專利名稱：一種富集銀杏黃酮化合物的方法
技術領域：
本發(fā)明屬于銀杏黃酮化合物提取純化的技術領域，特別涉及從銀杏葉中提取純化銀杏黃 酮化合物的方法。
二背景技術：
銀杏被譽為植物界的"活化石"，主要分布在中國、朝鮮、日本等國。科學研究發(fā)現(xiàn)， 銀杏葉中含大量的極性和非極性化合物，主要為黃酮類化合物、萜類內(nèi)酯，以及有機酸、烷 基酚和烷基酚酸、甾體化合物及微量元素等?，F(xiàn)代藥理研究表明，銀杏黃酮化合物具有擴張 血管，降低血清膽固醇，解痙，抗菌及松弛支氣管等作用，可捕獲游離基、抑制血小板活化 因子等。以銀杏葉提取物制備的制劑，對心腦血管、動脈硬化、高血壓等疾病有治療有價值 且長期服用無毒副作用。同時在衛(wèi)生保健品及化妝品行業(yè)方面也有廣闊的應用前景。所以從 銀杏葉中提取黃酮化合物有很重要的意義。
銀杏黃酮化合物提取分離的方法，主要有以下幾種①水浸取法，②水蒸汽蒸餾法，③ 有機溶劑浸取法。水作為浸取溶劑具有來源廣，生產(chǎn)成本低，無環(huán)境污染等優(yōu)點，但是采用 水浸取時，浸取液雜質(zhì)含量較高，如無機鹽、蛋白質(zhì)、糖和淀粉等，給進一步分離帶來許多 困難。水蒸氣蒸餾法具有設備簡單、成本低且對環(huán)境和人類無毒害的特點，但提取率低、雜 質(zhì)含量較高，后處理難度大。有機溶劑浸取法所采取的溶劑有甲醇、乙醇、丙酮等，由于有 機溶劑的蒸汽壓高，易燃易爆，而且生產(chǎn)成本高，邁此使有機溶劑的使用受到了限制。
現(xiàn)有提取純化銀杏黃酮化合物的方法，如《應用化學》2001年4月第18巻第4期的"銀杏 黃酮類化合物的提取分離" 一文，公開的方法是，以烘干粉碎的銀杏葉為原料，先制備銀杏 浸取液,后加入乙基丁基酮溶劑萃取劑，在溫度為60。C， pH為3 4的條件下，萃取30min，再 經(jīng)減壓蒸餾，除去溶劑而得成品。該方法的主要缺點是在生產(chǎn)過程中引入了乙基丁基酮等 有機溶劑，易燃易爆，危險性大；體系的pH較低，易生成佯鹽使黃酮活性成分被破壞；溶劑 回收困難，導致部分溶劑殘留在黃酮化合物中，產(chǎn)品質(zhì)量差；提取純化成本高。又如2006年8 月16日公開的公開號為CN1817875的"一種精制銀杏黃酮的方法"專利，公開的方法是以銀
杏葉為原料，先用有機溶劑乙醇溶解，后經(jīng)超濾、濃縮，再加入e-環(huán)糊精或改性e-環(huán)糊精
進行反應后，經(jīng)超濾、濃縮制得成品。該方法的主要缺點是不能有效除去無機鹽、氨基酸 等小分子雜質(zhì)，產(chǎn)品質(zhì)量差；不能進一步除去乙醇有機溶劑，純化不徹底，產(chǎn)品的純度不高 等。
三、發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是針對現(xiàn)有提取純化銀杏黃酮化合物方法的不足之處，提供一種富集銀杏 黃酮化合物的方法，具有不需要使用甲苯、丁酮、乙基丁基酮等有機溶劑，成本較低，操作 簡單，產(chǎn)品純度高，提取純化效率較高，無"三廢"排放等特點。
本發(fā)明的機理銀杏葉中含有銀杏黃酮化合物、多糖、雜蛋白、無機鹽以及氨基酸等物 質(zhì)。本發(fā)明利用銀杏葉粉中含有的多糖，雜蛋白等大分子量物質(zhì)的分子量均超過10000Da，且 不溶于一定濃度的乙醇-水溶液，而銀杏葉中的銀杏黃酮化合物均衍生于其母體化合物黃酮 中，以糖苷和甲基化的形式存在，其分子量較小， 一般低于1000Da，且易溶于水、甲醇、乙 醇等極性較強的溶劑的特點，因此，用一定濃度的乙醇-水溶液溶解其中的黃酮化合物，而多 糖則不溶解，以沉淀形式析出，經(jīng)過離心，與銀杏黃酮化合物分離。又利用超濾使原料液中 的溶劑及小分子溶質(zhì)從高壓進料液測透過膜進入低壓側(cè)，而大分子則被超濾膜所阻留進行分 離，除去大分子多糖后，銀杏黃酮-乙醇-水溶液中還含有雜蛋白，其分子量在10000-30000Da 左右，故選用合適的超濾膜除去銀杏黃酮乙醇-水溶液中大分子雜蛋白，獲得除去多糖及雜蛋 白的超濾液。然后利用電滲析將非帶電物質(zhì)與荷電物質(zhì)進行分離，在一定pH下，由于銀杏黃 酮化合物不帶電荷，在電場作用下不移動，而小分子的無機鹽、氨基酸等則帶電荷，在電場 作用下向其相反電荷的電極方向移動，故通過電滲析器，進一步除去無機鹽、氨基酸等雜質(zhì)。
再經(jīng)過真空減壓濃縮及冷凍干燥，即獲得純度較高銀杏黃酮含量的凍干粉。
本發(fā)明的目的是這樣實現(xiàn)的 一種富集銀杏黃酮化合物的方法，以銀杏葉粉為原料，經(jīng) 溶解、離心，及超濾分離、電滲析、濃縮及凍干，制得銀杏黃酮化合物凍干粉。其具體的方
法步驟如下
(1) 制備銀杏葉溶液
以銀杏葉粉(即烘干粉碎的銀杏葉)為原料，按銀杏葉粉的質(zhì)量(g):乙醇體積分數(shù)為50% 的乙醇-水溶液體積(mL)之比為l:40 60的比例，在銀杏葉粉中加入乙醇體積分數(shù)為5(W的乙 醇水溶液，攪拌溶解30 60分鐘，就制備出銀杏葉溶液，該溶液為溶解銀杏黃酮化合物的粗
提取液。
(2) 離心分離
第(l)步完成后，將第(l)步制備出的銀杏葉溶液放置于離心機中，在轉(zhuǎn)速為3000 6000 轉(zhuǎn)/分下，離心10 20分鐘，分別收集離心的上層清液和下層沉淀。對于上層清液，為除去銀 杏多糖的銀杏黃酮-乙醇-水溶液，用于下一步進行超濾；對于下層沉淀，因含有大量的銀杏 多糖，用于制備銀杏多糖，不排放。
(3) 超濾分離
第(2)步完成之后，將第(2)歩收集的上層清液泵入超濾器中，用截留分子量為10000Da的超濾膜，在O. 1 0. 3MPa下進行超濾分離，使小分子量的銀杏黃酮化合物、無機鹽等透過超濾膜，
存留在濾過液中，大分子蛋白不能透過超濾膜而留在截留液中，分別收集濾過液及截留液。
對于截留液，進行干燥后用作家禽詞料添加劑；對于濾過液，泵入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中，在溫度為 60 80°C、真空度為-0.6 -0.8MPa下，進行蒸發(fā)，直至無乙醇味時止，分別收集蒸出溶液 和脫除乙醇溶液。對于蒸出溶液，回收可用于配制乙醇-水溶液，溶解銀杏葉粉；對于脫除乙
醇溶液，用于下步進行電滲析。
(4) 電滲析
第(3)步完成后，將第(3)步收集的脫除乙醇溶液泵入電滲析器中，先用稀氫氧化鈉溶液調(diào) 節(jié)其pH值為6. 5 7. 5，控制電壓為30 70V進行電滲析，待電流穩(wěn)定后分別收集濃水和淡水。 對于濃水，因其中含有無機離子及少量色素等，經(jīng)生化處理達標后排放；對于淡水為含有銀 杏黃酮化合物的溶液，用于下步進行濃縮凍干。
(5) 制備銀杏黃酮化合物凍干粉
在第(4)步完成后，將第(4)步收集的淡水泵入反滲透機中，加入純凈水，在1. 5MPa 2. 5MPa 壓力下，進行反滲透濃縮,直至溶液中銀杏黃酮化合物的質(zhì)量百分濃度為10 15%時止，分別 收集透過液和截留液，對于透過液，因為純凈水，回收可用于配制乙醇-水溶液，溶解銀杏葉 粉；對于截留液，因為銀杏黃酮化合物濃縮液，將其先置于凍干瓶中，先在_16 -20。C溫度 下預凍3 6小時，再置于冷凍干燥機中，在30 60Pa真空度、-50 -6(TC溫度下，進行冷 凍干燥24 36小時，就制備出銀杏葉黃酮化合物的質(zhì)量百分數(shù)為40 6(F。的凍干粉。
本發(fā)明采用上述技術方案后，主要有以下效果
1、 本發(fā)明方法能有效除去銀杏葉溶液中的多糖、雜蛋白、無機鹽及氨基酸等雜質(zhì)，純化 效率高，產(chǎn)品的純度高，質(zhì)量好。
2、 本發(fā)明在生產(chǎn)過程中，脫除的雜蛋白回收利用于配制家禽飼料添加劑，離心沉淀物回 收利用于制備銀杏多糖，不排放。這不但有利于環(huán)境保護，還降低生產(chǎn)成本。
3、 本發(fā)明在生產(chǎn)過程中，主要使用離心、超濾及電滲析設備，不涉及昂貴的設備及儀器， 因而生產(chǎn)設備簡單，操作簡便且易于控制，因此生產(chǎn)安全又降低生產(chǎn)成本。
4、 本發(fā)明在生產(chǎn)過程中，主要使用乙醇、純凈水等無毒物質(zhì)，避免引用甲苯、丁酮等有 毒物質(zhì)，并且乙醇、純凈水使用后，還回收利用于再次溶解銀杏葉粉。這不但在生產(chǎn)過程中 安全無污染，無"三廢"排放，還充分利用資源，進一步降低生產(chǎn)成本。
采用本發(fā)明方法制備出的產(chǎn)品，可廣泛應用醫(yī)藥、保健品及化妝品行業(yè)中。主要有以下
生物活性作用①對心血管系統(tǒng)的作用；②抗肝臟毒作用；③抗炎作用；④雌性激素樣作用；
(D抗菌及抗病毒作用；⑥瀉下作用；⑦解痙作用；⑧清除人體自由基作用。具體實施例方式
下面結(jié)合具體實施方式
，進一步說明本發(fā)明。 實施例l
一種富集銀杏黃銅化合物的方法，具體方法步驟如下-
(1) 制備銀杏葉溶液
以銀杏葉粉(即烘干粉碎的銀杏葉)為原料，按銀杏葉粉的質(zhì)量(g):乙醇體積分數(shù)為50% 的乙醇-水溶液體積(mL)之比為l:40的比例，在銀杏葉粉中加入乙醇體積分數(shù)為50%的乙醇水 溶液，攪拌溶解30分鐘，就制備出銀杏葉溶液，該溶液為溶解銀杏黃酮化合物的粗提取液。
(2) 離心分離
第(l)步完成后，將第(l)步制備出的銀杏葉溶液放置于離心機中，在轉(zhuǎn)速為3000轉(zhuǎn)/分下， 離心10分鐘，分別收集離心的上層清液和下層沉淀。對于上層清液，為除去銀杏多糖的銀杏 黃酮-乙醇-水溶液，用于下一步進行超濾；對于下層沉淀，因含有大量的銀杏多糖，用于制 備銀杏葉多糖，不排放。
(3) 超濾分離
第(2)步完成之后，將第(2)步收集的上層清液泵入超濾器中，用截留分子量為10000Da的超 濾膜，在O. lMPa下進行超濾分離，使小分子量的銀杏黃酮化合物、無機鹽等透過超濾膜，存 留在濾過液中，大分子蛋白不能透過超濾膜而留在截留液中，分別收集濾過液及截留液。對 于截留液，進行干燥后用作家禽飼料添加劑；對于濾過液，泵入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中，在溫度為6(TC、 真空度為-0. 6MPa下，進行蒸發(fā)，直至無乙醇味時止，分別收集蒸出溶液和脫除乙醇溶液。對 于蒸出溶液，回收可用于配制乙醇-水溶液，溶解銀杏葉粉；對于脫乙醇溶液，用于下步進行 電滲析。
(4) 電滲析
第(3)步完成后，將第(3)步收集的脫除乙醇溶液泵入電滲析器中，先用稀氫氧化鈉溶液調(diào) 節(jié)其pH值為6.5，控制電壓為30V進行電滲析，待電流穩(wěn)定后分別收集濃水和淡水。對于濃水， 因其中含有無機離子及少量色素等，經(jīng)生化處理達標后排放；對于淡水，含有銀杏黃酮的溶
液，用于下步進行濃縮凍干。
(5) 制備銀杏黃酮凍干粉
在第(4)步完成后，將第(4)步收集的淡水泵入反滲透機中，加入純凈水，在1. 5MPa壓力下， 進行反滲透濃縮,直至溶液中銀杏黃酮的質(zhì)量百分濃度為10%時止，分別收集透過液和截留液， 對于透過液，因為純凈水，回收可用于配制乙醇-水溶液，溶解銀杏葉粉；對于截留液，因為 銀杏黃酮濃縮液.，將其先置于凍干瓶中，先在-16。C溫度下預凍3小時，再置于冷凍干燥機中，在30Pa真空度、-5(TC溫度下，進行冷凍干燥24小時，就制備出銀杏葉黃酮的質(zhì)量百分數(shù)為
40%的凍干粉。
實施例2
一種富集銀杏黃酮化合物的方法，具體方法步驟如下
(1) 制備銀杏葉溶液
同實施例l，其中銀杏葉粉的質(zhì)量(g):乙醇體積分數(shù)為50y。的乙醇-水溶液體積(mL)之比 為1:45，攪拌溶解45分鐘。
(2) 離心分離
同實施例l，其中離心機的轉(zhuǎn)速為4500轉(zhuǎn)/分，離心15分鐘。
(3) 超濾分離
同實施例l，其中對超濾器中的上層清液在0.2MPa下進行超濾分離，對旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中的 濾過液，在溫度為7(TC、真空度為-0.7MPa下，進行蒸發(fā)。
(4) 電滲析
同實施例l，其中對于電滲析器中的脫除乙醇溶液，先用稀氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)其pH值為 7.0，在電壓為50V下，進行電滲析。
(5) 制備銀杏黃酮化合物凍干粉
同實施例1，其中對反滲透機中的淡水，在2.0MPa壓力下，進行反滲透濃縮,直至溶 液中銀杏黃酮化合物的質(zhì)量百分濃度為12. 5%時止。對置于凍干瓶中的截留液，先在-18匸溫 度下預凍4.5小時，再置于冷凍干燥機中，在45Pa真空度、-55'C溫度下，進行冷凍干燥30 小時，就制備出銀杏黃酮化合物的質(zhì)量百分數(shù)為50%的凍干粉。 實施例3
一種富集銀杏黃酮化合物的方法，具體方法步驟如下-
(1) 制備銀杏葉溶液
同實施例l，其中銀杏葉粉的質(zhì)量(g):乙醇體積分數(shù)為50y。的乙醇-水溶液體積(mL)之比 為1:60，攪拌溶解60分鐘。
(2) 離心分離
同實施例l，其中離心機的轉(zhuǎn)速為6000轉(zhuǎn)/分，離心20分鐘。
(3) 超濾分離
同實施例l，其中對超濾器中的上層清液，在0.3MPa下進行超濾分離。對旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中 的濾過液，在溫度為80。C、真空度為-0.8MPa下，進行蒸發(fā)。
(4) 電滲析同實施例l ，其中對電滲析器中的脫除乙醇溶液，先用稀氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)其pH值為7. 5， 在電壓為70V下，進行電滲析。
(5)制備銀杏黃酮化合物凍干粉
同實施例l，其中對反滲透機中的淡水，在2.5MPa壓力下，進行反滲透濃縮，直至溶 液中銀杏黃酮化合物的質(zhì)量百分濃度為15%時止。置于凍干瓶中的截留液，先在-2(TC溫度下 預凍6小時，苒置于冷凍干燥機中，在60Pa真空度、-6(TC溫度下，進行冷凍干燥36小時， 就制備出銀杏黃酮的質(zhì)量百分數(shù)為60%的凍干粉。
權(quán)利要求
1.一種富集銀杏黃酮化合物的方法，其特征在于具體方法步驟如下(1)制備銀杏葉溶液以銀杏葉粉為原料，按銀杏葉粉的質(zhì)量乙醇體積分數(shù)為50％的乙醇-水溶液體積之比為1∶40～60的比例，在銀杏葉粉中加入乙醇體積分數(shù)為50％的乙醇-水溶液，攪拌溶解30～60分鐘；(2)離心分離第(1)步完成后，將第(1)步制備出的銀杏葉溶液放置于離心機中，在轉(zhuǎn)速為3000～6000轉(zhuǎn)/分下，離心10～20分鐘，分別收集離心的上層清液和下層沉淀；(3)超濾分離第(2)步完成之后，將第(2)步收集的上層清液泵入超濾器中，用截留分子量為10000Da的超濾膜，在0.1～0.3MPa下進行超濾分離，分別收集濾過液及截留液，對于截留液，進行干燥；對于濾過液，泵入旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中，在溫度為60～80℃、真空度為-0.6～-0.8MPa下，進行蒸發(fā)，直至無乙醇味時止，分別收集蒸出溶液和脫除乙醇溶液；(4)電滲析第(3)步完成后，將第(3)步收集的脫除乙醇溶液泵入電滲析器中，先用稀氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)其pH值為6.5～7.5，控制電壓為30～70V進行電滲析，當電流穩(wěn)定時分別收集濃水和淡水；(5)制備銀杏黃酮化合物凍干粉在第(4)步完成后，將第(4)步收集的淡水泵入反滲透機中，加入純凈水，在1.5MPa～2.5MPa壓力下，進行反滲透濃縮，直至溶液中銀杏黃酮化合物的質(zhì)量百分濃度為10～15％時止，分別收集透過液和截留液，對于截留液，將其先置于凍干瓶中，先在-16～-20℃溫度下預凍3～6小時，再置于冷凍干燥機中，在30～60Pa真空度、-50～-60℃溫度下，進行冷凍干燥24～36小時。
2. 按照權(quán)利要求1所述的一種富集銀杏黃酮化合物的方法，其特征在于具體步驟如下第(1)步中，銀杏葉粉的質(zhì)量乙醇體積分數(shù)為50%的乙醇-水溶液體積之比為1:40，攪拌溶 解30分鐘；第(2)步中，離心機的轉(zhuǎn)速為3000轉(zhuǎn)/分，離心10分鐘；第(3)步中，對超濾器中的上層清液在O. lMPa下進行超濾分離，對旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中的濾過液， 在溫度為6(TC、真空度為-0.6MPa下，進行蒸發(fā)；第(4)步中，對于電滲析器中的脫除乙醇溶液，先用稀氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)其pH值為6.5，在 電壓為30V下，進行電滲析；第(5)步中，對反滲透機中的淡水，在1.5MPa壓力下，進行反滲透濃縮，對置于凍干瓶中 的截留液，先在-16。C溫度下預凍3小時，再置于冷凍干燥機中，在30Pa真空度、-5(TC溫度 下，進行冷凍干燥24小時。
3. 按照權(quán)利要求1所述的一種富集銀杏黃酮化合物的方法，其特征在于具體步驟如下-第(1)步中，銀杏葉粉的質(zhì)量乙醇體積分數(shù)為50%的乙醇-水溶液體積之比為1:45，攪拌溶 解45分鐘；第(2)步中，離心機的轉(zhuǎn)速為4500轉(zhuǎn)/分，離心15分鐘；.第(3)步中，對超濾器中的上層清液在0.2MPa下進行超濾分離，對旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中的濾過液， 在溫度為70'C、真空度為-0. 7MPa下，進行蒸發(fā)第(4)步中，對于電滲析器中的脫除乙醇溶液，先用稀氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)其pH值為7.0，在 電壓為50V下，進行電滲析；第(5)步中，對反滲透機中的淡水，在2.0MPa壓力下，進行反滲透濃縮，對置于凍干瓶中 的截留液，先在-18。C溫度下預凍4.5小時，再置于冷凍干燥機中，在45Pa真空度、-55。C溫 度下，進行冷凍干燥30小時。
4. 按照權(quán)利要求1所述的一種富集銀杏黃酮化合物的方法，其特征在于具體步驟如下第(1)步中，銀杏葉粉的質(zhì)量乙醇體積分數(shù)為50%的乙醇-水溶液體積之比為1:60，攪拌溶 解60分鐘；第(2)步中，離心機的轉(zhuǎn)速為6000轉(zhuǎn)/分，離心20分鐘；第(3)步中，對超濾器中的上層清液在0.3MPa下進行超濾分離，對旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中的濾過液， 在溫度為8(TC、真空度為-0.8MPa下，進行蒸發(fā)； '第(4)步中，對于電滲析器中的脫除乙醇溶液，先用稀氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)其PH值為7. 5，在 電壓為70V下，進行電滲析；第(5)步中，對反滲透機中的淡水，在2.5MPa壓力下，進行反滲透濃縮，對置于凍干瓶中 的截留液，先在-2(TC溫度下預凍6小時，再置于冷凍干燥機中，在60Pa真空度、-6(TC溫度 下，進行冷凍干燥36小時。
全文摘要
一種富集銀杏黃酮化合物的方法，涉及從銀杏葉中提取純化黃酮化合物的方法。本發(fā)明以銀杏葉粉為原料，經(jīng)溶解、離心及超濾分離、電滲析、濃縮及凍干，制得銀杏黃酮化合物凍干粉。本發(fā)明方法的設備簡單，操作簡便且易于控制，因而生產(chǎn)安全且成本低。采用本發(fā)明制備出的產(chǎn)品純化率高，質(zhì)量好；在生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的副產(chǎn)物如脫除的雜蛋白、離心沉淀物及使用過的乙醇、純凈水均可回收利用，不排除，因而無“三廢”污染環(huán)境，并充分利用資源，進一步降低生產(chǎn)成本。采用本發(fā)明方法制備出的產(chǎn)品，可廣泛應用于醫(yī)藥、保健品及化妝品行業(yè)中。
文檔編號A61P1/10GK101596223SQ20091010424
公開日2009年12月9日 申請日期2009年7月3日 優(yōu)先權(quán)日2009年7月3日
發(fā)明者芳 云, 周小華, 張桂羅, 桑魯燕 申請人:重慶大學