專利名稱：鱷膽素及其制備方法與應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種鱷魚產品，尤其是涉及一種鱷膽素及其制備方法和在制備抗腫 藥物中的應用。
背景技術：
癌癥，醫(yī)學術語亦稱惡性腫瘤，中醫(yī)學中稱巖，是控制細胞生長增殖機制失常，組 織和器官異常增生、弱化或喪失應有功能所致的一種古老的疾病。在中國，癌癥已經成為 死亡率最高的疾病，取代了心血管疾病成為危害人類生命的“頭號殺手”。據世界衛(wèi)生組織 統(tǒng)計，每年世界有1100萬人患上癌癥，而死于癌癥人數約600萬，占全球死亡人數的12%。 中國癌癥發(fā)病占全球的20. 3%，每年新增癌癥患者220萬，死亡140萬，平均每3分鐘就有 1. 3人死于癌癥，而且癌癥的發(fā)病率呈急劇上升的趨勢。隨著生命科學的迅猛發(fā)展和癌癥 研究的不深入，尋找高效抗腫瘤藥物已成為人類攻克癌癥最重要的課題之一。自從20世紀 40年代應用第一個抗腫瘤藥物——氮芥成功地治療惡性淋巴瘤以來，抗腫瘤藥物的研究已 取得了很大的發(fā)展?，F今臨床應用的絕大多數化療藥物屬細胞毒類，針對不同的作用靶點， 通過抑制細胞生長、繁殖、誘導細胞分化、凋亡等達到治療腫瘤的目的。目前抗腫瘤藥物研 究已進入一個全新的階段，已不局限于傳統(tǒng)的細胞毒藥物、分化誘導劑、生物反應調節(jié)劑， 面臨著思路、理論及技術的更新。鱷魚是一種古老的爬行動物，《本草綱目》等古代醫(yī)學典籍中均有關于鱷魚藥用價
值的記載。早在南北朝時期的《本草經集注》就有對鱷魚甲的記載“味辛，微溫。......主
心腹癥瘕、伏堅、積聚、寒熱?！薄侗静菔斑z》稱鼉甲“主惡瘡，腹內癥瘕”。明代李時珍的《本 草綱目》“鱗部”第四十三卷則詳細記載了 “鼉(即鱷)甲主治心腹癥瘕；伏堅積聚；肉主
治少氣吸吸，足不立地；別錄濕氣邪氣、諸蠱內癥瘕、惡皰。脂主治摩風及惡瘡。......。”
上述癥瘕主要是指現代醫(yī)學中的卵巢癌，積聚指現代醫(yī)學中的肝癌。由此可見，鱷魚具有防 止和抵抗腫瘤的藥用價值的論斷具有歷史依據。公開號為CN1465351的發(fā)明專利申請?zhí)峁┮环N抗癌新制品鱷魚免疫抗癌丸，是以人工飼養(yǎng)的鱷魚的皮甲、肉骨、膽汁、血液等經加工精制后作為主要成分。本品對部分白血 病及已有轉移的中、晚期癌癥患者，收到較好效果。服用本品無任何毒性或副作用。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于提供鱷膽素及其制備方法。本發(fā)明的另一目的在于提供鱷膽素在制備抗腫瘤藥物中的應用。。本發(fā)明所述鱷膽素的制備方法包括以下步驟1)將暹羅鱷鱷魚膽去除膽囊壁，得膽汁混合物；2)在膽汁混合物中加入生理鹽水，攪拌抽提，離心后，取上清，過濾，得鱷膽素。在 步驟2)中，所述生理鹽水的質量濃度可為0. 9% ；所述攪拌抽提的時間可為Ih ；所述離心， 是20000g離心20min ；所述微孔濾膜，可采用0. 22 μ m微孔濾膜。
本發(fā)明所述鱷膽素的另一種制備方法包括以下步驟1)將暹羅鱷鱷魚膽去除膽囊壁，得膽汁混合物；2)在膽汁混合物中加入乙醇，浸漬，提取，合并提取液，旋轉蒸發(fā)儀真空蒸發(fā)、濃縮 至無醇味，得乙醇提取物浸膏；3)將乙醇提取物浸膏用水混懸，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇3種有機溶劑， 進行萃取分離，將萃取液真空濃縮去除有機溶劑，得鱷膽素；在步驟2)中，所述乙醇可采用體積濃度為70%乙醇；所述提取，可分三次提取。在步驟3)中，所述水，可采用蒸餾水；所述進行萃取分離，可按溶劑極性依次遞增 法進行萃取分離，每種溶劑萃取3次。所得鱷膽素可采用C18反向高效液相色譜進行鱷膽素成分分析。本發(fā)明所制備的鱷膽素是一種具有抗腫瘤功效的活性物質，可用于制備抗腫瘤藥 物。本發(fā)明利用有機溶劑分級萃取等現代生化技術對鱷魚膽汁進行分離純化，得到具 有抗腫瘤活性的提取物(稱為鱷膽素)，并證明鱷膽素在抗腫瘤藥物中的應用。尤其是鱷膽 素在抑制肝癌SMMC-7721細胞、膽管癌QBC939細胞、宮頸癌Hela細胞這3株腫瘤細胞的增 殖，誘導3種腫瘤細胞凋亡方面具有良好的效應。


圖1為鱷膽素HPLC洗脫圖。色譜條件色譜柱為SB-C18 ；檢測波長210nm ；流動 相比例甲醇-水(7 3)，流速lmL/min。橫坐標為時間(min)，縱坐標為響應強度(mAU)。 經高效液相色譜分離后，得到11個主峰，各峰的保留時間分別為1. 595min，2. 274min, 2. 608min,3. 630min,5. 170min,5. 753min,7. 663min,12. 081min,12. 444min,14. 596min, 31.265min。圖2為鱷膽素對人肝癌SMMC-7721細胞增殖的影響。圖中橫坐標為鱷膽素的濃 度(μ g/mL)，縱坐標為細胞增殖抑制率(％ )，以未加鱷膽素為實驗對照組。a為24h，b為 48h, c 為 72h。圖3為普通光學顯微鏡下觀察鱷膽素對肝癌SMMC-7721細胞形態(tài)的影響。A為未 加鱷膽素的對照組肝癌SMMC-7721細胞，B為用鱷膽素150 μ g/mL處理48h后的肝癌細胞。 標尺為50 μ m。圖4為姬姆薩染色光學顯微鏡下觀察鱷膽素對肝癌SMMC-7721細胞形態(tài)的影響。 A為未加鱷膽素的對照組肝癌SMMC-7721細胞，B為用鱷膽素150 μ g/mL處理48h后的肝癌 細胞。標尺為25 μ m。圖5為HoeChst33258染色熒光顯微鏡下觀察鱷膽素對肝癌SMMC-7721細胞形態(tài) 的影響。A為未加鱷膽素的對照組肝癌SMMC-7721細胞，B為用鱷膽素150 μ g/mL處理48h 后的肝癌細胞。標尺為25 μ m。圖6A0/EB染色熒光顯微鏡下觀察鱷膽素對肝癌SMMC-7721細胞細胞形態(tài)的影響。 A為未加鱷膽素的對照組肝癌細胞，B為用鱷膽素200 μ g/mL處理48h后的肝癌細胞。標尺 為 25 μ m0圖7為PI單染流式 細胞術檢測鱷膽素對肝癌SMMC-7721細胞周期的影響。A為未加鱷膽素的對照組肝癌SMMC-7721細胞，B為用鱷膽素160 μ g/mL處理48h后的肝癌細胞。 橫坐標為DNA含量，縱坐標為細胞個數。圖8為Armexin V/PI雙染流式細胞術檢測肝癌SMMC-7721細胞凋亡。A為肝癌 SMMC-7721細胞對照組，B為經160 μ g/mL鱷膽素處理組肝癌細胞；橫坐標為磷脂結合蛋白 ArmexinV的熒光強度，縱坐標為碘化丙碇的熒光強度。圖9為鱷膽素對膽管癌QBC939細胞增殖的影響。圖中橫坐標為鱷膽素濃度(μ g/ mL)，縱坐標為細胞增殖抑制率(％)，以未加鱷膽素為實驗對照組。橫坐標為濃度(yg/ mL)，縱坐標為抑制度(% ) ；a為24h，b為48h，c為72h。圖10為普通光學顯微鏡下觀察鱷膽素對膽管癌QBC939細胞形態(tài)的影響。A為未 加鱷膽素的對照組QBC939細胞，B為用鱷膽素250 μ g/mL處理48h后的膽管癌細胞。標尺 為 50 μ m。
圖11為姬姆薩染色光學顯微鏡下觀察鱷膽素對膽管癌QBC939細胞形態(tài)的影響。 A為未加鱷膽素的對照組膽管癌細胞，B為用鱷膽素200 μ g/mL處理48h后的膽管癌細胞。 標尺為25 μ m。圖12為H0eChst33258染色熒光顯微鏡下觀察鱷膽素對膽管癌QBC939細胞形態(tài) 的影響。A為未加鱷膽素的對照組膽管癌QBC939細胞，B為用鱷膽素200 μ g/mL處理48h 后的膽管癌細胞。標尺為25 μ m。圖13為PI單染流式細胞術檢測鱷膽素對膽管癌QBC939細胞周期的影響。A為 未加鱷膽素的對照組膽管癌QBC939細胞，B為用鱷膽素200 μ g/mL處理48h后的膽管癌細 胞。橫坐標為DNA含量，縱坐標為細胞個數。圖14為Armexin V/PI雙染流式細胞術檢測膽管癌QBC939細胞凋亡。A為膽管癌 QBC939細胞對照組，B為經100 μ g/mL鱷膽素處理組膽管癌細胞。橫坐標為磷脂結合蛋白 ArmexinV的熒光強度，縱坐標為碘化丙碇的熒光強度。圖15為鱷膽素對宮頸癌Hela細胞增殖的影響。圖中橫坐標為鱷膽素的濃度(μ g/ mL)，縱坐標為細胞增殖抑制率(％ )，以未加鱷膽素為實驗對照組。橫坐標為DNA含量，縱 坐標為細胞個數。圖16為普通光學顯微鏡下觀察鱷膽素對宮頸癌Hela細胞形態(tài)的影響。A為未加 鱷膽素的對照組宮頸癌Hela細胞，B為用鱷膽素200 μ g/mL處理48h后的宮頸癌細胞。標 尺為50 μ m。圖17為姬姆薩染色光學顯微鏡下觀察鱷膽素對宮頸癌Hela細胞形態(tài)的影響。A 為未加鱷膽素的對照組宮頸癌Hela細胞，B為用鱷膽素200 μ g/mL處理48h后的宮頸癌細 胞。標尺為25 μ m。圖18為HoeChst33258染色熒光顯微鏡下觀察鱷膽素對宮頸癌Hela細胞形態(tài)的 影響。A為未加鱷膽素的對照組宮頸癌Hela細胞，B為用鱷膽素200 μ g/mL處理48h后的 宮頸癌細胞。標尺為25 μ m。圖19為Α0/ΕΒ染色熒光顯微鏡下觀察鱷膽素對宮頸癌Hela細胞形態(tài)的影響。A 為未加鱷膽素的對照組Hela細胞，B為用鱷膽素200 μ g/mL處理48h后的Hela細胞。標 尺為25 μ m。圖20為PI單染流式細胞術檢測鱷膽素對宮頸癌Hela細胞周期的影響。A為未加鱷膽素的對照組宮頸癌Hela細胞，B為用鱷膽素200 μ g/mL處理48h后的宮頸癌細胞。橫 坐標為DNA含量，縱坐標為細胞個數。
具體實施例方式實施例1 鱷膽素的制備方法①將暹羅鱷鱷魚膽去除膽囊壁，得膽汁混合物。向其中加入質量濃度為0. 9%的生 理鹽水，攪拌抽提lh，20000g離心20min，取上清，0. 22 μ m微孔濾膜過濾，獲得鱷膽素，4°C 冰箱保存。②將暹羅鱷鱷魚膽去除膽囊壁，得膽汁混合物。向其中加入體積濃度為70%乙醇 超聲浸漬分三次提取，合并提取液，旋轉蒸發(fā)儀真空蒸發(fā)、濃縮至無醇味，獲得乙醇提取物 浸膏；將浸膏用適量的蒸餾水混懸，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇3種有機溶劑，按溶劑 極性依次遞增法進行萃取分離，每種溶劑萃取3次，將萃取液真空濃縮去除有機溶劑，獲得 鱷膽素，4°C保存?zhèn)溆?。③采用C18反向高效液相色譜進行鱷膽素成分分析，結果見圖1。實施例2鱷膽素對人肝癌SMMC-7721細胞的抑制作用以鱷膽素為效應物，應用MTT法研究了鱷膽素對人肝癌SMMC-7721細胞生長的影 響。實驗結果表明鱷膽素對SMMC-7721細胞抑制作用較強(圖2)，IC5tl值為158. 6 μ g/ mL，其抑制作用表現出了明顯的濃度效應和時間效應，當鱷膽素濃度為100、150、200、250、 300 μ g/mL時，作用24h后，抑制率分別為11 %、23%、66%、91 %、97%，作用48h后，抑制率 分別為 11%、42%、71%、93%、100%。倒置光學顯微鏡下對肝癌細胞形態(tài)進行觀察，可見對照組細胞結構緊密；經鱷膽 素作用后的細胞形態(tài)發(fā)生改變，表現為細胞變圓、體積縮小、細胞間隙增加，細胞腫脹、胞漿 中出現空泡，部分細胞失去貼壁能力(圖3)。經姬姆薩(Giemsa)染色后對照組細胞形態(tài)完整，呈不規(guī)則分布；而用鱷膽素處理 過的細胞，細胞變圓、皺縮、細胞核固縮、濃聚。表明鱷膽素可抑制肝癌細胞增殖，對細胞的 生長產生影響(圖4)。Hoechst 33258染色后，熒光顯微鏡下觀察發(fā)現，未經鱷膽素處理組肝癌細胞在熒 光顯微鏡下發(fā)出微弱藍色熒光，而經鱷膽素作用48h后，細胞核內呈現出濃度致密的顆粒 狀強藍色熒光，還有一些細胞形成大小不等的凋亡小體(圖5)。Α0/ΕΒ染色后，熒光顯微鏡下觀察發(fā)現，未加藥組細胞呈綠色熒光；而鱷膽素加藥 組細胞發(fā)黃色、橙色、橘紅色熒光，細胞數量明顯減少(圖6)。采用碘化丙錠(PI)單染的方法研究了鱷膽素對SMMC-7721細胞細胞周期的影響。 實驗結果表明不同濃度的鱷膽素作用SMMC-7721細胞48h后，與對照組相比各實驗組細胞 的GcZG1期比例增加，隨著鱷膽素濃度的增大和作用時間的延長，凋亡率增加，這些結果表 明，鱷魚膽汁使細胞阻滯于GcZG1期，然后誘導細胞發(fā)生凋亡，PI單染流式細胞術檢測鱷膽 素對肝癌SMMC-7721細胞周期的影響參見圖7，PI單染流式細胞術檢測鱷膽素處理肝癌細 胞48h后，周期數據分析結果參見表1。表 1
Annexin V是一種相對分子質量為35000大小的Ca2+依賴的磷脂結合蛋白，與細 胞膜內側的磷脂酰絲氨酸PS具有高度的親和性 ，可作為敏感的探針檢測細胞膜表面的 PS位置。將Armexin V進行異硫氰酸熒光素(FITC)標記，利用流式細胞儀或熒光顯微鏡可 檢測細胞凋亡的發(fā)生。PI是一種核酸染料，它不能透過完整的細胞膜，但處于凋亡中晚期 的細胞和死細胞，PI能夠透過細胞膜而使細胞核染上紅色。所以，Armexin V-FITC/PI雙 染檢測可用來區(qū)分正常細胞，早期凋亡細胞及壞死細胞或晚期凋亡細胞。Annexin V-FITC/ PI雙染檢測結果顯示不同濃度鱷膽素作用肝癌細胞24h后，對照組細胞自發(fā)早期凋亡率 為9. 31%，120、140、160 μ g/mL鱷膽素實驗組細胞早期凋亡率分別為28. 48%,46. 74%, 51. 76%，與對照組相比，凋亡明顯(圖8)。隨著膽汁濃度的增加，細胞凋亡率呈濃度依賴性 增加。實施例3鱷膽素對人膽管癌細胞QBC939的抑制作用以鱷膽素為效應物，應用MTT法研究了鱷膽素對人膽管癌細胞QBC939細胞生長的 影響。實驗結果表明鱷膽素對膽管癌細胞QBC939的抑制作用表現出了明顯的濃度效應和 時間效應。當作用時間為48h，膽素作用于QBC939細胞的IC5tl分別為200 μ g/mL和45 μ g/ mLo (圖 9)倒置光學顯微鏡下觀察可見，對照組細胞結構緊密；鱷膽素作用后的膽管癌細胞 形態(tài)發(fā)生改變，表現為細胞變?yōu)閳A形、體積縮小、細胞間隙增加，胞漿中出現空泡，部分細胞 由于失貼壁能力而懸浮(圖10)。經姬姆薩(Giemsa)染色后對照組細胞形態(tài)完整，呈不規(guī)則分布；而用鱷膽素處理 過的細胞，細胞變圓、皺縮、細胞核固縮、濃聚。表明鱷膽素可抑制膽管癌細胞增殖，對細胞 的生長產生影響(圖11)。Hoechst 33258染色后，熒光顯微鏡下觀察發(fā)現，未經鱷膽素處理組膽管癌細胞在 熒光顯微鏡下發(fā)出微弱藍色熒光，而經鱷膽素作用48h后，細胞核內呈現出濃度致密的顆 粒狀強藍色熒光，還有一些細胞形成大小不等的凋亡小體(圖12)。PI單染流式細胞術檢測結果顯示，不同濃度的鱷膽素作用膽管癌QBC939細胞48h 后，與對照組相比各實驗組細胞出現了明顯的S期和G2/M期細胞周期阻滯。這些結果表明， 鱷魚膽素使細胞阻滯于S期和G2/M期，然后誘導細胞發(fā)生凋亡，PI單染流式細胞術檢測鱷 膽素對膽管癌QBC939細胞周期的影響參見圖13，PI單染流式細胞術檢測鱷膽素處理膽管 癌細胞48h后，周期數據分析結果參見表2。表 2 Annexin V-FITC/PI雙染檢測結果顯示100 μ g/mL鱷魚膽素作用膽管癌QBC939細 胞48h后，細胞早期凋亡率由對照組細胞的0. 99%升高至20. 93%，凋亡明顯。與對照組相 比，凋亡明顯(圖14)。實施例4鱷膽素對人宮頸癌Hela細胞的抑制作用以鱷膽素為效應物，應用MTT法研究了鱷膽素對人子宮頸癌Hela細胞生長的影 響。實驗結果表明實驗結果表明鱷膽素對Hela細胞的抑制作用表現出了明顯的濃度 效應和時間效應(圖15)，當鱷膽素濃度為25、50、100、150、20(^8/1^時，作用24h后， 各濃度的抑制率分別為 15. 15%、18. 65%,44. 38%,68. 79%,73. 68%, IC50 為 119. 9 μ g/ mL;48h 時，各濃度的抑制率分別為 15. 16%,30. 46%,50. 87%,74. 88%,81. 971%, IC50 為 105. 3 μ g/mL ；72h 時，各濃度的抑制率分別為 15. 34%,27. 49 %,48. 65 %,63. 39 %, 91. 42%, IC50 為 95. 8 μ g/mL。倒置光學顯微鏡下觀察到對照組的Hela細胞平鋪貼壁生長，細胞輪廓清晰，細胞 之間排列密集，鋪滿時呈馬賽克狀排列，呈不規(guī)則多角形、圓形或卵圓形，細胞間無接觸抑 制；而經鱷膽素處理后的細胞形態(tài)發(fā)生明顯改變，表現為細胞數量明顯減少，形態(tài)輪廓變得 不清晰，細胞明顯變圓，且皺縮變形，細胞間連接減少，細胞脫壁而至懸浮狀態(tài)。(圖16)。這 一結果說明，鱷膽素能改變Hela細胞形態(tài)學特征，并有效抑制細胞的生長。經姬姆薩(Giemsa)染色后對照組Hela細胞，其染色結果對比度好、細胞核著色 清晰，細胞形態(tài)完整，呈不規(guī)則分布，核仁清晰可見，染色質分布均勻，細胞質較少；而經不 同濃度鱷膽素處理過的Hela細胞，細胞明顯變圓、皺縮變形，細胞體積明顯變小，細胞核固 縮、濃，聚核染色質呈致密深染。(圖17)Hoechst 33258染色后，熒光顯微鏡下觀察發(fā)現，未經鱷膽素處理組Hela細胞在 熒光顯微鏡下發(fā)出彌散均勻的微弱藍色熒光，細胞核未見濃縮致密染色，而經鱷膽素作用 48h后，細胞核內出現致密深染的顆粒狀、新月體狀結構，并發(fā)出強藍色熒光，呈現的染色質 高度凝集邊緣化這一凋亡典型特征，還有一些細胞形成大小不等的凋亡小體(圖18)。Α0/ΕΒ染色后，熒光顯微鏡下觀察發(fā)現，對照組Hela細胞呈明亮的綠色熒光，且細 胞形態(tài)完整，著色均一；而經鱷膽素作用后的Hela細胞數量明顯減少，并發(fā)出凋亡細胞所 呈現的橙色熒光，在有的細胞中還可見到核碎片及凋亡小體。(圖19)。說明鱷膽素能夠誘 導Hela細胞發(fā)生凋亡。PI單染流式細胞術檢測結果顯示不同濃度的鱷膽素處理Hela細胞48h后，其細胞 周期與對照組相比GcZG1期的細胞明顯增多，而G2/M期的細胞明顯減少，且在細胞周期DNA 直方圖Gl峰期前面均出現明顯的DNA亞二倍體峰，即凋亡峰，且峰面積隨著藥物濃度的增 加而增加，說明鱷膽素既能夠將細胞阻滯于GcZG1期，并能夠誘導細胞發(fā)生凋亡，PI單染流式細胞術檢測鱷膽素對宮頸癌Hela細胞周期的影響參見圖20，PI單染流式細胞術檢測鱷 膽素處理宮頸癌細胞48h后，周期數據分析結果參見表3。
表 3 本發(fā)明所采用的是暹羅鱷膽，由泰國是拉差龍虎園提供。本發(fā)明經實驗證明，鱷膽素在抑制肝癌SMMC-7721細胞、膽管癌QBC939細胞、宮頸 癌Hela細胞等3株腫瘤細胞的增殖，誘導3種腫瘤細胞凋亡方面具有良好的效應。因此可 用于制備抗腫瘤細胞的藥物。
權利要求
鱷膽素的制備方法，其特征在于包括以下步驟1)將暹羅鱷鱷魚膽去除膽囊壁，得膽汁混合物；2)在膽汁混合物中加入生理鹽水，攪拌抽提，離心后，取上清，過濾，得鱷膽素。
2.如權利要求1所述的鱷膽素的制備方法，其特征在于在步驟2)中，所述生理鹽水的 質量濃度為0.9%。
3.如權利要求1所述的鱷膽素的制備方法，其特征在于在步驟2)中，所述攪拌抽提的 時間為lh ；所述離心，是20000g離心20min。
4.如權利要求1所述的鱷膽素的制備方法，其特征在于在步驟2)中，所述微孔濾膜為 0. 22iim微孔濾膜。
5.如權利要求1 4所述的鱷膽素的制備方法制備的鱷膽素。
6.鱷膽素的制備方法，其特征在于包括以下步驟1)將暹羅鱷鱷魚膽去除膽囊壁，得膽汁混合物；2)在膽汁混合物中加入乙醇，浸漬，提取，合并提取液，旋轉蒸發(fā)儀真空蒸發(fā)、濃縮至無 醇味，得乙醇提取物浸膏；3)將乙醇提取物浸膏用水混懸，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇3種有機溶劑，進行 萃取分離，將萃取液真空濃縮去除有機溶劑，得鱷膽素；
7.如權利要求6所述的鱷膽素的制備方法，其特征在于在步驟2)中，所述乙醇是體積 濃度為70%乙醇；所述提取，分三次提取。
8.如權利要求6所述的鱷膽素的制備方法，其特征在于在步驟3)中，所述進行萃取分 離，是按溶劑極性依次遞增法進行萃取分離，每種溶劑萃取3次。
9.如權利要求6 8所述的鱷膽素的制備方法制備的鱷膽素。
10.如權利要求5或9所述鱷膽素在制備抗腫瘤藥物中的應用。
全文摘要
鱷膽素及其制備方法與應用，涉及一種鱷魚產品。提供鱷膽素及其制備方法和鱷膽素在制備抗腫瘤藥物中的應用。將暹羅鱷鱷魚膽去除膽囊壁，得膽汁混合物；在膽汁混合物中加入生理鹽水，攪拌抽提，離心后，取上清，過濾，得鱷膽素；或將暹羅鱷鱷魚膽去除膽囊壁，得膽汁混合物；在膽汁混合物中加入乙醇，浸漬，提取，合并提取液，旋轉蒸發(fā)儀真空蒸發(fā)、濃縮至無醇味，得乙醇提取物浸膏；將乙醇提取物浸膏用水混懸，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇3種有機溶劑，進行萃取分離，將萃取液真空濃縮去除有機溶劑，得鱷膽素。所制備的鱷膽素是一種具有抗腫瘤功效的活性物質，可用于制備抗腫瘤藥物。
文檔編號A61P35/00GK101856368SQ20101019270
公開日2010年10月13日 申請日期2010年6月7日 優(yōu)先權日2010年6月7日
發(fā)明者康勁翮, 張劍, 張祥盛, 李華亮, 熊佑熊, 邱乒乒, 陳清西 申請人:廈門大學;泰國是拉差龍虎園有限公司