專利名稱：一種丹參丹酚酸a的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)藥、保健食品技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種丹參丹酚酸A的制備方法。

背景技術(shù)：
丹參為唇形科鼠尾草屬植物丹參的根。味苦、性微寒，丹參是最常用的藥材之一，用于治療心絞痛、高血壓、冠心病和中風(fēng)等心腦血管疾病，具有活血化瘀、養(yǎng)血安神、涼血排癰和排毒生肌的功效，是中藥活血化瘀的常用藥味。
丹參的化學(xué)成分主要可分為水溶性成分和脂溶性成分，丹參水溶性成分多具有酚酸性結(jié)構(gòu)，即丹酚酸A、B、C、D、E等有效成分，丹參總酚酸中以丹酚酸B含量最高，因此，人們開發(fā)的重點(diǎn)集中于丹酚酸B，而含量較低、活性較強(qiáng)的丹酚酸A(salvianolic acid A)因為無法進(jìn)行工業(yè)化生產(chǎn)被人們忽略。查閱文獻(xiàn)，我們可以得知丹參中丹酚酸A的含量在萬分之五左右，因此，即使通過一系列的方法將其提取出來，只能得到微量的丹參丹酚酸A，將其應(yīng)用于臨床中，因為其價格太高而不能被患者接受；但丹參丹酚酸A具有很好的藥理活性，可以應(yīng)用于藥品、保健食品中，因此，很多醫(yī)藥工作者希望將丹酚酸A進(jìn)行工業(yè)化生產(chǎn)，開發(fā)為成藥制劑。
現(xiàn)有文獻(xiàn)和專利中公開了丹參丹酚酸A提取純化的工藝方法，雖然能夠得到丹參丹酚酸A，但其重點(diǎn)都放在如何將丹參丹酚酸A與雜質(zhì)的分離上，其提取率很低，無法在工業(yè)化生產(chǎn)中實現(xiàn)，也無法得到“成藥”級的丹參丹酚酸A，這是擺在很多科研工作者面前的一道難關(guān)。


發(fā)明內(nèi)容
基于上述原因，我們通過長期的研究發(fā)現(xiàn)，將丹參總酚酸提取出來以后，在一定條件下，可以將丹參總酚酸轉(zhuǎn)化成丹參丹酚酸A，從而大大提高了丹參丹酚酸A的提取率，其提取率可以達(dá)到1％-2％，在解決了提取率的基礎(chǔ)上，對丹酚酸A的制劑制備也迎刃而解。
本發(fā)明在于提供一種提高丹參丹酚酸A提取率的工藝方法； 本發(fā)明還在于提供一種含有丹參丹酚酸A制劑的制備方法。
本發(fā)明通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的。
一.工藝方法 丹參丹酚酸A提取 方法1丹參用水或乙醇溶液提取得到水提取液或醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至3.5-6.0、110-130℃溫度，加熱1-6小時，溶液進(jìn)行過濾，濾液濃縮干燥，得到丹參丹酚酸A提取物； 方法2丹參用水或乙醇溶液提取得到水提取液或醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至3.5-6.0，放入微波提取器，頻率為915MHz-2450MHz、功率為1000-15000瓦的微波提取0.5-2小時，提取液過濾，濾液濃縮干燥，得到丹參丹酚酸A提取物； 方法3丹參用水或乙醇溶液提取得到水提取液或醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至3.5-6.0、110-130℃溫度，加熱1-6小時，溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)非極性或弱極性大孔樹脂柱層析分離，先用水、10-30％稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用30-70％濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡，干燥，得到丹參丹酚酸A提取物； 方法4丹參用水或乙醇溶液提取得到水提取液或醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至3.5-6.0，放入微波提取器，頻率為915MHz-2450MHz、功率為1000-15000瓦的微波提取0.5-2小時，提取液過濾，濾液經(jīng)非極性或弱極性大孔樹脂柱層析分離，先用水、10-30％稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用30-70％濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡，干燥，得到丹參丹酚酸A提取物； 其中所述大孔樹脂柱為HPD-100、HPD-100A、HPD-300、HPD-400、HPD-400A、HPD-450、D101、1300-I、1400或AB-8。
含有丹參丹酚酸A提取物為活性成分的藥物組合物。
制劑制備取上述丹參丹酚酸A，按照片劑、膠囊劑、顆粒劑、軟膠囊劑、微丸劑、滴丸劑、口服液藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成制劑。
本申請制備的固體制劑進(jìn)行溶出度實驗，在45分鐘時溶出度達(dá)到80％以上。
二.檢測方法 實驗方法 色譜柱C18反相色譜柱，NUCLEODUR，250*4.6mm，ODS； 色譜條件與系統(tǒng)適用性實驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；流速1.0ml/min；柱溫35℃；檢測波長286nm；理論板數(shù)按丹酚酸A計應(yīng)不低于60000；以乙腈-0.2％醋酸水溶液為流動相，按下述梯度洗脫條件進(jìn)行梯度洗脫，運(yùn)行90分鐘； 0-15分鐘時，乙腈的比例由10％升至20％，0.2％醋酸水溶液的比例由90％降至80％；15-55分鐘時，乙腈的比例由20％升至30％，0.2％醋酸水溶液的比例由80％降至70％；55-65分鐘時，乙腈的比例由30％升至50％，0.2％醋酸水溶液的比例由70％降至50％；65-72分鐘時，乙腈的比例由50％升至80％，0.2％醋酸水溶液的比例由50％降至20％；72-77分鐘時，乙腈的比例80％，0.2％醋酸水溶液的比例20％；77-80分鐘時，乙腈的比例由80％降至10％，0.2％醋酸水溶液的比例由20％升至90％；80-90分鐘時，保持乙腈-0.2％醋酸水溶液以10∶90的比例進(jìn)行洗脫； 對照品溶液的配制精密稱取丹酚酸A對照品到容量瓶中，加甲醇溶解搖勻，并稀釋至刻度； 樣品溶液的配制取樣品，加入甲醇溶解搖勻；或精密量取或稱取制劑，加甲醇溶解搖勻，并稀釋至刻度； 測定法精密吸取對照品溶液，注入液相色譜儀，記錄色譜圖；精密吸取樣品溶液，注入液相色譜儀，計算峰面積比。
三.提取率實驗 實驗方法取丹參藥材，按照上述檢測分析實驗方法，測定丹參丹酚酸A含量，分成六等份，一份按照傳統(tǒng)工藝方法(中國專利CN1397276A，方案1)得到丹參丹酚酸A提取物，一份按照工藝方法(中國專利CN1830947，方案2)，另外四份分別按照本申請工藝方法(依次為方案3-6)得到丹參丹酚酸A提取物，按照上述檢測分析實驗計算丹參丹酚酸A提取物中丹酚酸A重量，根據(jù)丹酚酸A重量計算不同工藝方法的提取率，實驗結(jié)果見表1 表1不同工藝方法丹酚酸A的提取率

實驗結(jié)論通過上述實驗表明，本申請工藝方法得到丹酚酸A的提取率比現(xiàn)有技術(shù)中丹酚酸A的提取率提高了100多倍，這只通過簡單的提取純化工藝是無法實現(xiàn)的，必須通過一定的轉(zhuǎn)化將丹參總酚酸轉(zhuǎn)化成丹酚酸A，才能從根本上提高丹酚酸A的提取率。
四.藥理實驗 實驗1 1.對麻醉大鼠心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用 實驗方法 取健康SD大鼠，體重240-260g，隨機(jī)分組空白對照組、復(fù)方丹參片組、本申請丹參丹酚酸A固體制劑組。置于相同環(huán)境預(yù)飼養(yǎng)2天，自由飲食。預(yù)飼養(yǎng)結(jié)束后，進(jìn)行試驗，動物稱重，20％烏拉坦按0.6ml/100g腹腔注射，待麻醉滿意后，仰臥固定于鼠板上，氣管插管，接呼吸機(jī)，按10～12ml潮氣量，70次/分的頻率給予呼氣，持續(xù)正壓呼吸，吸∶呼比為1∶1。根據(jù)呼吸頻率及深度調(diào)整呼吸參數(shù)。隨后接心電圖機(jī)，測正常心電圖。剪去胸前手術(shù)區(qū)毛，碘酒消毒，剪開皮膚、皮下組織、胸前肌肉及筋膜3～4cm，用18#血管鉗沿第三肋間鈍性分離肋間肌3cm長，打開胸腔及心包膜，記錄心電圖，撐開3、4肋骨，用左手四指托住大鼠右側(cè)胸腔，助手用眼科鑷將胸腺向上推，在左心耳與肺動脈圓錐之間找到結(jié)扎標(biāo)志血管左冠狀靜脈，在左心耳下方2mm處用無創(chuàng)小圓針帶6-0絲線穿線，進(jìn)針深度為1～1.5mm，寬2～3mm，穿線后記錄心電圖，經(jīng)尾靜脈給予相應(yīng)藥液，給藥10min后記錄心電圖，并用一帶凹槽的小塑料管墊在結(jié)扎部位，兩端線頭在其上結(jié)扎。結(jié)扎后即刻記錄心電圖，以左室前壁呈紫紺或II導(dǎo)聯(lián)S-T段弓背向上抬高大于0.1mv并持續(xù)0.5h以上為結(jié)扎成功標(biāo)志(S-T段無改變者淘汰)。結(jié)扎后10min再次記錄心電圖，結(jié)扎30min后剪開結(jié)扎線，實現(xiàn)再灌注，并記錄再灌注即刻心電圖，清除胸腔內(nèi)積血后逐層縫合胸壁，撤呼吸機(jī)，動物恢復(fù)自主呼吸，氣管切口不做處理。再灌即刻、10min、20min、40min、1h、2h、3h分別記錄心電圖。將心臟在冰箱中冷凍10min后，自心尖向心底平行房室溝方向?qū)⒆笫仪谐上嗟群穸鹊?片，放入1％TTC染液中，37℃染色10min，未壞死區(qū)為暗紅色，壞死區(qū)呈灰白色。數(shù)碼相機(jī)拍照。將壞死區(qū)和非壞死區(qū)分別稱重，計算壞死區(qū)占左心室重量的百分比，即梗死范圍。

表4丹酚酸A固體制劑對結(jié)扎/再通大鼠左冠狀動脈前降支所致心肌缺血/再灌注損傷心肌梗死范圍(％)的影響(x±s)
注與空白對照組比較，**P＜0.01；與陽性復(fù)方丹參片組比較#P＜0.05 實驗2 對大鼠大腦中動脈缺血再灌注損傷保護(hù)作用的研究 實驗方法 動物隨機(jī)分組空白對照組、復(fù)方丹參片組、本申請丹參丹酚酸A制劑組。各劑量組連續(xù)灌胃給藥3天，第4天藥后20分鐘用改良線栓法制成大腦中動脈阻塞(MCAO)模型。大鼠麻醉后，將其仰臥固定。分離右側(cè)頸總動脈(CCA)、頸內(nèi)動脈(ICA)及頸外動脈(ECA)，結(jié)扎ECA與CCA，用動脈夾夾閉ICA遠(yuǎn)心端后，迅速于ECA與ICA分叉處作一切口，插入一端加熱成光滑球形并涂了0.1％多聚賴氨酸的尼龍線(直徑為0.25mm，距球端18mm處作標(biāo)記，插入前沾肝素溶液)，插入深度為18mm，實現(xiàn)大腦中動脈阻塞導(dǎo)致腦缺血。結(jié)扎入口處，尼龍線外留約1cm，縫合皮膚。2小時后輕輕提拉所留線頭至略有阻力，實現(xiàn)大腦中動脈再灌注，造模完成。在缺血2h和再灌注1h內(nèi)用電熱毯維持大鼠的體溫，體溫維持在肛溫36.5～37.5℃。動物入選標(biāo)準(zhǔn)，按Longa五級評分法，取神經(jīng)功能行為評分為1、2、3、4分的動物，(0分無神經(jīng)缺損癥狀；1分對側(cè)前肢不能完全伸直；2分向?qū)?cè)旋轉(zhuǎn)；3分向?qū)?cè)傾倒；4分不能自己行走或昏迷)。腦梗塞范圍測定，模型大鼠再灌注24h，行為學(xué)評分后，斷頭取腦，去掉嗅球、小腦和低位腦干，剩余部分在-20℃冰箱冷凍10min，在冰盤上冠狀切成6片，迅速將腦片置于TTC染液中，37℃避光溫孵1h，取出后置于10％甲醛液中避光保存24h。經(jīng)染色后非缺血區(qū)為玫瑰紅色，梗塞區(qū)為白色。將白色組織仔細(xì)挖下稱重，以梗塞組織重量占全腦重量百分比作為腦梗塞范圍。
腦含水量測定TTC染色稱重后，將大腦置于120℃真空干燥器內(nèi)烘干12h稱干重。腦含水量＝(腦濕重-腦干重)/腦濕重×100％。實驗結(jié)果詳見表5。
表5對大鼠大腦中動脈缺血再灌注損傷大鼠腦梗塞范圍及腦水含量的影響(X±S)
注與空白對照組比較，**P＜0.01；與陽性復(fù)方丹參片組比較#P＜0.05 實驗3 對CCl4x致大鼠肝纖維化的影響 實驗方法選擇雄性健康Wistar大鼠60只，體重180-200g，將大鼠均隨機(jī)分正常組、秋水仙堿組(0.17mg/kg)、本申請丹參丹酚酸A制劑組，除正常對照組外，其余各組大鼠首次于皮下注射CCl45ml/kg，以后每周2次背部皮下注射40％CCl4橄欖油3ml/kg，共6周。在實驗期間除正常組外，第1～2周各組均給予20％豬油加0.5％膽固醇的玉米粉飼料，第3～6周飼以普通飼料。各給藥組在造模開始時即同時灌胃給予相應(yīng)劑量的藥液，給藥體積1ml/100g，給藥時間共12周。各組用藥周期完成后，乙醚麻醉下剖腹，經(jīng)下腔門靜脈采血，分別檢測血清ALT、AST、Alb，并取一部分肝組織制成肝勻漿，用于檢測羥脯氨酸(Hyp)含量。另取肝組織作HE染色用于組織病理學(xué)觀察。實驗結(jié)果見表6 表6對肝纖維化模型大鼠肝組織中Hyp的影響(X±S)
注與空白對照組比較，**P＜0.01； 實驗4 對小鼠肺纖維化模型的影響 實驗方法 動物8-1周齡、雄性、昆明種小鼠，體重18-22g。試劑注射用博萊霉素A5，天津河北制藥廠，醋酸潑尼松片仙居制藥有限公司生產(chǎn)，用時研成粉末，以蒸餾水溶解配成50％的混懸液。PBS液，自己配制。采用博萊霉素A5復(fù)制動物彌漫性肺間質(zhì)纖維化模型。將小鼠用乙醚麻醉后仰臥于實驗臺上，固定頭部及四肢，切開頸部皮膚，由氣管一次性注入博萊霉素A5溶液0.05ml(含藥0.1mg，5mg/kg)。注藥完畢后縫合皮膚，將小鼠直立、旋轉(zhuǎn)，盡量使藥液在肺內(nèi)均勻分布。手術(shù)過程嚴(yán)格無菌操作?？瞻讓φ战M以同樣方法注入等量生理鹽水代替博萊霉素A5，動物清醒后隨意進(jìn)食。小鼠造模24小時后隨機(jī)分為6組，分別為空白對照組、醋酸潑尼松組(6.5mg/kg)、本申請固體制劑組?？瞻讓φ战M灌胃給予蒸餾水0.2ml/10g，每日三次；陽性對照組，造模后灌胃給予醋酸潑尼松，6.5mg/kg、0.2ml/10g，每日三次；給藥組，造模后按0.2ml/10g灌胃給予各相應(yīng)劑量的藥液。
以上各組，連續(xù)給藥28天。結(jié)果詳見表7。
表7對肺纖維化模型小鼠肺系數(shù)的影響(X±S)
注與空白對照組比較，**P＜0.01 實驗5 MTT還原法檢測制劑抗腫瘤活性試驗 實驗材料 MTT用0.01mol/L的磷酸鹽緩沖液(PBS)溶解MTT終濃度5mg/ml，過濾除菌，分裝后4℃避光保存。
MTT裂解液的配制80g十二烷基磺酸鈉溶解在200ml的N-N-二甲基甲酞胺中，水浴加熱助溶，加入200ml蒸餾水，用80％乙酸與1N鹽酸(1∶1)混合調(diào)pH至4.7。
細(xì)胞株選用人正常細(xì)胞株，人肝癌細(xì)胞株和人大細(xì)胞肺癌細(xì)胞株。
實驗方法單細(xì)胞懸液接種于96孔板(用RPM-1640基礎(chǔ)培養(yǎng)基將細(xì)胞稀釋至30000/ml，每孔加入200μl稀釋好的細(xì)胞)，37℃、5％二氧化碳飽和濕度下培養(yǎng)24小時；每組四個平行樣；去除培養(yǎng)基，取新配制培養(yǎng)基按系列濃度制備抗癌藥物(本申請制劑)溶液，每孔20μl，培養(yǎng)48小時；每孔加入2mg/ml的MTT20μl，孵育4小時；吸出孔內(nèi)培養(yǎng)液(盡量完全)，加入DMSO液(150μl/孔)，振蕩10分鐘，使結(jié)晶物充分溶解；酶標(biāo)儀檢測各孔OD值，(檢測波長560nm)；繪制細(xì)胞活力曲線圖，求出IC50值。實驗結(jié)果如表8所示 表8細(xì)胞毒性實驗結(jié)果
小結(jié)本申請固體制劑具有較強(qiáng)的細(xì)胞毒，其毒性對正常細(xì)胞和癌細(xì)胞具有一定的選擇性，本申請固體制劑可用于制各抗腫瘤藥物。
實驗6 對大鼠肝腫瘤抑制的比較 實驗動物大鼠，150g-180g，雌雄不分。
實驗藥物生理鹽水；本發(fā)明各組制劑；市售斑蝥素鈉片劑。
實驗方法取大鼠分為生理鹽水組、斑蝥素鈉片劑組、本發(fā)明制劑組，作W256的肝內(nèi)接種，接種7天后，用戊巴比妥鈉按35mg/kg的劑量腹腔注射麻醉，固定，剖腹暴露肝，測量肝上腫瘤表面最大徑(a)和最小徑(b)，按(a*b2)/2＝V(腫瘤體積)。分離胃、十二指腸動脈、肝總動脈和肝固有動脈，結(jié)扎胃、十二指腸動脈遠(yuǎn)端，以銀夾阻斷肝總動脈，于手術(shù)放大鏡下在胃十二指腸動脈上切口并插入外徑0.3mm導(dǎo)管后再送入肝固有動脈，然后按實驗分組分別注入受試藥物，術(shù)后拔管結(jié)扎胃十二指腸動脈，放開肝總動脈銀夾，再縫合切口，將大鼠置于動物室待蘇醒，繼續(xù)飼養(yǎng)觀察，手術(shù)后8天，按上法檢測腫瘤體積，實驗結(jié)果見表9 表9各組制劑對腫瘤的抑制比較
注與生理鹽水組比較**P＜0.01； 實驗7 抗衰老實驗 實驗方法 將老齡上海系小鼠隨機(jī)分組，14只/組，雌雄各半，給藥組每天灌胃本發(fā)明制劑15mg/kg，共給藥3周。將小鼠斷尾取血50μl，按照鄰苯三酚自氧化的方法測定SOD的活性。將小鼠斷頭處死，取出肝臟，用濾紙吸去殘血，剪碎稱重，加生理鹽水，制備成1％勻漿，采用硫代巴比妥酸法測定肝組織中LPO的含量。實驗結(jié)果見表10 表10固體制劑對SOD、LPO的影響
注與對照組比較**P＜0.01，*P＜0.05；與陽性對照組比較#P＜0.05 五.制備實施例 實施例1 方法1丹參用水提取得到水提取液，調(diào)PH值至3.5、110℃溫度，加熱1小時，溶液進(jìn)行過濾，濾液濃縮干燥，得到丹參丹酚酸A提取物； 方法2丹參用水提取得到水提取液，調(diào)PH值至3.5，放入微波提取器，頻率為915MHz、功率為1000瓦的微波提取0.5小時，提取液過濾，濾液濃縮干燥，得到丹參丹酚酸A提取物； 方法3丹參用水提取得到水提取液，調(diào)PH值至3.5、110℃溫度，加熱1小時，溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)HPD-100大孔樹脂柱層析分離，先用水、10％稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用30％濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡，干燥，得到丹參丹酚酸A提取物； 方法4丹參用水提取得到水提取液，調(diào)PH值至3.5，放入微波提取器，頻率為915MHz、功率為1000瓦的微波提取0.5小時，提取液過濾，濾液經(jīng)HPD-100A大孔樹脂柱層析分離，先用水、10％稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用30％濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡，干燥，得到丹參丹酚酸A提取物； 制劑制備取上述丹參丹酚酸A，按照片劑、膠囊劑、顆粒劑、軟膠囊劑、微丸劑、滴丸劑、口服液藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成制劑。
實施例2 方法1丹參用70％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至4.5、120℃溫度，加熱3小時，溶液進(jìn)行過濾，濾液濃縮干燥，得到丹參丹酚酸A提取物； 方法2丹參用70％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至4.5，放入微波提取器，頻率為2450MHz、功率為10000瓦的微波提取1小時，提取液過濾，濾液濃縮干燥，得到丹參丹酚酸A提取物； 方法3丹參用70％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至4.5、120℃溫度，加熱3小時，溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)HPD-300大孔樹脂柱層析分離，先用水、20％稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用50％濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡，干燥，得到丹參丹酚酸A提取物； 方法4丹參用70％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至4.5，放入微波提取器，頻率為2450MHz、功率為10000瓦的微波提取1小時，提取液過濾，濾液經(jīng)HPD-400大孔樹脂柱層析分離，先用水、20％稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用50％濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡，干燥，得到丹參丹酚酸A提取物； 制劑制備取上述丹參丹酚酸A，按照片劑、膠囊劑、顆粒劑、軟膠囊劑、微丸劑、滴丸劑、口服液藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成制劑。
實施例3 方法1丹參用80％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至6.0、130℃溫度，加熱6小時，溶液進(jìn)行過濾，濾液濃縮干燥，得到丹參丹酚酸A提取物； 方法2丹參用80％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至6.0，放入微波提取器，頻率為2450MHz、功率為15000瓦的微波提取2小時，提取液過濾，濾液濃縮干燥，得到丹參丹酚酸A提取物； 方法3丹參用80％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至6.0、130℃溫度，加熱6小時，溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)HPD-400A大孔樹脂柱層析分離，先用水、30％稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用70％濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡，干燥，得到丹參丹酚酸A提取物； 方法4丹參用80％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至6.0，放入微波提取器，頻率為2450MHz、功率為15000瓦的微波提取2小時，提取液過濾，濾液經(jīng)HPD-450大孔樹脂柱層析分離，先用水、30％稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用70％濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡，干燥，得到丹參丹酚酸A提取物； 制劑制備取上述丹參丹酚酸A，按照片劑、膠囊劑、顆粒劑、軟膠囊劑、微丸劑、滴丸劑、口服液藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成制劑。
實施例4 方法1丹參用水提取得到水提取液，調(diào)PH值至4.0、115℃溫度，加熱2小時，溶液進(jìn)行過濾，濾液濃縮干燥，得到丹參丹酚酸A提取物； 方法2丹參用20％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至4.0，放入微波提取器，頻率為915MHz、功率為2000瓦的微波提取0.8小時，提取液過濾，濾液濃縮干燥，得到丹參丹酚酸A提取物； 方法3丹參用25乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至4.0、115℃溫度，加熱1.5小時，溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)D101大孔樹脂柱層析分離，先用水、15％稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用35％濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡，干燥，得到丹參丹酚酸A提取物； 方法4丹參用水提取得到水提取液，調(diào)PH值至4.0，放入微波提取器，頻率為915MHz、功率為2500瓦的微波提取0.8小時，提取液過濾，濾液經(jīng)1300-I大孔樹脂柱層析分離，先用水、15％稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用35％濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡，干燥，得到丹參丹酚酸A提取物； 制劑制備取上述丹參丹酚酸A，按照片劑、膠囊劑、顆粒劑、軟膠囊劑、微丸劑、滴丸劑、口服液藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成制劑。
實施例5 方法1丹參用75％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至5.5、125℃溫度，加熱5.5小時，溶液進(jìn)行過濾，濾液濃縮干燥，得到丹參丹酚酸A提取物； 方法2丹參用水得到水提取液，調(diào)PH值至5.0，放入微波提取器，頻率為 2450MHz、功率為14500瓦的微波提取1.8小時，提取液過濾，濾液濃縮干燥，得到丹參丹酚酸A提取物； 方法3丹參用水提取得到水提取液，調(diào)PH值至5.5、125℃溫度，加熱5小時，溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)AB-8大孔樹脂柱層析分離，先用水、25％稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用65％濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡，干燥，得到丹參丹酚酸A提取物； 方法4丹參用75％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至5.5，放入微波提取器，頻率為2450MHz、功率為14500瓦的微波提取1.8小時，提取液過濾，濾液經(jīng)1400大孔樹脂柱層析分離，先用水、25％稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用65％濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡，干燥，得到丹參丹酚酸A提取物； 制劑制備取上述丹參丹酚酸A，按照片劑、膠囊劑、顆粒劑、軟膠囊劑、微丸劑、滴丸劑、口服液藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成制劑。
實施例6 方法1丹參用水提取得到水提取液，調(diào)PH值至4.5、120℃溫度，加熱4.5小時，溶液進(jìn)行過濾，濾液濃縮干燥，得到丹參丹酚酸A提取物； 方法2丹參用70％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至4.5，放入微波提取器，頻率為2450MHz、功率為10000瓦的微波提取1小時，提取液過濾，濾液濃縮干燥，得到丹參丹酚酸A提取物； 方法3丹參用70％乙醇溶液提取得到水提取液或醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至4.5、120℃溫度，加熱3小時，溶液進(jìn)行過濾，濾液經(jīng)1400大孔樹脂柱層析分離，先用水、20％稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用50％濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡，干燥，得到丹參丹酚酸A提取物； 方法4丹參用70％乙醇溶液提取得到醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至4.5，放入微波提取器，頻率為2450MHz、功率為9000瓦的微波提取1.5小時，提取液過濾，濾液1300-I大孔樹脂柱層析分離，先用水、20％稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用45％濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡，干燥，得到丹參丹酚酸A提取物； 制劑制備取上述丹參丹酚酸A，按照片劑、膠囊劑、顆粒劑、軟膠囊劑、微丸劑、滴丸劑、口服液藥劑學(xué)常規(guī)要求制備成制劑。
權(quán)利要求
1.一種丹參丹酚酸A的制備方法，其特征在于
丹參丹酚酸A提取
方法1丹參用水或乙醇溶液提取得到水提取液或醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至3.5-6.0，放入微波提取器，頻率為915MHz-2450MHz、功率為1000-15000瓦的微波提取0.5-2小時，提取液過濾，濾液濃縮干燥，得到丹參丹酚酸A提取物；
方法2丹參用水或乙醇溶液提取得到水提取液或醇提取液，醇提液濃縮乙醇至盡，調(diào)PH值至3.5-6.0，放入微波提取器，頻率為915MHz-2450MHz、功率為1000-15000瓦的微波提取0.5-2小時，提取液過濾，濾液經(jīng)非極性或弱極性大孔樹脂柱層析分離，先用水、10-30％稀乙醇洗脫，除去雜質(zhì)，再用30-70％濃度的乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇至盡，干燥，得到丹參丹酚酸A提取物。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種丹參丹酚酸A的制備方法，其中所述大孔樹脂柱為HPD-100、HPD-100A、HPD-300、HPD-400、HPD-400A、HPD-450、D101、1300-I、1400或AB-8。
全文摘要
文檔編號A61P39/00GK101696166SQ200910169900
公開日2010年4月21日 申請日期2007年1月23日 優(yōu)先權(quán)日2007年1月23日
發(fā)明者李志剛, 顧群, 渠守峰 申請人:北京本草天源藥物研究院