化的IFN-β。以20mL/h在分離柱(25mL)上進行分離，收集0.5mL級分。通過在^Onm的吸光度來分析洗脫級分的蛋白質(zhì)含量，合并所述級分，并確定合并物的蛋白質(zhì)濃度。根據(jù)lmg/mLPEG化IFN-β溶液的消光系數(shù)為2，調(diào)節(jié)PEG(lmg/mL溶液中20kDamPEG-0-ρ-苯乙醛在^Onm的消光系數(shù)為0.5)對^Onm的吸光度后，報道了IFN等效物中PEG化IFN-β的濃度。取合并物樣品進行分析，剩余部分可用含HAS的配制緩沖液稀釋至30μg/mL，以0.25mL/管進行等分，保存于-70°C。與非天然存在的聚合物偶聯(lián)的糖基化IFN-β可用于本發(fā)明的方法。聚合物可包括聚亞烷基二醇部分。聚亞烷基部分可通過選自醛基，馬來酰亞胺基，乙烯砜基，鹵代乙酸酯基，多個組氨酸殘基，胼基和氨硫醇基的基團而與干擾素-β偶聯(lián)。IFN-β可與聚乙二醇部分偶聯(lián)，其中IFN-β通過不穩(wěn)定性鍵而與聚乙二醇部分偶聯(lián)，其中不穩(wěn)定性鍵可被生物化學(xué)性水解和/或蛋白酶解作用斷裂。聚合物的分子量可以是約5-約40千道爾頓。其它可用的IFN-β是包含N-末端與含有聚亞烷基二醇部分的聚合物偶聯(lián)的生理活性糖基化干擾素-β的生理活性干擾素-β組合物，其中將生理活性干擾素-β和聚亞烷基二醇部分進行排列，以便在通過抗病毒測定時，生理活性干擾素-β組合物中的生理活性干擾素具有相對于缺少所述部分的生理活性干擾素基本上相似的活性。異源多肽或其它分子可與IFN-β蛋白質(zhì)或其變體共價或非共價連接?！肮矁r偶聯(lián)的”是指本發(fā)明的不同部分或互相直接共價結(jié)合，或經(jīng)一或多個插入部分，諸如橋接、間隔子或接合部分或多個部分而間接地共價連接。插入部分或多個部分被稱為“偶聯(lián)基團”。術(shù)語“結(jié)合的”可與“共價偶聯(lián)的”互換使用。用于本發(fā)明的IFN-β可以是糖基化或非糖基化(或未糖基化的)。非糖基化IFN-β可在例如原核宿主細(xì)胞中制備。IFN-β蛋白質(zhì)或其變體還可通過附著正常情況下IFN-β上不存在的多糖而進行修飾。3.產(chǎn)牛IFN-β治療劑的方法本發(fā)明的IFN-β治療劑可通過任何適宜的方法進行制備，諸如包括構(gòu)建編碼IFN-β治療劑的核酸和在適宜的轉(zhuǎn)化的宿主中表達該核酸的方法。該方法將制備重組IFN-β治療劑。IFN-β治療劑還可通過化學(xué)合成或化學(xué)合成與重組DNA技術(shù)的聯(lián)合進行制備。在一個實施方案中，通過分離或合成編碼IFN-β或其變體的DNA序列來構(gòu)建編碼IFN-β治療劑的核酸。例如，IFN-β融合蛋白可按照，例如本文所述進行制備。天然存在的IFN-β核酸可根據(jù)本領(lǐng)域眾所周知的方法獲得。例如，核酸可利用從已知表達IFN-β的細(xì)胞(例如，白細(xì)胞)中獲得的RNA，和基于IFN-β基因序列(例如，SEQIDNO:1)的引物，通過逆轉(zhuǎn)錄酶-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)進行分離。編碼IFN-β蛋白質(zhì)的核酸還可通過利用探針(例如，包含部分IFN-β序列的寡核苷酸)篩選文庫而進行分離，所述文庫例如從表達IFN-β的細(xì)胞中制備的cDNA文庫。可選地，可將完整氨基酸序列用于構(gòu)建反-翻譯(back-translated)的基因?？梢院铣砂幋aIFN-β治療劑的核苷酸序列的DNA寡聚體。例如，可以合成編碼部分所需多肽的小寡核苷酸，然后將其連接在一起。各寡核苷酸通常包含用于互補裝配的5'或3'突出端。通過本領(lǐng)域眾所周知的方法可在編碼IFN-β蛋白質(zhì)的核酸中引入改變。例如，改變可通過定點誘變，如Mark等，"Site-specificMutagenesisOfTheHumanFibroblastInterferonGene“,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81,pp.5662-66(1984)和美國專利4，588，585中所述的方法產(chǎn)生。構(gòu)建編碼IFN-β治療劑的核酸的另一方法是通過化學(xué)合成方法。例如，通過采用寡核苷酸合成儀的化學(xué)方法可以合成編碼所需IFN-β治療劑的基因。所述寡核苷酸根據(jù)IFN-β治療劑的氨基酸序列進行設(shè)計。當(dāng)選擇用于在表達系統(tǒng)中表達的核酸時，需要選擇在產(chǎn)生重組IFN-β治療劑的宿主細(xì)胞或表達系統(tǒng)中優(yōu)先(favor)的那些密碼子。例如，已知在原核細(xì)胞中特定密碼子比其它密碼子優(yōu)先表達(“密碼子優(yōu)選性”)。編碼IFN-β治療劑的DNA序列還可以包括或者不包括編碼信號序列的DNA序列。所述信號序列(如果存在)應(yīng)可被為表達IFN-β治療劑所選的細(xì)胞識別。信號序列可以是原核生物的和/或真核生物的。信號序列是本領(lǐng)域眾所周知的，本領(lǐng)域中描述了一些不同的信號序列。信號序列可以是天然的(即，天然存在的)IFN-β的信號序列。信號序列所包含的內(nèi)容依賴于其是否需要從產(chǎn)生分泌信號序列的重組細(xì)胞分泌IFN-β治療劑。如果所選擇的細(xì)胞是原核生物的，一般優(yōu)選所述DNA序列不編碼信號序列。如果所選擇的細(xì)胞是真核生物的，一般優(yōu)選所述DNA序列編碼信號序列而最優(yōu)選使用野生型IFN-β信號序列。一經(jīng)裝配(通過合成、定點誘變或其它方法)，編碼IFN-β治療劑的核酸被插入至表達載體中，并可操作地連接于適于在所需轉(zhuǎn)化的宿主中表達IFN-β治療劑的表達控制序列。適當(dāng)?shù)霓D(zhuǎn)配可通過核苷酸測序，限制性作圖和生物活性的多肽在適宜的宿主或宿主細(xì)胞中的表達得到證實。本領(lǐng)域已知，為了獲得轉(zhuǎn)染的基因在宿主或宿主細(xì)胞中的高表達水平，基因必須可操作地連接于在所選定表達宿主中具有功能的轉(zhuǎn)錄和翻譯表達控制序列。表達控制序列和表達載體的選擇依賴于宿主細(xì)胞的選擇?？梢允褂枚喾N表達宿主/載體組合?？捎糜谡婧怂拗鳎缯婧怂拗骷?xì)胞的表達載體為例如含有來自SV40，牛乳頭瘤病毒，腺病毒和巨細(xì)胞病毒的表達控制序列的載體，例如，下述載體pcDNAI/amp，pcDNAI/neo,pRc/CMV,pSV2gpt,pSV2neo,pSV2-dhfr,pTk2,pRSVneo,pMSG,pSVT7,pko-neo和PHyg來源的載體?？蛇x地，病毒諸如牛乳頭瘤病毒(BPV-I)，或Epstein-Barr病毒(pHEBo，pREP-來源的和p205)的衍生物可用于在真核細(xì)胞中瞬時表達蛋白質(zhì)。質(zhì)粒制備和宿主生物體的轉(zhuǎn)化中所用的多種方法是本領(lǐng)域眾所周知的。關(guān)于其它適宜的表達系統(tǒng)可以參見MolecularCloningALaboratoryManual,2ndEd.,ed.bySambrook，F(xiàn)ritsch禾口Maniatis(ColdSpringHarborLaboratoryPress:1989)第16禾口17章?？捎糜诩?xì)菌宿主的表達載體包括已知的細(xì)菌質(zhì)粒，諸如來自大腸桿菌的質(zhì)粒，包括colEl,pCRl，pBR322,pMB9及其衍生物；宿主范圍較寬的質(zhì)粒，諸如RP4，噬菌體DNA，例如，λ噬菌體的多種衍生物(例如ΝΜ989)和其它DNA噬菌體，諸如Μ13和絲狀單鏈DNA噬菌體等?？捎糜诮湍讣?xì)胞的表達載體包括2.mu.質(zhì)粒及其衍生物?？捎糜诶ハx細(xì)胞的載體包括PVL941。同樣參見，Cate等，“IsolationOfTheBovineAndHumanGenesForMullerianInhibitingSubstanceAndExpressionOfTheHumanGeneInAnimalCells“，Cell,45,pp.685-98(1986)。此外，這些載體中可使用任意的各種表達控制序列。所述可用的表達控制序列包括與前面表達載體的結(jié)構(gòu)基因相關(guān)聯(lián)的表達控制序列。可用的表述控制序列的實例包括，例如，SV40或腺病毒的早期和晚期啟動子，Iac系統(tǒng)，trp系統(tǒng)，TAC或TRC系統(tǒng)，噬菌體λ的主要操縱子和啟動子區(qū)，例如PL，fd外殼蛋白質(zhì)的控制區(qū)，3-磷酸甘油酸激酶或其它糖酵解酶的啟動子，酸性磷酸酶的啟動子，例如，Pho5，酵母α-交配系統(tǒng)的啟動子和已知控制原核或真核細(xì)胞或其病毒及其多種組合的基因表達的其它序列。任何適宜的宿主均可用于制備IFN-β治療劑，所述宿主包括細(xì)菌、真菌(包括酵母)、植物、昆蟲、哺乳動物或其它適宜的動物細(xì)胞或細(xì)胞系，以及轉(zhuǎn)基因動物或植物。示例性宿主包括大腸桿菌、假單胞菌(pseudomonas)、芽孢桿菌(Bacillus)、鏈霉菌(Streptomyces)、真菌、酵母的菌株、昆蟲細(xì)胞諸如Spodopterafruaiperda(SF9)，動物細(xì)胞諸如中國倉鼠卵巢(CHO)細(xì)胞和小鼠細(xì)胞諸如NS/0，非洲綠猴細(xì)胞諸如COS1，COS7，BSC1,BSC40和BMT10，人細(xì)胞，以及組織培養(yǎng)中的植物細(xì)胞。所述細(xì)胞可獲自美國典型培養(yǎng)物保藏中心(ATCC)。優(yōu)選用于動物細(xì)胞表達的宿主細(xì)胞包括培養(yǎng)的CHO細(xì)胞和COS7細(xì)胞，特別是CH0-DDUKY-β1細(xì)胞系。當(dāng)然，應(yīng)當(dāng)理解的是并非所有載體和表達控制序列表達本文所述的DNA序列的功能是完全相同的。所有含有相同表達系統(tǒng)的的宿主的功能也不完全相同。但是，本領(lǐng)域技術(shù)人員無需大量實驗即可在這些載體，表達控制序列和宿主中作出選擇。還應(yīng)當(dāng)考慮載體的拷貝數(shù)，控制拷貝數(shù)的能力，和由該載體編碼的任何其它蛋白質(zhì)(諸如抗生素標(biāo)記)的表達。例如，用于本發(fā)明的優(yōu)選載體包括那些能使編碼IFN-β治療劑的DNA的拷貝數(shù)擴增的載體。所述可擴增的載體是本領(lǐng)域眾所周知的。它們包括，例如，能通過DHFR擴增(參見，例如，1(811^11811，美國專利4，470，461，1(8011^11811andSharp,“ConstructionOfAModularDihydrafolateReductasecDNAGeneAnalysisOfSignalsUtilizedForEfficientExpression“，Mol.Cell.Biol.，2，pp.1304-19(1982))或谷氨酰胺合成酶(‘‘GS，，)擴增(參見，例如，美國專利5，122，464和歐洲公開的申請338，841)而被擴增的載體。在選擇表達控制序列時，還應(yīng)考慮多種因素。它們包括，例如，序列的相對強度(strength)，其可控性，及其與編碼IFN-β治療劑的實際DNA序列的相容性，特別要考慮可能的二級結(jié)構(gòu)。宿主的選擇應(yīng)當(dāng)考慮其對所選載體的相容性，本發(fā)明的DNA序列所編碼產(chǎn)物的毒性，其分泌特性，其使多肽正確地折疊的能力，其發(fā)酵或培養(yǎng)需要以及DNA序列所編碼產(chǎn)物的純化容易程度。根據(jù)這些參數(shù)，本領(lǐng)域技術(shù)人員可選擇能夠例如，利用CHO細(xì)胞或COS7細(xì)胞，在發(fā)酵或大規(guī)模動物培養(yǎng)中表達所需DNA序列的多種載體/表達控制序列/宿主組合。美國專利6，127，332中進一步描述了CHO細(xì)胞系CHO-KUKX-BIDHFRsup在表達IFN-β變體中的用途。IFN-β治療劑還可在體外系統(tǒng)中制備，例如，在體外翻譯系統(tǒng)，例如，細(xì)胞裂解物(例如，網(wǎng)織紅細(xì)胞(reticulocyte)裂解物)中。術(shù)語“體外翻譯系統(tǒng)”(其在本文中可與術(shù)語“無細(xì)胞翻譯系統(tǒng)”互換使用)是指這樣的翻譯系統(tǒng)，其為至少包含RNA分子翻譯為蛋白質(zhì)所需最少元件的無細(xì)胞提取物。體外翻譯系統(tǒng)通常包括大分子，諸如酶，翻譯，啟始和延長因子，化學(xué)試劑和核糖體。例如，體外翻譯系統(tǒng)可至少包括核糖體，tRNA,啟始物甲硫氨酰-tRNAfct，翻譯所涉及的蛋白質(zhì)或復(fù)合物，例如，eIF2，eIF3，包含帽結(jié)合蛋白(CBP)的帽結(jié)合(cap-binding(CB))復(fù)合物和真核啟始因子4F(eIF4F)。多種體外翻譯系統(tǒng)在本領(lǐng)域中是眾所周知的，包括可購得的試劑盒。體外翻譯系統(tǒng)的實例包括真核裂解物，諸如兔網(wǎng)織紅細(xì)胞裂解物，兔卵母細(xì)胞裂解物，人細(xì)胞裂解物，昆蟲細(xì)胞裂解物和麥胚提取物。裂解物可經(jīng)商業(yè)途徑從制造廠商處獲得，諸如!Iomega公司，Madison,Wis.；Stratagene,LaJolla,Calif.；Amersham,ArlingtonHeights,111.；和GIBC0/BRL，GrandIsland，N.Y。用于體外翻譯系統(tǒng)的RNA可在體外、例如采用SP6或T7啟動子、根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法來制備。在其它方法中，在宿主細(xì)胞中由內(nèi)源基因表達IFN-β治療劑。該方法可包括在IFN-β基因的編碼區(qū)上游插入導(dǎo)源啟動子，例如，誘導(dǎo)型啟動子，表達內(nèi)源IFN-β基因和回收制備的IFN-β。異源啟動子可根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法通過“敲入(knock-in)”，或可選地，通過在IFN-β基因中插入啟動子而被導(dǎo)入細(xì)胞中。根據(jù)用于制備的該治療劑的宿主生物體，按照本發(fā)明得到的IFN-β治療劑可以是糖基化的或非糖基化的。如果選用細(xì)菌作為宿主，則制備的IFN-β治療劑將是非糖基化的。另一方面，真核細(xì)胞需要糖基化的IFN-β治療劑。由轉(zhuǎn)化的宿主制備的IFN-β治療劑可根據(jù)任何適宜的方法進行純化。純化IFN-β的多種方法均為已知的。參見，例如，美國專利號4，觀9，689，4，359，389，4，172，071,4,551，271,5,244，655,4,485，017,4,257，938,4,541，952和6，127，332。在優(yōu)選的實施方案中，IFN-β治療劑通過免疫親合作用進行純化，如例如，Okamura等，“HumanFibroblastoidInterferonImmunosorbentColumnChromatographyAndN-TerminalAminoAcidSequence."Biochem.,19,pp.3831-35(1980)中所述。例如，根據(jù)常規(guī)方法，諸如提取，沉淀，層析，親合層析，電泳等，可以分離和純化所述IFN-β蛋白質(zhì)合其變體。例如，通過將其溶液通過其上固定有干擾素受體的柱子可以純化干擾素蛋白和片段(參見美國專利4，725，669)。然后通過用離液序列高的鹽處理或者通過用含水乙酸洗脫可以洗脫結(jié)合的干擾素分子。通過使含有融合蛋白的溶液通過含有選擇性結(jié)合該融合蛋白的Fc部分的固定化蛋白質(zhì)A或蛋白質(zhì)G的柱子，可以純化免疫球蛋白融合蛋白。參見，例如，Reis,K.J.，等，J.Immunol.132:3098-3102(1984)；PCT申請，申請?zhí)柖?7/003四。然后用離液序列高的鹽處理或者通過用含水乙酸洗脫可以洗脫嵌合的抗體?？蛇x地，可以在抗干擾素抗體柱上，或者在抗免疫球蛋白抗體柱上，純化干擾素蛋白和免疫球蛋白-融合分子，得到基本上純的蛋白質(zhì)。術(shù)語“基本上純的”意指所述蛋白質(zhì)不含與其天然結(jié)合的雜質(zhì)。通過電泳的單一條帶可以證實基本上純。已制備和純化的IFN-β可通過，例如肽譜法(ρ印tidemapping)進行特征描述。例如，IFN-β治療劑樣品可按照例如，美國專利號6，127，332中所述用內(nèi)蛋白酶Lys-C消化然后在反相HPLC上分析。在優(yōu)選的實施方案中，IFN-β治療劑基本上不含其它細(xì)胞性物質(zhì)，例如，蛋白質(zhì)。術(shù)語“基本純的”或“純的IFN-β治療劑制備物”是指這樣的IFN-β治療劑制劑，其含有低于約20%(以干重計)的污染性細(xì)胞性物質(zhì)，例如，核酸，蛋白質(zhì)和脂質(zhì)，優(yōu)選含有低于約5%污染性細(xì)胞性物質(zhì)。優(yōu)選的IFN-β治療劑制劑含有低于約2%的污染性細(xì)胞性物質(zhì)；甚至更優(yōu)選低于約的污染性細(xì)胞性物質(zhì)和最優(yōu)選低于約0.5；0.2；0.1；0.01；0.001%的污染性細(xì)胞性物質(zhì)。優(yōu)選的IFN-β治療劑組合物也基本上不含其它細(xì)胞性蛋白質(zhì)(本文也稱為“污染性蛋白質(zhì)”)，即，該組合物含有低于約20%(以干重計)的污染性蛋白質(zhì)，優(yōu)選含有低于約5%的污染性蛋白質(zhì)。優(yōu)選的目的多肽的制劑含有低于約2%的污染性蛋白質(zhì)；甚至更優(yōu)選低于約的污染性蛋白質(zhì)和最優(yōu)選低于約0.5;0.2;0.1；0.01；0.001%的污染性蛋白質(zhì)。IFN-β制劑的純度和濃度可根據(jù)本領(lǐng)域已知的方法進行測定，例如，通過對樣品進行凝膠電泳，如例如，RobertK.Scopes,ProteinPurification,PrinciplesAndPractice,ThirdEd.，SpringerVerlagNewYork,1993的描述(引入此處作為參考)。IFN-β治療劑的生物活性可采用本領(lǐng)域已知的任何適宜方法進行測定，例如，抗病毒活性的抗中和，誘導(dǎo)蛋白激酶，寡腺苷酸2，5-Α合成酶或磷酸二酯酶活性，例如，ΕΡ-Β1-41313和WO0(^23472中所述。所述測定法還包括免疫調(diào)節(jié)測定法(參見，例如，美國專利4，753，795)，生長抑制分析和與表達干擾素受體的細(xì)胞的結(jié)合的檢測。美國專利6，127，332和W000/23472中進一步描述了示例性抗病毒實驗。IFN-β治療劑治療腎小球腎炎的能力還可在動物模型中進行評估，例如，實施例和本文進一步描述的那些動物模型。測試可按照，例如實施例中所述進行實施。IFN-β治療劑還可以按下述商品名購得AVONEX(IFN-β-la)(Biogen公司，Cambridge，ΜΑ)；REBIF(IFN_3_la)(Serono,S.Α.，Geneva,Switzerland)以及BETAFERON或BferondFN-β-lb)(ScheringAktiengesellschaft,Berlin,Germany)，其也作為BETASERON或Bseron(Berlex，Montville,NJ；IFN-β-lb)出售。AVONEXREBIF是在中國倉鼠卵巢細(xì)胞中制備的重組野生型人糖基化IFN-β。BETAFERON和BETASERON⑧是在細(xì)菌中制備的。4.用IFN-β治療劑講行治療的方法本發(fā)明提供治療或預(yù)防個體中的神經(jīng)病的方法，包括給藥所述個體治療有效量的IFN-β治療劑，可選作為另一種治療的輔助治療。一個實施方案中，所述神經(jīng)病是脫髓鞘性神經(jīng)病，諸如慢性脫髓鞘性神經(jīng)病。慢性脫髓鞘性神經(jīng)病的實例包括CIDP和多灶性運動神經(jīng)病。優(yōu)選實施方案中，所述神經(jīng)病是CIDP。所這個體可以是已經(jīng)被鑒定為患有神經(jīng)病的個體?？筛鶕?jù)本領(lǐng)域已知方法診斷個體患有神經(jīng)病。具體地，CIDP的診斷可根據(jù)本領(lǐng)域已知方法例如本文進一步所述的進行。用IFN-β治療劑進行的治療可在任何時間在被診斷患有神經(jīng)病的人中開始。治療可在沒有神經(jīng)病表現(xiàn)，但很可能患神經(jīng)病的個體中進行。所述個體可例如通過遺傳標(biāo)準(zhǔn)鑒定。很可能患神經(jīng)病的個體還包括具有一些但不是全部通常與神經(jīng)病相關(guān)的癥狀的個體，諸如在不清楚所述個體是否事實上將患神經(jīng)病的一些情況下。治療可進行至少約1月，至少約3月，至少約6月，至少約1年，至少約3年，至少約5年或更長。個體可以是動物，諸如哺乳動物。哺乳動物的實例包括人，牛，綿羊，豬，馬，犬，貓，非人靈長類，小鼠和大鼠。一些實施方案中，IFN-β治療劑作為輔助治療給藥個體，即給藥正在接受另一種治療的個體。例如，患有CIDP的人可通過給藥IVIg;類固醇，諸如潑尼松龍(prednisolone)；或免疫抑制劑，諸如硫唑嘌呤，環(huán)孢霉素或環(huán)磷酰胺；或通過血漿交換，并接受IFN-β治療劑來進行治療。與IFN-β治療劑聯(lián)合治療可最小化其它治療的使用，所述其它治療可更有害(例如，類固醇)，更昂貴(例如，IVIg)或更不方便(血漿交換)。因此，在一些實施方案中，給藥個體IFN-β治療劑允許降低其它治療的劑量和/或頻率。例如，劑量和/或頻率可降低至少約10%,30%,50%,75%,100%(即，兩倍)，5倍，10倍或更多。上下文中給出了CIDP目前的治療標(biāo)準(zhǔn)。因此，一個實施方案中，本發(fā)明提供治療個體中慢性脫髓鞘性神經(jīng)病，例如CIDP的方法，所述個體正在接受選自下組的第一種CIDP療法給藥類固醇；給藥抗炎藥；給藥IVIg；或血漿置換，其中的改進包括給藥患者所述第一種CIDP療法以及一定劑量的IFN-β治療劑以便有效緩解CIDP的癥狀，所述一定劑量可有效地明顯降低所述第一種CIDP療法的劑量或頻率。免疫抑制劑目前用于治療CIDP。例如，發(fā)現(xiàn)類固醇對CIDP有益。通常在4周內(nèi)見到有利反應(yīng)。常用的一種類固醇是潑尼松(Prednisone)(Deltasone，0rasone，Meticorten)。潑尼松是口服皮質(zhì)類固醇，其抑制炎癥和免疫反應(yīng)，并據(jù)信改變炎癥位點的介質(zhì)功能并抑制CIDP中的免疫反應(yīng)。盡管劑量不同，大多數(shù)成年患者的開始劑量為0.5-lmg/kg/天P0(S卩，經(jīng)口)(約30-40到60-80mg/天)。在隨后的兩個月中預(yù)期出現(xiàn)改善。隨后，所述劑量可改為隔天治療，并精確地減少到允許維持患者不住院的最低有效劑量。另一種對治療CDP有效的免疫抑制劑是咪唑硫嘌呤(Azathioprine)(Imuran)，其為嘌呤類似物，并減少嘌呤代謝以及抑制DNA和RNA合成。據(jù)信咪唑硫嘌呤通過抑制對神經(jīng)的免疫介導(dǎo)的損傷來減輕CIDP的失能以及癥狀。初始劑量為約50mgPOqd(通過口服，每天一次)，通常逐漸增加到每日劑量2-;3mg/kg/天P0。盡管咪唑硫嘌呤的治療劑量難以針對每個患者確定；一些證據(jù)提示評估紅細(xì)胞體積(MCV)可指示治療劑量。治療反應(yīng)在6個月以后顯示。另一種目前用于治療CIDP的免疫抑制劑是霉酚酸酯(CellC印t)，其為免疫治療劑霉酚酸(mycophenolicacid)的前體藥物。據(jù)信霉酚酸酯通過抑制酶次黃嘌呤核苷單磷酸脫氫酶(inosinemonophosphatedehydrogenase)來抑制淋巴細(xì)胞嘌呤合成。成年人常用劑量為250mg-3g/天，可根據(jù)臨床效果調(diào)整。由11個氨基酸組成的環(huán)狀多肽環(huán)孢霉素(Sandimmune，Neoral)也可用于治療CIDP。環(huán)孢霉素抑制T細(xì)胞活化的第一階段并且不影響體液免疫。據(jù)信通過抑制T細(xì)胞，環(huán)孢霉素可抑制炎癥/免疫反應(yīng)位點細(xì)胞介導(dǎo)的神經(jīng)損傷。通常，其初始劑量為5mg/kg/天PO分開bid(口服，一天兩次)，并根據(jù)反應(yīng)增加劑量。監(jiān)測谷值和峰值水平以記錄有效性并避免毒性；盡管沒有鑒定到明確的CIDP特異性所需谷值水平，通常用于免疫疾病的谷值水平為100-250。另一免疫抑制劑是環(huán)磷酰胺(Cytoxan)，其為細(xì)胞周期非特異性抗腫瘤劑，以及作為烷化劑的免疫抑制劑。所述劑量通常為Hmg/kg/dP0。治療CIDP患者的另一種標(biāo)準(zhǔn)方法為通過靜脈內(nèi)給藥免疫球蛋白(IVIg)。用于IV輸注的溶液通常主要包含異源人IgG，但也包含少量的IgA和IgM。一些實施方案中，所述IV溶液對于抗體識別的表位而言是異源的，例如所述溶液不是用具體抗原免疫動物所得抗體的制備物。推定作用的基質(zhì)基于IVIg含有可中和免疫因子的隨機抗體組，導(dǎo)致CIDP中的周圍神經(jīng)破壞。平均而言，在第10天見到改善并持續(xù)到第42天。其血清半壽期約為21-天。患者通常需要每數(shù)周或月進行重復(fù)治療以便維持疾病緩解或者治療復(fù)發(fā)情況。通常劑量為0.4-2g/kg，通常分為每天5次，每次400mg/kg。治療可在較高的劑量(例如2g/kg)開始，隨后降低到較低劑量(例如0.5-lg/kg)。給藥頻率各不相同，大多數(shù)患者每2-8周接受劑量。例如IVIG給藥可為在數(shù)天中、0.4g/kg到每1-4周給藥l_2g/kg。另一種認(rèn)可的CIDP療法為血漿置換(或血漿交換)。這種治療據(jù)信去除負(fù)責(zé)免疫介導(dǎo)的周圍神經(jīng)損傷的抗體和補體成分。血漿通過與透析類似的方法從血液中去除。其效力似乎與CIDP的IVIg治療類似。通?；颊咴谇皟芍苊恐芙?jīng)3次血漿交換；然后，治療的數(shù)量和頻率根據(jù)臨床反應(yīng)確定。因此，IFN-β治療劑可與以下治療聯(lián)合用藥給藥免疫治療劑(例如類固醇)；給藥IVIg和/或血漿置換。IFN-β治療劑和輔助藥物可同時或序貫給藥。如果序貫給藥，可在同一天或不同日子給藥。當(dāng)IFN-β治療與血漿置換聯(lián)合時，IFN-β治療劑可在血漿置換后給藥，使得在血漿置換中沒有去除IFN-β治療劑。當(dāng)IFN-β與IVIg治療聯(lián)用時，所述兩種不同藥物的給藥優(yōu)選分隔至少1或2小時。另一實施方案中，將IFN-β治療劑給藥被發(fā)現(xiàn)難以用另一種CIDP治療(諸如上文所述的那些)控制的個體。在其它情況下，IFN-β治療可給藥沒有發(fā)現(xiàn)其難以用另一種CIDP治療控制的個體。例如，IFN-β治療劑可給藥對一或多種其它治療有反應(yīng)的個體。在另一實施方案中，將IFN-β治療劑給藥初始(nai've)個體，即其以前沒有使用任何ClDP治療。當(dāng)個體以前沒有接受過CIDP治療時，用IFN-β治療劑的治療包括首先鑒定患有CIDP或很可能患CIDP的個體。治療也可如下進行將IFN-β治療劑給藥正接受第一種CIDP療法，諸如IVIG的人，并持續(xù)所述聯(lián)合治療一段時間，然后停用所述第一種CIDP療法。所述第一種CIDP療法可逐漸停用，諸如通過降低所述第一種CIDP療法的劑量和/或頻率。在說明性實施方案中，患者每兩周或每四周接受一次IVIG。所述個體隨后接受IFN與IVIG的聯(lián)合治療，諸如每周給藥IFN-β治療劑一次或兩次。所述聯(lián)合治療可持續(xù)約10-20周，例如約16周。在聯(lián)合治療期間，優(yōu)選IVIg和IFN-β治療劑的給藥相隔至少約1-3小時，諸如至少約2小時。約16周后，中斷或減少所述第一種CIDP療法。例如，所述個體隨后接受較小劑量的IVIg或降低給藥頻率。在停用或減量所述第一種CIDP療法后沒有改善的個體中，可恢復(fù)所述第一種CIDP療法，并繼續(xù)與IFN-β治療劑一起聯(lián)合治療。通常，IFN-β治療劑可通過任何途徑給藥。例如，IFN-β治療劑可直接給藥個體，例如經(jīng)局部(如通過注射或局部給藥組織位點)或經(jīng)系統(tǒng)給藥(例如經(jīng)胃腸外或口服)。局部給藥包括，例如，直接給藥受影響的肌肉。胃腸外給藥包括氣霧劑(aerosol)、經(jīng)皮下、經(jīng)靜脈內(nèi)、經(jīng)肌肉內(nèi)、經(jīng)關(guān)節(jié)內(nèi)、經(jīng)滑膜腔內(nèi)、經(jīng)胸骨內(nèi)(intrasternal)、經(jīng)鞘內(nèi)(intrathecal)、經(jīng)肝內(nèi)、經(jīng)損傷內(nèi)(intralesional)和經(jīng)顱內(nèi)注射或輸注技術(shù)?？梢酝ㄟ^周期性注射本文所述藥物(即，IFN-β治療劑)的藥團(bolus)來給藥，或可經(jīng)由外部容器(例如，靜脈注射袋)或內(nèi)部容器(例如，可生物蝕解的植入物或植入的泵)通過靜脈內(nèi)或腹膜內(nèi)更連續(xù)地給藥。IFN-β治療劑優(yōu)選作為包含可藥用載體的無菌藥物組合物給藥。本交術(shù)語“載體”包括可接受的佐劑和載體。可用于本發(fā)明的藥物組合物中的可藥用載體包括(但不限于)離子交換劑、鋁、硬脂酸鋁、卵磷脂、血清蛋白(諸如人血清白蛋白)、緩沖物質(zhì)諸如磷酸鹽、甘氨酸、山梨酸、山梨酸鉀、飽和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物、水、鹽或電解質(zhì)類，諸如硫酸谷醇溶蛋白(prolaminesulfate)、磷酸氫二鈉，磷酸氫鉀，氯化鈉，鋅鹽，膠體硅，三硅酸鎂，聚乙烯吡咯烷酮，基于纖維素的物質(zhì)，聚乙二醇，羧甲基纖維素鈉，聚丙烯酸酯，蠟，聚乙烯-聚氧苯烯-嵌段聚合物，聚乙二醇和羊毛脂(woolfat)，葡聚糖，甘油，乙醇等及其組合物。IFN-β治療劑可被制成包含一種或多種其它蛋白質(zhì)(例如用于穩(wěn)定IFN-β治療劑)的組合物。例如，IFN-β治療劑可與白蛋白混合。當(dāng)經(jīng)胃腸外(諸如通過靜脈內(nèi)、皮下或肌肉內(nèi))施用IFN-β治療劑時，其優(yōu)選包括部分水溶液。該溶液是生理學(xué)上可接受的，以便除將所需藥物遞送給該個體外，該溶液不會另外地對該個體的電解質(zhì)和/或容量平衡產(chǎn)生不利作用。因此，用于藥物的水介質(zhì)可包括普通生理鹽水(例如，0.9%NaCl,0.15M，pH7-7.4)。用于胃腸外給藥的溶液可通過制藥領(lǐng)域己知的任何方法制備，其在例如Remington'sPharmaceuticalSciences(Gennaro,Α.，ed.)，MackPub.，1990中描述。根據(jù)本發(fā)明的，藥物組合物可以是無菌注射劑形式，例如無菌注射水性混懸劑或油性混懸劑。該混懸劑可按照本領(lǐng)域已知的方法采用適宜的分散劑或濕潤劑和混懸劑進行配制。無菌注射劑還可以是在無毒胃腸外可接受的稀釋劑或溶劑中的無菌注射溶液或混懸劑，例如1，3_丁二醇溶液。可使用的可接受的載體和溶劑是水，林格液和等滲氯化鈉溶液。此外，無菌、非揮發(fā)油通?？杀挥米魅軇┗驊腋〗橘|(zhì)。為這一目的，可使用任何溫和的非揮發(fā)油，包括合成甘油一酯或甘油二酯。和天然藥物學(xué)上可接受的油諸如橄欖油或蓖麻油(具體為所述油的聚氧乙烯形式)一樣，脂肪酸諸如油酸及其甘油酯衍生物也可用于制備注射劑。這些油溶液或混懸劑還可包括長鏈醇稀釋劑或分散劑。包含IFN-β治療劑的藥物組合物還可以經(jīng)口服給藥。例如，其可通過任何口服可接受的劑型，包括(但不限于)膠囊、片劑、水混懸劑或溶液進行施用。在用于口服使用的片劑的情況下，通常使用的載體包括乳糖和玉米淀粉。通常，還要加入潤滑劑，諸如硬脂酸鎂。對于以膠囊劑形式的口服施用，可用的溶劑包括乳糖和干玉米淀粉。當(dāng)口服使用需要水混懸劑時，將活性成分與乳化劑和懸浮劑聯(lián)合。如需要，還可以加入一些甜味劑、調(diào)味劑或著色劑。還可以使用局部透皮貼劑。本發(fā)明的藥物組合物還可通過鼻氣霧劑進行施用或使用霧化器、干粉吸入器或壓力定量氣霧劑來吸入。所述組合物可根據(jù)藥物配制領(lǐng)域眾所周知的技術(shù)進行制備，并可制備為鹽水溶液，其可使用苯甲醇或其它適宜的保存劑，增強生物利用度的吸收促進劑，碳氟化合物和/或其它常規(guī)增溶劑或分散劑。IFN-β或其變體還可以采用脂質(zhì)體遞送系統(tǒng)(諸如小型單層泡，單層大泡和多層泡)的形式進行施用。脂質(zhì)體可由多種磷脂制得，所述磷脂包括膽固醇、硬脂酰胺(stearylamine)或磷脂酰膽堿。在一些實施方案中，脂質(zhì)部分的膜通過與水溶液水合從而形成包封藥物的脂質(zhì)層，如美國專利5，262,564中所述。脂質(zhì)體可含有指導(dǎo)它們到達具體細(xì)胞或組織的表面分子。這種修飾的脂質(zhì)體可根據(jù)本領(lǐng)域已知方法制備。IFN-β或其變體還可以與作為可靶向的藥物載體的可溶性聚合物偶聯(lián)。所述聚合物可包括聚乙烯吡咯烷酮(polyvinylpyrrolidone)、吡喃共聚物、聚羥丙基-甲基丙烯酰胺-苯酚(polyhydroxypropyl-methacrylamide-phenol)、聚羥基乙基天冬酰胺苯酚(ρolyhydroxyethylaspanaidephenol)或軟脂酰(palmitoyl)殘基取代的聚氧化乙烯聚賴氨酸(polyethyleneoxid印olylysine)。IFN-β或其變體還可以與蛋白質(zhì)，諸如受體蛋白質(zhì)和白蛋白等偶聯(lián)。此外，IFN-β或其變體可與用于實現(xiàn)藥物的控制性釋放的生物可降解聚合物類偶聯(lián)，所述聚合物例如，聚乳酸，聚ε己內(nèi)酯(poly印siloncaprolactone)，聚羥基丁酸，聚原酸酯(polyorthoester)，聚縮醛(polyacetals)，聚二氫吡喃，聚氰基丙烯酸酯(polycyanoacrylates)和水凝膠的交聯(lián)的或兩親性嵌段共聚物相偶聯(lián)。IFN-β也可提供為包含穩(wěn)定劑的液體組合物。穩(wěn)定劑的存在量可以是IFN-β或其變體重量比的0.3%至5%。穩(wěn)定劑可以是氨基酸，諸如酸性氨基酸(例如，谷氨酸和門冬氨酸)或精氨酸或甘氨酸。如果穩(wěn)定劑是精氨酸-HCl，其濃度將優(yōu)選為0.5%(w/v)至5%，最優(yōu)選為3.13%(等效于150mM精氨酸-HC1)。如果穩(wěn)定劑是甘氨酸，其濃度將優(yōu)選為0.5%(w/v)至2.0%，最優(yōu)選為0.52%(等效于66.7mM至洸6.4mM,最優(yōu)選70mM)。如果穩(wěn)定劑是谷氨酸，其濃度將優(yōu)選為IOOmM至200mM，最優(yōu)選為170mM(等效于1.47%至2.94%的w/v百分?jǐn)?shù)且最優(yōu)選為2.5%)。液體制劑中IFN-β或其變體的優(yōu)選濃度范圍為約30μg/ml至約250μg/ml。優(yōu)選濃度范圍為48至78μg/ml，例如約60μg/ml。所述量有賴于，例如具體IFN-β治療劑的比活性。通常，劑量范圍為約1百萬國際單位(MIU)-約50MIU，例如，約3，6，9或12MIU每劑。一個實施方案中，氨基酸穩(wěn)定劑是是精氨酸，所述精氨酸以其酸性形式(精氨酸-HC1)摻入約pH5.0的溶液中。由此，優(yōu)選多離子型(poly-ionic)賦形劑。優(yōu)選地，液體組合物被包含在容器例如注射器內(nèi)，其中所述容器具有與液體接觸的表面，該表面已涂覆了對IFN-β惰性的物質(zhì)，例如，硅酮或聚四氟乙烯。更優(yōu)選的組合物的pH為4.0-7.2。一些實施方案中，包含穩(wěn)定劑的溶液優(yōu)選未被凍干和/或在制備和保存期間未被置于包含氧氣的氣體中。用于在本發(fā)明中將pH保持在約4.0-約7.2的范圍，諸如約4.5_約5.5，例如5.0的有機酸和磷酸鹽緩沖液可以是有機酸及其鹽的常規(guī)緩沖液，諸如枸櫞酸鹽緩沖液(例如，枸櫞酸一鈉-枸櫞酸二鈉混合物，枸櫞酸-枸櫞酸三鈉混合物，枸櫞酸-枸櫞酸一鈉混合物，等)，琥珀酸鹽緩沖液(例如，琥珀酸-琥珀酸一鈉混合物，琥珀酸-氫氧化鈉混合物，琥珀酸-琥珀酸二鈉混合物，等)，酒石酸鹽緩沖液，延胡索酸鹽緩沖液，葡萄糖酸鹽緩沖液，草酸鹽緩沖液，乳酸鹽緩沖液，磷酸鹽緩沖液，和醋酸鹽緩沖液，如WO98/28007中所述。示例性制劑(按WO98/38007中所述進行制備)包括(i)pH5.0的20mM醋酸鹽緩沖液，該緩沖液優(yōu)選預(yù)先未被凍干，其中緩沖液包含IFN-β和至少一種選自如下的成分(a)150mM精氨酸-HCl；(b)IOOmM氯化鈉和7OmM甘氨酸；(c)150mM精氨酸-HCl和15mg/ml人血清白蛋白；(d)150mM精氨酸-HCl和0.1%PluronicF-68；(e)140mM氯化鈉；(f)140mM氯化鈉和15mg/ml人血清白蛋白；和(g)140mM氯化鈉和0.1%PluronicF-68；(ii)包含IFN-β或其變體，170mML-谷氨酸和150mM氫氧化鈉的pH5.0的液體，該液體優(yōu)選預(yù)先未被凍干；和(iii)pH7.2的20mM磷酸鹽緩沖液，該緩沖液優(yōu)選預(yù)先未被凍干，其中緩沖液包含IFN-β和至少一種選自如下的成分(a)140mM精氨酸-HCl和(b)IOOmM氯化鈉和70mM甘氨酸。優(yōu)選的組合物還包括聚山梨醇酯，例如，0.005%w/v的聚山梨醇酯20。IFN-β或其變體還可與可溶性IFNI型受體或其一部分，諸如該受體的IFN-結(jié)合鏈聯(lián)合施用，諸如，例如美國專利6，372，207中所述。如該專利所述，以I型IFN與所述受體的IFN結(jié)合鏈的復(fù)合物形式給藥改善了IFN的穩(wěn)定性并增強了IFN的效力。該復(fù)合物可以是非共價復(fù)合物或共價復(fù)合物。IFN-β可被配制為干粉形式，其在施用于個體之前可被或可不被溶解或混懸。具體而言，已經(jīng)顯示出與聚合物(例如，PEG)結(jié)合的IFN-β在干燥形式下特別穩(wěn)定(參見，例如，WO00/23114和PCT/US/95/06008)。配制的組合物包含治療有效量的IFN-β治療劑。即，它們包含這樣的IFN-β治療劑的量，所述IFN-β治療劑的量在足以防止、抑制、延緩或減輕持久或進行性肌肉功能喪失、或者提供有效治療的時間內(nèi)，為肌肉組織或其它適宜的組織提供適宜濃度的IFN-β治療劑。本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)能理解，治療劑組合物中IFN-β治療劑的濃度將根據(jù)很多因素，包括所選IFN-β治療劑的生物效能，所使用IFN-β治療劑的化學(xué)特性(例如，疏水性)，IFN-β治療劑賦形劑的配制，給藥途徑和所擬定的治療(包括將IFN-β治療劑直接施用于組織還是將其系統(tǒng)給藥)。優(yōu)選的給藥物量也可有賴于諸如個體的組織的狀況，肌肉喪失程度和具體個體的整體健康狀態(tài)等變量。其也可依賴患者年齡，體重，性別，總體健康，飲食和排泄速率，以及所述個體對副作用的敏感性，以及IFN-β治療劑是否與其它藥物共同給藥。普通熟練醫(yī)師或獸醫(yī)可很容易地確定并給出有效預(yù)防、逆轉(zhuǎn)或阻止病癥進展所需的IFN-β治療劑有效量。所述劑量可連續(xù)，或每日施用，但目前優(yōu)選的是只要能維持滿意的反應(yīng)(如例如，通過測定適宜的醫(yī)學(xué)指標(biāo)和/或生命質(zhì)量指征所檢測到的疾病的穩(wěn)定和/或改善)，即可每周一次、兩次或三次施用所述劑量。還可以采用頻率較低的劑量(例如每月劑量)。為易于頻繁輸注，可植入半-永久性支架(例如，靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)或囊內(nèi)(intracapsular))。任何上述藥物組合物可包含0.1-99%，1-70%，或優(yōu)選，1_50%IFN-β治療劑作為活性成分。對于任何施用途徑，可使用分開的(divided)或單次劑量。例如，IFN-β治療劑可每日或每周以單次劑量施用，或?qū)⒖倓┝恳远?、三或四個分開的劑量進行施用。IFN-β治療劑給藥的劑量水平可為約0.001-約100mg/kg體重每劑，例如，約0.1-約50mg/kg體重；約0.lmg/kg體重-約20mg/kg體重；或約lmg/kg體重-約3mg/kg體重。這些劑量可以每1-14天的間隔給藥，諸如每天，每隔一天，每隔兩天，每隔四天，每周一次或每周兩次。根據(jù)具體IFN-β治療劑的比活性，也可以約10-約IOOyg/劑量，諸如約20-約50μg/劑量，例如，約30μg/劑量給藥。對于國際單位，IFN-β治療劑給藥可為約1-30MIU/劑量，諸如3-20MIU/劑量，例如，3-12MIU，優(yōu)選劑量包括約3MIU，6MIU和12MIU每劑。所述給藥劑量優(yōu)選約每周給藥一或兩次。劑量的優(yōu)化可，，例如，通過給藥IFN-β治療劑，然后評估IFN-β治療劑的循環(huán)或局部濃度來進行。在具體實施方案中，當(dāng)IFN-β治療劑的給藥通過在一周中采用皮下注射來遞送0.01-100μg/kg，或更優(yōu)選0.01-10μg/kg的IFN-β，例如，PEG化IFN-β時，分別在0和72小時注射0.005-50μg/μg,或更優(yōu)選0.005-5μg/kg。此外，根據(jù)美國專利3，710，795(引入此處作為參考)，胃腸外施用的一種途徑采用了植入緩釋或持續(xù)釋放系統(tǒng)，其能確保劑量水平恒定。本發(fā)明的口服劑量(優(yōu)選對于PEG化IFN-β治療劑而言)為約0.01-100μg/kg/日，口服；或更優(yōu)選0.01-10μg/kg/日，口服。組合物優(yōu)選以包含0.5-5000μg，或更優(yōu)選0.5-500UgIFN-β治療劑的刻痕片(seoredtablet)的形式提供。優(yōu)選實施方案中，患有神經(jīng)病例如CIDP的個體通過肌肉內(nèi)給藥IFN-β治療劑而用IFN-β治療劑治療。IFN-β治療劑可每周給藥一次。在更為優(yōu)選的實施方案中，IFN-β治療劑以約6MIU的劑量每周給藥所述個體一次。其它實施方案中，通過每周給藥約6MIU的IFN-β治療劑一次治療個體，所述給藥不必是經(jīng)肌內(nèi)的。一些實施方案中，IFN-β治療劑在一定時間內(nèi)按一種方案給藥，隨后按另一種方案給藥。例如，個體每周接受一次IFN-β治療劑，持續(xù)兩個月，然后下一個月中每周接受兩次。個體可首先通過皮下給藥治療，然后經(jīng)肌內(nèi)給藥治療。其它方案中，具體劑量、給藥方式或IFN-治療劑在下一次給藥中可改變?yōu)椴煌瑒┝?、給藥方式或IFN-治療劑。在最優(yōu)選的實施方案中，對需要的個體施以AVONEX。AVONEX作為包含下述物質(zhì)的凍干粉售賣每Iml劑量的配制30mcg干擾素-b-la(6百萬國際單位(MIU))50mM磷酸鈉IOOmM氯化鈉15mg人血清白蛋白pH7.2AVONEX干擾素的比活為2XIO8單位/mg，即，200MU抗病毒活性/每毫克的IFN-b-la蛋白質(zhì)。患者用無菌水重新溶解該粉劑，然后每周一次通過肌肉內(nèi)注射1ml。AVONEX還可按包含下述物質(zhì)的液體制劑進行制備每0.5ml劑量的配制30mcg(μg)IFN-b-la(6百萬國際單位(MIU))20mM醋酸鹽(醋酸鈉和醋酸)150mM精氨酸HCl0.005%w.ν聚山梨醇酯20注射用水pH4.8該制劑可包裝在載藥(pre-filled)注射器內(nèi)?；颊呖墒謩邮褂盟峁┑淖⑸淦骰蚺c自動注射器(autoinjector)聯(lián)合使用。給藥方案為每周一次通過肌肉內(nèi)注入6MUI(即，30mcg)。在另一實施方案中，IFN-β是REBIF，其作為凍干粉和液體制劑提供。凍干粉包含下列物質(zhì)每2.Oml劑量的配制3MIUIFN-b-la甘露醇HSA醋酸鈉pH5.5REBIF干擾素的比活為2.7XIO8單位/mg，即，270MU抗病毒活性/每毫克IFN-b-la蛋白質(zhì)?；颊哂寐然c溶液(0.9%NaCl)重新溶解該粉劑，隨后每周三次通過皮下注射。液體REBIF的配制如下每0.5ml劑量的配制6或12MIUIFN-b-la4或2mgHSA27.3mg甘露醇O.^ig醋酸鈉注射用水該液體制劑可包裝在載藥注射器內(nèi)，可以用或不用自動注射器裝置(Rebiject)每周三次(6或12MIU，分別對應(yīng)于66μg/周或132μg/周)經(jīng)皮下施用。而在另一實施方案中，IFN-β是BETASERON(獲自Berlex)，其為在大腸桿菌中制備的包含cys-17至ser突變的IFN-β。該非糖基化IFN-β的效力低于在CHO細(xì)胞中產(chǎn)生的AVONEX或REBIF。以250mcg(8Mlu)的劑型(包括凍干和液體制劑)售賣所述藥劑，其用于每隔一日經(jīng)皮下注射。BETAFERON為另一可購得的lFN-β，其可根據(jù)制造商說明書經(jīng)皮下施用。除了IFN-beta治療劑以及可選的另一種治療，個體也可接受治療神經(jīng)性疼痛(neuropathicpain)的藥物，例如抗癲癇藥物。最常用的藥物是加巴噴丁(gabapentin)(Neurontin)和卡馬西平(carbamazepine)(Tegretol)可選，三環(huán)類抗抑郁藥(例如，阿米替林(amitriptyline)(Elavil))也可用于治療神經(jīng)性疼痛。所述疾病的病程及其對藥物的反應(yīng)可通過臨床檢驗和實驗室發(fā)現(xiàn)隨診。本發(fā)明治療的有效性可通過前述病癥和疾病癥狀緩解的程度以及干擾素的正常副作用(即流感樣癥狀，例如發(fā)燒，頭痛，寒戰(zhàn)，肌痛，疲勞等，以及中樞神經(jīng)系統(tǒng)相關(guān)癥狀諸如抑郁，感覺異常(paresthesia)，注意力集中障礙(impairedconcentration)等)被消除或基本減輕的程度來確定。本發(fā)明通過下述實施例(非限制性的)進一步進行描述。所有引用的參考文件(包括如本申請全文引用的參考文獻，公布的專利，公開的專利申請)的內(nèi)容清楚地包含在本文中作為參考。除非另有所指，本發(fā)明的實施將采用細(xì)胞生物學(xué)，細(xì)胞培養(yǎng)，分子生物學(xué)，轉(zhuǎn)基因生物學(xué)，微生物學(xué)，重組DNA和免疫學(xué)的常規(guī)技術(shù)，其為本領(lǐng)域的常規(guī)技術(shù)?，F(xiàn)有文件中對所述技術(shù)有詳細(xì)的解釋。參見,例如,MolecularCloningALaboratoryManual,2ndEd.，ed.bySambrook,Fritsch禾口Maniatis(ColdSpringHarborLaboratoryPress:1989)；DNACloning,VolumeslandII(D.N.Glovered.,1985)；OligonucleotideSynthesis(M.J.Gaited.，1984);Mullis等，美國專^lJ4,683,195；NucleicHybridization(B.D.Hames&S.J.Higginseds.1984)；TranscriptionAndTranslation(B.D.Hames&S.J.Higginseds.1984)；CultureOfAnimalCells(R.I.Freshney,AlanR.Liss,Inc.,1987)；ImmobilizedCellsAndEnzymes(IRLPress,1986)；B.Perbal,APracticalGuideToMolecularCloning(1984)；thetreatise,MethodsInEnzymology(AcademicPress,Inc.,N.Y.)；GeneTransferVectorsForMammalianCells(J.H.MillerandM.P.Caloseds.,1987,ColdSpringHarborLaboratory)；MethodsInEnzymology,Vols.154and155(Wu等eds.),ImmunochemicalMethodsInCellAndMolecularBiology(MayerandWalker,eds.,AcademicPress,London,1987)；HandbookOfExperimentalImmunology,VolumesI-IV(D.M.WeirandC.C.Blackwell,eds.,1986)；ManipulatingtheMouseEmbryo,(ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,N.Y.,1986)。實施例實施例1用IFN-β-Ia治療CIDP患者用IVIg治療的CIDP患者將如下改為用IFN-β-Ia治療。經(jīng)由肌內(nèi)注射將IFN-β-Ia給藥確診為CIDP并穩(wěn)定地每兩周一次或每四周一次用IVIg治療的患者30mcg(6MIU)AVONEX每周一次；30mCg(6MIU)AVONEX每周兩次；60mcg(12MIU)AVONEX每周一次；或60mcg(12MIU)AVONEX每周兩次。當(dāng)在同一天給藥IVIg和IFN-β-Ia時，所述給藥分隔至少2小時。所述患者將接受所述聯(lián)合治療16周，在此期間，約每四周評估患者的疾病狀態(tài)一次。在第16周，停用IVIg并按如前述方案進行IFN-β-Ia治療。在患者內(nèi)持續(xù)檢測所述疾病。如果患者經(jīng)過聯(lián)合治療后好轉(zhuǎn)，將保持(reinstate)IVIg治療。隨后通過逐漸降低IVIg給藥的量或頻率來減量IVIg。等同物本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)理解，或能夠確定利用常規(guī)實驗，可獲得所述本發(fā)明的具體實施方案的多種等同物。所述等同物意在包含在權(quán)利要求內(nèi)。權(quán)利要求1.IFN-β治療劑在制備用于治療慢性脫髓鞘性運動神經(jīng)病的藥物中的用途。2.權(quán)利要求1的用途，其中所述IFN-β治療劑是經(jīng)由非皮下的胃腸外途徑給藥的治療劑。3.權(quán)利要求2的用途，其中所述IFN-β治療劑是經(jīng)肌內(nèi)給藥的治療劑。4.權(quán)利要求1-3之一的用途，其中所述慢性脫髓鞘性運動神經(jīng)病是慢性炎性脫髓鞘性神經(jīng)病(CIDP)。5.權(quán)利要求1-4之一的用途，其中所述IFN-β治療劑包含成熟IFN-β。6.權(quán)利要求1-5之一的用途，其中所述IFN-β治療劑缺乏第一個蛋氨酸。7.權(quán)利要求1-6之一的用途，其中所述IFN-β是人IFN-β。8.權(quán)利要求7的用途，其中所述IFN-β與具有SEQIDNO:4的全長成熟人IFN-β具有至少約95%的同一性。9.權(quán)利要求8的用途，其中所述IFN-β包含SEQIDNO:4。10.權(quán)利要求1-9之一的用途，其中所述IFN-β是糖基化的。11.權(quán)利要求1-9之一的用途，其中所述IFN-β是非糖基化的。12.權(quán)利要求7的用途，其中所述IFN-β是IFN-β-la。13.權(quán)利要求7的用途，其中所述IFN-β是IFN-β-Ib。14.權(quán)利要求1-13之一的用途，其中所述IFN-β治療劑包括與免疫球蛋白分子恒定區(qū)融合的IFN-β。15.權(quán)利要求14的用途，其中所述免疫球蛋白分子是人免疫球蛋白分子。16.權(quán)利要求15的用途，其中所述免疫球蛋白分子是IgGl的重鏈。17.權(quán)利要求16的用途，其中所述IFN-β包含SEQIDNO:14。18.權(quán)利要求1-17之一的用途，其中所述IFN-β治療劑包括PEG化的IFN-β。19.權(quán)利要求1-18之一的用途，其中所述藥物包含穩(wěn)定劑。20.權(quán)利要求19的用途，其中所述穩(wěn)定劑是酸性氨基酸。21.權(quán)利要求20的用途，其中所述穩(wěn)定劑是精氨酸。22.權(quán)利要求1-21之一的用途，其中所述藥物的ρΗ為約4.0到7.2。23.權(quán)利要求1-2及4-22之一的用途，其中所述IFN-β治療劑通過靜脈內(nèi)(i.v.)給藥。24.權(quán)利要求之1-23之一的用途，包括將數(shù)個劑量的IFN-β治療劑給藥哺乳動物。25.權(quán)利要求M的用途，其中所述IFN-β治療劑以約6MIU的劑量每周施用一次。26.權(quán)利要求M的用途，其中所述IFN-β以約6MIU的劑量每周施用兩次。27.權(quán)利要求M的用途，其中所述IFN-β治療劑以約12MIU的劑量每周施用一次。28.權(quán)利要求M的用途，其中所述IFN-β治療劑以約12MIU的劑量每周施用兩次。29.權(quán)利要求1-之一的用途，其中所述藥物是施用于人的藥物。30.權(quán)利要求1-之一在制備藥物中的用途，所述藥物是施用于下述個體的藥物，其中以前沒有發(fā)現(xiàn)所述個體抵抗慢性脫髓鞘性神經(jīng)病的其它治療。31.權(quán)利要求1-30之一的用途，其中所述藥物與包含免疫抑制劑或血漿置換的治療聯(lián)用給藥。32.權(quán)利要求30的用途，其中所述藥物與包含免疫抑制劑的治療聯(lián)合給藥，所述免疫治療劑選自類固醇，硫唑嘌呤，環(huán)孢霉素，環(huán)磷酰胺或霉酚酸酯。33.權(quán)利要求2-32之一的用途，其中所述藥物給藥與包含第二種CIDP療法的治療聯(lián)合，其中IFN-β治療劑是經(jīng)由非皮下的胃腸外途徑給藥的治療劑。34.權(quán)利要求2-32之一的用途，其中所述藥物與包含第二種CIDP療法的治療聯(lián)合給藥，其中每周給藥IFN-β治療劑一次。35.權(quán)利要求33或34的用途，其中所述第二種CIDP療法選自給藥IVIg；給藥類固醇；給藥抗炎藥或血漿置換。36.權(quán)利要求1-30之一的用途，其中將所述藥物給藥正接受另一種療法的個體以便治療慢性脫髓鞘性運動神經(jīng)病，且上述治療還包括停用所述另一種療法。37.IFN-β治療劑在制備治療慢性脫髓鞘性運動神經(jīng)病的藥物中的用途，其中所述IFN-β治療劑是與包含免疫抑制劑、抗炎藥或血漿置換的治療聯(lián)用給藥的治療劑。38.權(quán)利要求37的用途，其中所述IFN-β治療劑是與包含免疫抑制劑或血漿置換的治療聯(lián)用給藥的治療劑。39.權(quán)利要求37的用途，其中所述聯(lián)合治療是給藥IFN-β治療劑和免疫抑制劑。40.權(quán)利要求39的用途，其中所述免疫抑制劑選自類固醇，硫唑嘌呤，環(huán)孢霉素，環(huán)磷酰胺或霉酚酸酯。41.權(quán)利要求37的用途，其中所述聯(lián)合治療是給藥IFN-β治療劑和抗炎藥。42.權(quán)利要求37的用途，其中所述聯(lián)合治療是血漿置換和給藥IFN-β治療劑。43.權(quán)利要求37-42之一的用途，其中所述藥物是施用于下述個體的藥物，其中以前沒有發(fā)現(xiàn)所述個體抵抗慢性脫髓鞘性神經(jīng)病的其它治療。44.權(quán)利要求37-43之一的用途，所述IFN-β治療劑是經(jīng)由非皮下的胃腸外途徑給藥的治療劑。45.權(quán)利要求44的用途，其中所述IFN-β治療劑是經(jīng)肌內(nèi)給藥的治療劑。46.權(quán)利要求44的用途，其中所述IFN-β治療劑是通過靜脈內(nèi)給藥的治療劑。47.權(quán)利要求37-46之一的用途，其中所述慢性脫髓鞘性神經(jīng)病是慢性炎性脫髓鞘性神經(jīng)病。48.權(quán)利要求37-47之一的用途，其中所述IFN-β治療劑包含成熟IFN-β。49.權(quán)利要求37-48之一的用途，其中所述IFN-β治療劑缺乏第一個蛋氨酸。50.權(quán)利要求37-49之一的用途，其中所述IFN-β是人IFN-β。51.權(quán)利要求37-50之一的用途，其中所述與具有SEQIDNO:4的全長成熟人IFN-β具有至少約95%的同一性。52.權(quán)利要求51的用途，其中所述IFN-β包含SEQIDNO:4。53.權(quán)利要求37-52之一的用途，其中所述IFN-β是糖基化的。54.權(quán)利要求37-52之一的用途，其中所述IFN-β是非糖基化的。55.權(quán)利要求50的用途，其中所述IFN-β是IFN-β-la。56.權(quán)利要求50的用途，其中所述IFN-β是IFN-i3-lb。57.權(quán)利要求37-56之一的用途，其中所述IFN-β治療劑包括與免疫球蛋白分子恒定區(qū)融合的IFN-β。58.權(quán)利要求57的用途，其中所述免疫球蛋白分子是人免疫球蛋白分子。59.權(quán)利要求57的用途，其中所述免疫球蛋白分子是IgGl的重鏈。60.權(quán)利要求59的用途，所述IFN-β包含SEQIDNO:14。61.權(quán)利要求37-60之一的用途，其中所述IFN-β治療劑包括PEG化的IFN-β。62.權(quán)利要求37-61之一的用途，其中所述IFN-β治療劑包含穩(wěn)定劑。63.權(quán)利要求62的用途，其中所述穩(wěn)定劑是酸性氨基酸。64.權(quán)利要求63的用途，其中所述穩(wěn)定劑是精氨酸。65.權(quán)利要求37-64之一的用途，其中所述藥物的ρΗ為約4.0到7.2。66.權(quán)利要求37-65之一的用途，包括將數(shù)個劑量的IFN-β治療劑給藥哺乳動物。67.權(quán)利要求37-66之一的用途，其中所述IFN-β治療劑以約6MIU的劑量每周施用一次。68.權(quán)利要求37-67之一的用途，其中所述IFN-β治療劑以約6MIU的劑量每周施用兩次。69.權(quán)利要求37-68之一的用途，其中所述IFN-β治療劑以約12MIU的劑量每周施用一次。70.權(quán)利要求37-69之一的用途，其中所述IFN-β治療劑以約12MIU的劑量每周施用兩次。71.權(quán)利要求37-70之一的用途，其中所述藥物是施用于人的藥物。72.權(quán)利要求1-71之一的用途，其中所述藥物是施用于人的藥物，所述人是指以前未發(fā)現(xiàn)抵抗慢性脫髓鞘性運動神經(jīng)病的其它治療的人。全文摘要本發(fā)明提供了用于治療患有或易患慢性脫髓鞘性神經(jīng)病例如CIDP的受試哺乳動物的方法以及用于所述治療的藥物。所述方法包括給藥IFN-β治療劑。文檔編號A61K39/395GK102038938SQ20101025606公開日2011年5月4日申請日期2003年9月26日優(yōu)先權(quán)日2002年9月27日發(fā)明者艾爾弗雷德·桑德羅克申請人:比奧根艾迪克Ma公司