專利名稱：婦康丸中山茱萸的薄層色譜檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于薄層色譜檢測技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種利用薄層色譜檢測山茱萸中熊 果酸的方法。
背景技術(shù)：
婦康丸是一種中成藥，具有益氣養(yǎng)血，行氣化瘀的作用，用于產(chǎn)后氣血不足，虛中 加瘀，寒熱錯雜的肋腹脹痛，腹痛，頭身疼痛，惡露不絕，血暈昏迷，大便秘結(jié)，無乳等癥。山 茱萸是方中臣藥，含有熊果酸、齊墩果酸，山茱萸苷、蘋果酸、沒食子酸等，能固經(jīng)止血，可用 治婦女體虛、月經(jīng)過多等癥。現(xiàn)行的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)采用雙波長掃描法測定山茱萸中熊果酸的含 量，操作復(fù)雜，重復(fù)性差?！吨袊幍洹凡捎帽訏呙璺y定山茱萸藥材熊果酸的含量，操作 時間長，步驟煩瑣，顯色誤差大，穩(wěn)定性和重復(fù)性相對較差。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是山茱萸藥材熊果酸鑒定比較復(fù)雜，提供一種操作簡 單，可行性強(qiáng)的檢測方法。本發(fā)明的內(nèi)容為婦康丸中山茱萸的薄層色譜檢測方法，檢測過程按如下步驟操 作(1)對照品溶液的制備稱取熊果酸對照品，加甲醇制成每Iml甲醇含Img熊果酸 的溶液；(2)供試品溶液的制備稱取婦康丸5 10g，粉碎，加乙醇20 30ml，加熱回流 1 2h，過濾，濾液蒸干，殘?jiān)铀?5 20ml使之溶解，用乙醚洗滌至乙醚層無色，傾去乙 醚層，用正丁醇洗滌水層2 4次，每次20 30ml，合并正丁醇提取液，用水洗滌2 4次， 每次15 20ml，傾去水層，將正丁醇層蒸干，殘?jiān)右掖? 2ml使之溶解，加入0. 5 Ig 中性氧化鋁，水浴上拌勻，干燥，裝入一預(yù)先裝填好的中性氧化鋁柱頂部，以甲醇40 50ml 洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)?. 5 Iml乙酸乙酯使之溶解，作為供試品分析液；(3)陰性對照溶液的制備按處方量藥材同法制備婦康丸(不含山茱萸)，按步驟 (2)制備陰性對照分析液；(4)色譜識別吸取步驟(1)、(2)、(3)制備的溶液在硅膠板上點(diǎn)樣，在展開劑中展 開，噴以硫酸乙醇溶液顯色，根據(jù)步驟(2)制備的供試品溶液和步驟(3)制備的陰性對照溶 液與步驟(1)制備的對照品溶液斑點(diǎn)同一 Rf值處，作對比分析。所述步驟(3)中性氧化鋁柱內(nèi)徑為10 15mm，填充的中性氧化鋁為1 2g，200 300 目。所述步驟(4)對照品溶液的點(diǎn)樣量為2 3μ 1，供試品溶液和陰性對照溶液的點(diǎn) 樣量為4 6μ 1，展距為6 10cm。所述展開劑為甲苯、乙酸乙酯、冰醋酸的混合液，混合液中各組分的體積比例為甲 苯乙酸乙酯冰醋酸=(2O 3O) (6 10) 1。
所述硅膠板為硅膠G板。所述的硫酸乙醇溶液濃度為30%，制備方法為在燒杯中加入70ml乙醇，量取 30ml濃硫酸沿?zé)诰徛尤耄吋舆厰嚢?。所述的顯色是將30%硫酸乙醇溶液噴于板上，90 110°C加熱至紫紅色斑點(diǎn)清 晰，日光下檢視。本發(fā)明中，山茱萸的鑒定作了陰性對照試驗(yàn)，結(jié)果表明，婦康丸中其他藥品不干擾 山茱萸中熊果酸的鑒定。本發(fā)明的有益效果是操作簡單，價格低廉，可行性強(qiáng)，重復(fù)性好，有利于推廣。
具體實(shí)施例方式下面通過實(shí)施例對本發(fā)明作詳細(xì)說明，但并不以任何方式限制本發(fā)明。實(shí)施例1婦康丸中山茱萸的薄層色譜檢測方法，檢測過程按如下步驟操作(1)對照品溶液的制備稱取熊果酸對照品10mg，加入甲醇10ml，搖勻；(2)供試品溶液的制備稱取婦康丸8g，粉碎，加乙醇25ml，加熱回流lh，過濾， 濾液蒸干，殘?jiān)铀?5ml使之溶解，用乙醚洗滌至乙醚層無色，傾去乙醚層，用正丁醇洗滌 水層3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用水洗滌3次，每次15，傾去水層，將正丁醇層蒸 干，殘?jiān)右掖糏ml使之溶解，加入0. 5g中性氧化鋁，水浴上拌勻，干燥，裝入一預(yù)先裝填好 的中性氧化鋁柱頂部，中性氧化鋁柱內(nèi)徑為10mm，填充的中性氧化鋁為lg，200目，以甲醇 40ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)?. 5ml乙酸乙酯使之溶解，作為樣品分析液；(3)陰性對照溶液的制備按處方量藥材同法制備婦康丸(不含山茱萸)，按步驟 (2)制備陰性對照分析液；(4)色譜識別吸取步驟⑴、(2)、(3)制備的溶液在硅膠G板上點(diǎn)樣，對照品溶液 的點(diǎn)樣量為2μ 1，供試品溶液和陰性對照溶液的點(diǎn)樣量為4μ 1，展距為6cm，在展開劑中展 開，噴以體積分?jǐn)?shù)為30%硫酸乙醇溶液，105°C熱風(fēng)加熱至紫紅色斑點(diǎn)清晰，日光下檢視，根 據(jù)步驟(2)制備的供試品溶液和步驟(3)制備的陰性對照溶液與步驟(1)制備的對照品溶 液斑點(diǎn)同一 Rf值處，作對比分析。所述展開劑為甲苯、乙酸乙酯、冰醋酸的混合液，混合液中各組分的體積比例為甲 苯乙酸乙酯冰醋酸=20 6 1。實(shí)施例1婦康丸中山茱萸的薄層色譜檢測方法，檢測過程按如下步驟操作(1)對照品溶液的制備稱取熊果酸對照品10mg，加入甲醇10ml，搖勻；(2)供試品溶液的制備稱取婦康丸8g，粉碎，加乙醇25ml，加熱回流lh，過濾，濾 液蒸干，殘?jiān)铀?5ml使之溶解，用乙醚洗滌至乙醚層無色，傾去乙醚層，用正丁醇洗滌水 層3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用水洗滌3次，每次15ml，傾去水層，將正丁醇層蒸 干，殘?jiān)右掖糏ml使之溶解，加入0. 5g中性氧化鋁，水浴上拌勻，干燥，裝入一預(yù)先裝填好 的中性氧化鋁柱頂部，中性氧化鋁柱內(nèi)徑為10mm，填充的中性氧化鋁為lg，200目，以甲醇 40ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)?. 5ml乙酸乙酯使之溶解，作為樣品分析液；(3)陰性對照溶液的制備按處方量藥材同法制備婦康丸(不含山茱萸)，按步驟(2)制備陰性對照分析液；(4)色譜識別吸取步驟(1)、(2)、(3)制備的溶液在硅膠G板上點(diǎn)樣，對照品溶液 的點(diǎn)樣量為2μ 1，供試品溶液和陰性對照溶液的點(diǎn)樣量為4μ 1，展距為6cm，在展開劑中展 開，噴以體積分?jǐn)?shù)為30%硫酸乙醇溶液，105°C熱風(fēng)加熱至紫紅色斑點(diǎn)清晰，日光下檢視，根 據(jù)步驟(2)制備的供試品溶液和步驟(3)制備的陰性對照溶液與步驟(1)制備的對照品溶 液斑點(diǎn)同一 Rf值處，作對比分析。所述展開劑為甲苯、乙酸乙酯、冰醋酸的混合液，混合液中各組分的體積比例為甲 苯乙酸乙酯冰醋酸=20 6 1。實(shí)施例2婦康丸中山茱萸的薄層色譜檢測方法，檢測過程按如下步驟操作(1)對照品溶液的制備稱取熊果酸對照品10mg，加入甲醇10ml，搖勻；(2)供試品溶液的制備稱取婦康丸6g，粉碎，加乙醇20ml，加熱回流lh，過濾，濾 液蒸干，殘?jiān)铀?6ml使之溶解，用乙醚洗滌至乙醚層無色，傾去乙醚層，用正丁醇洗滌水 層2次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用水洗滌3次，每次20ml，傾去水層，將正丁醇層蒸 干，殘?jiān)右掖?ml使之溶解，加入0. 5g中性氧化鋁，水浴上拌勻，干燥，裝入一預(yù)先裝填好 的中性氧化鋁柱頂部，中性氧化鋁柱內(nèi)徑為12mm，填充的中性氧化鋁為lg，200目，以甲醇 40ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)?. 5ml乙酸乙酯使之溶解，作為樣品分析液；(3)陰性對照溶液的制備按處方量藥材同法制備婦康丸(不含山茱萸)，按步驟 (2)制備陰性對照分析液；(4)色譜識別吸取步驟⑴、(2)、(3)制備的溶液在硅膠G板上點(diǎn)樣，對照品溶液 的點(diǎn)樣量為2μ 1，供試品溶液和陰性對照溶液的點(diǎn)樣量為5μ 1，展距為6cm，在展開劑中展 開，噴以體積分?jǐn)?shù)為30%硫酸乙醇溶液，95°C熱風(fēng)加熱至紫紅色斑點(diǎn)清晰，日光下檢視，根 據(jù)步驟(2)制備的供試品溶液和步驟(3)制備的陰性對照溶液與步驟(1)制備的對照品溶 液斑點(diǎn)同一 Rf值處，作對比分析。所述展開劑為甲苯、乙酸乙酯、冰醋酸的混合液，混合液中各組分的體積比例為甲 苯乙酸乙酯冰醋酸=25 6 1。實(shí)施例3婦康丸中山茱萸的薄層色譜檢測方法，檢測過程按如下步驟操作(1)對照品溶液的制備稱取熊果酸對照品10mg，加入甲醇10ml，搖勻；(2)供試品溶液的制備稱取婦康丸5g，粉碎，加乙醇20ml，加熱回流lh，過濾，濾 液蒸干，殘?jiān)铀?5ml使之溶解，用乙醚洗滌至乙醚層無色，傾去乙醚層，用正丁醇洗滌水 層2次，每次25ml，合并正丁醇提取液，用水洗滌3次，每次15ml，傾去水層，將正丁醇層蒸 干，殘?jiān)右掖糏ml使之溶解，加入0. 5g中性氧化鋁，水浴上拌勻，干燥，裝入一預(yù)先裝填好 的中性氧化鋁柱頂部，中性氧化鋁柱內(nèi)徑為10mm，填充的中性氧化鋁為lg，250目，以甲醇 42ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)?. 5ml乙酸乙酯使之溶解，作為樣品分析液；(3)陰性對照溶液的制備按處方量藥材同法制備婦康丸(不含山茱萸)，按步驟 (2)制備陰性對照分析液；(4)色譜識別吸取步驟⑴、(2)、(3)制備的溶液在硅膠G板上點(diǎn)樣，對照品溶液 的點(diǎn)樣量為2μ 1，供試品溶液和陰性對照溶液的點(diǎn)樣量為6μ 1，展距為6cm，在展開劑中展開，噴以體積分?jǐn)?shù)為30%硫酸乙醇溶液，100°C熱風(fēng)加熱至紫紅色斑點(diǎn)清晰，日光下檢視，根 據(jù)步驟(2)制備的供試品溶液和步驟(3)制備的陰性對照溶液與步驟(1)制備的對照品溶 液斑點(diǎn)同一 Rf值處，作對比分析。所述展開劑為甲苯、乙酸乙酯、冰醋酸的混合液，混合液中各組分的體積比例為甲 苯乙酸乙酯冰醋酸=24 8 1。實(shí)施例4婦康丸中山茱萸的薄層色譜檢測方法，檢測過程按如下步驟操作(1)對照品溶液的制備稱取熊果酸對照品20mg，加入甲醇20ml，搖勻；(2)供試品溶液的制備稱取婦康丸9g，粉碎，加乙醇30ml，加熱回流2h，過濾，濾 液蒸干，殘?jiān)铀?0ml使之溶解，用乙醚洗滌至乙醚層無色，傾去乙醚層，用正丁醇洗滌水 層3次，每次20ml，合并正丁醇提取液，用水洗滌3次，每次15ml，傾去水層，將正丁醇層蒸 干，殘?jiān)右掖糏ml使之溶解，加入Ig中性氧化鋁，水浴上拌勻，干燥，裝入一預(yù)先裝填好 的中性氧化鋁柱頂部，中性氧化鋁柱內(nèi)徑為15mm，填充的中性氧化鋁為lg，300目，以甲醇 45ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)?. 5ml乙酸乙酯使之溶解，作為樣品分析液；(3)陰性對照溶液的制備按處方量藥材同法制備婦康丸(不含山茱萸)，按步驟 (2)制備陰性對照分析液；(4)色譜識別吸取步驟⑴、(2)、(3)制備的溶液在硅膠G板上點(diǎn)樣，對照品溶液 的點(diǎn)樣量為2μ 1，供試品溶液和陰性對照溶液的點(diǎn)樣量為6μ 1，展距為8cm，在展開劑中展 開，噴以體積分?jǐn)?shù)為30%硫酸乙醇溶液，105°C熱風(fēng)加熱至紫紅色斑點(diǎn)清晰，日光下檢視，根 據(jù)步驟(2)制備的供試品溶液和步驟(3)制備的陰性對照溶液與步驟(1)制備的對照品溶 液斑點(diǎn)同一 Rf值處，作對比分析。所述展開劑為甲苯、乙酸乙酯、冰醋酸的混合液，混合液中各組分的體積比例為甲 苯乙酸乙酯冰醋酸=30 8 1。實(shí)施例5婦康丸中山茱萸的薄層色譜檢測方法，檢測過程按如下步驟操作(1)對照品溶液的制備稱取熊果酸對照品20mg，加入甲醇20ml，搖勻；(2)供試品溶液的制備稱取婦康丸8g，粉碎，加乙醇28ml，加熱回流2h，過濾，濾 液蒸干，殘?jiān)铀?8ml使之溶解，用乙醚洗滌至乙醚層無色，傾去乙醚層，用正丁醇洗滌水 層4次，每次25ml，合并正丁醇提取液，用水洗滌3次，每次20ml，傾去水層，將正丁醇層蒸 干，殘?jiān)右掖糏ml使之溶解，加入Ig中性氧化鋁，水浴上拌勻，干燥，裝入一預(yù)先裝填好 的中性氧化鋁柱頂部，中性氧化鋁柱內(nèi)徑為15mm，填充的中性氧化鋁為lg，300目，以甲醇 45ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)?. 5ml乙酸乙酯使之溶解，作為樣品分析液；(3)陰性對照溶液的制備按處方量藥材同法制備婦康丸(不含山茱萸)，按步驟 (2)制備陰性對照分析液；(4)色譜識別吸取步驟(1)、(2)、(3)制備的溶液在硅膠G板上點(diǎn)樣，對照品溶液 的點(diǎn)樣量為3 μ 1，供試品溶液和陰性對照溶液的點(diǎn)樣量為6 μ 1，展距為10cm，在展開劑中 展開，噴以體積分?jǐn)?shù)為30%硫酸乙醇溶液，105°C熱風(fēng)加熱至紫紅色斑點(diǎn)清晰，日光下檢視， 根據(jù)步驟(2)制備的供試品溶液和步驟(3)制備的陰性對照溶液與步驟(1)制備的對照品 溶液斑點(diǎn)同一 Rf值處，作對比分析。
所述展開劑為甲苯、乙酸乙酯、冰醋酸的混合液，混合液中各組分的體積比例為甲苯乙酸乙酯冰醋酸=22 7 1。實(shí)施例6婦康丸中山茱萸的薄層色譜檢測方法，檢測過程按如下步驟操作(1)對照品溶液的制備稱取熊果酸對照品20mg，加入甲醇20ml，搖勻；(2)供試品溶液的制備稱取婦康丸7g，粉碎，加乙醇28ml，加熱回流2h，過濾，濾 液蒸干，殘?jiān)铀?8ml使之溶解，用乙醚洗滌至乙醚層無色，傾去乙醚層，用正丁醇洗滌水 層3次，每次25ml，合并正丁醇提取液，用水洗滌3次，每次15ml，傾去水層，將正丁醇層蒸 干，殘?jiān)右掖?ml使之溶解，加入Ig中性氧化鋁，水浴上拌勻，干燥，裝入一預(yù)先裝填好 的中性氧化鋁柱頂部，中性氧化鋁柱內(nèi)徑為15mm，填充的中性氧化鋁為lg，300目，以甲醇 42ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)?. 5ml乙酸乙酯使之溶解，作為樣品分析液；(3)陰性對照溶液的制備按處方量藥材同法制備婦康丸(不含山茱萸)，按步驟
(2)制備陰性對照分析液；(4)色譜識別吸取步驟(1)、(2)、(3)制備的溶液在硅膠G板上點(diǎn)樣，對照品溶液 的點(diǎn)樣量為2μ 1，供試品溶液和陰性對照溶液的點(diǎn)樣量為6μ 1，展距為8cm，在展開劑中展 開，噴以體積分?jǐn)?shù)為30%硫酸乙醇溶液，105°C熱風(fēng)加熱至紫紅色斑點(diǎn)清晰，日光下檢視，根 據(jù)步驟(2)制備的供試品溶液和步驟(3)制備的陰性對照溶液與步驟(1)制備的對照品溶 液斑點(diǎn)同一 Rf值處，作對比分析。所述展開劑為甲苯、乙酸乙酯、冰醋酸的混合液，混合液中各組分的體積比例為甲 苯乙酸乙酯冰醋酸=22 7 1。上述實(shí)施例中，濃度為30%的硫酸乙醇溶液的制備方法為在燒杯中加入70ml乙 醇，量取30ml濃硫酸沿?zé)诰徛尤耄吋舆厰嚢?。上述?shí)施例中，色譜識別結(jié)果在步驟(1)制備的對照品溶液斑點(diǎn)Rf值處，步驟
(3)制備的陰性對照溶液無斑點(diǎn)，這說明婦康丸中其他藥品不干擾山茱萸中熊果酸的鑒定， 步驟⑵制備的供試品溶液在Rf值處有斑點(diǎn)，證明婦康丸中熊果酸的存在，進(jìn)而證明本發(fā) 明薄層色譜檢測方法檢測了婦康丸中的山茱萸。上述實(shí)施例中，熊果酸在中國藥品生物制品檢定所購買，硅膠G在青島海洋化工 廠購買，婦康丸由鄭州豫密藥業(yè)股份有限公司，處方及處方量為白術(shù)12重量份，黨參12重 量份，茯苓12重量份，蒼術(shù)12重量份，川芎12重量份，熟地黃12重量份，川牛膝12重量份， 蒲黃12重量份，香附12重量份，山茱萸(蒸)28重量份。
權(quán)利要求
婦康丸中山茱萸的薄層色譜檢測方法，其特征在于檢測過程按如下步驟操作(1)對照品溶液的制備稱取熊果酸對照品，加甲醇制成每1ml甲醇含1mg熊果酸的溶液；(2)供試品溶液的制備稱取婦康丸5～10g，粉碎，加乙醇20～30ml，加熱回流1～2h，過濾，濾液蒸干，殘?jiān)铀?5～20ml使之溶解，用乙醚洗滌至乙醚層無色，傾去乙醚層，用正丁醇洗滌水層2～4次，每次20～30ml，合并正丁醇提取液，用水洗滌2～4次，每次15～20ml，傾去水層，將正丁醇層蒸干，殘?jiān)右掖?～2ml使之溶解，加入0.5～1g中性氧化鋁，水浴上拌勻，干燥，裝入一預(yù)先裝填好的中性氧化鋁柱頂部，以甲醇40～50ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)?.5～1ml乙酸乙酯使之溶解，作為供試品分析液；(3)陰性對照溶液的制備按處方量藥材同法制備婦康丸(不含山茱萸)，按步驟(2)制備陰性對照分析液；(4)色譜識別吸取步驟(1)、(2)、(3)制備的溶液在硅膠板上點(diǎn)樣，在展開劑中展開，噴以硫酸乙醇溶液顯色，根據(jù)步驟(2)制備的供試品溶液和步驟(3)制備的陰性對照溶液與步驟(1)制備的對照品溶液斑點(diǎn)同一Rf值處，作對比分析。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的婦康丸中山茱萸的薄層色譜檢測方法，其特征在于所述步 驟(3)中性氧化鋁柱內(nèi)徑為10 15mm，填充的中性氧化鋁為1 2g，200 300目。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的婦康丸中山茱萸的薄層色譜檢測方法，其特征在于所述步 驟⑷對照品溶液的點(diǎn)樣量為2 3iU，供試品溶液和陰性對照溶液的點(diǎn)樣量為4 6iU， 展距為6 10cm。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的婦康丸中山茱萸的薄層色譜檢測方法，其特征在于所述展 開劑為甲苯、乙酸乙酯、冰醋酸的混合液，混合液中各組分的體積比例為甲苯乙酸乙酯 冰醋酸=(20 30) (6 10) 1。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的婦康丸中山茱萸的薄層色譜檢測方法，其特征在于所述硅 膠板為硅膠G板。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的婦康丸中山茱萸的薄層色譜檢測方法，其特征在于所述的 硫酸乙醇溶液濃度為30%，制備方法為在燒杯中加入70ml乙醇，量取30ml濃硫酸沿?zé)?壁緩慢加入，邊加邊攪拌。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的婦康丸中山茱萸的薄層色譜檢測方法，其特征在于所述的 顯色是將30%硫酸乙醇溶液噴于硅膠板上，90 110°C加熱至紫紅色斑點(diǎn)清晰，日光下檢 視。
全文摘要
本發(fā)明公開了婦康丸中山茱萸的薄層色譜檢測方法，屬于薄層色譜檢測技術(shù)領(lǐng)域，檢測過程按如下步驟操作(1)稱取熊果酸，加甲醇制成對照品溶液；(2)供試品溶液的制備；(3)陰性對照溶液的制備；(4)色譜識別，吸取步驟(1)、(2)、(3)制備的溶液在硅膠板上點(diǎn)樣，在展開劑中展開，噴以硫酸乙醇溶液顯色，作對比分析。本發(fā)明操作簡單，可行性強(qiáng)，重復(fù)性好。
文檔編號A61P15/00GK101987154SQ20091006569
公開日2011年3月23日 申請日期2009年8月7日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月7日
發(fā)明者馮金河, 張春紅, 張艷紅, 李建彬, 段桂生, 魏朝陽 申請人:鄭州豫密藥業(yè)股份有限公司