專利名稱：：一種水溶性羧橋雙核Pt(Ⅱ)抗腫瘤配合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及到一種新型的水溶性羧橋雙核鉑(II)抗癌配合物，屬于化學(xué)制藥領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
：惡性腫瘤是一種嚴(yán)重威脅人類健康和生命的疾病，是繼心血管疾病后的全球第二大死亡原因?；瘜W(xué)療法是目前臨床治療惡性腫瘤的重要手段之一?；瘜W(xué)療法的基礎(chǔ)是化學(xué)藥物，因此，世界各國每年都投入大量人力物力進(jìn)行抗腫瘤藥物的研發(fā)。鉑類抗癌藥物是上世紀(jì)70年代末發(fā)展起來的一類無機(jī)抗癌化合物，由于其抗癌活性強(qiáng)、作用譜較廣，作用機(jī)制獨(dú)特，與非鉑類抗癌藥物不產(chǎn)生交叉耐藥性，是目前治療許多惡性腫瘤的首選藥物，得到廣泛使用。目前批準(zhǔn)上市的鉑類抗腫瘤藥物有六個(gè)，它們分別是順鉑(cisplatin)、卡拍(carboplatin)、奧沙禾U拍(oxaliplatin)、奈達(dá)拍(nedaplatin)、舒拍(simpla，印taplatin)和樂鉬(lobaplatin)，均為單核鉬(II)配合物。然而，近年來不斷出現(xiàn)對鉑類藥物產(chǎn)生耐藥性的病例，嚴(yán)重影響其臨床療效，同時(shí)鉑類藥物還存在較大的毒副作用如腎毒性、骨髓抑制、神經(jīng)損傷，因此研制新型的鉑類抗癌藥物仍具有重要的意義。多核(雙核和三核)鉑配合物是一類全新結(jié)構(gòu)的鉑抗腫瘤化合物，可與癌細(xì)胞的DNA發(fā)生多點(diǎn)鍵合，結(jié)合能力更強(qiáng)，對DNA的結(jié)構(gòu)和功能破壞得更加嚴(yán)重，使得癌細(xì)胞更難自我修復(fù)和更難耐受。因此，多核鉑配合物顯示出強(qiáng)大的體外抗癌活性，且與順鉑無交叉耐藥性，是一類具有重大開發(fā)應(yīng)用前景的新藥，也是目前鉑類抗癌藥發(fā)展的重要方向之一。英國Novuspharma公司研制了多種多核鉑配合物，其中反式_雙核鉑配合物BBR-3610和反式_三核鉑配合物BBR-3464進(jìn)入臨床試驗(yàn)。最近臨床研究發(fā)現(xiàn)它們雖然體外活性高，但體內(nèi)的療效并不佳，且毒副作用大，前景并不樂觀。:pt瑪、ci4-BBR-3610h3n、ci,nz嗎:Pt\>\、\嗎h3n\一:pt、嗎4+BBR-346
發(fā)明內(nèi)容目前已報(bào)道的多核鉑配合物之所以體內(nèi)抗癌作用不理想而且毒副作用大，我們認(rèn)為主要原因是(l)為離子型化合物?，F(xiàn)已知鉑類藥物作用的靶點(diǎn)為癌細(xì)胞的DNA，離子型化合物極性大，導(dǎo)致跨膜擴(kuò)散達(dá)到靶標(biāo)困難；(2)不穩(wěn)定。注射進(jìn)入血液后，離去基團(tuán)(氯離子)很快解離，與血液中的多種生物大分子產(chǎn)生結(jié)合，導(dǎo)致不希望的毒副作用。為此，我們以臨床應(yīng)用最廣的鉑類抗癌藥之一卡鉑為先導(dǎo)化合物，經(jīng)過大量的研究和試驗(yàn)，研制出一種非離子型、穩(wěn)定的羧橋雙核鉑(II)抗癌配合物-順式-四氨-y-雙(3-乙酰氧基-1，l-環(huán)丁烷二羧酸根-01，02)雙鉑(II)，化學(xué)結(jié)構(gòu)式(1)如下，立體機(jī)構(gòu)如圖1。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>其中，離去基團(tuán)為2個(gè)3-乙酰氧基-1，1-環(huán)丁烷二羧酸根，載體為4NH3，二個(gè)鉑(II)中心原子通過離去基團(tuán)的兩個(gè)羧基橋聯(lián)，這種配合物仍符合鉑類藥物的經(jīng)典構(gòu)效關(guān)系。據(jù)我們所知，這是第一個(gè)具有羧橋雙核結(jié)構(gòu)特征的鉑(II)抗癌配合物。我們前期專利申請(CN101386629，"以3_乙酰氧基_1，1_環(huán)丁烷二羧酸根為離去基團(tuán)的新型水溶性Pt(II)抗癌配合物")報(bào)道了其中的一種配合物-順式-二氨(3-乙酰氧基-l，l-環(huán)丁烷二羧酸根)合鉑(II)，它與本發(fā)明的配合物具有相同的元素組成，但化學(xué)結(jié)構(gòu)完全不同，屬于單核鉑(II)配合物，同時(shí)抗癌活性和毒性也與本發(fā)明的雙核配合物有較大的差異，本發(fā)明的雙核配合物抗癌作用更強(qiáng)。產(chǎn)生結(jié)構(gòu)差異的原因是制備提純方法不同，在水乙醇=1:1的體系中重結(jié)晶得到的是專利CN101386629報(bào)道的單核鉑(II)配合物，而本發(fā)明的雙核結(jié)構(gòu)的鉑(II)配合物是在純水中重結(jié)晶得到的。本發(fā)明化合物的制備方法是以K2PtCl4為起始原料，加入KI，轉(zhuǎn)化成K2PtI4，反應(yīng)，制備出相應(yīng)的cis-[Pt(II)(NH3)2I2]中間體，再在水中與3-乙酰氧基-l，l-二羧酸銀等摩爾定量反應(yīng)，反應(yīng)完全后過濾分離AgI，母液冷凍干燥得到粗品。粗品中重結(jié)晶得到本發(fā)明的配合物純品，本發(fā)明的化合物其特征在于它的羧橋雙核結(jié)構(gòu)，同時(shí)實(shí)驗(yàn)研究還表明它具有溶解度大、抗癌活性高、毒副作用小優(yōu)點(diǎn)，可以用于臨床治療癌癥。本發(fā)明的化合物可以制成兩種常規(guī)的制劑_凍干粉和注射液在臨床中使用。圖面說明圖1為本發(fā)明的立體機(jī)構(gòu)圖。水烷水氨丁純與環(huán)在具體實(shí)施例方式(1)3-乙酰氧基-1，1-環(huán)丁烷二羧酸銀的制備先按文獻(xiàn)報(bào)道的方法[InorganicaChimicaActa,2004，357，4452-4466]制備3-羥基-l，l-環(huán)丁烷二羧酸(mp151-152°C)。取20g3-羥基-1，1-環(huán)丁烷二羧酸，溶于200ml丙酮，加入33g新蒸乙酰氯，于5(TC攪拌4h，蒸發(fā)除溶劑，得粗品，在異丙醚重結(jié)晶，得到白色晶體，60"烘干，得3-乙酰氧基-l，l-環(huán)丁烷二羧酸15.5g，mp:128_129°C，產(chǎn)率60%。取3-乙酰氧基-l，l-環(huán)丁烷二羧酸10g，溶于100ml的水中，用lmol/LNaHC03調(diào)節(jié)ra=5-6，加入104mmol、100mlAgN03(過量5%)，得到3-乙酰氧基-1，1_環(huán)丁烷二羧酸銀沉淀，過濾收集，用水、乙醇洗滌后在60-7(TC下真空干燥4小時(shí)，得到19g3-乙酰氧基-1，1-環(huán)丁烷二羧酸銀，產(chǎn)率92%。(2)cis-[Pt(II)(NH3)2I2]中間體的制備稱取2.5gK2PtCl4(12mmol)溶于50ml水中，過濾除去不溶物，在6(TC下，緩慢加入含KI6g(72mmo1)的水溶液50ml，避光反應(yīng)2-3小時(shí)后，滴加氨水31mmol(過量30%);黃色沉淀，過濾收集，用水、乙醇洗滌后在60-7(TC下真空干燥4小時(shí)，分別得到cis-[Pt(11)(NH3)2I2]5.lg，產(chǎn)率90X。(3)順式-四氨-y-雙(3-乙酰氧基-l，l-環(huán)丁烷二羧酸根-01，02)雙鉑(II)(1)的合成取2.5g的cis-[Pt(NH3)2l2]，懸浮100ml水中，加入等摩爾量的3_乙酰氧基-1，1-環(huán)丁烷二羧酸銀2.14g，在45t:下攪拌反應(yīng)8小時(shí)，檢查反應(yīng)完全后過濾除去Agl沉淀，母液直接冷凍干燥，得到白色粉末，在水中重結(jié)晶提純得到白色晶體l.lg，產(chǎn)率50X。在水中的溶解度大約40mg/ml(室溫)，高于卡鉑(17mg/ml)。特征結(jié)構(gòu)參數(shù)為〈1>元素分析C22.2%，N6.50%，H3.31%，Pt45.3%與理論值C22眉，N6.52%，H3.26%，Pt45.5%—致?！?>FAB+_MS(m/e，RI):859(M+，15%)?！?>晶體結(jié)構(gòu)monoclinic，spacegroupP2(l)/c，a=14.1675(13)，b=8.7965(8)，C=ll.0801(10)A，P=105.3140(10);V=1331.8(2)A3;Z=2;Dc=0.297gcm-3;y=2.618mm—1;F(OOO)=100，crystalsize=0.18X0.11XO.08mm3。主要鍵長[A]和鍵角為:Pt(l)-N(l)2.011(5)Pt(l)-N(2)2.027(5)Pt(l)鄰)2.032(4)Pt(l)鄰)2.034(4)0(3)-Pt(l)2.034(4)Pt(l)-Pt(lA)6.532(6)N(l)-Pt(l)陽N(2)90.2(2)N(l)-Pt(l)-O(l)90.64(18)N(2)-Pt(l)-0(1)174.92(18)N(l)-Pt(l)鄰)177.04(17)N(2)-Pt(l)-0(3)91.99(19)O(l)-Pt(l)鄰)87.00(17)C(l)-O(l)陽Pt(l)121.2(4)C(3)-0(3)-Pt(l)124.4(3)(4)發(fā)明的配合物(1)的初步毒性昆明種ICR小鼠，體重20-22克，60只，雌、雄各半，等分成6個(gè)組，每組10只。所發(fā)明的化合物和卡鉑用5%葡萄糖溶液配制，單次靜脈注射給，給藥后14天觀察死亡率及毒性情況。根據(jù)死亡率應(yīng)用Bliss方法計(jì)算1A。(10X的致死劑量)，LDs。(半致死劑量)。試驗(yàn)測得所發(fā)明的配合物(1)注射給藥的LD1Q和LD5。分別為223.4和250.3mg/kg，相同的實(shí)驗(yàn)測得卡鉑的LD1Q和LD5。為118.3和139.Omg/kg，比較兩組數(shù)據(jù)可知，發(fā)明的配合物(1)初步毒性明顯比低于卡鉑，如下表。LD10[mg/kg]LD50[mg/kg]所發(fā)明的化合物l223.4250.3卡鉑118.3139.0(5)發(fā)明的配合物(1)的體外抗癌作用以水為溶媒、以卡鉑為對照，采用MTT法測定所發(fā)明的化合物(1)對A549/ATCC和NCI-H460人肺癌細(xì)胞株、SGC-7901人胃癌細(xì)胞株、HT-29和HCT-116人結(jié)腸癌細(xì)胞株、Ramos淋巴癌細(xì)胞株、HL60白血病細(xì)胞株生長的抑制作用，計(jì)算IC5。(半數(shù)抑制濃度)。從IC5。的大小可知，所發(fā)明的化合物(1)對A549/ATCC、NCI-H460、SGC-7901、HT-29、HCT-116、Ramos、HL60癌細(xì)胞生長的抑制明顯高于明顯高于目前臨床使用的鉑類抗癌藥卡鉑，如下表。6<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>權(quán)利要求一種水溶性羧橋雙核Pt(II)抗腫瘤配合物，其特征在于化學(xué)結(jié)構(gòu)為化學(xué)名為順式-四氨-μ-雙(3-乙酰氧基-1，1-環(huán)丁烷二羧酸根-O1，O2)雙鉑(II)。F2009102182605C00011.tif2.根據(jù)權(quán)利要求l所述的一種水溶性羧橋雙核Pt(II)抗腫瘤配合物，其特征在于所述Pt(II)抗腫瘤配合物制成凍干粉或注射液，用于臨床治療癌癥。全文摘要本發(fā)明公開了一種水溶性羧橋雙核鉑(II)抗癌配合物，化學(xué)名為順式-四氨-μ-雙(3-乙酰氧基-1，1-環(huán)丁烷二羧酸根-O1，O2)雙鉑(II)，可以采用常規(guī)的鉑類抗癌藥物制備的方法合成。本發(fā)明配合物的抗癌活性高于目前臨床上常使用的鉑類藥物卡鉑、毒副作用明顯比卡鉑低，可以制成凍干粉或注射液，用于臨床治療癌癥。文檔編號A61K9/08GK101787051SQ200910218260公開日2010年7月28日申請日期2009年12月1日優(yōu)先權(quán)日2009年12月1日發(fā)明者余堯,侯樹謙,劉偉平,葉青松,常橋穩(wěn),樓麗廣,諶喜珠,謝明進(jìn)申請人:昆明貴金屬研究所;中國科學(xué)院上海藥物研究所;云南大學(xué)